perfil de expresión de ARN no codificante de largo en el cáncer gástrico humano y su no codificante perfil clínico a largo significances

la expresión del ARN en el cáncer gástrico humano y sus significados clínicos
Resumen Antecedentes

ARNs no codificantes largas (más) son lncRNAs prevalentemente transcrito en el genoma sin embargo, sus posibles funciones en los cánceres humanos no se conocen bien. El objetivo del presente estudio fue determinar el perfil de expresión lncRNA en el cáncer gástrico y su potencial valor clínico.
Métodos comentario El perfil de expresión lncRNA global en el cáncer gástrico se midió por lncRNA microarrays. Los niveles de dos lncRNAs representativas, H19 y uc001lsz, fueron confirmados por reacción en cadena de polimerasa transcriptasa inversa en tiempo real. Se exploró la relación entre sus niveles y los factores clínico-patológicas de los pacientes con cáncer gástrico. Una característica de funcionamiento del receptor (ROC) curva se construyó para diferenciar el cáncer gástrico de enfermedades gástricas benignas.
Resultados
total de 135 lncRNAs diferenciales, que los niveles de expresión entre los tejidos tumorales y no tumorales eran más del doble, se encontró ( GEO No. GSE47850). Las mayoría de lncRNAs-regulado en los tejidos de cáncer gástrico fueron FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600, y AK054588; mientras que los más regulados arriba-queridos estaban H19, HMlincRNA717, BM709340, BQ213083, AK054978 y DB077273. H19 fue encontrado altamente expresado en líneas celulares de estómago y cáncer de hígado, mientras humilde expresado en el cáncer de pulmón y líneas de células de cáncer de próstata. Uc001lsz se expresó humilde de líneas gástrico, de pulmón y de células de cáncer de hígado, mientras altamente expresado en el cáncer de próstata. Las áreas bajo las curvas ROC fueron hasta 0,613, 0,751, y 0,761 para H19, uc001lsz, y la combinación, respectivamente.
Conclusiones Francia El perfil de expresión lncRNA en el cáncer gástrico sugiere la posible función de lncRNAs en la incidencia de cáncer gástrico y desarrollo. La sobreexpresión de H19 en el cáncer gástrico sugiere que H19 puede participó en el cáncer gástrico. La expresión reducida de uc001lsz en líneas celulares de cáncer gástrico y tejidos, sus asociaciones con el estadio TNM, y su desregulación en el cáncer temprano y lesiones precancerosas
sugieren que uc001lsz puede ser un marcador potencial para el diagnóstico del cáncer gástrico precoz. Palabras clave
el cáncer gástrico largo no codificante ARN perfil Expresión Antecedentes H19 uc001lsz
los componentes bien estudiados en el genoma humano son los de los genes codificantes de proteínas. Sin embargo, los exones de codificación de estos genes representan sólo el 1,5% del genoma [1]. En los últimos años, se ha vuelto cada vez más evidente que la parte no codificante de la proteína del genoma es de importancia funcional crucial para la aparición de la enfermedad [2]. Los ARN no codificante (ncRNAs) caracterizan como tres tipos, ncRNAs largos, de tamaño medio y corto ncRNAs ncRNAs [1]. Aunque la mayoría de los estudios sobre ncRNAs se centran en corto ncRNAs, tales como microARN (miARN), los ARN no codificantes largos (lncRNAs) están ganando rápidamente la prominencia recientemente.
LncRNAs son mayores de 200 nucleótidos de longitud [3]. Han surgido recientemente como actores principales en el gobierno de los procesos biológicos fundamentales. La expresión aberrante de lncRNAs se ha asociado con cánceres [3]. Por ejemplo, diferencial código de visualización 3 (DD3 PCA3), una lncRNA específico de la próstata, parece ser un marcador para el diagnóstico precoz del cáncer de próstata [4]. Más importante, DD3 PCA3 puede ser detectada en la orina de pacientes con cáncer de próstata [5]. Aunque la metástasis de pulmón asociado adenocarcinoma de transcripción 1 (MALAT-1) en primer lugar se encuentra anormal expresado en metástasis de carcinomas de pulmón no microcítico [6], es hasta reguladas en el hepatocarcinoma, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer colorrectal y cáncer de próstata [7]. MALAT-1 no sólo es un marcador de diagnóstico potencial, sino también un potencial marcador de pronóstico [8]. HOX transcrito de ARN antisentido (HOTAIR) se asocia con cáncer de mama y cáncer colorrectal [9, 10]. H19, otro famoso lncRNA, participa con frecuencia en los tumores pediátricos y adultos [11].
El cáncer gástrico es todavía una de las causas más frecuentes de mortalidad en el mundo [12]. Sin embargo, las estrategias tradicionales basadas en la cirugía radical para el tratamiento del cáncer gástrico no son todavía satisfactorios. Por lo tanto, revelar los mecanismos de la aparición y el desarrollo de cáncer gástrico está atrayendo cada vez más atención en la investigación del cáncer.
Dado que el perfil de expresión lncRNA global en el cáncer gástrico no es totalmente al descubierto, en el presente estudio, se analizó el perfil de expresión en lncRNA cáncer gástrico. A continuación, se exploró la relación entre el aberrantemente expresado-lncRNAs y factores clinicopatológicos de pacientes con cáncer gástrico. Nuestros datos proporciona candidatos biomarcadores de diagnóstico de cáncer gástrico.
Métodos Pacientes y muestras

