CD44 pero no la expresión de CD24 se relaciona con mal pronóstico en el adenocarcinoma no cardias del CD44 stomach

pero no la expresión de CD24 se relaciona con mal pronóstico en el adenocarcinoma no cardias del estómago
Resumen Antecedentes

Estudios recientes han centrado en la importancia diagnóstica y pronóstica de CD24 y la expresión de CD44 en los cánceres humanos. Este estudio tuvo como objetivo explorar los cambios en los niveles de CD24 y CD44 expresión en pacientes con cáncer gástrico y para evaluar sus valores pronósticos.
Métodos
CD44 y CD24 niveles de expresión fueron investigados por inmunohistoquímica en muestras de tumores de 290 pacientes con gástrico no cardias adenocarcinoma, de los cuales 77 habían apareado mucosa gástrica normal adyacente. los niveles de ARNm de CD24 y CD44 se determinaron mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en 34 pacientes. Suero anti-Helicobacter pylori
IgG se detectó mediante un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas. Se analizaron las relaciones entre CD24 y CD44 niveles de expresión de proteínas y parámetros tumorales y sus valores pronósticos fueron evaluados por Cox modelos de riesgos proporcionales.
Resultados
CD24 y CD44 niveles de expresión fueron significativamente mayores en los pacientes con cáncer gástrico en comparación con los de emparejado los controles (45,5% frente a 0,0%, y 61,0% vs. 0,0%, p Hotel < 0,001). Entre 290 pacientes, la tasa de supervivencia global fue significativamente mayor en CD44 (-) en comparación con CD44 (+) (log-rank test, P = 0,035
) pacientes. Sin embargo, no hubo correlación significativa entre la expresión de CD24 y el tiempo de supervivencia global (log-rank test, P = 0,115
). El análisis de regresión multivariante indicó que la expresión de CD44 positivo (P = 0,029
), estadificación TNM (P Hotel < 0,001), y la invasión linfovascular (P = 0,016
), pero no la expresión de CD24 (P
= 0,065), fueron factores pronósticos independientes en el cáncer gástrico.
Conclusiones
expresión individual de CD44 se asoció con una baja supervivencia en pacientes con carcinoma gástrico. expresión cáncer
Palabras clave
CD44 CD24 pronóstico gástrica por Helicobacter pylori
Antecedentes
el cáncer gástrico es el tercer cáncer más común en china. A pesar de las mejoras en las técnicas quirúrgicas y el desarrollo de nuevos regímenes de quimioterapia, hubo 989,600 nuevos casos y más de 738.000 muertes en todo el mundo en 2008. La mitad de estos casos y se estimaron las muertes que se producen en China. El pronóstico para los pacientes con cáncer gástrico avanzado sigue siendo pobre, incluso después de la cirugía curativa [1-3]. Aunque muchos estudios han investigado los marcadores moleculares para el cáncer gástrico, los mecanismos de la carcinogénesis siguen siendo oscuros. Las interacciones entre las variantes genéticas de susceptibilidad, alteraciones moleculares, y los factores ambientales y de estilo de vida se sabe que contribuyen al desarrollo de cáncer gástrico. Estadificación TNM del carcinoma gástrico se utiliza para juzgar el pronóstico, pero actualmente no existe un buen marcador biológico base molecular que puede servir como un indicador pronóstico útil para el cáncer gástrico avanzado [4]. Tanto CD24 y CD44 se sabe que contribuyen a la señalización celular y la adhesión celular, y se han investigado su papel en la carcinogénesis. CD24 es una proteína de superficie celular similar a la mucina demostrado que se asocia con la malignidad en numerosos estudios de tejido humano [5]. CD44 es una glicoproteína transmembrana que participan en la adhesión celular, que también se ha demostrado ser altamente expresado en el adenocarcinoma gástrico [6]. Sheridan et al. demostró que el CD44 (+) /CD24 (-) fenotipo de las células de cáncer de mama se asoció con propiedades invasivas y mal pronóstico [7]. células madre de cáncer (CSC) han sido recientemente identificado en líneas celulares de cáncer gástrico humano en varios estudios [8], y se han demostrado que las células CD44 (+) CD24 (+) para definir una población de células de cáncer gástrico altamente tumorigénico con propiedades de auto -regeneration y diferenciación multi-linaje [9]. Weichert et al. mostró que la expresión citoplásmica de CD24 se correlacionó de forma independiente con la supervivencia acortada en el cáncer colorrectal [10]. Yong et al. recientemente investigado la expresión de CD44 /CD24 en un análisis retrospectivo de los pacientes con cáncer gástrico recurrente, pero no encontró ninguna asociación entre la expresión individual o combinada de CD24 y CD44 y la recurrencia de cáncer gástrico [11]. Sobre la base de estos estudios previos, la hipótesis de que la expresión de CD24 y CD44 puede ser correlacionado con el pronóstico del cáncer gástrico. El objetivo de este estudio fue, por tanto, para evaluar los niveles de expresión de CD24 y CD44 en el cáncer gástrico y evaluar su posible relevancia para la práctica clínica predictivo futuro. Helicobacter pylori
