CD44, men ikke CD24-ekspression er forbundet med dårlig prognose i ikke-cardia adenocarcinom i stomach

CD44, men ikke CD24-ekspression er forbundet med dårlig prognose i ikke-cardia adenocarcinom i maven
Abstract
Baggrund
Nylige undersøgelser har fokuseret på den diagnostiske og prognostiske betydning af CD24 og CD44-ekspression i humane cancere. Denne undersøgelse havde til formål at udforske ændringer i CD44 og CD24 ekspressionsniveauerne hos patienter med mavekræft og vurdere deres prognostiske værdi.
Metoder
CD44 og CD24 ekspressionsniveauerne blev undersøgt immunhistokemisk i tumor prøver fra 290 patienter med ikke-cardia gastrisk adenocarcinom, hvoraf 77 var parret tilstødende normale gastrisk mucosa. CD24 og CD44-mRNA-niveauer blev bestemt ved kvantitativ polymerasekædereaktion i 34 patienter. Serum anti-Helicobacter pylori
IgG blev detekteret ved enzymkoblet immunosorbentassay. Forholdet mellem CD44 og CD24 protein ekspressionsniveauer og tumor parametre blev analyseret, og deres prognostiske værdier blev evalueret af Cox proportional hazards model.
Resultater Salg CD24 og CD44-ekspressionsniveauer var signifikant højere hos patienter med gastrisk cancer sammenlignet med dem i parret kontroller (45,5% vs. 0,0%, og 61,0% versus 0,0%, P
< 0,001). Blandt 290 patienter, den samlede overlevelse var signifikant højere i CD44 (-) i forhold til CD44 (+) patienter (log-rank test, P
= 0,035). Der var imidlertid ingen signifikant korrelation mellem CD24-ekspression og overlevelsestiden (log-rank test, P
= 0,115). Multivariat regressionsanalyse viste, at positiv CD44-ekspression (P
= 0,029), TNM mellemstationer (P
< 0,001), og lymphovascular invasion (P
= 0,016), men ikke CD24-ekspression (P
= 0,065), var uafhængige prognostiske faktorer i mavekræft.
konklusioner
Individuel udtryk for CD44 var forbundet med dårlig overlevelse hos patienter med gastrisk karcinom.
Nøgleord
CD44 CD24 Prognose mavekræft Expression Helicobacter pylori
Baggrund
mavekræft er den tredje mest almindelige kræftform i Kina. Trods forbedringer i kirurgiske teknikker og udvikling af nye kemoterapeutiske regimer, der var 989,600 nye tilfælde, og mere end 738.000 dødsfald på verdensplan i 2008. Halvdelen af ​​disse sager og dødsfald blev anslået til at ske i Kina. Prognosen for patienter med fremskreden mavekræft forbliver fattige, selv efter kurativ kirurgi [1-3]. Selv om mange studier har undersøgt molekylære markører for mavekræft, mekanismerne i carcinogenese forbliver uklar. Interaktioner mellem genetisk modtagelighed varianter, molekylære ændringer og miljømæssige og livsstil faktorer er kendt for at bidrage til udviklingen af ​​mavekræft. TNM stadieinddeling af gastrisk karcinom bruges til at bedømme prognosen, men der er i øjeblikket ingen god molekylær-baserede biomarkør, der kan tjene som en nyttig prognostisk indikator for avanceret mavekræft [4]. Både CD24 og CD44 er kendt for at bidrage til cellulær signalering og celleadhæsion og deres roller i carcinogenese er blevet undersøgt. CD24 er et mucin-lignende celleoverfladeprotein vist at være associeret med malignitet i talrige human-væv undersøgelser [5]. CD44 er et transmembrant glycoprotein er involveret i cellulær adhæsion, som også er blevet vist at være højt udtrykt i gastrisk adenocarcinom [6]. Sheridan et al. viste, at CD44 (+) /CD24 (-) fænotype af brystcancerceller var forbundet med invasive egenskaber og dårlig prognose [7]. Cancerstamceller (CSCS) er for nylig blevet identificeret i humane gastriske cancercellelinier i adskillige undersøgelser [8], og CD44 (+) CD24 (+) celler har vist sig at definere en yderst tumorigene, mavekræft cellepopulation med egenskaber self -regeneration og multi-slægt differentiering [9]. Weichert et al. viste, at cytoplasmatisk udtryk for CD24 uafhængigt var korreleret med forkortet overlevelse i kolorektal cancer [10]. Yong et al. nylig undersøgte CD44 /CD24-ekspression i en retrospektiv analyse af patienter med tilbagevendende mavekræft, men fandt ingen associationer mellem enkelte eller kombineret udtryk for CD24 og CD44 og fornyet mavekræft [11]. Baseret på disse tidligere undersøgelser, vi den hypotese, at CD24 og CD44 ekspression kan korreleres med gastrisk cancer prognose. Formålet med denne undersøgelse var derfor at vurdere ekspressionsniveauerne af CD24 og CD44 i gastrisk cancer og vurdere deres eventuelle prædiktiv relevans for den fremtidige klinisk praksis. Helicobacter pylori
infektion betragtes som en risikofaktor for gastrisk adenocarcinom, og en nylig undersøgelse rapporterede, at H. pylori
via CagA, afslørede CSC-lignende egenskaber i gastriske epitelceller [12]. Vi har derfor også undersøgt sammenhængen mellem H. pylori
infektion og CD24 /CD44-ekspression.
