Lange nicht-kodierenden RNA-Expressionsprofil in der menschlichen Magenkrebs und seine klinische significances

Lange nicht-kodierenden RNA-Expressionsprofil in der menschlichen Magenkrebs und seine klinische Wertigkeiten
Zusammenfassung
Hintergrund
Lange nicht-kodierenden RNAs (lncRNAs) sind in das Genom noch ihre möglichen Rollen in menschlichen Krebserkrankungen versteht man nicht gut überwiegend transkribiert. Das Ziel der vorliegenden Studie war es, die lncRNA Expressionsprofil in Magenkrebs und seine potenziellen klinischen Wert zu bestimmen.
Methoden
Die globale lncRNA Expressionsprofil in Magenkrebs durch lncRNA Microarray gemessen wurde. Levels von zwei repräsentativen lncRNAs, H19 und uc001lsz wurden durch Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion bestätigt. Die Beziehung zwischen den Ebenen und klinisch-pathologischen Faktoren von Patienten mit Magenkrebs wurde untersucht. Ein receiver operating characteristic (ROC) Kurve wurde zur Unterscheidung von Magenkrebs von gutartigen Magenerkrankungen aufgebaut.
Ergebnisse | Insgesamt 135 lncRNAs, die Expressionsniveaus zwischen Tumor und Nicht-Tumorgewebe Differential waren mehr als zweifach wurden gefunden ( GEO Nr GSE47850). Die am meisten herunterreguliert lncRNAs bei Magenkrebs Gewebe wurden FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600 und AK054588; während die meisten waren hochreguliert diejenigen H19, HMlincRNA717, BM709340, BQ213083, AK054978 und DB077273. H19 wurde stark exprimiert in Magen- und Leberkrebszelllinien gefunden, während Niedrigen in Lungenkrebs und Prostatakrebs-Zelllinien exprimiert. Uc001lsz wurde demütig Magen-, Lungen- und Leberkrebszelllinien exprimiert, während hoch in Prostatakrebs ausgedrückt. Die Flächen unter ROC-Kurven waren bis zu 0.613, 0.751 und 0.761 für H19, uc001lsz, und die Kombination dar.
Schlussfolgerungen
Der lncRNA Expressionsprofil in Magenkrebs schlägt vor, die möglichen Rollen von lncRNAs bei Magenkrebs Auftreten und Entwicklung. Die Überexpression von H19 bei Magenkrebs schlägt vor, dass H19 bei Magenkrebs beteiligt werden können. Die verminderte Expression von uc001lsz bei Magenkrebs-Zelllinien und Geweben, ihre Assoziationen mit TNM-Stadium, und ihre Dysregulation in frühen Krebs und präkanzerösen Läsionen legen nahe, dass uc001lsz ein potentieller Marker für die Diagnose von Magenkrebs früh sein kann.
Keywords
Magenkrebs Lange nicht-codierende H19 uc001lsz Background RNA Expression Profil für die gut untersuchten Komponenten im menschlichen Genom diejenigen von Protein-kodierenden Gene sind. Allerdings machen die kodierenden Exons der Gene für nur 1,5% des Genoms [1]. In den letzten Jahren wurde es immer deutlicher, dass die Nicht-Protein-kodierenden Teil des Genoms von entscheidender funktioneller Bedeutung ist für die Krankheits Auftreten [2]. Die nicht-kodierenden RNAs (ncRNAs) charakterisieren als drei Typen, lange ncRNAs, mittelgroße ncRNAs und kurz ncRNAs [1]. Obwohl die meisten Studien über ncRNAs auf kurze ncRNAs fokussiert sind, wie microRNAs (miRNAs), lange nicht-kodierenden RNAs (lncRNAs) gewinnen immer mehr Bedeutung in letzter Zeit.
LncRNAs sind größer als 200 Nukleotide lang [3]. Sie haben bei der Regulierung der grundlegenden biologischen Prozesse vor kurzem als wichtige Akteure entstanden. Aberrante Expression von lncRNAs wurde mit Krebserkrankungen [3] verbunden sind. Zum Beispiel Code Differenzanzeige 3 (DD3 PCA3), ein Prostata-spezifisches lncRNA, erscheint ein Marker für die Früherkennung von Prostatakrebs zu sein [4]. Noch wichtiger ist, kann DD3 PCA3 im Urin von Patienten mit Prostatakrebs nachgewiesen werden [5]. Obwohl Metastasierung Lungenadenokarzinom Transkript 1 (MALAT-1) zunächst abnormal gefunden in metastasierenden nicht-kleinzelligem Lungenkarzinom exprimiert [6], es ist hochreguliert in hepatocarcinoma, Brustkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Darmkrebs und Prostatakrebs [7]. MALAT-1 ist nicht nur eine potentielle diagnostische Marker, sondern auch eine potentielle prognostischer Marker [8]. HOX Transkript Antisense-RNA (HOTAIR) mit Brustkrebs und Darmkrebs [9, 10]. H19, ein anderer berühmter lncRNA, wird bei Kindern und Erwachsenen Tumoren häufig beteiligt [11].
