Rimta ne kodavimo RNR išraiška aprašymą žmogaus skrandžio vėžio ir jos klinikinė significances

seniai ne kodavimo RNR išraiška aprašymą žmogaus skrandžio vėžio ir jos klinikinių reikšmes
tezės
Background
ilgus kodavimo RNR (lncRNAs) yra paplitimo perrašyti genomo tačiau jų potencialūs vaidmenis žmogaus vėžio nėra gerai suprantama. Šio tyrimo tikslas buvo nustatyti lncRNA išraiška profilį skrandžio vėžiu ir jo galimą klinikinę vertę.
Metodai
Pasaulinė lncRNA išraiška aprašymą skrandžio vėžio buvo matuojamas lncRNA microarray. Lygiai du tipinius lncRNAs, H19 ir uc001lsz, patvirtino realaus laiko atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandininės reakcijos. buvo ištirta tarp jų lygių ir klinikos veiksnių Pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu santykiai. ROC kreivė (ROC) kreivė buvo pastatytas diferencijuojant skrandžio vėžiu nuo gerybinių skrandžio ligas.
Rezultatai
Iš viso 135 lncRNAs, kurie diferencinė ekspresija lygių tarp naviko ir ne tumoro audiniuose buvo daugiau nei dvigubai, buvo nustatyta ( GEO Nr GSE47850). Patys žemyn reguliuojamos lncRNAs skrandžio vėžio audiniuose buvo FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600 ir AK054588; o labiausiai up-reguliuojami tie buvo H19, HMlincRNA717, BM709340, BQ213083, AK054978, ir DB077273. H19 buvo rastas labai išreikštas skrandžio ir kepenų vėžio ląstelių linijas, o nuolankios išreikštas plaučių vėžio ir prostatos vėžio ląstelių linijas. Uc001lsz buvo nuolankios išreikštas skrandžio, plaučių ir kepenų vėžio ląstelių linijų, nors ir labai išreikštas prostatos vėžio. Pagal ROC kreivių plotai iki 0.613, 0.751 ir 0.761 už H19, uc001lsz, ir derinys, atitinkamai.
Išvados Viesbutis The lncRNA ekspresijos profilio skrandžio vėžio rodo galimus vaidmenis lncRNAs skrandžio vėžio atsiradimo ir plėtra. Iš H19 raiškos skrandžio vėžio rodo, kad H19 galima dalyvavo skrandžio vėžio. Sumažintas išraiška uc001lsz skrandžio vėžio ląstelių linijų ir audiniuose, jos asociacijų su TNM etape ir jos reguliacijos sutrikimas ankstyvoje vėžio ir ikivėžinius pakitimus leidžia manyti, kad uc001lsz gali būti potencialus žymeklis ankstyvo skrandžio vėžio diagnozę.
Raktažodžiai
Skrandžio vėžys Rimta ne kodavimo RNR išraiška profilis H19 uc001lsz Background
gerai mokėsi komponentai žmogaus genomo tie baltymų kodavimo genuose. Tačiau, koduojantis egzonų šių genų sudaro tik 1,5% genomo [1]. Pastaraisiais metais ji tapo vis labiau aišku, kad ne baltymų kodavimo dalis iš genomo yra labai funkcinės svarbos ligos atvejų [2]. Ne kodavimo RNR (ncRNAs) apibūdinti kaip trijų tipų, ilgų ncRNAs, vidutinio dydžio ncRNAs ir trumpą ncRNAs [1]. Nors dauguma studijas ncRNAs yra orientuota į trumpą ncRNAs, kaip antai mikro RNR (miRNAs), ilgas nekoduojanti RNR (lncRNAs) sparčiai įgauna reikšmę neseniai.
LncRNAs yra didesnė nei 200 nukleotidų ilgio [3]. Jie neseniai atsirado kaip pagrindinių žaidėjų, reglamentuojančius pagrindinius biologinius procesus. Netipinė išraiška lncRNAs buvo susijęs su vėžio [3]. Pavyzdžiui, Diferencialo ekranas kodas 3 (DD3 PCA3), prostatos konkrečių lncRNA, atrodo žymeklį anksti diagnozuoti prostatos vėžį [4]. Dar svarbiau, DD3 PCA3 galima aptikti šlapime pacientams, sergantiems prostatos vėžiu [5]. Nors Metastazė susijęs plaučių adenokarcinomos stenograma 1 (MALAT-1) nustatytas pirmą kartą nenormalus išreikštas metastasizing ne smulkiųjų ląstelių plaučių karcinomos [6], jis yra iki-reguliuojamas kepenų vėžį, krūties vėžio, kasos vėžio, gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio, ir prostatos vėžio [7]. MALAT-1 yra ne tik potencialus diagnostikos žymeklis, bet taip pat yra galimas prognostinė gaudantis [8]. HOX stenograma RNR (HOTAIR) yra susijęs su krūties vėžio ir gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio [9, 10]. H19, kitas garsus lncRNA, dažnai dalyvauja vaikų ir suaugusiųjų navikų [11].