Metoder
Deltagerne
En alt 290 patienter (221 mænd og 69 kvinder) med ikke-Cardia gastrisk adenocarcinom, som undergik radikal operation (D1 + eller D2) på First Hospital i Jilin University blev indrulleret i denne undersøgelse mellem august 2000 og december 2010. patienterne fik ikke nogen præoperativ kemo-strålebehandling. Postoperativ kemoterapi blev givet til alle patienter med trin II, III, og IV tumorer. Diagnosen mavekræft blev foretaget på grundlaget for morfologiske og immunhistokemiske fund, vurderet uafhængigt af to patologer (MJ og YW). Tumorprøver blev opsamlet ved kirurgi. Histopatologisk klassificering og kvaliteter af adenocarcinom blev defineret i henhold til Lauren klassifikationen [13], og World Health Organization (WHO) klassifikation 2010 [14]. De omfattede papillær adenocarcinom (n = 4), rørformet adenocarcinom (n = 252), mucinøs adenocarcinom (n = 27), og dårligt kohæsive carcinomer (signetring celle carcinom) (n = 7) ifølge WHO klassificering 2010. Tilstødende normal gastrisk epiteliale prøver blev også indsamlet fra 77 patienter til sammenligning. Patient aldre var fra 32 til 87 år, med en gennemsnitsalder på 64 år. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter, og undersøgelsen protokollen blev godkendt af den etiske komité for Første Hospital Jilin Universitet
Immunhistokemi
væv blokke blev konstrueret ved hjælp af et væv array (Minicore;. Alphelys Impasse Paul Langevin, Plaisir, Frankrig). Snit (4 um tyk) blev skåret, deparaffineret og farvet under anvendelse af et streptavidin-biotin immunoperoxidaseteknik. Snittene blev derefter inkuberet med et anti-humant CD24-polyklonalt antistof (1: 100 fortyndet, sc-7034, Santa Cruz, USA) og et CD44 monoklonalt antistof (1:50 fortyndet, MA1-81995; Thermo Fisher Scientific Inc., Chicago , IL, USA), hhv. 3, blev 3-Diaminobenzidin ansat som kromogen. Snit blev modfarvet med hæmatoxylin. Slides behandlet med IgG isotyper i stedet for primære antistoffer blev anvendt som negative kontroller. De farvede objektglas blev evalueret uafhængigt af to patologer (MJ og YW), der var blindet til de kliniske data og resultater. Farvningsintensitet og procentdele af celler farvet ved en specifik størrelse af intensitet blev vurderet ved anvendelse af almindeligt accepterede HScore system. Den HScore blev beregnet ved anvendelse af følgende ligning: HScore = ΣPi (i) (I = 0, 1, 2, 3, Pi = 0-100%), hvor i repræsenterer den farvningsintensitet, dvs. 0 = ingen farvning, 1 = svag farvning, 2 = moderat farvning, og 3 = stærk farvning. (Yderligere fil 1: Figur S1) Fotografier af reference- intensiteter er vist i de supplerende data. Da Pi repræsenterer procentdelen af ​​farvede celler med intensiteter varierer fra 0 til 100%, blev den endelige HScore varierede fra 0 til 300. De procentdele af positive celler talt i mindst 50 felter ved at undersøge mindst 1000 celler under et mikroskop under anvendelse af en 40 x objektiv linse. Ekspressionsniveauerne af CD24 og CD44 blev klassificeret som negativ (HScore < 30) og positive (HScore ≥ 30). Cut-off værdier for CD24 og CD44 (HScore < 30) blev ændret i overensstemmelse med resultaterne af tidligere undersøgelser [11, 15]