El cáncer de los tejidos gástricos de pacientes, incluyendo los tejidos de cáncer gástrico, lesión precancerosa y los correspondientes tejidos no tumorales adyacentes fueron conservados inmediatamente en el ARN (fijador Bioteke, Beijing, china) después de la eliminación del cuerpo y se almacena a -80 ° C hasta su uso. Las muestras de tejido se obtuvieron a partir de muestras quirúrgicas o biopsias de febrero 2011-junio 2012 en tres centros de cáncer, el Hospital Popular Yinzhou, Ningbo Nº 1 Hospital y el Hospital Afiliado de la Facultad de Medicina de la Universidad China de Ningbo. El consentimiento informado se tomó de todas las materias. El Comité de Ética de Investigación Humana de la Universidad de Ningbo aprobó todos los aspectos de este estudio. Los tumores se clasifican de acuerdo al tumor-nódulo-metástasis (TNM) sistema de clasificación de la Unión Internacional Contra el Cáncer (5 ª ed). El grado histológico fue evaluada después de la National Comprehensive Cancer Network (NCCN) guía de práctica clínica de la oncología (V.1.2011). Los tejidos no tumorales eran 5 cm desde el borde del tumor y no había células tumorales obvias, como evaluadas por un patólogo. No hubo radioterapia, quimioterapia, terapia dirigida o célula /asesino dendríticas inducida por citoquinas (DC /CIK) tratamiento previo al examen de endoscopia gastrointestinal superior o la operación fue aislado.
ARN total de preparación
ARN total usando el reactivo Trizol ( Invitrogen, Karlsruhe, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante [13].
lncRNA ensayo de microarrays
Tres emparejado muestras de biopsias se obtuvieron de pacientes (55 años y sexo masculino, 76 y y masculina, y 88 y y hembra) con mal o mal-y-moderadamente diferenciado cáncer gástrico. microarray lncRNA humano fue fabricado en Sistema NimbleGen hibridación (Arraystar, Rockville, MD). Más de 23 000 lncRNAs se obtuvieron de las fuentes de datos autorizadas incluyendo el Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI) RefSeq, Universidad de California, Santa Cruz (UCSC), lncRNAs de las literaturas y las regiones ultra-conservados (UCR) [14]. Los datos se extrajeron y se normalizó el uso de software v2.5 NimbleScan (Roche NimbleGen, Madison, WI). El análisis adicionales de los datos se realizó mediante el software Agilent GeneSpring GX 11.5 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). línea de células epiteliales gástricas humanas de cultivo celular gratis (GES-1), líneas celulares de cáncer gástrico (AGS, MGC-803 y próstata línea celular epitelial SGC-7901), la línea de hígado normal de las células (HL-7702), líneas celulares de carcinoma hepático (HepG2 y SMMC-7721), línea celular de fibroblastos de pulmón fetal (CAES), línea celular de carcinoma de pulmón (A549), líneas celulares de carcinoma de próstata (RWPE-1) y (Du-145 y PC-3) se obtuvieron del Instituto de Shanghai de Bioquímica y Biología celular, Academia de Ciencias de china (Shanghai, china). Las células fueron cultivadas en frascos de cultivo a 37 ° C en una atmósfera humidificada de 5% de CO 2 [15].
Detección de QRT-PCR de H19 y uc001lsz
