Stomach Health > Maag Gezondheid >  > Stomach Knowledges > onderzoeken

H. pylori klinische isolaten hebben uiteenlopende babAB genotype distributies over verschillende topografische sites van de maag met correlatie met klinische ziekte outcomes

H. pylori
klinische isolaten hebben uiteenlopende babAB
genotype distributies over verschillende topografische sites van de maag met correlatie met de klinische resultaten en vaatziekten
Abstracte achtergrond
Intragenomic recombinatie tussen Baba Kopen en Babb
bemiddelt antigene varianten en kan helpen H. pylori
kolonisatie. Deze studie onderzocht of variabele genotypen van Baba Kopen en Babb
correleren met verschillende klinische resultaten en vaatziekten, en kan verdelen over de verschillende maag niches.
Resultaten
deze studie werden 92 klinische stammen (45 van maagzweer , 27 van gastritis en 20 van maagkanker) te detecteren of Baba Kopen en babb Wat zijn bij locus A of B door PCR-reacties met de primers ontworpen van de stroomopwaartse en variabele regio Baba Kopen en Babb
genen. Vier genotypen van Baba Kopen en Babb
(A B, AB B, A AB, AB AB) werden gevonden. De verdeling van de 4 genotypen in 92 klinische stammen was significant verschillend tussen patiënten met verschillende maagaandoeningen (p
< 0,05). De isolaten van maagkanker patiënten hadden een hoger percentage van AB AB genotype dan die van niet-kankerpatiënten (40,0% vs.
9,7%, p Restaurant < 0,05). AB AB genotype was geassocieerd met een hogere intensiteit van intestinale metaplasie (p
< 0,05), maar niet gecorreleerd met een hogere ontsteking en kolonisatie dichtheid in gastrische histologie (p
> 0,05). Trouwens, de studie namen 19 patiënten na te gaan of variabele genotypen van babAB
bestond in de verschillende maag niches. Van de patiënten die geïnfecteerd zijn met meerdere babAB
genotypen via antrum en corpus, waren er hogere genotypes als AB en AB AB in isolaten antrum dan in die van corpus (75,0% vs. 16,7%
, p Restaurant <. 0,05)
Conclusies
de H. pylori
isoleren met de AB AB genotype correleert met een verhoogd risico op kanker maag, en koloniseren in een antrum overheersende manier
Achtergrond Helicobacter pylori infectie
verhoogt het risico van maagzweren en gastrisch adenocarcinoom van de menselijke maag [1-3]. H. pylori
vasthouden aan de maag epitheel en leveren effectoren tot ontstekingen [4, 5] induceren. Een van de best bestudeerde adhesinen de bloedgroep antigeen bindende adhesine (BabA), die Lewis b (Leb) en verwante ABO antigenen bindt [6, 7]. Vermeende adhesine, Babb, wordt gecodeerd door Babb
, die bijna identiek zijn N- en C-terminale sequenties deelt met Baba
[7, 8]. De omgekeerde chromosomale locaties van Baba Kopen en Babb
tussen strain J99 en 26.695 bewijzen dat de recombinatie gebeurtenissen tussen deze twee genen [9, 10]. De twee genen geografische en allelvariatie [11] tonen ook. Bovendien is de verdubbeling van Baba golfreizen of Babb
gen wordt gemedieerd door genconversie tussen de verschillende chromosomale loci [12-14]. Bäckström et al
. [14] heeft aangetoond dat de stille Baba
gen van een Leb-bindende stam kan worden geactiveerd door recombinatie in het Babb
gen. De resusaap model bleek dat de meeste herstelde isolaten hebben Baba
vervangen door een tweede exemplaar van Babb
na enkele weken van de infectie [12].
In de westerse landen, patiënten die besmet zijn met Baba
-positieve H . pylori
isolaten zijn geassocieerd met een verhoogd risico van maagzweer ziekten [15, 16]. Echter, is deze vereniging niet bevestigd bij patiënten uit het Oost-Azië, of een andere westerse landen [17-19]. Colbeck et al
. [20] gebruikt PCR om te detecteren of de stroomafwaarts van hpyD
(locus A) en S18
(locus B) zijn Baba golfreizen of Babb
en vond single-kolonie te isoleren met gemengde Baba
en babb
genotype op dezelfde locus, wat aangeeft subpopulaties binnen de bacteriepopulatie verkregen uit een enkele kolonie. Het is het waard om te beantwoorden of de genetische profielen van Baba Kopen en Babb
kan worden gerelateerd aan de verschillende klinische ziekte uitkomsten of de specifieke H. pylori
gerelateerde histologische kenmerken.