revers transkription-polymerasekædereaktion kvantificering af CD24 og CD44
Expression niveauer af CD24. og CD44 mRNA blev bestemt i 34 patienter med gastrisk cancer. Kort beskrevet RNA blev ekstraheret fra mave væv under anvendelse af en RNA Isolation Kit (Axygen, CA, USA) i overensstemmelse med producentens retningslinier. Efter DNase-behandling, blev første streng cDNA syntetiseret ved anvendelse af et cDNA-syntese kit (Roche, Basel, Schweiz). Kvantitativ polymerase kædereaktion af CD24 (forward primer: AAA CAA CAA CTG GAA CTT CAA GTA ACT C, revers primer: GGT GGT GGC ATT AGT TGG ATT T) og CD44v6 (forward primer: TCC CTG CTA CCA ATA GGA ATG ATG, revers primer : GGT CAC TGG GAT GAA GGT CC) blev udført ved anvendelse af Light Cycler 480-system (Roche). Glyceraldehyd 3-phosphat-dehydrogenase (GAPDH) blev kvantificeret som en endogen RNA-kontrol (fremadrettet primer: TGC ACC ACC AAC TGC TTA GC, revers primer: GGC ATG GAC TGT GGT CAT GAG).
Bestemmelse af H. pylori
infektion
Blodprøver blev opsamlet fra 103 patienter til bestemmelse af tilstedeværelsen af ​​H. pylori
infektion før operation. Serum anti-H. pylori
IgG blev detekteret ved enzymkoblet immunosorbent assay (Biohit, Helsinki, Finland). Kort fortalt blev prøver med titere over afskæringsværdi på 30 EIU betragtes som positiv for H. pylori
infektion som tidligere beskrevet [16].
Statistisk analyse Salg The HSCOREs for CD24 og CD44-ekspression var præsenteres som medianer (interkvartile område). Mann-Whitney U, Kruskal-Wallis H, og Wilcoxon signed rank test blev anvendt til at sammenligne resultater mellem grupper. Kaplan-Meier-metoden blev anvendt til at anslå den samlede overlevelsesraten, og overlevelse forskelle blev analyseret under anvendelse log-rank test. En Cox proportionel risiko model blev brugt til at beregne de relative risici og tilsvarende konfidensintervaller 95% (CI), efter justering for alder, køn, lymphovascular invasion, og TNM mellemstationer. Analyser blev udført ved hjælp af SPSS-software 18.0 (SPSS Inc., USA). Alle statistiske tests blev tosidede og P
værdier < blev påvist 0,05 blev anset for at være statistisk signifikant.
Resultater
CD24 og CD44 ekspressionsniveauerne i mavekræft
CD24 og CD44-ekspression i membranen af ​​kræftceller i mavekræft prøver (Figur 1). Svag farvning for både CD24 og CD44 blev også observeret i kernen af ​​gastriske cancerceller. Alle negative kontroller demonstrerede ubetydelig baggrundsfarvning. Blandt 77 parrede prøver, blev CD24 (+) og CD44 (+) farvningsresultater fundet i 35/77 (45,5%) og 47/77 (61,0%) af de gastriske cancer prøver. Men viste de parrede normale gastriske epitelceller, negative udtryk for CD24 og CD44. mRNA ekspressionsniveauer af både CD24 og CD44 var signifikant højere i immunhistokemisk positive sammenlignet med immunhistokemisk negative grupper. MRNA ekspressionsniveauer af CD24 og CD44 var i overensstemmelse med immunhistokemiske resulterer i gastrisk cancer (figur 2). Figur 1 Visualisering af CD24 og CD44 ekspression i gastriske cancerceller ved immunhistokemi. CD24 (A) og CD44 (B) immunfarvning i membranen af ​​gastriske carcinomceller.