reacción en cadena cuantitativa con transcripción inversa de la polimerasa en tiempo real (QRT-PCR) es el estándar de oro para la verificación de datos. Para verificar los resultados de microarrays lncRNA, ADNc se generó usando el Sistema GoScript transcripción inversa (RT) (Promega, Madison, WI). reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) se logró mediante el uso de la GoTaq qPCR Master Mix (Promega, Madison, WI) en un Sistema de PCR (Stratagene, La Jolla, CA) Mx3005P en tiempo real. Las secuencias de los cebadores de PCR para H19, uc001lsz, y β-actina fueron como sigue: 5'-ACCAGCCACCACATCATC-3 '(sentido) y 5'-TCAGAAACAAAGAGACAGAAGG-3' (antisentido) para H19; 5'-GACGGCACCTACTACACCTT-3 '(sentido) y 5'-GCTGACCACCTTGTTGTTGAA-3' (antisentido) para uc001lsz; 5'-AAGCCACCCCACTTCTCTCTAA-3 '(sentido) y 5'-AATGCTATCACCTCCCCTGTGT-3' (antisentido) para β-actina. Los datos se analizaron por el? C
t método [16, 17]. Todos los resultados se expresaron como la media ± desviación estándar de tres experimentos independientes.
La clonación y secuenciación de los productos QRT-PCR
Los productos QRT-PCR de lncRNA se purificaron en primer lugar utilizando un kit de purificación de productos de PCR UnIQ-10 y luego clonados en el vector pUCm-T (Sangon Biotech, Shanghai, china) siguiendo las instrucciones del fabricante. Entonces, la secuenciación de ADN se realizó por Sangon Biotech Co., Ltd.
serológica análisis de marcadores tumorales
antígeno carcinoembrionario Serum (CEA) y el antígeno carbohidrato 19-9 (CA19-9) se midieron usando una máquina de Elecsys 2010 (Roche Diagnostics, Basel, Suiza). Los valores de corte fueron de 5 ng /mL y 35 U /ml de CEA y CA 19-9, respectivamente.
El análisis estadístico
Todos los datos estadísticos se analizaron mediante el programa estadístico para Ciencias Sociales (SPSS) de software 18.0 (SPSS, Chicago , IL) y GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Una forma de análisis de varianza, t de Student
se utilizaron prueba de suma de rangos de test y en su caso de dos colas. Una curva de características operativas del receptor (ROC) se estableció para evaluar el valor diagnóstico. P Hotel < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
Resultados
perfiles de expresión lncRNA en tejidos de cáncer gástrico en relación con los tejidos no tumorales adyacentes
Los lncRNA patrones de expresión entre los tejidos de cáncer gástrico y los tejidos no tumorales adyacentes resultaron ser significativamente diferente (Figura 1). Total de 135 lncRNAs, que el cambio de expresión fue más del doble, se encontraron números de acceso (GEO es 47850; http:.... //Www NCBI NLM NIH gov /geo /consulta /acc. cgi? acc = GSE47850). Entre ellos, 71 y 64 fueron arriba y abajo expresa en los tejidos tumorales, respectivamente. Los lncRNAs más baja regulado en los tejidos de cáncer gástrico fueron FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600, y AK054588. Los lncRNAs más regulados arriba en tejidos de cáncer gástrico fueron H19, HMlincRNA717, AI769947, BQ213083, AK054978 y DB077273 (Tabla 1). Figura 1 Las alteraciones en lncRNA perfiles de expresión entre los tejidos de carcinoma gástrico y tejidos no tumorales. El resultado de la agrupación jerárquica muestra la expresión de perfiles lncRNA distinguibles entre las muestras. "Rojo" indica una alta expresión relativa; y "azul" indica una baja expresión relativa.
Tabla 1 Más de lncRNAs expresados ​​diferencialmente de cuatro veces en los tejidos de cáncer gástrico en comparación con los tejidos no tumorales pareadas
nombre