Er bestaan ​​verschillende overheersende cel types in het antrum en corpus. De pariëtale cellen produceren HCl vinden in het corpus en maak een andere pH-gradiënt aan de antrum. Onze eerdere studie toonde aan patiënten met chronische H. pylori infectie
een hogere intensiteit van Lewis b in de gastrische epitheel corpus uitgedrukt dan in antrum [17]. Recombinatie tussen baba Kopen en Babb
zou kunnen helpen H. pylori
haar hechting mogelijkheid om verschillende niches te passen in de maag [21] te wijzigen. Bijgevolg is het waard om het genotype verdeling van Baba
te bepalen en Babb
in de H. pylori
besmetting over de verschillende topografische locaties als ofwel antrum en corpus in menselijke maag. In deze studie analyseerden we de klinische betekenis van Baba Kopen en Babb
genotypes en de aanwezigheid van Baba Kopen en Babb Restaurant at locus A en B van meerdere kolonies van verschillende maag niches de babAB genetisch profiel van H. pylori
isoleert over de maag regio's binnen dezelfde host.
Resultaten
Uitkering van Baba en Babb genotypen bij patiënten met verschillende klinische aandoeningen
Detectie van babAB
genotypen was gebaseerd op de primer ontwerp getoond in figuur 1. van 92 stammen, de verdeling van de vier genotypen (AB, AB B A AB en AB AB) werd de 46 (50%), 21 (22,8%), 10 (10,9%) en 15 (16,3%), respectievelijk. Er was geen verschil in het geslacht verdeling tussen de verschillende genotypen (Chi-kwadraat test, p Restaurant > 0,05). De gemiddelde leeftijd van patiënten die geïnfecteerd zijn met genotype als AB AB was iets ouder dan degenen die besmet zijn met andere genotypen (57,6 versus 50,3 jaar, Onafhankelijk-sample t-test, p
= 0,09). De verdelingen van de vier genotypen waren significant verschillend bij patiënten met verschillende klinische aandoeningen (tabel 1, Chi-kwadraat test, p
= 0,04). De gemiddelde leeftijd van de patiënten GC hoger was dan de andere niet-kankerpatiënten (58,6 vs. 49,5
jaar Onafhankelijk-sample t-test, p
= 0,01). De koers van de AB AB genotype bij patiënten met GC was hoger dan die in de drie groepen niet-kankerpatiënten (40,0% [8/20] vs.
9,7% [7/72], Fisher exact test, p Restaurant < 0,05, odds ratio: 6,2; 95% CI: 1,9-20,3) .table 1 De Baba en Babb genotypen van H. pylori uit verschillende klinische groepen patiënten
N (%)

DU
(n = 18)
GU
(n = 27)
Gastritis
(n = 27)
GC
(n = 20)
Totaal
(n = 92)
Statistieken
p
waarde
AB
11 (61.1)
14 (51,9)
15 (55,6)
6 (30)
46 (50)
0.039
AB B
6 (33,3) verhuur 4 (14,8)
7 (25,9) verhuur 4 (20)
21 (22,8)
Een AB
0 (0) verhuur 4 (14,8) verhuur 4 (14,8)
2 (10)
10 (10.9)
AB AB
1 (5.6)
5 (18,5)
1 (3.7)
8 (40)
15 (16.3 )
DU: darmzweren. GU: maagzweer. GC: maagkanker. Het verschil tussen de vier genotypen maagaandoeningen werd beoordeeld door de chikwadraattoets.
Aangezien de AB AB genotype was hoger bij de patiënten met maagkanker, we verder getest of dit genotype kan leiden tot een hoger precancerous wijzigingen of ernstiger histologische ontsteking. Bij patiënten met GC, werd het AB AB genotype geassocieerd met een hogere intensiteit van intestinale metaplasie (IM) in het antrum vergelijking met niet-AB AB genotype (2,0 vs.
0,27, p = 0,02
). In de niet-kankerpatiënten, AB AB genotype was niet geassocieerd met hogere acute ontsteking scores (som van antrum, corpus en cardia: 3,43 vs.