Figur 2 mRNA ekspressionsniveauer af CD24 og CD44. Kvantificering ved revers transkription-polymerasekædereaktion viste, at CD24 (A) og CD44 (B) niveauer signifikant højere i immunhistokemisk positive sammenlignet med immunhistokemisk negative grupper, henholdsvis. *, P
< 0,001.
Korrelationer mellem CD24 /CD44 ekspressionsniveauerne og clinicopathologic parametre
Patienter med lymphovascular invasion havde signifikant højere CD44 positivitet end dem uden invasion (P
= 0,013). CD24 og CD44-ekspressionsniveauer blev også analyseret efter alder, køn, tumor differentiering, dybde af invasion, lymfeknudemetastase, og TNM fase. Men der var ingen signifikante forskelle i CD24 /CD44 ekspressionsniveauer i forhold til disse parametre. De kliniske karakteristika for de emner er sammenfattet i tabel 1.Table 1 CD24 og CD44 udtryk i gastriske carcinomer i henhold til klinisk-patologiske parametre
CD24 positiv rate n (%)
P-værdi


CD44 positiv rate n (%)
P-værdi
Køn
Mand (n = 221)
92 (41,6)
0,148
133 (60,2)
0,835
Kvinde (n = 69)
22 (31,9)
45 (65,2)
Alder (y)
≤60 (n = 127 )
48 (37,8)
0,435
85 (66,9)
0,087
> 60 (n = 163)
69 (42,3)
93 (57,0)
H.pylori
infektion (n = 103)
Positiv (n = 67)
24 (35,8)
0,096
48 (71,6)
0,815
Negativ (n = 36)
19 (52,8)
25 (69,4)
Lauren klassificering
Intestinal type (n = 104)
42 (40.3)
0,965
67 (64,4)
0,168
Diffus type (n = 186)
77 (41,3)
103 (55,3)
WHO klassifikation
Papillært adenocarcinom (n = 4)
1 (25,0)
0,906
4 (100,0)
0,064
Tubular adenocarcinom
Well (n = 1)
0 (0,0)
0 (0,0)
Moderat (n = 98)
30 (30,6)
49 (50,0)
Utilfreds (n = 153)
47 (30.7)
87 (56,9)
mucinøs adenocarcinom (n = 27)
7 (25,9)
13 (48,1) Salg Dårligt sammenhængende carcinomer (Signet ring celle carcinomer) (n = 7)
1 (14,3)
1 (14,3)
lymfeknuder-kar invasion
Fraværende (n = 134)
56 (41,8)
0,642
72 (53,7)
0,013
Present (n = 156)
61 (39,1)
106 (67,9)
TNM stadie
I (n = 23)
10 (43,5)
0,844
16 (69,6)
0,559
II (n = 47)
19 (40,4)
32 (68,1)
III (n = 187)
77 (41,2)
110 (58,9)
IV (n = 33)
11 (33.3)
20 (60,6)
invasion
T1 (n = 9)
2 (22.2)
0,537
7 (77,8)
0,485
T2 ( n = 36)
14 (38,9)
22 (61,1)
T3 (n = 212)
85 (40,1)
132 (62.2)
T4 (n = 33)
16 (48,5)
17 (51,5)
lymfeknudemetastase
n0 (n = 62)
27 (43,5)
0,445
40 (64,5)
0,534
N1 (n = 89)
39 (43,8)
49 (55,1)
N2 (n = 74)
24 (32,4)
47 (63,5)
N3 (n = 65)
27 (41,5)
42 (64,6)
Overlevelse
Overlevet (n = 171)
62 (36,3)
0,089
96 (56,1 )
0,028
Død (n = 119)
55 (46,2)
82 (68,9)
CD44-ekspression forbundet med dårlig overlevelse
Opfølgning oplysninger blev tilgængelige for alle 290 patienter for perioder på 3-135 måneder (median 41 måneder). Ingen patient døde af postoperative komplikationer inden for 30 dage efter begyndelsen af ​​undersøgelsen periode, men 119 (41,0%) patienter døde under opfølgningsperioden. Den samlede overlevelse var signifikant længere i CD44 (-) i forhold til CD44 (+) patienter (figur 3A; log-rank test, P
= 0,035). Selv patienter med CD24 (-) tumorer viste en tendens mod længere samlet overlevelse tendens, forskellen var ikke signifikant (figur 3B; log-rank test, P
= 0,115). TNM stadie og lymphovascular invasion var signifikant relateret til postoperativ overlevelsestid (figur 3C, D). Figur 3 Faktorer, der påvirker den samlede overlevelse hos patienter med mavekræft. Bemærk ingen signifikant korrelation mellem CD24-ekspression og samlet overlevelse tid (B). Men CD44-ekspression (A), TNM mellemstationer (C), og lymphovascular invasion (D) var signifikant forbundet med dårlig overlevelse i mavekræft.