Magenkrebs immer noch eine der häufigsten Todesursachen in der Welt ist [12]. Jedoch sind traditionelle Strategien basierend auf radikale Chirurgie zur Behandlung von Magenkrebs noch nicht zufriedenstellend. Daher zeigen die Mechanismen des Auftretens und die Entwicklung von Magenkrebs ist erhöhte Aufmerksamkeit in der Krebsforschung zu gewinnen.
Da die globale lncRNA Expressionsprofil in Magenkrebs nicht vollständig freigelegt wird, in der vorliegenden Studie untersuchten wir die lncRNA Expressionsprofil in Magenkrebs. Dann wird die Beziehung zwischen dem aberrant exprimiert-lncRNAs und klinisch-pathologischen Faktoren von Patienten mit Magenkrebs wurden untersucht. Unsere Daten liefert Kandidaten diagnostische Biomarker von Magenkrebs.
Methoden
Patienten und Proben Magenkrebspatienten Gewebe
, einschließlich Magenkrebs Gewebe, Präkanzerose und benachbarten nicht-tumorösen Gewebe entsprechen, wurden sofort in RNA fixer erhalten ( Bioteke, Beijing, China) nach der Entnahme aus dem Körper und bis zur Verwendung bei -80 ° C gelagert. Gewebeproben wurden aus chirurgischen oder Biopsieproben ab Februar 2011 bis Juni 2012 an drei Krebs-Zentren erhalten, Yinzhou Volkskrankenhaus, Ningbo No. 1 Krankenhaus und die Affiliated Hospital der Ningbo University School of Medicine, China. Eine Einverständniserklärung wurde von allen Probanden genommen. Der Human Research Ethics Committee of Ningbo Universität genehmigt alle Aspekte dieser Studie. Die Tumore wurden nach der Tumor-Knoten-Metastase (TNM) Staging-System der International Union Against Cancer (5 th ed) in Szene gesetzt. nach dem National Comprehensive Cancer Network (NCCN) der klinischen Praxis Leitlinie der Onkologie (V.1.2011) wurde Grading bewertet. Die nicht-tumorösen Gewebe wurden 5 cm vom Rand des Tumors, und es gab keine offensichtlichen Tumorzellen, wie durch einen Pathologen untersucht. Es gab keine Strahlentherapie, Chemotherapie, zielgerichtete Therapie oder Dendritische Zellen /Zytokin-induzierte Killer (DC /CIK) Therapie vor der oberen gastrointestinalen Endoskopie Untersuchung oder Operation.
Gesamt-RNA-Präparation
Gesamt-RNA isoliert wurde mit Trizolreagenz ( Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland) gemäß den Anweisungen des Herstellers [13].
LncRNA Microarray-Test
Drei gepaart Biopsieproben wurden von Patienten erhalten (55 Jahre und männlich, 76 Jahre und männlich und 88 y und weiblich) mit schlecht oder schlecht-and-mäßig Magenkrebs unterschieden. Menschliche lncRNA Microarray wurde in NimbleGen Hybridization System (Arraystar, Rockville, MD) hergestellt. Mehr als 23 000 lncRNAs wurden aus den autoritativen Datenquellen, einschließlich National Center for Biotechnology Information (NCBI) RefSeq, University of California, Santa Cruz (UCSC), lncRNAs von Literaturen und Ultra-konservierten Regionen (UCRs) [14] gesammelt. Die Daten wurden extrahiert und normalisiert mit NimbleScan v2.5 Software (Roche NimbleGen, Madison, WI). Weitere Datenanalyse wurde unter Verwendung von Agilent Genespring GX 11.5 Software durchgeführt (Agilent Technologies, Santa Clara, CA).
Zellkultur
menschliche Magen-epithelialen Zell-Linie (GES-1), Magenkrebs-Zelllinien (AGS, MGC-803 Leber und SGC-7901), normale Zelllinie (HL-7702), Leberkarzinom-Zelllinien (HepG2 und SMMC-7721), fetale Lungenfibroblasten-Zelllinie (HELF), Lungenkarzinom-Zelllinie (A549), Zell-epithelialen Prostata-Linie (RWPE-1), und Prostatakarzinom-Zelllinien (Du-145 und PC-3) wurden von der Shanghai-Institut für Biochemie und Zellbiologie, chinesische Akademie der Wissenschaften (Shanghai, China) erhalten. Die Zellen wurden bei 37 ° C in Kulturflaschen kultiviert, in einer befeuchteten Atmosphäre von 5% CO 2 [15].