2,94, p
> 0,05), chronische ontsteking scores (som van antrum, corpus en cardia: 7.29 vs.
7.22, blz Restaurant > 0,05), H. pylori
dichtheid (som van antrum, corpus en cardia: 8,14 versus 8,84
, blz Restaurant > 0,05), of de intensiteit van de IM (0,43 versus 0,51
, blz Restaurant >. 0,05) in vergelijking met niet-AB AB genotype
Verschil in het Baba en Babb genotype tussen isolaten van antrum en corpus
Voor de 19 patiënten die isolaten van verschillende maag niches over de antrum en corpus, het genotype samenstelling van Baba
verstrekt en Babb Restaurant at locus A en B van hun antrum en corpus isolaten wordt getoond in Tabel 2. Vier patiënten (nr. 7, 12, 29, 30) werden geïnfecteerd met een stam genotype AB in antrum en corpus en 15 patiënten bleken een gemengde genotype (AB B a AB of AB AB) alleen in het corpus, of beide maag niches. In deze 15 patiënten 3 patiënten (no. 28, 2, 4) had dezelfde gemengde genotypen in het antrum en corpus. Acht van de resterende 12 patiënten hadden een grote genotype over beide maag niches. Combineren met de 7 patiënten (nr. 7, 12, 29, 30, 28, 2, 4) met slechts één genotype, 78,9% (15/19) van onze patiënten hadden een grote genotype verdeeld over twee niches.Table 2 Genotype composities van antrum en corpus H. pylori-isolaten van 19 patiënten
zaak nr
babAB
genotype van isolaten
Major babAB
genotype over antrum & corpus
Dominant genotype in het antrum /corpus
AB of AB AB als dominant genotype van de 12 patiënten die besmet zijn met meer dan één genotype
antrum (n)

corpus (n)
antrum
corpus
7
AB (4)
AB (4)
AB
AB /AB
x
x
12
AB (4)
AB (4)
AB
AB /AB
x
x
29
AB (4)
AB (4)
AB
AB /AB
x
x
30
AB (4 )
AB (4)
AB
AB /AB
x
x
28 Hotels A AB (4)
Een AB (4) Hotels A AB
Een AB /A AB
x
x 2
AB AB (4)
AB AB (4)
AB AB
AB AB /AB AB
x
x verhuur 4
AB AB (4)
AB AB (4)
AB AB
AB AB /AB AB
x
x
1
AB AB (3)
AB AB (2)
AB AB
AB AB /-
+
- AB B (1)
AB B (2)
3
AB B (3)
AB B (4)
AB B
AB B /AB B
-
- AB (1)
6
AB AB (3)
Een AB (1)
AB AB (4)
AB AB
AB AB /AB AB
+
+
10 | AB AB (3)
AB B (4)
- AB AB /AB B
+
- AB B (1)
19
AB (3)
AB (3)
AB
AB /-
+
- A AB (4)
21
AB (4)
AB (3)
AB
AB /AB
+
+
AB B (1)
25 | AB (4)
AB (1)
- AB /AB B
+
- AB B (3)
14
AB (4)
AB (2 )
AB
AB /-
+
- AB B (2)
AB B (2) AB AB (2)
24
AB (3 )
AB (1)
- AB /-
+
- A AB (1)
AB B (1)
Een AB (2)
27 Hotels A AB (3)
AB (1) Hotels A AB
een AB /A AB
-
- AB AB (1)
A AB (3)
11
AB (4)
Een AB (2)
- AB /-
+
- AB B (1 )
AB AB (3)
AB AB (2)
17
AB (3)
AB (3)
AB
- /- Frankrijk -
-
AB B (3)
Een AB (1)
Een AB (2)
AB AB (2)
patiënt niet. 1, 3, 6, 19 en 21, die zijn geïnfecteerd door 2 genotypes, nog een belangrijke ene aan beide maag niches, en dat ook het geval was in 2 (nr. 14, 27) patiënten met 3 en 1 (geen. 17) patiënt met 4 genotypes vertegenwoordigd in hun infecties. - Wat aangeeft dat de patiënten niet-dominante baba Kopen en Babb
genotype in de isolaten van antrum of corpus. De patiënten waren dat volgens onze vorige studie [22].