Skrandžio vėžys yra dar viena dažniausių mirties priežasčių visame pasaulyje [12]. Tačiau, tradicinių pagrįstų strategijų radikaliai operacijos dėl skrandžio vėžio gydymui yra dar yra pakankamai. Todėl atskleisti iš atsiradimo ir plėtros skrandžio vėžio mechanizmų pritraukti daugiau dėmesio vėžio tyrimams.
Kadangi pasaulinė lncRNA išraiška aprašymą skrandžio vėžys yra ne visiškai neuždengtą šioje studijoje, mes ištirti lncRNA išraiška profilio skrandžio vėžys. Tada buvo ištirta tarp nenormaliai išreikšta-lncRNAs ir klinikos veiksnių Pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu santykiai. Mūsų duomenų suteikia kandidates diagnostikos biologinius žymenis skrandžio vėžio.
Metodai
Pacientai ir jų pavyzdžiai
skrandžio vėžio pacientų audinius, įskaitant skrandžio vėžio audiniuose, ikivėžinių pažeidimo ir atitinkantis gretimų ne navikinio audinio buvo nedelsiant konservuoti RNR fiksažų ( Bioteke, Pekinas, Kinija) pašalinus iš organizmo ir saugomi -80 ° C iki naudojimo. Audinių mėginiai buvo imami iš chirurginio ar biopsijos mėginių nuo 2011 vasario iki 2012 birželio trijų vėžio centrus, yinzhou Liaudies ligoninė, Ningbo Nr.1 ​​ligoninės ir kitų susijusių ligoninės Ningbo universiteto medicinos mokyklos, Kinija. Informuotas sutikimas buvo paimti iš visų dalykų. Žmogaus tyrimų etikos komitetas Ningbo universitetas patvirtino visus šio tyrimo aspektų. Navikai buvo pastatytas pagal naviko limfmazgius metastazių (TNM) sustojimo sistema Tarptautinės Sąjunga su vėžiu (5 -osios ED). Histologinis laipsnio buvo įvertintas vadovaujantis Nacionaline Išsami Vėžys tinklas (NCCN) klinikinėje praktikoje gairės onkologijos (V.1.2011). Kad ne-navikinių audiniai buvo 5 cm nuo naviko krašto ir nebuvo akivaizdžių auglio ląstelės, kaip įvertinti patologas. Nebuvo radioterapija, chemoterapija, skirta terapija, arba Dendritic ląstelių /citokinų sukeltą žudikas (DC /CIK) terapija prieš viršutinės virškinimo trakto endoskopija nagrinėjimo ar operaciją.
RNR paruošimas
viso RNR buvo išskirta naudojant Trizol reagentą ( INVITROGEN, Karlsruhe, Vokietija) pagal gamintojo instrukcijas [13].
LncRNA Mikrogardelė tyrimas
trijų prijungtų biopsijos mėginiai buvo gauti iš pacientų (55 y ir Vyras, 76 y ir patinas, ir 88 y ir patelė) su prastai ar blogai-ir-vidutinio diferencijuoti skrandžio vėžiu. Žmogaus lncRNA Mikrogardelė buvo pagamintas NimbleGen hibridizacijos sistemos (Arraystar, Rockville, MD). Daugiau nei 23 000 lncRNAs buvo surinkti iš autoritetingų duomenų šaltiniais, įskaitant Nacionalinės centro biotechnologijos informacija (NCBI) RefSeq, University of California, Santa Cruz (UCSC), lncRNAs iš literatūros ir Ultra užkonservuotas (UCRs) [14]. Duomenys buvo gauti ir normalizuotas naudojant NimbleScan v2.5 programinę įrangą ( "Roche NimbleGen Madison, WI). Daugiau duomenų analizė atlikta naudojant "Agilent GeneSpring GX 11,5 programinę įrangą (AGILENT TECHNOLOGIES, Santa Clara, CA).
Ląstelių kultūros
Žmogaus skrandžio epitelio ląstelių linija (GES-1), skrandžio vėžio ląstelių linijas (AGS, MGC-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901), kepenų normalus ląstelių linija (HL-7702), kepenų karcinoma ląstelių linijas (HepG2 ir SMMC-7721), vaisiaus plaučių fibroblastų ląstelių linija (HELF), plaučių karcinoma ląstelių linija (A549), prostatos epitelio ląstelių linija (RWPE-1), ir prostatos karcinoma ląstelių linijas (Du-145 ir PC-3) buvo gauti iš Šanchajaus instituto Biochemijos ir ląstelių biologijos, Kinijos mokslų akademijos (Šanchajus, Kinija). Ląstelės buvo auginamos kultūros kolbos 37 ° C drėgnoje atmosferoje 5% CO 2 [15].