QRT-PCR-Nachweis von H19 und uc001lsz
Real-time quantitative reverse Transkription-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR) ist der Goldstandard für die Datenüberprüfung. Um die Ergebnisse der lncRNA Microarray zu überprüfen, wurde cDNA erzeugt die GoScript Reverse Transkription (RT) System (Promega, Madison, WI). Quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) wurde unter Verwendung der GoTaq qPCR Master Mix (Promega, Madison, WI) auf einer Mx3005P real-time PCR-System (Stratagene, La Jolla, CA) erreicht. Die Sequenzen der PCR-Primer für H19, uc001lsz und β-Actin wurden wie folgt: 5'-ACCAGCCACCACATCATC-3 '(sense) und 5'-TCAGAAACAAAGAGACAGAAGG-3' (antisense) für H19; 5'-GACGGCACCTACTACACCTT-3 '(sense) und 5'-GCTGACCACCTTGTTGTTGAA-3' (antisense) für uc001lsz; 5'-AAGCCACCCCACTTCTCTCTAA-3 '(sense) und 5'-AATGCTATCACCTCCCCTGTGT-3' (antisense) für β-Actin. Die Daten wurden durch die Δ C
t-Methode analysiert [16, 17]. Alle Ergebnisse wurden als Mittel ± SD von drei unabhängigen Experimenten ausgedrückt.
Klonierung und Sequenzierung von qRT-PCR-Produkte
Die qRT-PCR-Produkte von lncRNA zuerst eine UNIQ-10-PCR-Produkt Purification Kit und anschließend gereinigt wurden kloniert in den pUCm-T-Vektor (Sangon Biotech, Shanghai, China) nach den Anweisungen des Herstellers. Dann wurde die DNA-Sequenzierung durch Sangon Biotech Co., Ltd.
serologischen Tumormarkeranalyse
Serum carcinoembryonales Antigen (CEA) und Kohlenhydrat-Antigen 19-9 (CA 19-9) wurden gemessen unter Verwendung eines Elecsys 2010-Maschine (Roche durchgeführt Diagnostics, Basel, Schweiz). Die Cutoff-Werte wurden 5 ng /ml und 35 U /ml für CEA und CA19-9 sind.
Statistische Analyse
Alle statistischen Daten durch Statistische Programm für Sozialwissenschaften (SPSS) 18.0 Software (SPSS, Chicago analysiert IL), und GraphPad Prism 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Eine Möglichkeit, Varianzanalyse Test, zweiseitigen Student t
-test und Rangsummentest wurden entsprechend verwendet. Ein receiver operating characteristic (ROC) Kurve wurde festgestellt, um den diagnostischen Wert zu bewerten. P
< 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet.
Ergebnisse | LncRNA Expressionsprofile in Magenkrebsgewebe im Verhältnis zu benachbarten nicht-tumorösen Gewebe, Die lncRNA Expressionsmuster zwischen Magenkrebs Gewebe und benachbarten nicht-tumorösen Gewebe wurden signifikant verschieden zu sein (Abbildung 1). Insgesamt 135 lncRNAs, die die Expression Veränderung mehr als das Doppelte war, gefunden wurden (GEO-Zugangsnummern ist 47850; http:.... //Www ncbi NLM nih gov /geo /query /acc. cgi? acc = GSE47850). Unter ihnen, 71 und 64 wurden nach oben und unten in Tumorgeweben exprimiert, respectively. Die am meisten herunterreguliert lncRNAs bei Magenkrebs Gewebe wurden FER1L4, uc001lsz, BG491697, AF131784, uc009ycs, BG981369, AF147447, HMlincRNA1600 und AK054588. Die meisten hochreguliert lncRNAs bei Magenkrebs Gewebe wurden H19, HMlincRNA717, AI769947, BQ213083, AK054978 und DB077273 (Tabelle 1). Abbildung 1 Veränderungen in lncRNA Expressionsprofile zwischen Magenkarzinom Geweben und nicht-tumorösen Gewebe. Das Ergebnis aus Hierarchical Clustering zeigt unterscheidbare lncRNA Ausdruck unter den Proben Profilierung. "Rot" zeigt eine hohe relative Expression; und "Blau" zeigt geringer relativer Ausdruck.