CD44-ekspression var en uafhængig prognostisk markør
Efter justering for køn, alder, TNM fase, og lymphovascular invasion, CD44 (+) patienter havde en signifikant højere risiko for mavekræft dødsfald sammenlignet med CD44 (-) patienter (odds ratio (OR) = 1,57; 95% CI: 1,05-2,36; P
= 0,029). Sammenlignet med patienter, som var CD24 (-), CD24 (+) patienter havde en højere sandsynlighed for kortere samlet overlevelse, om forskellen ikke var signifikant (OR = 1,41; 95% CI: 0,98-2,02; P
= 0,065) . Multivariat analyser identificeret CD44 udtryk, TNM stadie, og lymphovascular invasion som selvstændige prognostiske faktorer af dårlig patient overlevelse i gastrisk cancer (tabel 2) .table 2 Multivariat analyse med Cox proportionel risiko model til forudsigelse af den samlede overlevelse hos patienter med mavekræft

Relativ risiko (95% CI)
P-værdi *
CD44 udtryk
Negativ (n = 112)
reference
Positiv (n = 178)
1,57 (1,05-2,36)
0,029
CD24 udtryk
Negativ (n = 173)
reference
Positiv (n = 117)
1,41 (0,98-2,02 )
0,065
TNM mellemstationer
I (n = 23)
reference
II (n = 47)
1,69 (0,46-6,24)
0,433
III ( n = 187)
4,32 (1,33-14,01)
0,015
IV (n = 33)
14,53 (4,27-49,41)
< 0,001
lymfeknuder-vaskulær invasion
Fraværende (n = 134)
reference
Present (n = 156)
1,60 (1,09-2,35)
0,016
* Cox proportionel risiko model, justeret for køn, alder, venøs infiltration blev TNM mellemstationer.
CD24 /CD44 ekspressionsniveauerne og H. pylori
infektion
Helicobacter pylori
infektion påvist i 67 af de (65,4%) gastrisk patienter 103 cancer testet. Der var imidlertid ingen korrelation mellem H. pylori
infektion og CD44-ekspression (P
= 0,815), og ikke signifikant sammenhæng mellem H. pylori
infektion og CD24-ekspression (P
= 0,096).
Diskussion
Adskillige nyere undersøgelser har fokuseret på den diagnostiske og prognostiske betydning af CD24 og CD44-ekspression i humane kræftformer [17-19], og de roller, CD24 og CD44 i gastrisk karcinom er også blevet undersøgt [6, 11 , 20, 21]. Takahashi et al. rapporterede, at CD24 opregulering var signifikant associeret med dybde invasion og høj patologisk stadium i 173 patienter med mavekræft [22]. Hyppigheden af ​​CD44-ekspression i mavekræft varierer meget fra den 31. til 72%. Ozmen et al. rapporterede signifikante sammenhænge mellem CD44 overekspression og perineurale invasion og lymfeknude positivitet i gastrisk kræft [23]. Den foreliggende undersøgelse samtidigt analyseret CD24 og CD44-ekspressionsniveauer uafhængigt og viste, at positivt udtryk for CD44 alene, men ikke CD24, var forbundet med ringe overlevelse i gastrisk karcinom. Nr CD24 (+) eller CD44 (+) farvning blev fundet i normal gastrisk overfladeepitelet i den foreliggende undersøgelse, selvom Bessede et al. havde påvise CD44-ekspression i normale gastrisk mucosa [12]. Yderligere undersøgelser er nødvendige for at forklare denne tilsyneladende uoverensstemmelse. CD24 er en mucin-typen glycosylphosphatidylinositol-linked celleoverfladeprotein der udtrykkes i udvikling eller regenerere væv, og i kræft i æggestokkene og hepatocellulært carcinom [20, 24]. Tidligere undersøgelse af korrelationen mellem CD24 /CD44-ekspression og gastrisk cancer afslørede, at CD24 (+) patienter havde en højere sandsynlighed for gastrisk cancer tilbagefald end CD24 (-) patienter [11]. Men den biologiske funktion af CD24 i carcinogenese fortsat ukendt. Tidligere undersøgelser observerede forhold mellem høj CD24-ekspression og lymfeknudemetastaser, venøs invasion, og lymfe invasion. Men skønt den foreliggende undersøgelse viste en tendens til kortere overlevelse i CD24 (-) sammenlignet med CD24 (+) patienter, var forskellen ikke signifikant. Duckworth et al. detekteret CD24-ekspression i gastriske parietalceller og viste, at det regulerede apoptose og reaktionen på Helicobacter felis