infección se considera un factor de riesgo para el adenocarcinoma gástrico, y un estudio reciente informó que el H. pylori
, a través de CagA, dio a conocer las propiedades de CSC-como en las células epiteliales gástricas [12]. por lo tanto, también se investigó la correlación entre la infección por H. pylori
y la expresión de CD24 /CD44.
Métodos
Participantes
Un total de 290 pacientes (221 hombres y 69 mujeres) con adenocarcinoma gástrico no cardias que se sometió a operación radical (D1 o D2 +) en el primer hospital de la Universidad de Jilin se inscribieron en este estudio entre agosto de 2000 y diciembre de 2010. los pacientes no recibieron ningún quimio-radioterapia preoperatoria. la quimioterapia adyuvante se administró a todos los pacientes con estadios II, tumores III, y IV. El diagnóstico de cáncer gástrico se hizo sobre la base de los hallazgos morfológicos e inmunohistoquímicos, evaluados de forma independiente por dos patólogos (MJ y PA). Las muestras tumorales se recogieron en la cirugía. clasificación y los grados de adenocarcinoma histopatológico se definieron de acuerdo a la clasificación de Lauren [13] y la Organización Mundial de la Salud (OMS) de 2010 [14]. Ellos incluyen adenocarcinoma papilar (n = 4), adenocarcinoma tubular (n = 252), adenocarcinoma mucinoso (n = 27), y carcinomas mal cohesivos (carcinoma de células en anillo de sello) (n = 7) de acuerdo con clasificación de la OMS de 2010. gástrica normal adyacente muestras epiteliales también se obtuvieron de 77 pacientes para la comparación. edades de los pacientes eran de 32 a 87 años, con una edad media de 64 años. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes y el protocolo de estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Primer Hospital de la Universidad de Jilin
inmunohistoquímica bloques
de tejido fueron construidos utilizando una matriz de tejido (Minicore;. Alphelys Impasse Paul Langevin, Plaisir, Francia). Se cortaron secciones (4 m de espesor), deparaffinized, y se tiñeron utilizando una técnica de inmunoperoxidasa estreptavidina-biotina. Las secciones fueron incubadas con un anticuerpo policlonal anti-CD24 humana (1: 100 diluida, sc-7034; Santa Cruz, EE.UU.) y un anticuerpo monoclonal CD44 (01:50 diluida, MA1-81995; Thermo Fisher Scientific Inc., Chicago , IL, EE.UU.), respectivamente. 3, 3-diaminobencidina se empleó como cromógeno. Las secciones fueron contrastadas con hematoxilina. Los portaobjetos tratados con isotipos de IgG en lugar de anticuerpos primarios se utilizaron como controles negativos. Los portaobjetos teñidos fueron evaluados de forma independiente por dos patólogos (MJ y PA) que fueron cegados a los datos clínicos y resultados. intensidad de la tinción y el porcentaje de células teñidas de una magnitud específica de la intensidad se evaluaron utilizando el sistema HSCORE ampliamente aceptado. El HSCORE se calculó utilizando la ecuación siguiente: HSCORE = ΣPi (i) (i = 0, 1, 2, 3, Pi = 0 a 100%), donde i representa la intensidad de la tinción, es decir, 0 = sin manchas, 1 = tinción débil, 2 = tinción moderada y 3 = fuerte tinción. (Archivo adicional 1: Figura S1) Fotografías de las intensidades de referencia se muestran en los datos suplementarios. Dado que Pi representa el porcentaje de células teñidas con intensidades que varían de 0 a 100%, el HSCORE última varía de 0 a 300. Los porcentajes de células positivas se contaron en al menos 50 campos mediante el examen de las células por lo menos 1000 bajo un microscopio, usando una lente objetivo de 40 aumentos. Los niveles de expresión de CD24 y CD44 se clasificaron como negativos (HSCORE < 30) y positivos (HSCORE ≥ 30). Los valores de corte para CD24 y CD44 (HSCORE < 30) se modifican de acuerdo con los resultados de estudios anteriores [11, 15]
transcripción inversa-reacción en cadena de la polimerasa cuantificación de CD24 y CD44
