CD44 maar niet CD24 expressie gerelateerd is aan een slechte prognose in niet-cardia adenocarcinoom van de maag

CD44 maar niet CD24 expressie gerelateerd is aan een slechte prognose in niet-cardia adenocarcinoom van de maag
Abstract achtergrond
Recente studies hebben zich gericht op de diagnostische en prognostische betekenis van CD24 en CD44 expressie in menselijke kankers. Dit onderzoek was gericht op veranderingen in CD44 en CD24 expressieniveaus verkennen in patiënten met maagkanker en hun prognostische waarde beoordelen.
Werkwijzen
CD44 en CD24 expressieniveaus werden immunohistochemisch onderzocht tumor monsters van 290 patiënten met niet-gastrische cardia adenocarcinoom, van wie er 77 aangrenzend normaal maagslijmvlies had gekoppeld. CD24 en CD44 mRNA-niveaus werden bepaald door kwantitatieve polymerasekettingreactie bij 34 patiënten. Serum anti-Helicobacter pylori
IgG werd gedetecteerd door enzym-gekoppelde immunosorbent assay. Relaties tussen CD44 en CD24 eiwitexpressie niveaus en tumor parameters werden geanalyseerd en hun prognostische waarden werden geëvalueerd door Cox proportional hazards modellen.
Resultaten
CD24 en CD44 expressie niveaus waren significant hoger bij patiënten met maagkanker in vergelijking met die in gepaarde controles (45,5% vs. 0,0% en 61,0% vs. 0,0%, P Restaurant < 0,001). Onder de 290 patiënten was de totale overleving was significant hoger in CD44 (-), vergeleken met CD44 (+) van de patiënten (log-rank test, P
= 0,035). Er was echter geen significante correlatie tussen de CD24 expressie en overall overlevingstijd (log-rank test, P
= 0,115). Multivariate regressie-analyse gaf aan dat positieve CD44 expressie (P
= 0,029), TNM enscenering (P Restaurant < 0,001), en lymfovasculaire invasie (P
= 0,016), maar niet CD24 expressie (P
= 0,065) waren onafhankelijke prognostische factoren bij maagkanker.
conclusies
Individuele expressie van CD44 werd geassocieerd met een slechte overleving in patiënten met maagcarcinoom.
Sleutelwoorden
CD44 CD24 Prognose maagkanker Expression Helicobacter pylori
Achtergrond
Maagkanker is de derde meest voorkomende kanker in China. Ondanks verbeteringen in chirurgische technieken en de ontwikkeling van nieuwe chemotherapeutische behandelingen, waren er 989.600 nieuwe gevallen en meer dan 738.000 doden wereldwijd in 2008. De helft van deze gevallen en sterfgevallen werden naar schatting plaatsvinden in China. De prognose voor patiënten met gevorderde maagkanker blijft slecht, zelfs na curatieve chirurgie [1-3]. Hoewel veel studies moleculaire markers onderzocht maagkanker, de mechanismen van de carcinogenese blijft onduidelijk. Interactie tussen genetische gevoeligheid varianten, moleculaire veranderingen en omgevingsfactoren en leefstijl bekend bij te dragen aan de ontwikkeling van maagkanker. TNM maagcarcinoom wordt gebruikt om de prognose beoordelen, maar er is nog geen goede moleculaire basis biomarker die als nuttige prognostische predictor voor gevorderde maagkanker [4] kan dienen. Zowel CD24 en CD44 is gekend dat ze signaaltransductie en celhechting en hun rol bij de carcinogenese zijn onderzocht. CD24 is een mucine-achtige celoppervlakte-eiwit blijken geassocieerd te zijn met kanker in verschillende humane weefsels studies [5]. CD44 is een transmembraan glycoproteïne betrokken bij cellulaire adhesie, die ook is aangetoond in hoge mate uitgedrukt in adenocarcinoom [6]. Sheridan et al. aangetoond dat de CD44 (+) /CD24 (-) fenotype van borstkankercellen werd geassocieerd met invasieve eigenschappen en slechte prognose [7]. Kanker stamcellen (CSC) zijn recent geïdentificeerd in menselijke maagkanker cellijnen in verschillende studies [8] en CD44 (+) CD24 (+) cellen is aangetoond dat een zeer tumorigene, maagkanker celpopulatie definiëren met eigenschappen self -regeneratie en multi-lijn differentiatie [9]. Weichert et al. bleek dat cytoplasmatische expressie van CD24 onafhankelijk is gecorreleerd met verkorte overleving van colorectale kanker [10]. Yong et al. onlangs onderzocht CD44 /CD24 expressie in een retrospectieve analyse van patiënten met terugkerende maagkanker, maar vond geen associaties tussen individuele of gezamenlijke expressie van CD24 en CD44 en de herhaling van maagkanker [11]. Op basis van deze eerdere studies hebben we de hypothese dat CD24 en CD44 expressie kunnen worden gecorreleerd met maagkanker prognose. Het doel van deze studie was dan ook om de expressieniveaus van CD24 en CD44 bij maagkanker evalueren en hun eventuele voorspellende relevantie voor toekomstige klinische praktijk evalueren. Helicobacter pylori
infectie wordt beschouwd als een risicofactor voor adenocarcinoom van de maag, en een recente studie gemeld dat H. pylori
, via CagA, onthulde CSC-achtige eigenschappen in de maag epitheelcellen [12]. Daarom hebben we ook onderzoek gedaan naar de relatie tussen H. pylori
infectie en CD24 /CD44 expressie.