KRL-PGR aptikti H19 ir uc001lsz pervežimas realaus laiko kiekybine atvirkštinės transkripcijos-polimerazės grandininės reakcijos (KRL-PGR) yra aukso standartas už duomenų patikrinimą. Norėdami patikrinti lncRNA microarray rezultatus, kDNR buvo sukurtas naudojant GoScript atvirkštinės transkripcijos (RT) sistema (Promega, Madison, WI). Kiekybinis polimerazės grandininė reakcija (qPCR) buvo pasiektas naudojant GoTaq qPCR Master Mix (Promega, Madison, WI) dėl Mx3005P realiojo laiko PGR sistema (Stratagene, La Jolla, Kalifornija). PGR pradmenis, H19, uc001lsz ir beta-aktino sekos buvo taip: 5'-ACCAGCCACCACATCATC-3 "(prasme) ir 5'-TCAGAAACAAAGAGACAGAAGG-3" (Priešprasminis) už H19; 5'-GACGGCACCTACTACACCTT-3 '(pojūtis) ir 5'-GCTGACCACCTTGTTGTTGAA-3' (Priešprasminis) už uc001lsz; 5'-AAGCCACCCCACTTCTCTCTAA-3 '(pojūtis) ir 5'-AATGCTATCACCTCCCCTGTGT-3' (Priešprasminis) už beta-aktino. Duomenys buvo analizuojami pagal ΔC
T metodas [16, 17]. Visi rezultatai buvo išreikštas priemonėmis ± SD trijų nepriklausomų eksperimentų.
Klonavimas ir seka KRL-PGR produktų
KRL-PGR produktai lncRNA pirmą kartą buvo išvalyta naudojant UNIQ-10 PGR produktas gryninimo rinkinį ir tada klonuotų į pUCm-T vektoriaus (Sangon Biotech, Šanchajus, Kinija) pagal gamintojo instrukcijas. Tada DNR sekos atliko Sangon Biotech Co., Ltd
serologinius naviko žymenų analizės pervežimas Serumas karcinoembrioninius antigeno (CEA) ir angliavandenių antigeno 19-9 (CA19-9) buvo išmatuotas naudojant Elecsys 2010 mašina (Roche diagnostika, Bazelis, Šveicarija). Apipjaustymas vertės buvo 5 ng /ml ir 35 V /ml CEA ir CA19-9, atitinkamai.
Statistinė analizė
Visi statistiniai duomenys buvo analizuojami statistikos programa Socialinių mokslų (SPSS) 18,0 programinė įranga (SPSS, Čikaga IL) ir GraphPad Prizmė 6.0 (GraphPad Programinė įranga, La Jolla, Kalifornija). Vienas iš būdų, dispersinė analizė bandymo, du-tailed Stjudento t
-test ir rango suma testas buvo naudojamas kaip tinkamas. ROC kreivė (ROC) kreivė buvo įsteigta siekiant įvertinti diagnostinę vertę. P
< 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas.
Rezultatai
LncRNA ekspresijos profilius skrandžio vėžio audiniuose, palyginti su gretimų ne tumoro audinių
lncRNA raiškos modelius tarp skrandžio vėžio audiniuose bei gretimų ne tumoro audiniuose buvo nustatyta, kad reikšmingai skiriasi (Figūra 1). Iš viso 135 lncRNAs, kurios išraiška pokytis buvo daugiau nei dvigubai, buvo nustatyta stojimo (geo numeriai yra 47850; http:.... //Www ncbi NLM NIH valst /GEO /užklausos /acc. CGI? ACC = GSE47850). Tarp jų, 71 ir 64 buvo aukštyn ir žemyn, išreikštas navikų audiniuose, atitinkamai. Labiausiai žemyn reguliuojamos lncRNAs skrandžio vėžio audiniuose buvo FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600 ir AK054588. Labiausiai up-reguliuojami lncRNAs skrandžio vėžio audiniuose buvo H19, HMlincRNA717, AI769947, BQ213083, AK054978, ir DB077273 (1 lentelė). 1 pav Pasikeitimai lncRNA ekspresijos profilius tarp skrandžio karcinoma audinių ir ne tumoro audiniuose. Rezultatas iš Hierarchinis Grupavimas rodo, kuris skiriasi lncRNA ekspresijos tarp mėginių. "Raudona" rodo aukštą santykinę išraišką; ir "mėlynas" rodo žemą santykinę išraišką.