Van deze 12 patiënten geïnfecteerd met meer dan één genotype (tabel 2), de frequentie van de grote dominante genotype, in combinatie met AB AB AB, in het antrum was hoger in vergelijking met die in het corpus (75% [9/12]
vs. 16,2% [2/12], p = 0,012
, odds ratio: 15). Echter, 6 van 12 patiënten ontbrak een overheersende genotype in hun corpus isolaten.
Sequentieanalyse en vergelijking
locus A, antrum en corpus elke patiënt isolaten hadden specifieke substituties van aminozuren in de regio BabA (figuur 2 en tabel 3). Er was echter geen duidelijke verschil tussen het antrum en corpus isolaten in de sequentie regio, met uitzondering van patiënt no. 27 (aminozuur 134 en 198). We vonden ook 5 verschillende synonieme substituties op aminozuur 161 in isolaten 6 patiënten, in vergelijking met stam J99. Hetzelfde scenario (sequentie specificiteit in stammen individuele patiënten ', maar niet tussen de antrum en corpus isolaten) was in de Babb
sequenties. Figuur 1 PCR bandenpatronen van babAB genotypes. (A) Primerparen voor gendetectie bij locus A en B. De voorwaartse primers, HypDF1 en S18F1, in het stroomopwaartse gebied van Baba
of babb
, worden gecombineerd met BabAR1 of BabBR1 primers te bepalen of de gen op locus A en B is baba golfreizen of Babb
. (B) PCR banding patronen van genotype A B, AB B, A en AB AB AB. De AB B genotype toonde twee bacteriële populaties in de single-kolonie te isoleren, de dominante als baba Kopen en de minderjarige als Babb
op locus A. De stam met een AB genotype vertegenwoordigde een dominante bevolking van Babb en een minderjarige bevolking van Baba Restaurant at locus B. De combinatie van AB B A AB werd gedefinieerd als een AB AB genotype. Lane M1, een 100 bp moleculaire marker; lane M2, l HindIII marker. De grootte van de PCR producten op locus A en B was 2,1-2,6 kb en 1,0-1,5 kb resp.
Tabel 3 De aminozuursubstituties in BabA gecodeerd door Baba bij locus A
De locatie van amino- -substituties
Case No.
6
9
37
92
131
134
136
161
165
166
198
202
204
206
212
218
25 | L
T Shirts Een
N
N
K
T Shirts R
Y
G
N
S
T Shirts T
E
S
27
L Hotels A Hotels A
N
N
T, K
T
Een
D
G
N, K
S
T Shirts T Shirts Q
P 2
L
A
S
S
N
E
T Shirts K
Y
S
N
S
T Shirts T Shirts E
S
24
L Hotels A Hotels A
N
N
K
I
T
Y
G
N
E
S
T
E
D
6
L Hotels A Hotels A
N
H
Q
T
P
Y
G
N
N
T Shirts T Shirts A
S
26
F
A Hotels A
N
N
K
T Shirts S
Y
G
N
S
N
Een
E
S
CT herhalingen van Baba en Babb bij locus B
Genes bij locus B worden geregeld door CT herhaalt in de 5 'coderende gebied, en het aantal CT herhaalt (5, 8 en 11) maakt in-frame eiwitexpressie mogelijk [12, 20]. De CT herhalingen van de Babb
gen op locus B worden getoond in Tabel 4. De corpus isolaten 7 van 12 patiënten een verandering van CT herhalingen van de Babb
gen op locus B en antrum isolaten van deze patiënten hebben altijd dezelfde CT herhalingen, met uitzondering van de patiënt 17 (tabel 4) .table 4 het aantal CT herhaalt in de 5 'coderende gebied van Babb bij locus B
zaak nr
Antrum isolaten (n = 2)
(CT herhaling nummer)
Corpus isolaten (n = 2)
(CT herhaling nummer)
Concordantie
Verandering van CT herhaling in de corpus
2
8, 8
8, 8
+
- 12
8, 8
8, 8
+
-
24
7, 7
7, 7
+
- 30
11, 11
11, 11
+
- 1
8, 8
7, 10 -
+
11
8, 8
7, 9
- +
26
8, 8
8, 9 -
+
6
9, 9
9, 12 -
+
21
7, 7
9, 10 -
+
27
9, 9
9, 8 -
+
14
8, 8
7, 7
-
- 17
7, 10 | 8, 7 -
+
Vier patiënten (nr. 2, 12, 24, 30) werden geïnfecteerd door isolaten met een soort CT repeat (7, 8 en 11) in het antrum en corpus, maar slechts één van hen (nr. 24) had een uit frame babb
. Bij andere patiënten (no. 1, 11 en 26), het antrum isolaten bevat 8 herhalingen CT maar het corpus isolaten veranderd 7, 9 of 10 herhalingen. Voor de patiënten (no. 6, 21 en 27) die waren geïnfecteerd door het antrum isolaten met 7 of 9 CT herhalingen, de corpus isolaten had ook een verandering van CT herhaald, maar het aantal CT herhalingen nog uit frame (9 , 10 en 12), behalve in één isolaat van patiënt no. 27 (CT herhaalt = 8).