Cromosoma
Reglamento
doble cambio
Fuentea
P value

H19
11
up
8.91
lncRNAdb
0.020
HMlincRNA717
18
up
5.96
lincRNA
0.013
AI769947
7
up
5.51
lincRNA
0.026
BQ213083
2
up
5.45
lincRNA
0.040
AK054978
X
up
4.59
lincRNA
0.006
DB077273
2
up
4.11
lincRNA
0.008
FER1L4
20
down
9.17
refNR
0.047
uc0 01lsz
11
down
8.36
UCSC_knowngene
0.020
BG491697
20
down
6.50
lincRNA
0.035
AF131784
18
down
6.25
mRNA
0.019
uc009ycs
11
down
5.82
UCSC_knowngene
0.009
BG981369
1
down
5.20
lincRNA
0.048
AF147447
16
down
4.76
mRNA
0.038
HMlincRNA1600
X
down
4.12
lincRNA
0.013
AK054588
1
down
4.04
lincRNA
0.045
alncRNAdb: http:.. //lncrnadb com /aspx predeterminado; lincRNA: http:.. //genoma UCSC edu /cgi-bin /hgGateway; .. RefNR: http: //genoma UCSC edu /cgi-bin /hgTables; .... Http: //www NCBI NLM NIH gov /RefSeq /; .. UCSC_knowngene: http: //genoma UCSC edu /cgi-bin /hgTables; ARNm: http:... //genoma UCSC edu /cgi-bin /hgTables
expresión de H19 fue hasta reguladas en los tejidos de carcinoma gástrico
Desde H19 se encontró que la mayor parte lncRNA hasta reguladas en el tejido de cáncer gástrico, hasta el cambio 8,91 veces en la detección de microarrays (Tabla 1), para validar este resultado, se detectó el nivel de expresión de H19 en dos tipos de cáncer de los tejidos, tejidos de biopsia y muestras quirúrgicas, mediante qRT-PCR. En primer lugar, se analizó el nivel de expresión de H19 en 15 pares de carcinoma 'tejidos de biopsia gástrica. Se encontró que su nivel en tejidos de cáncer era significativamente más alta que en los tejidos no tumorales (Figura 2A). A continuación, se detectó nivel H19 en gran número de especímenes quirúrgicos. Como se muestra en la Figura 2B, fue hasta reguladas en el 74,0% (57/77) de los tejidos de cáncer gástrico (P = 0,029)
. Por secuenciación del producto de QRT-PCR, se encontró que la secuencia de H19 (Figura 2C) fue consistente con la de la base de datos (http:.... //Www NCBI NLM NIH gov /gen /283.120). Figura 2 H19 fue hasta reguladas en tejidos de cáncer gástrico, líneas celulares de cáncer gástrico y otras líneas celulares de cáncer común. En tiempo real QRT-PCR se utilizó para determinar el nivel de expresión de H19. El valor t? C
se determina restando el valor de C
t β-actina de la meta lncRNA C
valor t. Menor valor? C
t indica una mayor expresión. Nivel de H19 en los tejidos de biopsia de cáncer gástrico (n = 15
, P = 0,014
; A) y tejidos de cáncer gástrico (n = 77
, P = 0,029
; B). resultado secuenciación de producto qRT-PCR de H19 (C). El nivel de H19 en las líneas gástricos celulares de cáncer (AGS, MGC-803 y SGC-7901) y líneas celulares de cáncer de hígado (SMMC-7721 y HepG2) fue mayor que en la línea celular epitelial gástrica humana GES-1 y normal de las células de hígado humano línea HL-7702, respectivamente; sin embargo, su nivel en células de cáncer de pulmón línea A549 y líneas celulares de cáncer de próstata (Du-145 y PC-3) fue menor que en las células HELF línea celular de fibroblastos de pulmón fetal humano y de próstata línea celular epitelial humana RWPE-1 (D). Todos los resultados se expresan como la media ± SD de tres experimentos independientes. #P Hotel < 0.001.
Expresión de H19 en el cáncer de líneas celulares comunes
Para obtener más información acerca de la expresión de H19 en los cánceres, se determinó su nivel en algunas líneas celulares de cáncer comunes. Como se muestra en la Figura 2D, en comparación con respectiva línea celular normal, H19 fue encontrado altamente expresado en líneas de cáncer de estómago de células (AGS, MGC-803 y SGC-7901) y líneas celulares de carcinoma hepatocelular (SMMC-7721 y HepG2), mientras expresado humilde en la línea celular de cáncer de pulmón (A549) y las líneas celulares de cáncer de próstata (Du-145 y PC-3).