1 lentelė Daugiau nei keturis kartus skirtingai išreikštas lncRNAs skrandžio vėžio audiniuose palyginti su suporuotas ne tumoro audinių
Vardas
chromosomos
reglamento

Sulenkite pokyčius
Sourcea
P value

H19
11
up
8.91
lncRNAdb
0.020
HMlincRNA717
18
up
5.96
lincRNA
0.013
AI769947
7
up
5.51
lincRNA
0.026
BQ213083
2
up
5.45
lincRNA
0.040
AK054978
X
up
4.59
lincRNA
0.006
DB077273
2
up
4.11
lincRNA
0.008
FER1L4
20
down
9.17
refNR
0.047
uc0 01lsz
11
down
8.36
UCSC_knowngene
0.020
BG491697
20
down
6.50
lincRNA
0.035
AF131784
18
down
6.25
mRNA
0.019
uc009ycs
11
down
5.82
UCSC_knowngene
0.009
BG981369
1
down
5.20
lincRNA
0.048
AF147447
16
down
4.76
mRNA
0.038
HMlincRNA1600
X
down
4.12
lincRNA
0.013
AK054588
1
down
4.04
lincRNA
0.045
alncRNAdb http:.. //lncrnadb lt /default ASPX; lincRNA http:.. //genomo UCSC edu /cgi-bin /hgGateway; .. RefNR http: //genomo UCSC edu /cgi-bin /hgTables; .... Http: //www ncbi NLM NIH valst /RefSeq /; .. UCSC_knowngene http: //genomo UCSC edu /cgi-bin /hgTables; iRNR http:... //genomo UCSC edu /cgi-bin /hgTables
išraiška H19 buvo reguliuojama skrandžio karcinoma audinių
Nuo H19 buvo rastas labiausiai up-reguliuojamas lncRNA skrandžio vėžio audinyje, iki 8,91 kartų kaita mikrogardeliq aptikti (1 lentelė), patvirtinti šį rezultatą, mes nustatėme, ekspresijos lygį H19 dviejų tipų vėžio audiniuose, biopsijos audinių ir chirurginių egzempliorių, atliekant KRL-PGR. Pirma, mes ištirti raiškos lygį H19 15 porų skrandžio karcinoma "biopsijos audiniuose. Mes nustatėme, kad jo lygis vėžiu audinių buvo žymiai didesnis nei, kad ne-tumoro audinių (2A pav). Tada mes nustatėme, H19 lygį daug chirurginių egzempliorių. Kaip parodyta 2B pav, tai buvo-reguliuojami 74,0% (57/77) skrandžio vėžio audiniuose (P
= 0,029). Iki sekos su KRL-PGR produktą, mes nustatėme, kad H19 (2c pav) seka atitiko, kad iš duomenų bazės (http:.... //Www ncbi NLM NIH ropos /geno /283.120). 2 H19 skaičius buvo iki reguliuojama skrandžio vėžio audiniuose, skrandžio vėžio ląstelių linijų ir kitų paplitusi vėžio ląstelių linijų. Realaus laiko KRL-PGR buvo siekiama nustatyti raiškos lygį H19. Į ΔC
T vertė buvo nustatyta atimant beta-aktino C
T vertė nuo taikinio lncRNA C
t vertės. Mažesni ΔC
T vertė rodo didesnę raišką. Lygis H19 skrandžio vėžio biopsijos audinių (N
= 15, p
= 0,014; A) ir skrandžio vėžio audiniuose (N
= 77, p
= 0,029, B). Sekos rezultatas KRL-PGR produkto H19 (C). Iš H19 lygis skrandžio vėžio ląstelių linijų (AGS, MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901) ir kepenų vėžio ląstelių linijų (SMMC-7721 ir HepG2) buvo didesnis nei žmogaus skrandžio epitelio ląstelių linijos GES-1 ir žmogaus kepenų normalus ląstelių linija HL-7702, atitinkamai; Tačiau, jo lygis plaučių vėžio ląstelių linija A549 ir ​​prostatos vėžio ląstelių linijų (Du-145 ir PC-3) buvo mažesnis nei žmogaus vaisiaus plaučių fibroblastų ląstelių linija HELF ląstelių ir žmogaus prostatos epitelio ląstelių linijos RWPE-1 (D). Visi rezultatai buvo išreikštas priemonės ± SD trijų nepriklausomų eksperimentų. #P
≪ 0,001.