Tabelle 1 Mehr als vervierfacht unterschiedlich exprimiert lncRNAs im Magengewebe Krebs mit paarigen nicht tumoröse Gewebe zu vergleichen
-Name
Chromosome
Verordnung

Falten Änderung
Sourcea
P value

H19
11
up
8.91
lncRNAdb
0.020
HMlincRNA717
18
up
5.96
lincRNA
0.013
AI769947
7
up
5.51
lincRNA
0.026
BQ213083
2
up
5.45
lincRNA
0.040
AK054978
X
up
4.59
lincRNA
0.006
DB077273
2
up
4.11
lincRNA
0.008
FER1L4
20
down
9.17
refNR
0.047
uc0 01lsz
11
down
8.36
UCSC_knowngene
0.020
BG491697
20
down
6.50
lincRNA
0.035
AF131784
18
down
6.25
mRNA
0.019
uc009ycs
11
down
5.82
UCSC_knowngene
0.009
BG981369
1
down
5.20
lincRNA
0.048
AF147447
16
down
4.76
mRNA
0.038
HMlincRNA1600
X
down
4.12
lincRNA
0.013
AK054588
1
down
4.04
lincRNA
0.045
alncRNAdb: http:.. //lncrnadb com /Default aspx; lincRNA: http:.. //Genom ucsc edu /cgi-bin /hgGateway; .. RefNr: http: //Genom ucsc edu /cgi-bin /hgTables; .... Http: //www ncbi NLM nih gov /RefSeq /; .. UCSC_knowngene: http: //Genom ucsc edu /cgi-bin /hgTables; mRNA: http:... //Genom ucsc edu /cgi-bin /hgTables
Expression von H19 war hochreguliert in Magenkarzinom Gewebe
Da H19 die meisten up-regulierten lncRNA gefunden wurde in Gewebe Magenkrebs, bis zu 8,91-fache Veränderung der Mikroarray-Detektion (Tabelle 1), um dieses Ergebnis zu bestätigen, entdeckten wir die Expression von H19 in zwei Arten von Krebsgewebe, Biopsiegewebe und chirurgischen Proben, durch qRT-PCR. Zunächst erkundeten wir die Expression von H19 in 15 Paaren von Magenkarzinom 'Biopsiegewebe. Wir fanden, dass das Niveau in Krebsgewebe war signifikant höher als in nicht tumorösen Geweben (2A). Dann entdeckten wir H19 Ebene in große Anzahl von chirurgischen Proben. Wie in 2B gezeigt ist, war es in 74,0% (57/77) der Magenkrebsgewebe (P
= 0,029) hochreguliert. Durch Sequenzierung der qRT-PCR-Produkt, fanden wir, dass die Sequenz von H19 (Figur 2C) stand im Einklang mit der aus der Datenbank (http:.... //Www NCBI NLM NIH gov /Gen /283120). Figur 2 H19 wurde in Magenkrebsgewebe, Magenkrebs-Zelllinien und anderen gängigen Krebszelllinien hochreguliert. Real-time qRT-PCR wurde verwendet, um die Expression von H19 zu bestimmen. Die Δ C
t-Wert wurde durch Subtraktion des β-Actin-C
t-Wert aus dem Ziel lncRNA C
t-Wert bestimmt. Kleinere Δ C
t Wert zeigt eine höhere Expression. Stand H19 in Magenkrebs Biopsie Gewebe (n
= 15, P
= 0,014; A) und Magenkrebs Gewebe (n
= 77, P
= 0,029; B). Sequencing Ergebnis qRT-PCR-Produkt von H19 (C). Die Höhe der H19 bei Magenkrebs-Zelllinien (AGS, MGC-803 und SGC-7901) und Leberkrebs-Zelllinien (SMMC-7721 und HepG2) war höher als die in der menschlichen Magen-epithelialen Zelllinie GES-1 und der menschlichen Leber normale Zelle Linie HL-7702 sind; jedoch seine Ebene in Lungenkrebszelllinie A549 und Prostata-Krebszelllinien (DU-145 und PC-3) war niedriger als die in menschlichen fötalen Lungenfibroblasten-Zelllinie HELF-Zellen und menschliche epitheliale Prostatazelllinie RWPE-1 (D). Alle Ergebnisse wurden als Mittelwert ± SD von drei unabhängigen Experimenten ausgedrückt. #P
≪ 0,001.
Expression von H19 gemeinsam Krebszelllinien
Um mehr Informationen über H19-Expression in Krebsarten zu erhalten, untersuchten wir das Niveau in einigen gemeinsamen Krebszelllinien. Wie in 2D gezeigt ist, mit entsprechenden normalen Zelllinie verglichen wurde H19 hoch exprimiert in Magenkrebszelllinien (AGS, MGC-803 und SGC-7901) und hepatozellulären Karzinom-Zelllinien (SMMC-7721 und HepG2) gefunden, während niedrig exprimierten in Lungenkrebs-Zelllinie (A549) und Krebszelllinien Prostata (Du-145 und PC-3).