Expresión de uc001lsz se había reducido regulado en los tejidos de carcinoma gástrico
Uc001lsz es un recién descubierto lncRNA, que es transcrito a partir de la hebra hacia delante en el cromosoma 11p15.5. A partir de los resultados de microarrays (Tabla 1), podemos ver que uc001lsz fue el segundo lncRNA las reguladas las más importantes en el tejido de cáncer gástrico. Otra razón por la que nos animó a más uc001lsz estudio es que es trans servicios asociados con MUC2, que es secretada y forma una barrera mucosa insoluble en la luz intestinal. A fin de validar la expresión de uc001lsz en el cáncer gástrico, hemos ampliado el número de la muestra. Los datos indican que fue significativamente las reguladas en el 84,4% (65/77) de los tejidos de cáncer gástrico (Figura 3 A, P Restaurant < 0,001). Por secuenciación del producto de QRT-PCR, se encontró que la secuencia de uc001lsz (Figura 3B) fue consistente con la de la base de datos (http:. //UCSC genoma edu /cgi-bin /hgTables.). Figura 3 Uc001lsz se había reducido regulado en los tejidos de cáncer gástrico, líneas celulares de cáncer gástrico y otras líneas celulares de cáncer común. En tiempo real QRT-PCR se utilizó para determinar el nivel de expresión de uc001lsz. Se llevaron a cabo tres experimentos independientes. Nivel de uc001lsz en tejidos de cáncer gástrico fue significativamente menor que en los tejidos no tumorales correspondientes (n = 77
, P
< 0,001; A). resultado secuenciación de producto qRT-PCR de uc001lsz (B). El nivel de uc001lsz en líneas celulares de cáncer gástrico (AGS, MGC-803 y SGC-7901), líneas de células de cáncer de hígado (SMMC-7721 y HepG2) y cáncer de pulmón línea celular A549 fue menor que en la línea celular epitelial gástrica humana ges- 1, línea celular hepática humana normal HL-7702 y la línea de células fetales de fibroblastos de pulmón humano CAES, respectivamente; sin embargo, su nivel en líneas celulares de cáncer de próstata (Du-145 y PC-3) fue mayor que en la próstata línea celular epitelial humana RWPE-1 (C).
Expresión de uc001lsz en líneas celulares de cáncer común
a obtener la información sobre la expresión uc001lsz en los cánceres comunes, que hemos detectado su nivel en varias líneas celulares de cáncer común. Se encontró que la comparación con la respectiva línea celular normal, uc001lsz se expresó humilde de cáncer gástrico (AGS, MGC-803 y SGC-7901), el cáncer de pulmón (A549) y cáncer de hígado (SMMC-7721 y HepG2) líneas celulares, mientras que sólo altamente expresado en el cáncer de próstata (Du-145 y PC-3) líneas celulares (Figura 3C).
valores de diagnóstico potenciales de H19 y uc001lsz
a continuación realizó un análisis para identificar si H19 o expresión uc001lsz se asoció con la clinicopatológica características de cáncer gástrico. Como se muestra en la Tabla 2, el nivel de uc001lsz se asoció con estadios TNM (P
= 0,032). Las tasas de detección de positivos de H19 y uc001lsz son 74.0% y 84.4%, respectivamente. Ambos son más altos que los de CEA común gástrico biomarcador de cáncer (64,0%) y CA19-9 (53,3%) (Tabla 2). Las áreas bajo las curvas ROC fueron hasta 0,613, 0,751, y 0,761 para H19, uc001lsz, y la combinación, respectivamente (Figura 4). El uso combinatorio de H19 y uc001lsz aumentaron ligeramente el diagnóstico value.Table 2 La relación de H19 y los niveles de expresión uc001lsz (Δ C t) en los tejidos de cáncer con factores clínico-patológicas de los pacientes con cáncer gástrico a
Características
No. de los pacientes (%) guía empresas H19
uc001lsz
Media ±
P valor
Media ± SD
P
valor
Edad (a)
≥ 60
59 (76,6) 8,74 ± 4,67