niveles de expresión de CD24. y CD44 mRNA se determinaron en 34 pacientes con cáncer gástrico. Brevemente, el ARN fue extraído de tejidos del estómago utilizando un kit de aislamiento de ARN (Axygen, CA, EE.UU.) según las instrucciones del fabricante. Después del tratamiento con DNasa, primera línea de cDNA fue sintetizado utilizando un kit de síntesis de ADNc (Roche, Basilea, Suiza). reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa de CD24 (cebador directo: AAA CAA CAA CTG GAA CTT CAA GTA ACT C, cebador inverso: GGT GGT GGC ATT AGT TGG ATT T) y CD44v6 (cebador directo: TCC CTG CTA CCA ATA GGA ATG ATG, cebador inverso : GGT TGG CAC GAT GAA GGT CC) se ha realizado mediante el sistema Light Cycler 480 (Roche). deshidrogenasa gliceraldehído 3-fosfato (GAPDH) se cuantificó como un control de ARN endógeno (cebador directo: TGC ACC ACC AAC TGC TTA GC, cebador inverso: GGC GGT TGT ATG CAG CAT GAG).
Determinación de H. pylori
infección
tomaron muestras de sangre de 103 pacientes para determinar la presencia de H. pylori
infección antes de la cirugía. Suero anti-H. pylori
IgG se detectó mediante un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (Biohit, Helsinki, Finlandia). Brevemente, las muestras con títulos por encima del valor de corte de 30 EIU fueron considerados como positivos para H. pylori
, tal como se describe anteriormente [16]. El análisis estadístico
Francia El HSCOREs para CD24 y CD44 expresión eran presentados como mediana (rango intercuartil). Mann-Whitney, Kruskal-Wallis H, y Wilcoxon rango pruebas se utilizaron para comparar los resultados entre los grupos. El método de Kaplan-Meier se utilizó para estimar la tasa de supervivencia global, y se analizaron las diferencias de supervivencia mediante pruebas de log-rank. Un modelo de riesgos proporcionales de Cox se utilizó para calcular los riesgos relativos y los correspondientes intervalos de confianza del 95% (IC), después de ajustar por la edad, el sexo, la invasión linfovascular, y la estadificación TNM. Los análisis se realizaron utilizando el software SPSS 18.0 (SPSS Inc., EE.UU.). Todas las pruebas estadísticas fueron de dos colas y P <
valores; 0,05 fueron considerados estadísticamente significativos.
Resultados
CD24 y CD44 niveles de expresión en el cáncer gástrico
CD24 y CD44 expresión se detectaron en la membrana de las células cancerosas en las muestras de cáncer gástrico (Figura 1). Tinción débil tanto para CD24 y CD44 también se observó en el núcleo de células de cáncer gástrico. Todos los controles negativos mostraron tinción de fondo insignificante. Entre 77 muestras pareadas, se encontró que CD24 (+) y CD44 (+) resultados de la tinción en 35/77 (45,5%) y 47/77 (61,0%) de las muestras de cáncer gástrico, respectivamente. Sin embargo, las células epiteliales gástricas normales emparejados mostraron expresión negativa de CD24 y CD44. los niveles de expresión de ARNm de CD24 y CD44 tanto fueron significativamente mayores en inmunohistoquímica positiva en comparación con los grupos inmunohistoquímicamente negativos. Los niveles de expresión de ARNm de CD24 y CD44 fueron consistentes con los resultados de inmunohistoquímica en el cáncer gástrico (Figura 2). Figura 1 Visualización de CD24 y la expresión de CD44 en células de cáncer gástrico por inmunohistoquímica. CD24 (A) y CD44 (B) inmunotinción en la membrana de las células de carcinoma gástrico.
Figura 2 niveles de mRNA expresión de CD24 y CD44. Cuantificación por reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa mostró que CD24 (A) y CD44 (B) los niveles fueron significativamente mayores en inmunohistoquímica positiva en comparación con los grupos inmunohistoquímicamente negativos, respectivamente. *, P Hotel < . 0.001
correlaciones entre CD24 /CD44 niveles de expresión y parámetros clínico
Los pacientes con invasión linfovascular tuvieron tasas significativamente más altas de la positividad de CD44 que aquellos sin invasión (P = 0,013)
. los niveles de expresión de CD24 y CD44 también se analizaron de acuerdo a la edad, el sexo, la diferenciación del tumor, profundidad de la invasión, metástasis en los ganglios linfáticos y el estadio TNM. Sin embargo, no hubo diferencias significativas en los niveles de expresión de CD24 /CD44 en relación con estos parámetros. Las características clínicas de los sujetos se resumen en la Tabla 1 1.Table CD24 y CD44 expresión en carcinomas gástricos acuerdo con parámetros clínico
CD24 tasa positivo n (%)
P valor