Methods
Deelnemers
Een totaal van 290 patiënten (221 mannen en 69 vrouwen) met een niet-cardia adenocarcinoom van de maag, die onderging radicale operatie (D1 + of D2) op het eerste ziekenhuis van Jilin University werden geïncludeerd in deze studie tussen augustus 2000 en december 2010. de patiënten hadden geen preoperatieve chemo-radiotherapie niet ontvangen. Postoperatieve chemotherapie werd toegediend aan alle patiënten met stadium II, III en IV tumoren. De diagnose van maagkanker werd gemaakt op basis van morfologische en immunohistochemische bevindingen onafhankelijk beoordeeld door twee pathologen (MJ en YW). Tumormonsters werden verzameld op chirurgie. Histopathologische classificatie en kwaliteiten van adenocarcinoom werden gedefinieerd volgens de Laurén indeling [13] en de World Health Organization (WHO) classificatie 2010 [14]. Zij omvatten papillair adenocarcinoom (n = 4), buisvormige adenocarcinoom (n = 252), mucineus adenocarcinoom (n = 27) en slecht samenhangende carcinomen (zegelring cell carcinoma) (n = 7) volgens de WHO classificatie 2010. Aangrenzende normale maag epitheliale monsters werden verzameld van 77 patiënten ter vergelijking. Patiënt leeftijden waren 32-87 jaar, met een mediane leeftijd van 64 jaar. Schriftelijke toestemming werd verkregen van alle patiënten en het studieprotocol werd goedgekeurd door de ethische commissie van het eerste ziekenhuis van Jilin University of Immunohistochemie
Tissue blokken werden gebouwd met behulp van een tissue array (Minicore;. Alphelys Impasse Paul Langevin, Plaisir, Frankrijk). Secties (4 urn dik) werden gesneden, ontdaan van paraffine, en gekleurd met behulp van een streptavidine-biotine immunoperoxidasetechniek. De coupes werden vervolgens geïncubeerd met een anti-humaan CD24 polyklonaal antilichaam (1: 100 verdund, sc-7034, Santa Cruz, USA) en CD44 monoklonaal antilichaam (1:50 verdund, MA1-81995 Thermo Fisher Scientific Inc., Chicago , IL, USA), respectievelijk. 3, 3-Diaminobenzidine was werkzaam als een chromogeen. Secties werden tegengekleurd met hematoxyline. Slides behandeld met IgG isotypen plaats van primaire antilichamen werden gebruikt als negatieve controles. De gekleurde glaasjes werden onafhankelijk van elkaar onderzocht door twee pathologen (MJ en YW), die verblind waren om de klinische gegevens en resultaten. Kleurintensiteit en percentages van cellen gekleurd met een bepaalde mate van intensiteit werden vastgesteld met behulp van algemeen aanvaarde HSCORE systeem. De HSCORE werd berekend met de volgende vergelijking: HSCORE = ΣPi (i) (I = 0, 1, 2, 3, Pi = 0-100%), waarbij i de kleurintensiteit, dat wil zeggen 0 = geen kleuring, 1 = zwakke kleuring, 2 = matig vlekken, en 3 = sterke kleuring. (Aanvullende bestandsinformatie 1: Figuur S1) Referentiegebieden intensiteiten zijn weergegeven in de aanvullende data. Aangezien Pi vertegenwoordigt het percentage gekleurde cellen met intensiteiten die variëren van 0 tot 100%, werden de laatste HSCORE varieerde van 0 tot 300. De percentages van positieve cellen in ten minste 50 gebieden geteld door het onderzoeken van ten minste 1000 cellen onder een microscoop met behulp een 40 × objectief. De expressieniveaus van CD24 en CD44 werden geclassificeerd als negatief (HSCORE < 30) en positieve (HSCORE ≥ 30). Afkapwaarden voor CD24 en CD44 (HSCORE < 30) zijn aangepast aan de resultaten van eerdere studies [11, 15]