0,588
18.85 ± 4.94
0.240
< 60
18 (23,4)
8,08 ± 3,99 17,28 ± 4,85

Sexo Masculino

57 (74,0) 8,66 ± 4,81

0.823
18.19 ± 5.01
0,355
Mujer
20 (26,0) 8,40 ± 3,44

19,37 ± 4,58
Diámetro (cm) b
≥ 5
39 (52,0)
7,98 ± 4,44 0,282

18,49 ± 5,03 0,682
Hotel < 5
36 (48,0)
9.10 ± 4.53 18.01 ± 5.11

CEAB
positiva
48 (64,0)
8.45 ± 4.21
0.882
18.28 ± 4,54
0.593
negativo
27 (36,0)
8,61 ± 5,01 18,92 ± 5,71

CA19-9b
positiva
40 (53,3) 8,68 ±
3,87
0.720
18.65 ± 4.64
0,792
negativo
35 (46,7)
8,31 ± 5,14 5,37 ± 18.35

Differentiationc
Bueno página 3 (4.9)
8,28 ± 1,92 0,635

15,34 ± 5,40 0,371

Moderado
33 (54,1) 9,05 ± 4,40

19.37 ± 4.85
Pobre
25 (41,0) 7,84 ± 5,47

19,54 ± 4,91
linfático metastasisc
N0
20 (32,8)
8.95 ± 3.17
0,926
18.55 ± 6.01
0.472
N1 & N2 & N3
41 (67,2) 9,07 ± 5,25