CD44 tasa positivo n (%)
valor de p
Género
masculino (n = 221)
92 (41,6) 0,148

133 (60,2) 0,835

femenino (n = 69)
22 (31,9)
45 (65,2)
Edad (a)
≤60 (n = 127 )
48 (37,8) 0,435

85 (66,9) 0,087
Hotel > 60 (n = 163)
69 (42,3)
93 (57,0)
H. pylori
infección (n = 103)
positiva (n = 67)
24 (35,8) 0,096

48 (71,6) 0,815

negativa (n = 36) página 19 (52,8)
25 (69,4)
clasificación de Lauren
tipo intestinal (n = 104)
42 (40,3) 0,965

67 (64,4)
0,168
difusa tipo (n = 186)
77 (41,3)
103 (55,3)
clasificación de la OMS
adenocarcinoma papilar (n = 4)
1 (25,0)
0,906 página 4 (100,0)
0,064
adenocarcinoma tubular
Bueno (n = 1)
0 (0,0) 0
(0.0)
moderada (n = 98)
30 (30,6)
49 (50,0)
Pobre (n = 153)
47 (30,7)
87 (56,9)
adenocarcinoma mucinoso (n = 27)
7 (25,9) página 13 (48,1): perfil del mal carcinomas cohesivos (carcinomas de células en anillo de sello) (n = 7)
1 (14,3)
1 (14,3)
linfático vascular invasión
Ausente (n = 134)
56 (41,8) 0,642

72 (53,7) 0,013

presente (n = 156): perfil 61 (39,1)
106 (67,9)
estadio TNM
I (n = 23): perfil 10 (43,5) 0,844

16 (69,6) 0.559

II (n = 47) página 19 (40,4)
32 (68,1)
III (n = 187)
77 (41,2)
110 (58,9)
IV (n = 33) página 11 (33.3)
20 (60,6)
invasión
T1 (n = 9) página 2 (22,2) 0,537
página 7 (77,8) 0,485

T2 ( n = 36) página 14 (38,9)
22 (61,1)
T3 (n = 212)
85 (40,1)
132 (62,2)
T4 (n = 33)
16 (48,5)
17 (51,5)
metástasis de ganglios linfáticos
N0 (n = 62)
27 (43,5) 0,445

40 (64,5)
0,534
N1 (n = 89)
39 (43,8)
49 (55,1)
N2 (n = 74)
24 (32,4)
47 (63,5)
N3 (n = 65)
27 (41,5)
42 (64,6)
Supervivencia
ha sobrevivió (n = 171)
62 (36,3) 0,089