Expression von uc001lsz-heruntergeregelt wurde in Magenkarzinom Gewebe
Uc001lsz ist ein neu gewonnenes lncRNA, das ist von dem vorderen Strang in Chromosom 11p15.5 transkribiert. Aus den Microarray-Ergebnisse (Tabelle 1), können wir sehen, dass uc001lsz die zweithäufigste nach unten reguliert lncRNA im Magenkrebsgewebe war. Ein weiterer Grund, der uns zu weiteren Studie uc001lsz ermutigt war, dass es trans
mit MUC2 assoziiert ist, die ausgeschieden wird und bildet eine unlösliche Schleimhautbarriere in das Darmlumen. Um die Expression von uc001lsz bei Magenkrebs zu validieren, wir erweitert, um die Probennummer. Die Daten zeigen, dass es deutlich herunterreguliert in 84,4% (65/77) der Magenkrebsgewebe (3A, P
< 0,001) war. Durch Sequenzierung der qRT-PCR-Produkt, fanden wir, dass die Folge von uc001lsz (3B) war konsistent mit der aus der Datenbank (http:. //Genom ucsc edu /cgi-bin /hgTables.). Abbildung 3 Uc001lsz wurde herunterreguliert im Magenkrebsgewebe, Magenkrebs-Zelllinien und andere gemeinsame Krebszelllinien. Real-time qRT-PCR wurde verwendet, um die Expression von uc001lsz zu bestimmen. Drei unabhängige Experimente wurden durchgeführt. Niveau uc001lsz im Magenkrebsgewebe war signifikant niedriger als in entsprechenden nicht-tumorösen Gewebe (n
= 77, P
< 0,001; A). Die Sequenzierung Ergebnis der qRT-PCR-Produkt von uc001lsz (B). Die Höhe der uc001lsz bei Magenkrebs-Zelllinien (AGS, MGC-803 und SGC-7901), Leberkrebszelllinien (SMMC-7721 und HepG2) und Zelllinie A549 Lungenkrebs war niedriger als die in der menschlichen Magen-epithelialen Zelllinie GES 1, die menschliche Leber normale Zelllinie HL-7702 und menschlichen fetalen Lunge Fibroblasten-Zelllinie HELF sind; jedoch das Niveau in Prostatakrebs-Zelllinien (Du-145 und PC-3) war höher als die in der menschlichen Prostata epithelialen Zelllinie RWPE-1 (C).
Expression von uc001lsz gemeinsam Krebszelllinien
An erhalten die Expression Informationen über uc001lsz gemeinsam Krebs, entdeckten wir das Niveau in verschiedenen Krebszelllinien gemeinsam. Wir fanden, dass mit entsprechenden normalen Zelllinie zu vergleichen, wurde uc001lsz niedrig bei Magenkrebs ausgedrückt (AGS, MGC-803 und SGC-7901), Lungenkrebs (A549) und Leberkrebs (SMMC-7721 und HepG2) Zelllinien, während nur sehr bei Prostatakrebs (Du-145 und PC-3) Zelllinien (3C).