Genotype en BabA uitdrukking
Om het effect van Baba Restaurant at locus A en B op BabA expressie (figuur 3A) te bepalen, vonden we dat de Baba
locus B niet duidelijk van invloed is op BabA expressie, in vergelijking met de isolaten 19C3 (A AB) en 19C1 (AB). Alle isolaten (26A1, A4, C2 en C3) had de A AB genotype, maar de CT herhalingen van The Baba
locus B van C2 was uit frame. De expressie van BabA werd niet beïnvloed door het feit of Baba
locus B was in of uit van het frame. We verder bepaald of een gemengde genotype bij locus A BabA uitdrukking zou beïnvloeden, en vond 14C2 en 14C3 met de AB B genotype (BabA /Hsp60 ratio: 0,76 en 0,70) had iets lagere expressie dan 14A2 en 14A4 met de AB genotype (BabA /hsp60-verhouding: 0,90 en 0,87, figuur 3B). AB AB genotype had ook de lagere BabA expressie dan A B (BabA /Hsp60 ratio: 1,09 en 0,89, figuur 3C). Figuur 2 De Baba sequenties aan locus A van het antrum en corpus isoleert. Kardinaal getallen geven isolaten verschillende patiënten '. A1-4 en 1-4 waren single-kolonie isoleer uit het antrum en het corpus, respectievelijk. Witte markering geeft aan aminozuren anders dan consensus.
Discussie
Het optreden van intragenomic recombinatie tussen Baba Kopen en Babb
aangetoond is in in vitro en in vivo

experimenten, wat impliceert dit mechanisme kan eventueel helpen bij H. pylori
aan te passen in de menselijke maag [12, 14]. Bovendien, gemengde genotypen Baba Kopen en babb
bij locus A of B is aangetoond [20]. De klinische associatie van de Baba Kopen en Babb
genotype van H. pylori
stammen en genetische profiel met infecties van de antrum en het corpus van een enkele host zijn nog onduidelijk. In deze studie hebben we aangetoond dat de AB AB genotype, een overheersende genotype in het antrum, werd geassocieerd met de prekankerlaesie als IM en gecorreleerd met maagkanker. Echter, H. pylori
infectie door dergelijke AB AB genotype heeft niet geleid tot een meer dichte kolonisatie of ontsteking ernst in de maag histologie. Onze gegevens tonen aan H. pylori Baba
en Babb
genotypes als AB AB moet op zijn minst uit te oefenen met een betere aanpassing aan de maag omgeving tijdens carcinogenese.
Colbeck et al
. [20] gevonden 9 genotypes (A B, AB B, A AB, A A, B B, B A, B C, C B en B AB) in hun studie. Niettemin, onze studie bleek slechts vier genotypes (A B, A AB, AB B en AB AB) in de 168 isolaten van antrum en corpus (tabel 2) 19 patiënten '. Het geeft het genotype diversiteit van babAB
in Taiwanese isolaten kon uiteraard minder bemoeilijken. Bovendien tenminste één Baba
gen op locus A bestonden elk van de isolaten. Deze bevinding is compatibel is met onze vorige verslag aan de Taiwanese H. pylori
isolaten zijn bijna 100% Baba
-positieve [17] onthullen, en ondersteuning van de hogere prevalentie van Baba
in H. pylori
stammen uit Oost-Aziatische landen dan die van de westerse wereld [23]. Bovendien Matteo et al
. [24] heeft aangetoond dat 9 van 34 patiënten (26,5%) had Bab
genvaratie in antrum en corpus van een enkele host op een bepaald tijdstip. Wij vonden dat 12 van de 19 patiënten (63,2%) geïnfecteerd door meer dan één genotype in een of beide maag niches. De prevalentie discrepantie tussen de twee studies kan worden veroorzaakt door de analyse van Bab
genotype van de bacteriële pool of enkelvoudige kolonie-isolaat.