infektion i en musemodel [25]. Men den nuværende undersøgelse viste ingen signifikant sammenhæng mellem Helicobacter
infektion og CD24-ekspression. En mulig forklaring på den signifikant sammenhæng mellem CD44 og overlevelse kan være relateret til den stamcelle funktion af CD44 (+) celler [26-29]. I 2009 Takaishi et al. først demonstrerede eksistensen af ​​CD44 (+) celler udstyret med stamcelle egenskaber i gastriske tumorer. De rapporterede, at CD44 (+) gastriske cancerceller viste stamcelle karakteristika selvfornyelse og evnen til at danne differentierede afkom og giver anledning til CD44 (-) celler. Takaishi et al. verificeres yderligere CD44 som en celleoverflademarkør af gastriske CSCS i flere humane gastriske cancercellelinjer, og viste, at CD44 (+) gastriske cancerceller viste forøget resistens mod kemoterapi- eller stråleinduceret celledød [29]. Liu et al. rapporterede, at CD44 var en direkte og relevant nedstrøms mål for miR-34a i prostatakræft. CD44 protein niveauer blev nedsat i celler overudtrykker miR-34a, og banke ned af CD44 funktionelt efterlignede MIR-34a virkninger af hæmning af tumor udvikling og metastase [30]. Vi fandt derfor, at højere ekspression af CD44 i gastriske cancerceller kan repræsentere en højere procentdel af CSCS, hvilket forklarer, hvorfor CD44 (+) patienter demonstrerer dårligere samlet overlevelse end CD44 (-) patienter. Yderligere undersøgelser er berettiget til at undersøge mekanismerne for miRNA regulering af CSCS.
Konklusioner
Afslutningsvis blev ekspressionen af ​​CD44 forbundet med dårlig overlevelse hos patienter med gastrisk karcinom. Dette antyder, at CD44 kan være en klinisk nyttig prognostisk markør, og kan også repræsentere en nyttig terapeutisk mål. Men funktioner CD24 og CD44 i gastrisk carcinogenese fortsat uklare [31, 33], og der er behov for yderligere undersøgelser for at afklare deres roller.
Erklæringer
Tak
Dette arbejde blev støttet af Norman Bethune Program Jilin University [2013025], og National Natural Science Foundation of China (81072369 og 81273065) | Electronic supplerende materiale
12876_2014_1181_MOESM1_ESM.pptx Yderligere fil 1:. Figur S1: Billeder af CD44 immunhistokemi farvning intensiteter: 0, 1 , 2, og 3. (PPTX 5 MB) Forfattere 'oprindelige indsendt filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12876_2014_1181_MOESM2_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12876_2014_1181_MOESM3_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12876_2014_1181_MOESM4_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 3 konkurrerende interesser
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.
Forfattere ' bidrag
JJ og XC designet undersøgelse og gennemføres mest af undersøgelsen; JJ og XC skrev det første udkast af manuskriptet; DC udført de molekylære eksperimenter; HM udført de patologiske forsøg; MJ, YW, og FK analyserede den patologiske data; DC, ZJ, og FK indsamlede patienternes kliniske oplysninger; JJ udførte den statistiske analyse. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• De overmethylated gener i Helicobacter pylori-inficerede maveslimhinden er demethyleret i gastriske cancere
• Spontan bristning af gigantiske gastrisk stromal tumor i gastriske lumen