Omgekeerde transcriptie-polymerasekettingreactie kwantificering van CD24 en CD44
expressieniveaus van CD24. en CD44 mRNA werden bepaald in 34 patiënten met maagkanker. In het kort werd RNA geëxtraheerd uit weefsels maag via een RNA Isolation Kit (Axygen, CA, USA) volgens de richtlijnen van de fabrikant. Na DNase behandeling, werd de eerste streng cDNA gesynthetiseerd met behulp van een cDNA-synthese kit (Roche, Bazel, Zwitserland). Kwantitatieve polymerase-kettingreactie van CD24 (voorwaartse primer: AAA CAA CAA CTG GAA CTT CAA GTA ACT C, reverse primer: GGT GGT GGC ATT AGT TGG ATT T) en CD44v6 (voorwaartse primer: TCC CTG CTA CCA ATA GGA ATG ATG, omgekeerde primer : GGT CAC TGG GAT GAA GGT CC) werd uitgevoerd met het Light Cycler 480 systeem (Roche). Glyceraldehyde 3-fosfaat dehydrogenase (GAPDH) werd gekwantificeerd als een endogeen RNA (voorwaartse primer: TGC ACC ACC AAC TGC TTA GC, reverse primer: GGC ATG GAC TGT GGT CAT GAG).
Bepaling van H. pylori
infectie
Bloedmonsters werden verzameld van 103 patiënten op de aanwezigheid van H. pylori infectie
bepalen voor de operatie. Serum anti-H. pylori
IgG werd gedetecteerd door enzym-gekoppelde immunosorbent assay (Biohit, Helsinki, Finland). In het kort, monsters met titers boven de cut-off waarde van 30 EIU werden beschouwd als positief voor H. pylori
infectie, zoals eerder beschreven [16] Statistische analyse
HSCOREs voor CD24 en CD44 expressie.
Waren gepresenteerd als medianen (interkwartielafstand). Mann-Whitney U, Kruskal-Wallis H en Wilcoxon signed rank tests werden gebruikt om de resultaten tussen de groepen te vergelijken. De Kaplan-Meier-methode werd gebruikt om de totale overleving schatten en overleving verschillen werden geanalyseerd met log-rank test. Een Cox proportional hazards model werd gebruikt om de relatieve risico's en bijbehorende 95% betrouwbaarheidsintervallen (CI) te berekenen, na aanpassing voor leeftijd, geslacht, lymfovasculaire invasie en TNM. Analyses werden uitgevoerd met SPSS 18.0 (SPSS Inc., USA). Alle statistische toetsen waren tweezijdig en P
waarden <
0,05 werden als statistisch significant beschouwd. Resultaten
CD24 en CD44 expressieniveaus in maagkanker
CD24 en CD44 expressie werden gedetecteerd in het membraan van kankercellen in maagkanker monsters (figuur 1). Zwakke kleuring voor zowel CD24 en CD44 werd ook waargenomen in de kern van maagkanker cellen. Alle negatieve controles blijkt verwaarloosbaar achtergrond kleuring. Onder 77 gepaarde monsters waren CD24 (+) en CD44 (+) kleuringen in 35/77 (45,5%) en 47/77 (61,0%) van de maagkanker monsters, respectievelijk. Echter, de gepaarde normale maag epitheelcellen toonde negatieve expressie van CD24 en CD44. mRNA expressie van zowel CD24 en CD44 waren significant hoger in vergelijking met immunohistochemisch positieve immunohistochemisch negatieve groepen. Het mRNA expressieniveaus van CD24 en CD44 waren consistent met de resultaten immunohistochemie bij maagkanker (figuur 2). Figuur 1 Visualisatie van CD24 en CD44 expressie in maagkanker cellen door immunohistochemie. CD24 (A) en CD44 (B) immunokleuring in de membraan van gastrische carcinoomcellen.