Išraiška H19 bendrinėje vėžio ląstelių linijas
Norėdami gauti daugiau informacijos apie H19 raiškos vėžio, mes ištirti savo lygį kai kuriose paplitusi vėžio ląstelių linijų. Kaip parodyta 2D paveiksle, lyginant su atitinkamu normalaus ląstelių linijos, H19 buvo rastas labai išreikštas skrandžio vėžio ląstelių linijas (AGS, MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901) ir kepenų vėžio ląstelių linijas (SMMC-7721 ir HepG2), o nuolankios išreiškė plaučių vėžio ląstelių linijos (A549) ir prostatos vėžio ląstelių linijų (Du-145 ir PC-3) išraiška uc001lsz.
buvo žemyn reguliuojama skrandžio karcinoma audinių
uc001lsz yra naujos rado lncRNA, kuris yra transkripcija iš priekinės krypties chromosomos 11p15.5. Nuo mikrogardeliq rezultatus (1 lentelė), matome, kad uc001lsz buvo antra labiausiai žemyn reguliuojama lncRNA skrandžio vėžio audinyje. Kita priežastis, kad paskatino mus toliau studijuoti uc001lsz buvo, kad jis yra trans
susijęs su MUC2, kuris išsiskiria ir sudaro netirpius gleivinės barjerą žarnyno spindyje. Siekiant dar labiau patvirtina, kad uc001lsz skrandžio vėžiu išraiška, mes plečiame mėginio numerį. Duomenys rodo, kad jis buvo gerokai žemyn reguliuojama 84,4% (65/77) skrandžio vėžio audiniuose (3a pav P
< 0,001). Iki sekos su KRL-PGR produktą, mes nustatėme, kad uc001lsz (3b pav) seka atitiko, kad iš duomenų bazės ( "http: //. Genomas UCSC edu /cgi-bin /hgTables.). 3 pav Uc001lsz buvo žemyn reguliuoja skrandžio vėžio audiniuose, skrandžio vėžio ląstelių linijų ir kitų paplitusi vėžio ląstelių linijų. Realaus laiko KRL-PGR buvo siekiama nustatyti raiškos lygį uc001lsz. Buvo atlikti trys nepriklausomi eksperimentai. Lygis uc001lsz skrandžio vėžio audiniuose buvo gerokai mažesnis nei, atitinkantis ne navikinio audinio (N
= 77, p
< 0,001; A) dalį. Sekos rezultatas KRL-PGR produkto uc001lsz (B). Iš uc001lsz skrandžio vėžio ląstelių linijų (AGS, MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901), kepenų vėžio ląstelių linijas (SMMC-7721 ir HepG2) ir plaučių vėžio ląstelių linijos A549 lygis buvo mažesnis nei žmogaus skrandžio epitelio ląstelių linijos GES- 1, žmogaus kepenys normalus ląstelių linija HL-7702 ir žmogaus vaisiaus plaučių fibroblastų ląstelių linija HELF, atitinkamai; Tačiau, jo lygis prostatos vėžio ląstelių linijų (Du-145 ir PC-3) buvo didesnis negu žmogaus prostatos epitelio ląstelių linijos RWPE-1 (C) Išsireiškimas uc001lsz į paplitusi vėžio ląstelių linijas.

gauti išraiška informacijos apie uc001lsz bendruose vėžio, mes nustatėme savo lygį keliuose paplitusi vėžio ląstelių linijų. Mes nustatėme, kad, lyginant su atitinkamu normalaus ląstelių linijos, uc001lsz buvo nuolankios išreikštas skrandžio vėžiu (MAA, MSV-803 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901), plaučių vėžys (A549) ir kepenų vėžys (SMMC-7721 ir HepG2) ląstelių linijas, o tik labai išreikštas prostatos vėžiu (Du-145 ir PC-3) ląstelių linijas (3c pav.)