19.53 ± 4.39
metastasisc distal
M0
58 (95,1)
8,87 ± 4,70 0,258

19.13 ± 5.02
0,617
M1 Estrellas: 3 (4.9)
12,00 ± 1,30 20,62 ± 3,74

Invasionc
Tis & T1-T3
20 (32,8)
10,04 ± 3,86 0,237

17,73 ± 4,72 0,105

T4
41 (67,2) 8,53 ± 4,95

19.93 ± 4.95
TNM stagec
0 & I & II
24 (39,3) 9,40 ± 3,86

0.620
17,81 ± 5,52 0,032

III & IV
37 (60,7)
8.79 ± 5.14 muestras
20.49 ± 3.98
aall son constan de 16 muestras de biopsia endoscópica y 61 muestras de cirugía de pacientes con cáncer gástrico.
BNOT detectado durante 2 pacientes que estaban efectuado el examen de endoscopia.
COnly incluye 61 pacientes de cirugía.
Figura 4 La curva ROC.
Expresión de uc001lsz era aberrante en el cáncer temprano y lesiones precancerosas
Por fin, para observar los posibles valores de diagnóstico precoz de lncRNA, que mide el nivel de uc001lsz en el cáncer temprano y lesiones precancerosas. Se encontró que su nivel fue notable menor en estas lesiones en comparación con las de los correspondientes tejidos no tumorales adyacentes (Figura 5A). El nivel de uc001lsz en tejidos normales fue significativamente mayor que la de las lesiones precancerosas y cáncer de los tejidos temprana. Además, su nivel en lesiones precancerosas era visible más alta que en los tejidos de cáncer temprano (Figura 5B). Figura 5 Expresión de uc001lsz en el cáncer temprano y lesiones precancerosas. El nivel de uc001lsz en el tejido cambio patológico temprano es menor que en el tejido normal apareado (n
= 14, P = 0,0016
; A). El nivel de uc001lsz en el tejido normal es significativamente más alta que en las lesiones precancerosas y cánceres tempranos (B). #P Hotel < 0.001; * P Hotel < 0.05.
Discusión
estudios han demostrado que ~ 18% de la proteína genes que producen lncRNAs están asociados con cáncer de codificación, mientras que sólo el 9% de toda la proteína humana genes de codificación están asociados con el cáncer [18]. La relación entre los tumores lncRNAs y actualmente se ha convertido en uno de los focos de los estudios de cáncer.
Hay una creciente evidencia de que son lncRNAs relación con los tumores del aparato digestivo [19]. Tres lncRNAs, H19, de aire caliente y lncRNA altamente regulados por incremento en el cáncer de hígado (HULC), se encontraron sobreexpresión en hepatocarcinomas humanos (HCC) [20-22]. Además, la expresión HULC no sólo se limita a HCC, sino que también se expresa en los carcinomas colorrectales que hacen metástasis en el hígado [23].
Investigaciones sobre lncRNAs relacionados con el estómago son limitadas. Sun et al. Hola, ha encontrado que el nivel de expresión del transcrito gástrica asociada al cáncer 1 (GACAT1), o AC096655.1-002, se correlacionó significativamente con la metástasis en los ganglios linfáticos, metástasis a distancia, estadios TNM, y la diferenciación [17]. Mei et al.
Reportó que el modificador de tipo ubiquitina (SUMO) 1 pseudogen 3, SUMO1P3, podría ser un biomarcador potencial en el diagnóstico de cáncer gástrico [16]. Niinuma et al. Hola, ha encontrado que la sobreexpresión de HOTAIR se asoció significativamente con tumores del estroma gastrointestinal alto riesgo [24]. ARN, 7SK nuclear pequeño (RN7SK) puede regular indirectamente la tumorigénesis gástrica a través de elongación de la transcripción del factor-b positivo (P-TEFb) [25]. H19 puede jugar un papel importante en el cáncer gástrico por la pérdida de impresión y otros mecanismos de [26, 27]. Reciente, Cao et al
. métodos de bioinformática utiliza para la inspección lncRNA perfiles de expresión asociados con el cáncer gástrico [28]. En primer lugar, dos matrices disponibles públicamente exón humanos para el cáncer gástrico y de datos para el tejido normal correspondiente fueron descargados de la GEO. A continuación, se re-anotado las sondas de los arrays de exones humanos. Por último, se conservaron las sondas que trazan única para lncRNAs a nivel del gen. Total de 88 lncRNAs que son expresados ​​diferencialmente en el cáncer gástrico se identificaron [28].
Aquí, los enfoques para la selección de lncRNAs asociados con el cáncer gástrico fueron diferentes de los utilizados por Cao et al
. [28]. Para identificar los lncRNAs notablemente regulados hacia abajo o regulados arriba-en el cáncer gástrico, lo primero que recogimos cáncer gástrico y muestras de tejidos no tumorales adyacentes de examen de endoscopia gastrointestinal superior. A partir de los perfiles de expresión lncRNA obtenidos a partir del análisis de microarrays lncRNA (Figura 1), se encontró que entre los diferentes significativamente lncRNAs expresadas (Tabla 1), sólo el H19 se ha encontrado en otros tipos de cáncer [11, 20, 26, 27]. Como resultado, es crucial para aclarar aún más las firmas clínicos de lncRNAs en el diagnóstico y tratamiento del cáncer gástrico.
Los estudios de crecimiento funcionalmente caracterizado lncRNAs revela que estas transcripciones son importantes en diferentes procesos fisiológicos, incluyendo la diferenciación de células madre embrionarias [29], la diferenciación de las células T [30], la diferenciación de los queratinocitos [31], sobre todo, la expresión alterada de lncRNAs podría resultar en cáncer [32].