Figuur 2 mRNA expressie van CD24 en CD44. Kwantificatie door reverse transcriptie-polymerase kettingreactie aangetoond dat CD24 (A) en CD44 (B) niveaus waren significant hoger in vergelijking met immunohistochemisch positieve immunohistochemische negatieve groepen, respectievelijk. *, P Restaurant < 0.001.
Correlaties tussen CD24 /CD44 expressie en clinicopathologic parameters
Patiënten met lymfovasculaire invasie had aanzienlijk hogere tarieven van CD44 positiviteit dan die zonder invasie (P
= 0,013). CD24 en CD44 expressieniveaus werden geanalyseerd naar leeftijd, geslacht, tumordifferentiatie, invasiediepte, lymfeknoop metastase en TNM. Er waren echter geen significante verschillen in CD24 /CD44 expressieniveaus in verband met deze parameters. De klinische kenmerken van de onderwerpen zijn samengevat in tabel 1 1.Table CD24 en CD44 uitdrukkingen in de maag carcinomen volgens clinicopathologische parameters
CD24 positief tarief n (%)
P-waarde


CD44 positief tarief n (%)
P waarde
Geslacht
Man (n = 221)
92 (41,6)
0,148
133 (60,2)
0,835
Vrouw (n = 69)
22 (31,9)
45 (65,2)
Age (y)
≤60 (n = 127 )
48 (37,8)
0,435
85 (66,9)
0.087 Restaurant > 60 (n = 163)
69 (42,3)
93 (57,0)
H. pylori
infectie (n = 103)
Positief (n = 67)
24 (35,8)
0,096
48 (71,6)
0,815
Negatief (n = 36)
19 (52,8)
25 (69,4)
Lauren indeling
Intestinale type (n = 104)
42 (40,3)
0,965
67 (64,4)
0,168
Diffuse type (n = 186)
77 (41,3)
103 (55,3)
WHO-classificatie
Papillaire adenocarcinoom (n = 4)
1 (25,0)
0,906 verhuur 4 (100,0)
0,064
Tubular adenocarcinoom
Well (n = 1)
0 (0,0)
0 (0,0)
Moderate (n = 98)
30 (30,6)
49 (50,0)
Poor (n = 153)
47 (30,7)
87 (56,9)
Mucineuze adenocarcinoom (n = 27)
7 (25,9)
13 (48,1)
Slecht samenhangende carcinomen (Signet ring cell carcinoma) (n = 7)
1 (14.3)
1 (14.3)
lymfe-vasculaire invasie
Afwezig (n = 134)
56 (41,8)
0,642
72 (53,7)
0,013
Present (n = 156)
61 (39,1)
106 (67,9)
TNM stadium
I (n = 23)
10 (43,5)
0,844
16 (69,6)
0,559
II (n = 47)
19 (40,4)
32 (68,1)
III (n = 187)
77 (41,2)
110 (58,9)
IV (n = 33)
11 (33,3)
20 (60,6)
Invasion
T1 (n = 9) Pagina 2 (22.2)
0,537
7 (77,8)
0,485
T2 ( n = 36)
14 (38,9)
22 (61,1)
T3 (n = 212)
85 (40.1)
132 (62,2)
T4 (n = 33)
16 (48,5)
17 (51,5)
lymfekliermetastasen
N0 (n = 62)
27 (43,5)
0,445
40 (64,5)
0,534
N1 (n = 89)
39 (43,8)
49 (55,1)
N2 (n = 74)
24 (32,4)
47 (63,5)
N3 (n = 65)
27 (41,5)
42 (64,6)
Survival
Overleeft (n = 171)
62 (36,3)
0,089
96 (56.1 )
0,028
Overleden (n = 119)
55 (46,2)
82 (68,9)
CD44 expressie werd geassocieerd met een slechte overlevingskansen
Follow-up informatie is beschikbaar voor alle 290 patiënten voor een periode van 3-135 maanden (mediaan 41 maanden). Geen van de patiënten overleed aan postoperatieve complicaties binnen 30 dagen na het begin van de onderzoeksperiode, maar 119 (41,0%) patiënten overleden tijdens de follow-up periode. De totale overleving was significant langer in CD44 (-), vergeleken met CD44 (+) van de patiënten (figuur 3A, log-rank test, P
= 0,035). Hoewel patiënten met CD24 (-) tumoren toonde een trend naar langere algemene overleving trend, het verschil was niet significant (Figuur 3B, log-rank test, P
= 0,115). TNM podium en lymfovasculaire invasie waren significant gerelateerd aan postoperatieve overlevingstijd (figuur 3C, D). Figuur 3 Factoren die de totale overleving bij patiënten met maagkanker. Opmerking geen significante correlatie tussen de CD24 expressie en overall overlevingstijd (B). Echter CD44 expressie (A), TNM staging (C), en lymfovasculaire invasie (D) werden significant geassocieerd met slechte overleving bij maagkanker.