galimą diagnostinę vertybes H19 ir uc001lsz
Mes šalia vykdė analizę, siekdama nustatyti, ar H19 arba uc001lsz išraiška buvo susijęs su klinikos bruožai skrandžio vėžio. Kaip parodyta 2-oje lentelėje uc001lsz lygis buvo susijęs su TNM etapais (P
= 0,032). Teigiami aptikimo normos H19 ir uc001lsz yra 74,0% ir 84,4%, atitinkamai. Abu jie yra didesni nei bendro skrandžio vėžio žymenų CEA (64,0%) ir CA19-9 (53,3%) (2 lentelė). Pagal ROC kreivių plotai buvo iki 0.613, 0.751 ir 0.761 už H19, uc001lsz, o derinys, atitinkamai (4 paveikslas). Kombinuotą naudojimas H19 ir uc001lsz šiek tiek padidėjo diagnostikos value.Table 2 d H19 ir uc001lsz ekspresijos lygį (Δ C t) Santykiai vėžiu audinių, klinikos veiksnių Pacientams, sergantiems skrandžio vėžys
Charakteristikos

Ne. pacientų (%)
H19
uc001lsz
vidurkis ± SD
P vertę
vidurkis ± SD
>
P vertę
amžius (Y)
≥ 60
59 (76,6)
8,74 ± 4,67
0,588
18,85 ± 4,94
0,240
< 60
18 (23,4)
8.08 3.99 4.85
±
17,28 ± Lytis
Vyras
57 (74,0)
8,66 ± 4,81
0,823
18,19 ± 5.01
0,355
Moteris
20 (26,0)
8,40 ± 3,44
4.58
19,37 ± Skersmuo (cm); b
≥ 5
39 (52,0)
7,98 ± 4,44
0,282
18,49 ± 5,03
0,682
< 5
36 (48,0)
9,10 ± 4,53 5,11
18,01 ± CEAb
Teigiamas
48 (64,0)
8.45 ± 4.21
0.882
18.28 ą 4.54
0,593
Neigiama
27 (36,0)
8,61 ± 5,01
18,92 ± 5,71
CA19-9b
Teigiamas
40 (53,3)
8,68 ± 3.87
0.720
18,65 ± 4,64
0,792
Neigiama
35 (46,7)
8,31 ± 5,14
18,35 ± 5,37
Differentiationc
Na
3 (4.9)
8,28 ± 1,92
0,635
15,34 ± 5,40
0,371
Vidutinis
33 (54,1)
9.05 4.85
± 4,40
19,37 ± Prastas
25 (41,0)
7,84 ± 5,47
19,54 ± 4,91
limfinės metastasisc
N0
20 (32,8)
8,95 ± 3,17
0,926
18,55 ± 6.01
0,472
N1, & N2 & n3
41 (67,2)
9,07 ± 5,25
19,53 ± 4,39
Distalinė metastasisc
M0
58 (95,1)
8,87 ± 4,70
0,258
5,02 0,617
19,13 ±
M1
3 (4.9)
12.00 ± 1.30
20,62 ± 3,74
Invasionc
tis & T1-T3
20 (32,8)
10,04 ± 3,86
0,237
17,73 ± 4,72
0,105
T4
41 (67,2)
8,53 ± 4,95 19.93 ± 4,95
TNM stagec
0 & I & II
24 (39,3)
9.40 ± 5.52
0,032
3.86
0.620
17,81 ± III & IV
37 (60,7)
8.79 ± 5.14
20,49 ± 3,98
Aall mėginiai yra sudarytas iš 16 endoskopinių biopsijos mėginių ir 61 chirurgijos pavyzdžius iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu.
bNot aptikta 2 pacientams, kurie buvo atliktas endoskopinis tyrimas egzaminą.
cOnly apima 61 chirurgija pacientus.
4 pav ROC kreive.
išraiška uc001lsz buvo netipinė ankstyvą vėžio ir ikivėžinių pakitimų
Pagaliau, stebėti galimus ankstyvus diagnostikos vertybes lncRNA, mes matuojamas uc001lsz lygį ankstyvą vėžio ir ikivėžinius pakitimus. Mes nustatėme, kad jo lygis buvo puikus mažesnis šių pažeidimų, palyginti su atitinkamų gretimų ne navikinio audinių (5a pav). Iš uc001lsz sveikuose audiniuose lygis buvo gerokai didesnis nei kad ikivėžinius pakitimus ir ankstyvųjų vėžio audiniuose. Be to, jos lygis ikivėžinius pakitimus buvo pastebimi didesni nei pradžioje vėžio audiniuose (5b pav.) 5 paveikslas išraiška uc001lsz ankstyvą vėžio ir ikivėžinius pakitimus. Iš uc001lsz lygio pradžioje patologinių pokyčių audiniuose yra mažesnis nei suporuotas normalaus audinio (N
= 14, p
= 0,0016; A) dalį. Iš uc001lsz į normalaus audinio lygis yra žymiai didesnis nei ta, priešvėžinių pažeidimų ir pradžioje, vėžio (B). #P
≪ 0,001; * P
< 0,05.
Diskusijos
tyrimai parodė, kad ~ 18% baltymų kodavimo genus, kurie gamina lncRNAs yra susiję su vėžio, o tik 9% visų žmogaus baltymų kodavimo genus yra susiję su vėžio [18]. Tarp lncRNAs ir navikų santykiai šiuo metu tapo viena iš vėžio tyrimų akcentų.
Yra montavimo įrodymų, kad lncRNAs yra santykis su virškinimo sistemos navikų [19]. Trys lncRNAs, H19, HOTAIR ir lncRNA labai aktyvinama kepenų vėžio (HULC), buvo nustatyta padidėjusi žmogaus kepenų karcinoma (HCC) [20-22]. Be to, HULC išraiška ne tik apsiriboti HCC, bet taip pat išreikšta storosios žarnos karcinoma, kad metastazuoti į kepenis [23].