96 (56,1 )
0.028
murieron (n = 119)
55 (46,2)
82 (68,9)
expresión de CD44 se asoció con una baja supervivencia
Seguimiento de la información estaba disponible para todos 290 pacientes durante períodos de 3-135 meses (mediana de 41 meses). Ningún paciente falleció de complicaciones postoperatorias dentro de los 30 días del inicio del período de estudio, pero 119 (41,0%) pacientes murieron durante el período de seguimiento. El tiempo de supervivencia global fue significativamente mayor en CD44 (-) en comparación con CD44 (+) de los pacientes (Figura 3A; log-rank test, P = 0,035
). Aunque los pacientes con CD24 (-) tumores mostraron una tendencia a la tendencia general de supervivencia más larga, la diferencia no fue significativa (Figura 3B; log-rank test, P = 0,115
). El estadio TNM y la invasión linfovascular se relacionaron significativamente con el tiempo de supervivencia postoperatoria (Figura 3C, D). Figura 3 Factores que influyen en la supervivencia global en pacientes con cáncer gástrico. Nota correlación significativa entre la expresión de CD24 y el tiempo de supervivencia global (B). Sin embargo la expresión de CD44 (A), la estadificación TNM (C), y la invasión linfovascular (D) se asociaron significativamente con una mala supervivencia en cáncer gástrico.
Expresión de CD44 fue un marcador pronóstico independiente
Después de ajustar por sexo, edad, TNM etapa, y la invasión linfovascular, CD44 (+) de los pacientes tenían un riesgo significativamente mayor de muerte relacionada con el cáncer gástrico en comparación con CD44 (-) pacientes (odds ratio (OR) = 1,57; IC del 95%: 1,05 a 2,36; P
= 0,029). En comparación con los pacientes que eran CD24 (-), CD24 (+) pacientes tuvieron una mayor probabilidad de supervivencia general más corta, aunque la diferencia no fue significativa (OR = 1,41; IC del 95%: 0,98 a 2,02; P = 0,065
) . Un análisis multivariante identificó la expresión de CD44, el estadio TNM, y la invasión linfovascular como factores pronósticos independientes de supervivencia pobre paciente en el cáncer gástrico (Tabla 2) Análisis multivariado .Tabla 2 con Cox de riesgos proporcionales para la predicción de la supervivencia global en pacientes con cáncer gástrico

riesgo relativo (IC del 95%)
P * valor
expresión de CD44
negativa (n = 112)
Referencia
positiva (n = 178)
1,57 (1,05-2,36)
0,029
expresión de CD24
negativa (n = 173)
Referencia
positiva (n = 117)
1,41 (0,98-2,02 )
0.065
estadificación TNM
I (n = 23)
Referencia
II (n = 47)
1,69 (0,46-6,24)
0.433
III ( n = 187)
4,32 (1,33-14,01)
0,015
IV (n = 33)
14,53 (4,27-49,41) Hotel < 0,001 invasión
linfático vascular
Ausente (n = 134)
Referencia
presente (n = 156)
1,60 (1,09-2,35)
0,016 *
modelo de riesgos proporcionales de Cox, ajustado por sexo, la edad, la infiltración venosa , se detectó estadificación TNM.
CD24 /CD44 niveles de expresión y la infección por H. pylori

Helicobacter pylori
infección en 67 de los 103 (65,4%) pacientes con cáncer gástrico probadas. Sin embargo, no hubo correlación entre la infección por H. pylori
y la expresión de CD44 (P = 0,815
), y ninguna asociación significativa entre la infección por H. pylori
y la expresión de CD24 (P = 0,096
). Discusión