CD44 expressie was een onafhankelijke prognostische marker
Na correctie voor geslacht, leeftijd, TNM podium, en lymfovasculaire invasie, CD44 (+) van de patiënten hadden een significant hoger risico van maag-kanker-gerelateerde overlijden in vergelijking met CD44 (-) van de patiënten (odds ratio (OR) = 1,57; 95% CI: 1,05-2,36; P
= 0,029). Vergeleken met patiënten die waren CD24 (-), CD24 (+) patiënten hadden een hogere kans kortere totale overleving, maar het verschil was niet significant (OR = 1,41, 95% CI: 0,98-2,02; p = 0,065
) . Multivariate analyse geïdentificeerd CD44 expressie, TNM stadium, en lymfovasculaire invasie als onafhankelijke prognostische factoren van slechte overleving patiënt bij maagkanker (tabel 2) .table 2 Multivariate analyse met Cox proportionele hazards model voor de voorspelling van de totale overleving bij patiënten met maagkanker

Relatief risico (95% CI)
P-waarde *
CD44 expressie
Negatieve (n = 112)
referentie
Positief (n = 178)
1,57 (1,05-2,36)
0.029
CD24 expressie
Negatieve (n = 173)
referentie
Positive (n = 117)
1,41 (0,98-2,02 )
0.065
TNM staging
I (n = 23)
referentie
II (n = 47)
1,69 (0,46-6,24)
0,433
III ( n = 187)
4,32 (1,33-14,01)
0,015
IV (n = 33)
14,53 (4,27-49,41) Restaurant < 0,001
lymfe-vasculaire invasie
Afwezig (n = 134)
referentie
Present (n = 156)
1,60 (1,09-2,35)
0,016 pagina Home Cox proportionele hazards model, gecorrigeerd voor geslacht, leeftijd, veneuze infiltratie , TNM staging.
CD24 /CD44 expressie en H. pylori-infectie

Helicobacter pylori
infectie gevonden in 67 van de 103 (65,4%) maagkanker patiënten getest. Echter, er was geen correlatie tussen de H. pylori
infectie en CD44 expressie (P
= 0,815), en er geen significant verband tussen H. pylori
infectie en CD24 expressie (P
= 0,096).
Discussie
recent onderzoek heeft geconcentreerd op de diagnostische en prognostische betekenis van CD24 en CD44 expressie in menselijke kankers [17-19], en de rol van CD24 en CD44 in maagcarcinoom zijn ook onderzocht [6, 11 , 20, 21]. Takahashi et al. gemeld dat CD24 opregulatie was significant geassocieerd met diepte van invasie en hoge pathologische stadium van 173 patiënten met maagkanker [22]. De frequentie van CD44 expressie in maagkanker varieert sterk 31-72%. Ozmen et al. gerapporteerde significante correlaties tussen CD44 overexpressie en perineurale invasie en lymfeklieren positiviteit in maagkanker [23]. Deze studie gelijktijdig geanalyseerd CD24 en CD44 expressieniveaus onafhankelijk en toonde aan dat expressie van CD44 positieve alleen, maar niet CD24, was geassocieerd met een slechte overleving bij maagkanker. Nr CD24 (+) of CD44 (+) kleuring werd gevonden in normale maagzijde epitheel in dit onderzoek, maar Bessède et al. detecteerde CD44 expressie in normale maagslijmvlies [12]. Verdere studies zijn nodig om deze ogenschijnlijke tegenstrijdigheid te verklaren. CD24 is een mucine-type glycosylfosfatidylinositol verbonden celoppervlakte-eiwit dat tot expressie bij de ontwikkeling of regeneratie van weefsel, en bij eierstokkanker en hepatocellulair carcinoom [20, 24]. Vorige onderzoek naar de correlatie tussen CD24 /CD44 expressie en maagkanker onthulde dat CD24 (+) van de patiënten hadden een hogere kans op maagkanker recidief dan CD24 (-) van de patiënten [11]. De biologische functie van CD24 in kanker blijft onbekend. Eerdere studies waargenomen relaties tussen hoge CD24 expressie en lymfeklieren metastase, veneuze invasie, en lymfatische invasie. Hoewel deze studie bleek een trend naar kortere overleving CD24 (-) vergeleken met CD24 (+) patiënten, het verschil was niet significant. Duckworth et al. gedetecteerd CD24 expressie in pariëtale cellen en toonde aan dat het gereguleerde apoptose en de reactie op Helicobacter felis