Tyrimų apie lncRNAs, susijusių su skrandžio yra ribotos. Saulė ir kt.
Nustatė, kad išraiška lygis skrandžio vėžiu susijęs stenograma 1 (GACAT1), arba AC096655.1-002, reikšmingai koreliavo su limfmazgių metastazių, tolimos metastazės, TNM etapais, ir diferenciacijos [17]. Mei ir kt.
Pranešė, kad ubikvitino-kaip modifikatorius (sumo) 1 pseudogene 3, SUMO1P3, gali būti potencialus biologinis į skrandžio vėžio [16] diagnozę. Niinuma et al.,
Nustatė, kad padidėjusią HOTAIR buvo ženkliai susijęs su didelės rizikos virškinimo trakto stromos navikų [24]. RNR, 7SK mažas branduolinis (RN7SK) gali netiesiogiai reguliuoja skrandžio tumorigenezei per teigiamą transkripcija pailgėjimo faktorius-B (p TEFb) [25]. H19 gali vaidinti svarbų vaidmenį skrandžio vėžio praradimo spauda ir kitais mechanizmais [26, 27]. Naujausi Cao ir kt
. Naudotų bioinformatikos metodus ekranas lncRNA raiškos profilius, susijusias su skrandžio vėžiu [28]. Pirma, du viešai prieinamas žmogaus Exon matricas skrandžio vėžio ir duomenų atitinkamą normalaus audinio buvo atsisiųsti iš GEO. Tada į žmogaus Exon masyvų zondai buvo pakartotinai komentuojami. Galiausiai, zondai unikaliai kartografavimo lncRNAs tuo genų lygmenyje buvo saugomi. buvo nustatyti iš viso 88 lncRNAs kad buvo skirtingai išreikštas skrandžio vėžio [28].
Čia, už skrandžio vėžiu susijęs lncRNAs atrankos metodai skyrėsi nuo tų, Cao ir kt
. [28]. Norėdami nustatyti nepaprastai žemyn reguliuojamoje arba iki reglamentuotas lncRNAs skrandžio vėžio, mes pirmą kartą renkami skrandžio vėžiu ir gretimų ne navikinio audinio mėginiai iš viršutinės virškinimo trakto endoskopija egzaminą. Nuo lncRNA ekspresijos profilius, gautų iš lncRNA mikrogardeliq analizė (1 paveikslas), mes nustatėme, kad tarp labai skiriasi išreikštų lncRNAs (1 lentelė), tik H19 buvo rasta kitų vėžio [11, 20, 26, 27]. Kaip rezultatas, jis yra labai svarbus siekiant papildomai paaiškinti klinikinius parašų lncRNAs diagnozuojant ir gydant skrandžio vėžio.
Didėjančią studijas funkciškai būdingas lncRNAs atskleidžia, kad šie nuorašai yra svarbus įvairių fiziologinių procesų, įskaitant embrioninių kamieninių ląstelių diferenciacijos [29], T-ląstelių diferenciacija [30], keratinocitų diferenciaciją [31], ypač, pakeista išraiška lncRNAs gali sukelti vėžį [32].
Šiame tyrime, mes sutelktas į du lncRNAs, H19 ir uc001lsz , Sąvoka lygis H19 skrandžio vėžio audiniuose buvo nustatyta, kad akivaizdžiai didesnis nei, kad ne-navikų audiniuose (2a ir B pav). Kartu su padidėjusiu išraiška H19 skrandžio vėžio ląstelių linijas (2d pav), mes rekomenduojame, kad H19 gali vaidinti svarbų vaidmenį skrandžio vėžio patogenezėje. Įdomu, H19 išraiška nepadidėjo kiekvienoje naviko tipų. Kaip parodė 2D paveiksle, H19 išraiška sumažėjo kepenų vėžį ir prostatos vėžio. Šie rezultatai toliau patvirtina, kad H19 veikia ne tik kaip onkogeno bet taip pat kaip auglio slopinamojo [20, 27, 33]. Matouk kt
. Nustatyta, kad beldžiasi į apačią nuo H19 RNR lėmė beveik visą slopinimas P57 kip2 indukcijos reaguojant į hipoksinio streso [20]. Jie taip pat nustatė, kad H19 buvo susijęs su Angiopoietino (ANG) ir fibroblastų augimo faktoriaus-18 (FGF-18), kurio funkcijos dalyvauja naviko augimą ir proliferaciją [20]. Norėdami suprasti molekulinį mechanizmą, pagal kurį H19 didina skrandžio vėžio ląstelių augimą, Yang et al
. išnagrinėti, ar H19 paveikia auglio slopinamojo p53 [27] funkciją. Jie nustatė, kad H19 buvo susijęs su p53, ir kad ši asociacija lėmė dalinę p53 nukenksminti [27].