Analyse van de sequenties Baba Kopen en babb
bleek dat synonieme substituties aminozuren zich tussen de verschillende stammen (Figuur 2, Tabel 3 en gegevens niet getoond), maar niet tussen de gastrische nissen. Trots et al
. [11] toonde ook een hoge allelische diversiteit binnen Baba Kopen en Babb
in de stammen van verschillende patiënten. Getuige de 6 verschillende synonieme substituties van aminozuur 161 in stammen de 6 patiënten, dat codon was een zeer variabele plaats. Dit is de moeite waard verder onderzoek, waar het een speciale site die verantwoordelijk is voor de aanpassing aan verschillen in individuele magen kunnen zijn.
CT herhaalt in de 5 'coderende gebied van Baba Kopen en Babb
worden vaker gevonden op locus B dan locus A [20]. We vonden dat het corpus isolaten hadden een hogere frequentie van veranderingen van het aantal herhalingen van CT babb
locus B dan antrum isolaten (tabel 4). Onder de 7 geïnfecteerd met het corpus isolaten met een verandering van CT herhalingen, één (patiënt nr. 27) had het isolaat veranderende CT herhaalt in-frame (CT = 8) (Tabel 4). Deze gegevens duiden erop dat Babb expressie strak kon worden gecontroleerd door faseverandering te wijten aan uit frame herhalingen in het corpus. Onder de 12 patiënten die geïnfecteerd zijn door isolaten met meer dan een genotype, hun isolaten van antrum hebben een hoger percentage van de AB en AB AB als dominant genotypen dan corpus (9/12 vs.
2/12, blz Restaurant < 0,05 ). Bovendien, de helft van de patiënten ontbrak een overheersende genotype in hun corpus isolaten. Deze resultaten suggereren dat de omgeving in het corpus kunnen verschillende aanpassingen voor de verschillende organismen met H. pylori
genetische diversiteit bevorderen. Ondernemingen De aanwezigheid van de AB AB genotype was hoger bij patiënten met GC oudere leeftijd (tabel 1). Bovendien wordt het genotype AB AB niet gecorreleerd met ernstigere ontsteking of precancerous veranderingen in de niet-kankerpatiënten. Op basis van deze transversale klinische histologische gegevens, suggereert de AB AB stammen kunnen een betere aanpassing aan de kankercellen milieu in de maag, in plaats van die naar meer toxiciteit bij maagkanker. In figuur 3A wordt aangetoond dat de Baba
gen locus op een overwegend bepaald BabA expressie en de gemengde genotype AB op de locus A BabA expressie (Figuur 3B en 3C) kunnen verminderen. Het is dus mogelijk een gemengd genotype AB bij locus A kan H. pylori
isolaten leveren aan een subpopulatie verliezen BabA expressie bevatten. Als alternatief kan de gemengde genotype AB bij locus B eventueel mogelijk H. pylori Belgique Om Babb expressie veranderen en dus verdient verder onderzoek.
Daarnaast zijn onze eerdere gegevens blijkt dat de intensiteit van Lewis B worden afgenomen antrum atrofie, maar kan worden bewaard in corpus hogere kolonisatie bug mediëren overthere [17]. Dus, zal het ook implicatieve zijn om te testen of de AB AB genotype dominant in antrum voordeel voor de maag epitheel met zwakke Lewis b expressie in de toekomst aan te passen kan hebben.
Conclusies
De H. pylori
isoleren met Baba Kopen en Babb
genotype als AB AB genotype correleert met een verhoogd risico op kanker van de maag, en koloniseren in een antrum overheersende manier. Dergelijke AB AB genotype wordt geassocieerd met een betere aanpassing aan de maag voorstadia of kanker milieu, en misschien het genereren van subpopulaties verliezen BabA of Babb.