Varios estudios recientes se han centrado en la importancia diagnóstica y pronóstica de la expresión de CD24 y CD44 en los cánceres humanos [17-19], y el papel de CD24 y CD44 en carcinoma gástrico también se han explorado [6, 11 , 20, 21]. Takahashi et al. informó que CD24 sobre regulación se asoció significativamente con la profundidad de la invasión y de alta estadio patológico en 173 pacientes con cáncer gástrico [22]. La frecuencia de expresión de CD44 en el cáncer gástrico es muy variable del 31 al 72%. Ozmen et al. reportadas correlaciones significativas entre CD44 sobre-expresión y la invasión perineural y la positividad de los ganglios linfáticos en el cáncer gástrico [23]. El presente estudio analiza simultáneamente los niveles de CD24 y CD44 expresión independiente y demostró que la expresión positiva de CD44 solo, pero no CD24, se asocia a peor supervivencia en el carcinoma gástrico. No CD24 (+) o CD44 (+) tinción se encuentra en el epitelio normal de superficie gástrica en el presente estudio, aunque Bessède et al. detectó la expresión de CD44 en la mucosa gástrica normal [12]. Se necesitan más estudios para explicar esta aparente discrepancia. CD24 es una proteína de superficie celular glicosilfosfatidilinositol ligado de tipo mucina que se expresa en el desarrollo o la regeneración de tejido, y en el cáncer de ovario y carcinoma hepatocelular [20, 24]. Investigación previa de la correlación entre la expresión de CD24 /CD44 y cáncer gástrico reveló que CD24 (+) pacientes tuvieron una mayor probabilidad de recurrencia del cáncer gástrico que CD24 (-) de los pacientes [11]. Sin embargo, se desconoce la función biológica de CD24 en la carcinogénesis. Estudios previos observaron relaciones entre la alta expresión de CD24 y la metástasis de los ganglios linfáticos, invasión venosa y linfática. Sin embargo, aunque el presente estudio se encontró una tendencia hacia una menor supervivencia en CD24 (-) en comparación con CD24 (+) de los pacientes, la diferencia no fue significativa. Duckworth et al. detectó la expresión CD24 en las células parietales gástricas y mostró que regula apoptosis y la respuesta a la infección por Helicobacter felis
en un modelo de ratón [25]. Sin embargo, el presente estudio no encontró ninguna asociación significativa entre la infección por Helicobacter y CD24
expresión. Una posible explicación para la asociación significativa entre la CD44 y la supervivencia puede estar relacionado con la función de células madre de CD44 (+) células [26 a 29]. En 2009, Takaishi et al. primero demostrado la existencia de células CD44 (+) dotados de propiedades de células madre en los tumores gástricos. Se informó de que CD44 (+) células de cáncer gástrico mostró las características de células madre de auto-renovación y la capacidad de formar progenie diferenciada y dar lugar a CD44 (-) de las células. Takaishi et al. verificado aún más CD44 como marcador de la superficie celular de células madre cancerosas gástricas en varias líneas celulares de cáncer gástrico humano, y demostraron que la CD44 (+) células de cáncer gástrico mostraron una mayor resistencia a la muerte celular por quimioterapia o inducida por la radiación [29]. Liu et al. informó que CD44 era un objetivo abajo directa y relevante de miR-34a en el cáncer de próstata. los niveles de proteína CD44 se redujeron en células que sobreexpresan miR-34a, y derribar de CD44 funcionalmente imitado los efectos miR-34a de la inhibición del desarrollo de tumores y la metástasis [30]. Por lo tanto, consideramos que una mayor expresión de CD44 en células de cáncer gástrico puede representar un porcentaje más alto de células madre cancerosas, lo que explica por qué CD44 (+) de los pacientes demuestran la supervivencia global más pobre que CD44 (-) de los pacientes. Se necesitan más estudios para investigar los mecanismos de regulación de los genes miARN de células madre cancerosas.
Conclusiones
En conclusión, la expresión de CD44 se asocia a peor supervivencia en pacientes con carcinoma gástrico. Esto sugiere que CD44 puede ser un marcador pronóstico clínicamente útil, y también puede representar una diana terapéutica útil. Sin embargo, las funciones de CD24 y CD44 en la carcinogénesis gástrica siguen sin estar claros [31, 33], y se necesitan más estudios para aclarar sus funciones.
Declaraciones
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Programa de Norman Bethune Universidad de Jilin [2013025], y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81072369 y 81273065)
material complementario Electrónico
12876_2014_1181_MOESM1_ESM.pptx archivo adicional 1:. Figura S1: Fotografías de las intensidades de tinción inmunohistoquímica CD44: 0, 1 , 2 y 3. (PPTX 5 MB) Autores 'archivos originales presentados para las imágenes
a continuación se presentan los enlaces a los autores originales presentados archivos de imágenes. 'archivo original para la figura 1 12876_2014_1181_MOESM3_ESM.pdf autores 12876_2014_1181_MOESM2_ESM.pdf Autores archivo original de la figura 2 12876_2014_1181_MOESM4_ESM.pdf autores archivo original para la figura 3 Conflicto de intereses México La autores declaran que no tienen intereses en competencia.
Autores' contribuciones
JJ y XC diseñó el estudio y llevó a cabo la mayor parte del estudio; JJ y XC escribió el primer borrador del manuscrito; DC realizó los experimentos moleculares; HM realizó los experimentos de patología; MJ, YW, y el FK analizaron los datos patológica; DC, ZJ, y el FK recogieron información clínica de los pacientes; JJ realizó el análisis estadístico. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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