Priešingai H19, uc001lsz ekspresijos lygį skrandžio vėžio audiniuose buvo nustatyta, kad žymiai mažesnis (3A pav.) Kaip parodė Fig.3C, kad uc001lsz raiškos skrandžio vėžio ląstelių linijas (AGS ir MGC-803) yra mažesnis nei skrandžio epitelio ląstelės (GES-1), tačiau nebuvo jokių reikšmingų skirtumų tarp SGC-7901 ir GES-1 , Gal žemos kokybės piktybinis navikas ir SGC-7901 veda prie šio rezultato. Dar svarbiau, kad didesnis ryšys tarp uc001lsz saviraiškos ir TNM etape buvo nustatyta (2 lentelė). Šie rezultatai patvirtino uc001lsz kaip svarbus žaidėjas slopina skrandžio vėžio vystymąsi. Kaip mes žinoma, daugelis lncRNAs transkribuojami arti arba per baltymų kodavimo loci, kuri sustiprino hipotezę, kad lncRNAs gali turėti cis
-acting poveikį per šių lokusų. Bet uc001lsz gali turėti trans
-acting poveikį per gretimų baltymų kodavimo loci. MUC2
, priklausanti muciną baltymų šeimos genų narys, įsikūręs šalia UC001LSZ
. MUC2 išsiskiria ant gleivinės paviršių, kur ji yra išskiriami iš taurė ląstelių epitelio gleivine į skrandį [34] spindyje. Kaip pranešama, MUC2 buvo didelė raiška skrandžio vėžio [35]. Nors uc001lsz atrodo žaidžia kaip auglio slopinamojo geno skrandžio vėžio ir daugelio kitų tipų navikais, jis gali žaisti skirtingą vaidmenį prostatos vėžio kur uc001lsz buvo labai išreikštą (3c pav.)
Molekuliniai naviko biologiniai žymenys yra gyvybiškai diagnostikos ir prognostiniai įrankiai. Mūsų duomenys rodo, kad uc001lsz išraiška buvo netipinė ankstyvą skrandžio vėžio ir skrandžio ikivėžinius pakitimus (5a pav.) Ir neeilinis pakeitimai gal rodomi ikivėžinius pakitimus (5b pav.) Šis tyrimas rodo, kad uc001lsz gali būti kandidatas biologinis skrandžio vėžio.
Išvadas
Apibendrinant, mes vaizduoti lncRNA išraiška profilį, susijusį su skrandžio vėžiu. Iš H19 raiškos skrandžio vėžio ląstelių linijų ir audinių rodo, kad H19 galima dalyvavo skrandžio vėžio. Sumažintas išraiška uc001lsz skrandžio vėžio ląstelių linijų ir audiniuose, jos asociacijų su TNM etape ir jos reguliacijos sutrikimas ankstyvoje vėžio ir ikivėžinius pakitimus leidžia manyti, kad uc001lsz gali turėti svarbų vaidmenį skrandžio vėžio atsiradimo ir būti potencialus biologinis už ankstyva diagnozė skrandžio vėžio
Santrumpos
ANG:.
Angiopoietino
CA19-9: Rīga, Angliavandeniai antigenui 19-9

CEA: Rīga, karcinoembrioninius antigenas
Ct: Rīga, slenkstis ciklas
DC /CIK: Rīga dendritic ląstelių /citokinų sukeltą žudikas
FGF-18: Rīga, fibroblastų augimo faktoriaus-18
GACAT1: Rīga, skrandžio vėžys -associated stenograma 1
H19:
abipusiškai įspaudu partneriu Igf2
HCC: Rīga, kepenų ląstelių karcinoma


HOTAIR: Rīga, HOX stenograma RNR
HOX: Rīga, homeozinis genas
HULC:
Labai aktyvinama kepenų vėžio
IGF2: Rīga, į insuliną panašaus augimo faktoriaus 2
IGF2-AS: Rīga, IGF -IR ir IGF-IIR Priešprasminis
IGF-iR: Rīga, į insuliną panašaus augimo faktoriaus I tipo receptorių
IGF-IIR:
į insuliną panašaus augimo faktoriaus tipas II receptorių
lncRNA: Rīga, Rimta ne kodavimo RNR
MALAT-1: <

• Aptikta kontrolinių ir ne kontrolinius limfmazgių mikrometastazių visiškas serijinių pjūvių ir imunohistocheminio analizės skrandžio vėžio
• EBNA1 privalomas ir epigenetinius reguliavimas gastrokine auglio slopinamojo genų skrandžio karcinoma ląstelių