Methoden
Patiënten en bacteriële isolaten
Een totaal van 92 H. pylori
stammen werden gekweekt van biopsie specimens van patiënten met verschillende klinische aandoeningen zoals darmzweer (DU, n = 18), maagzweren (GU, n = 27), gastritis (n = 27) of maagkanker (GCA, n = 20), gedefinieerd door endoscopie met histologische bevestiging. Alle patiënten hadden informed consent en onderging Panendoscopie in ons instituut gegeven. Tijdens Panendoscopie voor elke patiënt werden vijf stukjes maag biopsie, waaronder 2 van het antrum, 2 van het corpus, en 1 van de cardia verkregen. De bacteriële kweek en histologisch onderzoek werden als het vorige artikel [17]. Deze studie werd goedgekeurd door de 'Human Experiment en de ethische commissie van de Nationale Cheng Kung University Hospital' (nr HR-98-023).
Single-kolonie isolaten uit het antrum en corpus werden willekeurig gekozen uit de primaire kweekplaten. Voor elke site, werden minstens 3-4 single-kolonie isolaten willekeurig gekozen om de babAB
genotype te bepalen. Kolonie kweek voor DNA-extractie minder dan 8 passages op de mogelijkheid van genetische variatie in vitro verminderen. Elk van de 19 patiënten in het antrum en corpus geïnfecteerd door isolaten met hetzelfde RAPD banding patroon werd eerder beschreven [22].
Detectie van Baba en Babb genotypes
De detectie van Baba Kopen en Babb
genotypes was gebaseerd op de methode van Colbeck et al
[20]. HypDF1-BabAR1 en HypDF1-BabBR1 primers werden gebruikt om te bepalen of het gen op locus A was Baba golfreizen of Babb
. Evenzo werden S18F1-BabAR1 en S18F1-BabBR1 primers toegepast om te bepalen of het gen op locus B was Baba
of Babb
(Figuur 1A). 40 amplificatiecycli werden uitgevoerd met 20 pmol primer, 0,15 mM van elke deoxynucleoside trifosfaat, reactiebuffer met MgCl 2 en 1 U Taq DNA polymerase (New England Biolabs, Beverly, MA, USA) in een eindvolume van 50 pl. De omstandigheden van thermische cycli waren eerder [20] beschreven. Elke geamplificeerde product (20 ui) geanalyseerd op een 1% agarose gel gekleurd met ethidiumbromide. Figuur 3 baba op locus A dominant bepaald BabA expressie. (A) Effect van Baba Restaurant at locus B op de BabA
expression.The isoleren (19C3) had Baba Restaurant at locus A en in-frame CT herhalingen van Baba Restaurant at locus B, die waren in vergelijking met het isolaat alleen met Baba Restaurant at locus A (19C1). De aanwezigheid van Baba Restaurant at locus A en B was in de isolaten 26A1, A4, C2 en C3, maar C2 had een uit frame Baba
locus B. (B) Effect van gemengde genotype op locus A op The Baba
expressie. De isolaten van één patiënt (nr. 14) had een gemengd genotype bij locus A (14C2 en C3), die werd vergeleken met die van Baba
alleen locus A (14A2 en A4). (C) Vergelijking van BabA
tussen AB AB en A B genotypes. Hsp60 was als een interne controle.
Genotype Definitie van The Baba Kopen en Babb
genotype van elke afzonderlijke kolonie-isolaat was gebaseerd op de vorige beschrijving [20]. Een J99-achtige isolaat toonde de verwachte PCR banden van Baba
bij locus A en babb
bij locus B en is gedefinieerd als de "A B genotype" (Figuur 1B-a). Een enkele kolonie isolaat die zowel Baba Kopen en Babb
op hetzelfde locus werd gedefinieerd als "gemengde genotype" (zoals AB B A AB en AB AB), wat aangeeft dat er subpopulaties binnen de bacteriepopulatie waren afgeleid van een enkele kolonie. Een isolaat met een AB-B genotype bevatte één populatie met Baba Kopen en de andere bevolkingsgroepen met Babb
op hetzelfde locus A (Figuur 1B-b). De A AB genotype vertegenwoordigd twee populaties bacteriën, de dominante met Babb Kopen en de minderjarige een met Baba
locus B, hoewel beide afgeleid van een enkele kolonie (Figuur 1B-c). Een gemengde genotype gedetecteerd bij zowel locus A en B werd gedefinieerd als AB AB (Figuur 1B-d).

Other Languages