Mögliche Diagnosewerte von H19 und uc001lsz ausgedrückt kaufen Wir nächstes eine Analyse durchgeführt, ob Ausdruck H19 oder uc001lsz identifizieren wurde mit der klinisch-pathologischen assoziiert Merkmale von Magenkrebs. Wie in Tabelle 2 gezeigt, wurde die Höhe der uc001lsz mit TNM Stadien assoziiert (P
= 0,032). Die positiven Erkennungsraten von H19 und uc001lsz sind 74,0% und 84,4%, respectively. Beide sind höher als die der gemeinsamen CEA Magenkrebs-Biomarker (64,0%) und CA 19-9 (53,3%) (Tabelle 2). Die Flächen unter ROC-Kurven wurden bis zu 0,613, 0,751 und 0,761 für H19, uc001lsz, und die Kombination, bzw. (Abbildung 4). Die kombinatorische Verwendung von H19 und uc001lsz leicht erhöht die diagnostische value.Table 2 Das Verhältnis von H19 und uc001lsz Expressionsniveaus (Δ C t) in Krebsgewebe mit klinisch-pathologischen Faktoren von Patienten mit Magenkrebs ein
Eigenschaften
Nein. der Patienten (%)
H19
uc001lsz
Mittelwert ± SD
P-Wert
Mittelwert ± SD

P-Wert
Alter (y)
≥ 60
59 (76,6)
8,74 ± 4,67
0.588
18,85 ± 4,94
0,240
< 60
18 (23,4)
8,08 ± 3,99
17,28 ± 4,85
Geschlecht
männlich
57 (74,0)
8,66 ± 4,81
0.823
18.19 ± 5.01
0.355
Weiblich
20 (26,0)
8,40 ± 3,44
19,37 ± 4,58
Durchmesser (cm) b
≥ 5
39 (52,0)
7,98 ± 4,44
0.282
18,49 ± 5,03
0.682
< 5
36 (48,0)
9,10 ± 4,53
18.01 ± 5.11
CEAB
Positive
48 (64,0)
8,45 ± 4,21
0.882
18.28 ± 4,54
0.593
Negative
27 (36,0)
8,61 ± 5,01
18,92 ± 5,71
CA19-9b
Positive
40 (53,3)
8,68 ± 3,87
0.720
18,65 ± 4,64
0.792
Negative
35 (46,7)
8,31 ± 5,14
18,35 ± 5,37
Differentiationc
Well
3 (4.9)
8,28 ± 1,92
0,635
15.34 ± 5.40
0.371
Moderate
33 (54,1)
9,05 ± 4,40
19,37 ± 4,85
Schlechte
25 (41,0)
7,84 ± 5,47
19,54 ± 4,91
Lymphatische metastasisc
N0
20 (32,8)
8,95 ± 3,17
0.926
18,55 ± 6.01
0.472
N1 & N2 & N3
41 (67,2)
9,07 ± 5,25
19,53 ± 4,39
Distal metastasisc
M0
58 (95,1)
8,87 ± 4,70
0.258
19,13 ± 5,02
0.617
M1
3 (4.9)
12.00 ± 1.30
20,62 ± 3,74
Invasionc
Tis & T1-T3
20 (32,8)
10,04 ± 3,86
0.237
17,73 ± 4,72
0,105
T4
41 (67,2)
8,53 ± 4,95
19.93 ± 4.95
TNM stagec
0 & I & II
24 (39,3)
9,40 ± 3,86
0.620
17,81 ± 5,52
0,032
III & IV
37 (60,7)
8,79 ± 5,14
20,49 ± 3,98
s Sämtliche Proben von 16 endoskopische Biopsie-Proben und 61 Chirurgie-Proben von Patienten mit Magenkrebs bestehen sind.
BNOT für 2 Patienten nachgewiesen, die waren Endoskopie Untersuchung durchgeführt.
Conly 61 Chirurgie-Patienten umfasst.
4 der ROC-Kurve Abbildung.
Expression von uc001lsz anomale war in der frühen Krebs und präkanzerösen Läsionen
Endlich die möglichen frühen Diagnosewerte von lncRNA zu beobachten, gemessen wir das Niveau der uc001lsz in frühen Krebs und präkanzerösen Läsionen. Wir fanden, dass das Niveau bemerkenswert niedriger war in dieser Läsionen im Vergleich mit denen von benachbarten nicht-tumorösen Gewebe (5A) entspricht. Die Höhe der uc001lsz in normalen Geweben war signifikant höher als in Präkanzerosen und frühen Krebsgewebe. Außerdem war das Niveau in präkanzerösen Läsionen auffällig höher als in frühen Krebsgewebe (5B). Abbildung 5: Expression von uc001lsz in frühen Krebs und präkanzerösen Läsionen. Die Höhe der uc001lsz in frühen pathologischen Veränderung Gewebes geringer ist als die in normalem Gewebe gepaarte (n
= 14, P = 0,0016
; A). Die Höhe der uc001lsz in normalem Gewebe ist deutlich höher als die in präkanzerösen Läsionen und frühen Krebserkrankungen (B). #P
≪ 0,001; * P
< 0.05.
Diskussion
Studien zeigten, dass ~ 18% der die lncRNAs mit Krebs erzeugen kodierenden Gene Protein gezeigt verbunden ist, während nur 9% aller menschlichen Protein-kodierenden Genen, die mit Krebs in Verbindung gebracht werden [18]. Die Beziehung zwischen lncRNAs und Tumoren hat sich zur Zeit einer der Schwerpunkte der Krebsstudien.
Es gibt immer mehr Hinweise darauf, dass lncRNAs sind Bezug auf Verdauungssystem Tumoren [19]. Drei lncRNAs, H19, HOTAIR und lncRNA hoch upregulated in Leberkrebs (HULC) wurden gefunden Überexpression in humanen hepatozellulären Karzinomen (HCC) [20-22]. Darüber hinaus ist HULC Ausdruck nicht nur auf HCC beschränkt, sondern ist auch in kolorektalen Karzinomen exprimiert, die in die Leber metastasieren [23].