en el presente estudio, nos centramos en dos lncRNAs, H19 y uc001lsz . Se encontró que el nivel de expresión de H19 en tejidos de cáncer gástrico de ser evidentemente más alto que en los tejidos no tumorales (Figura 2A y B). Junto con el aumento de la expresión de H19 en las líneas celulares de cáncer gástrico (Figura 2D), sugerimos que H19 puede jugar un papel importante en la patogénesis del cáncer gástrico. , La expresión de H19 interesante no se incrementa en cada tipo de tumor. Como se muestra en la Figura 2D, la expresión de H19 se disminuye en hepatocarcinoma y cáncer de próstata. Estos resultados certifican además que H19 actúa no sólo como un oncogén, sino también como un supresor de tumor [20, 27, 33]. Matouk et al
. encontró que el abajo golpeando de H19 RNA resultó en la atenuación casi completa de p57 inducción kip2 en respuesta al estrés hipóxico [20]. Ellos encontraron además que H19 se asoció con angiopoyetina (ANG) y factor de crecimiento de fibroblastos-18 (FGF-18), cuyas funciones están involucrados en el crecimiento y la proliferación [20] tumor. Para entender el mecanismo molecular por el que H19 aumenta el crecimiento de células de cáncer gástrico, Yang et al
. examinó si H19 afecta a la función de la p53 supresora de tumores [27]. Encontraron que H19 se asoció con p53, y que esta asociación resultó en la inactivación de p53 parcial [27].
Contrariamente a H19, uc001lsz nivel de expresión en tejidos de cáncer gástrico se encontró que era notablemente inferior (Figura 3A). Como se muestra en la Figura 3C, la expresión de uc001lsz en líneas celulares de cáncer gástrico (AGS y MGC-803) es menor que en las células epiteliales gástricas (GES-1), pero no había ninguna diferencia significativa entre SGC-7901 y GES-1 . Tal vez el bajo grado de malignidad de SGC-7901 conduce a este resultado. Más importante aún, una mayor asociación entre la expresión uc001lsz y estadio TNM se encontró (Tabla 2). Estos resultados confirmaron uc001lsz como un jugador importante en la inhibición del desarrollo de cáncer gástrico. Como se sabe, muchos lncRNAs se transcriben cerca o dentro de los loci de codificación de proteínas, lo que ha reforzado la hipótesis de que lncRNAs puede tener efectos cis-actuando
dentro de estos loci. Pero uc001lsz pueden tener trans-actuando
efecto dentro de sus loci que codifican proteínas adyacentes. MUC2
, un miembro de la familia de proteínas de los genes de mucina, está situado junto a UC001LSZ
. El MUC2 se secreta en las superficies de las mucosas, en los que se secreta de las células caliciformes en el revestimiento epitelial en el lumen del estómago [34]. Como se informó, MUC2 era alta expresión en el cáncer gástrico [35]. Aunque uc001lsz parece jugar como gen supresor de tumores en el cáncer gástrico y muchos otros tipos de tumores, que puede jugar un papel diferente en el cáncer de próstata, donde uc001lsz fue altamente expresado (Figura 3C).
Biomarcadores tumorales moleculares son herramientas de diagnóstico y pronóstico vitales. Nuestros datos muestran que la expresión de uc001lsz era aberrante en el cáncer gástrico precoz y lesiones precancerosas gástricas (Figura 5A). Y los cambios extraordinarios tal vez aparecen en las lesiones precancerosas (Figura 5B). Esta investigación indica que uc001lsz puede ser un biomarcador candidato del cáncer gástrico.
Conclusiones
En resumen, representamos un perfil de expresión lncRNA que asocia con el cáncer gástrico. La sobreexpresión de H19 en las líneas celulares de cáncer gástrico y los tejidos sugiere que H19 puede participó en el cáncer gástrico. La expresión reducida de uc001lsz en líneas celulares de cáncer gástrico y tejidos, sus asociaciones con el estadio TNM, y su desregulación en el cáncer temprano y lesiones precancerosas sugieren que uc001lsz puede tener un papel importante en la aparición del cáncer gástrico y ser un potencial biomarcador para el diagnóstico de principios cáncer gástrico
abreviaciones
ANG:.
angiopoyetina
CA 19-9:
antígeno carbohidrato 19-9

CEA: antígeno carcinoembrionario
Ct:
ciclo umbral
DC /CIK:
células dendríticas /asesino de citoquinas inducida por
FGF-18:
factor de crecimiento de fibroblastos-18
GACAT1: El cáncer gástrico
-asociado transcripción 1
H19: Francia El socio recíprocamente impresa de Igf2
HCC:
hepatocarcinomas

HOTAIR:
HOX ARN antisentido transcripción
HOX:
Homeobox
HULC:
altamente upregulated en el cáncer de hígado
IGF2:
similar a la insulina factor de crecimiento de 2
IGF-2-AS:
IGF -IR y el IGF-IIR antisentido
IGF-IR:
similar a la insulina tipo I receptor del factor de crecimiento
IGF-IIR:
similar a la insulina factor de crecimiento tipo II receptor de
lncRNA: ¿Cuánto tiempo ARN no codificante
MALAT-1: <

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