infectie bij een muismodel [25]. Echter, de huidige studie vond geen significant verband tussen Helicobacter
infectie en CD24 expressie. Een mogelijke verklaring voor de significante associatie tussen CD44 en overleving kunnen worden gerelateerd aan de stamcel functie van CD44 (+) cellen [26-29]. In 2009, Takaishi et al. voor het eerst aangetoond dat de aanwezigheid van CD44 (+) cellen begiftigd met stamcellen eigenschappen in de maag tumoren. Zij meldde dat CD44 (+) maagkanker cellen vertoonden de stamcel kenmerken van zelfvernieuwing en het vermogen om gedifferentieerde nageslacht te vormen en tot CD44 verkregen (-) cellen. Takaishi et al. CD44 verder geverifieerd als een celoppervlak marker van maag CSCs in verschillende menselijke maagkanker cellijnen en aangetoond dat CD44 (+) maagkanker cellen vertoonden verhoogde resistentie tegen door chemotherapie of bestraling geïnduceerde celdood [29]. Liu et al. gemeld dat CD44 was een directe en relevante downstream doelwit van miR-34a bij prostaatkanker. CD44 eiwit niveaus werden verlaagd in cellen overexpressie van miR-34a en knock down van CD44 functioneel nagebootst de miR-34a effecten van de remming van tumorontwikkeling en metastase [30]. Daarom aangenomen dat hogere expressie van CD44 bij maagkanker cellen een hoger percentage CSCs kunnen vormen, waardoor verklaren waarom CD44 (+) patiënten demonstreren slechtere overleving dan CD44 (-) patiënten. Verdere studies zijn gerechtvaardigd om de mechanismen van miRNA regulatie van CSCs onderzoeken.
Conclusies
Tot slot, de expressie van CD44 werd geassocieerd met een slechte overleving bij patiënten met maagcarcinoom. Dit suggereert dat CD44 een klinisch bruikbare prognostische marker kan zijn, en kan ook een bruikbaar therapeutisch doelwit vertegenwoordigen. Echter, de functies van CD24 en CD44 in de maag carcinogenese blijven onduidelijk [31, 33], en de verdere studies nodig zijn om hun rol te verduidelijken.
Verklaringen
Dankwoord
Dit werk werd ondersteund door de Norman Bethune Program van Jilin University [2013025], en de National Natural Science Foundation of China (81072369 en 81273065)
Electronic aanvullend materiaal
12876_2014_1181_MOESM1_ESM.pptx Extra file 1:. Figuur S1: Foto's van de CD44 immunohistochemie kleuring intensiteiten: 0, 1 , 2 en 3. (PPTX 5 MB) auteurs 'originele bestanden ingediend voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12876_2014_1181_MOESM3_ESM.pdf Authors' 12876_2014_1181_MOESM2_ESM.pdf Auteurs originele bestand voor figuur 2 12876_2014_1181_MOESM4_ESM.pdf Authors 'originele bestand voor figuur 3 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
Authors' bijdragen
JJ en XC ontwierp de studie en het grootste deel van het onderzoek uitgevoerd; JJ en XC schreef het eerste ontwerp van het manuscript; DC voerde de moleculaire experimenten; HM voerde de pathologie experimenten; MJ, YW en FK analyseerde de pathologische gegevens; DC, ZJ, en FK verzamelde klinische informatie van patiënten; JJ deed de statistische analyse. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• De overmethylated genen in Helicobacter pylori-infectie maagslijmvlies gedemethyleerd in maagkanker
• Spontane ruptuur van reusachtige maag stromale tumor in de maag lumen