Über lncRNAs Researches zu Magen bezogen sind begrenzt. Sun et al.
Festgestellt, dass das Expressionsniveau von Magenkrebs-assoziierten Transkript 1 (GACAT1) oder AC096655.1-002, war signifikant mit Lymphknotenmetastasen korreliert, Fernmetastasen, TNM Stadien und Differenzierung [17]. Mei et al.
Dass Ubiquitin-like Modifier berichtet (SUMO) 1 Pseudogen 3, SUMO1P3 könnte ein potentielles Biomarker für die Diagnose von Magenkrebs [16] sein. Niinuma et al.
Festgestellt, dass die Überexpression von HOTAIR deutlich mit hohem Risiko gastrointestinalen Stromatumoren [24] verbunden war. RNA, 7SK small nuclear (RN7SK) indirekt Magen tumorigenesis über positive Transkription Elongationsfaktor-b (p-TEFb) [25] regeln. H19 kann eine wichtige Rolle bei Magenkrebs durch den Verlust von Imprinting und andere Mechanismen [26, 27] spielen. Neu, Cao et al
. gebrauchte Bioinformatikmethoden lncRNA Expressionsprofile im Zusammenhang mit Magenkrebs [28] zu screenen. Zuerst werden zwei öffentlich zugänglichen menschlichen Exon Arrays für Magenkrebs und Daten für die entsprechende normale Gewebe wurden aus der GEO heruntergeladen. Dann wurden die Proben der humanen Exons Arrays wiederannotiert. Schließlich wurden die Sonden eindeutig Zuordnung zu lncRNAs auf Gen-Ebene beibehalten. Insgesamt 88 lncRNAs, die bei Magenkrebs unterschiedlich exprimiert wurden, wurden identifiziert [28].
Dabei sind die Ansätze für das Screening von Magenkrebs-assoziierten lncRNAs waren verschieden von denen, die von Cao et al
. [28]. Um die bemerkenswert herabreguliert oder hochreguliert lncRNAs bei Magenkrebs zu identifizieren, die wir gesammelt erste Magenkrebs und benachbarten nicht-tumorösen Gewebeproben von oberen gastrointestinalen Endoskopie Prüfung. Aus den lncRNA Expressionsprofile von lncRNA Microarray-Analyse erhalten (Abbildung 1), fanden wir unter den signifikant unterschiedlich ausgedrückt lncRNAs (Tabelle 1), dass nur H19 bei anderen Krebsarten gefunden wurde [11, 20, 26, 27]. Als Ergebnis ist es entscheidend, die klinischen Unterschriften lncRNAs in der Diagnose und Behandlung von Magenkrebs weiter zu klären., Die wachsende Studien der funktionell charakterisiert lncRNAs offenbart, daß diese Transkripte in verschiedenen physiologischen Prozessen von Bedeutung sind, einschließlich der Differenzierung embryonaler Stammzellen [29], T-Zell-Differenzierung [30], Differenzierung der Keratinozyten [31], vor allem die veränderte Expression von lncRNAs zu Krebs führen könnte [32]. in der vorliegenden Studie
wir auf zwei lncRNAs konzentriert, H19 und uc001lsz . Der Expressionsgrad von H19 in Geweben Magenkrebs wurde gefunden, als die offensichtlich höher sein in nicht-Tumorgeweben (2A und B). Zusammen mit der erhöhten Expression von H19 bei Magenkrebs-Zelllinien (2D), schlagen wir vor, dass H19 eine wichtige Rolle bei Magenkrebs Pathogenese spielen. Interessant, H19 Ausdruck wird in jeder Tumorarten nicht erhöht. Wie in 2D gezeigt, wird H19 Ausdruck in hepatocarcinoma und Prostatakrebs verringert. Diese Ergebnisse bestätigen, dass weitere H19 wirkt nicht nur als ein Onkogen, sondern auch als Tumorsuppressor [20, 27, 33]. Matouk et al
. festgestellt, dass das Klopfen-down von H19-RNA in eine nahezu vollständige Dämpfung von p57 Kip2 Induktion als Reaktion auf hypoxischen Stress führte [20]. Sie fanden ferner, dass mit H19 Angiopoietin verbunden war (ANG) und Fibroblasten-Wachstumsfaktor-18 (FGF-18), deren Funktionen beteiligt sind, in das Tumorwachstum und die Proliferation [20]. Um zu verstehen, den molekularen Mechanismus, mit dem H19 Magenkrebs Zellwachstum erhöht, Yang et al
. geprüft, ob H19 die Funktion des Tumor-Suppressor p53 [27] wirkt. Sie fanden heraus, dass H19 mit p53 verbunden war, und dass dieser Verband führte zu teilweise p53 Inaktivierung [27].
Im Gegensatz zu H19, uc001lsz Expressionsniveau in Magenkrebsgewebe gefunden wurde deutlich niedriger (3A) zu sein. Wie in 3C gezeigt, ist die Expression von uc001lsz bei Magenkrebs-Zelllinien (AGS und MGC-803) niedriger als im Magen-epithelialen Zell (GES-1), aber es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen SGC-7901 und GES-1 . Vielleicht führt die low grade Bösartigkeit von SGC-7901 zu diesem Ergebnis bei. Noch wichtiger ist, wurde eine stärkere Verbindung zwischen uc001lsz Expression und TNM-Stadium gefunden (Tabelle 2). Diese Ergebnisse bestätigten uc001lsz als wichtiger Akteur in der Entwicklung von Magenkrebs zu hemmen. Wie wir bekannt sind, schließen viele lncRNAs transkribiert oder innerhalb von Protein-kodierenden Loci, die die Hypothese verstärkt, die lncRNAs haben cis
-wirkenden Effekte innerhalb dieser Loci. Aber uc001lsz kann trans
-wirkende Wirkung innerhalb ihrer benachbarten Protein-kodierenden Loci. MUC2
, ein Mitglied der Mucin-Protein-Familie von Genen, befindet sich neben dem
zu UC001LSZ. Die MUC2 wird auf Schleimhautoberflächen sezerniert wird, wo es von Becherzellen im epithelial lining in das Lumen des Magens [34] ausgeschieden wird. Wie berichtet, war MUC2 hohe Expression in Magenkrebs [35]. Obwohl uc001lsz scheint, als Tumor-Suppressor-Gen bei Magenkrebs und viele andere Arten von Tumoren spielen, kann es andere Rolle bei Prostatakrebs spielen, wo uc001lsz stark exprimiert wurde (3C).
Molekulare Tumor Biomarker sind wichtige diagnostische und prognostische Tools. Unsere Daten zeigen, dass die Expression von uc001lsz in frühen Magenkrebs und Magen präkanzerösen Läsionen (5A) anomale war. Und die außergewöhnlichen Veränderungen erscheinen vielleicht in der präkanzerösen Läsionen (5B). Diese Untersuchung zeigt, dass uc001lsz ein Kandidat Biomarker von Magenkrebs sein kann.
Schlussfolgerungen
Zusammengefasst wir ein lncRNA Expressionsprofil darstellen, die mit Magenkrebs in Verbindung gebracht. Die Überexpression von H19 bei Magenkrebs-Zelllinien und Geweben deutet darauf hin, dass H19 bei Magenkrebs beteiligt werden können. Die verminderte Expression von uc001lsz bei Magenkrebs-Zelllinien und Geweben, ihre Assoziationen mit TNM-Stadium, und ihre Dysregulation in frühen Krebs und präkanzerösen Läsionen legen nahe, dass uc001lsz eine wichtige Rolle bei Magenkrebs Auftreten haben kann und ein potentieller Biomarker für die Diagnose von früh Magenkrebs
Abkürzungen
ANG:.
Angiopoietin
CA19-9:
Carbohydrate Antigen 19-9

CEA:
Carcinoembryonic Antigen
Ct:
Schwellenzyklus
DC /CIK:
Dendritische Zelle /Zytokin-induzierte Killer
FGF-18:
Fibroblasten-Wachstumsfaktor-18
GACAT1:
Magenkrebs -assoziierten Transkript 1
H19:
der reziprok prägt Partner von Igf2
HCC:
hepatozellulären Karzinomen

HOTAIR:
HOX Transkript Antisense-RNA
HOX:
Homeobox
HULC:
Hoch bei Leberkrebs upregulated
IGF2:
Insulin-like growth factor 2
IGF2-AS:
IGF -IR und IGF-IIR-Antisense-
IGF-IR:
Insulin-like growth factor-Typ-I-Rezeptor
IGF-IIR:
Insulin-like growth factor-Typ-II-Rezeptor
lncRNA:
Lange nicht-kodierenden RNA
MALAT-1: <

• Der Nachweis von Sentinel und Non-Sentinel-Lymphknoten-Mikrometastasen durch komplette Serienschnitt und immunhistochemischen Analyse für Magenkrebs
• EBNA1 Bindung und epigenetischen Regulation von Gastrokine Tumor-Suppressor-Gene in Magenkarzinomzellen