Schulung vun chromosome Onstabilitéit an Mo. Kriibs vun der Ausdrock Muster vun mitotic Bomm Genen am Mais bis areca-nut ausgesat Wou muss ech

Schulung vun chromosome Onstabilitéit an Mo. Kriibs vun der Ausdrock Muster vun mitotic Bomm Genen am Mais bis areca-nut VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background ausgesat Wou muss ech VerfÜgung Et sinn staark Zeechen fir eng causal association tëscht areca-nut Konsum an Cancers. An Meghalaya, Indien, ass d'Varietéit vun areca-nut als Matière a behandelt Form hir chemescher Zesummesetzung a pharmacological Aktiounen gemellt goufen benotzt. Nach wësse mer wéineg op der éischter Passerelle an areca-nut verbonne carcinogenesis Équipe well et schwiereg ass hir Auswierkungen op genetesch hire Restaurant ouni vun anere compounding Faktoren agemëscht ze bewäerten. Dowéinst, gouf dobäi Etude am Mais land d'Fähegkeet vun raw areca-nut (quasi) fir z'iwwerpréiwen Kriibs ze induce an den Ausdrock vun enger bestëmmter Genen vun carcinogenesis Équipe ze kontrolléieren. Dës Etude ass keng aktiv Ingredienten vum Ran ze isoléieren ausschléissen an hir Aktioun am Wanterschlof war. VerfÜgung Method VerfÜgung Dräi Gruppe vu Mais (n = 25 vun all) waren bei verschidden Zäit-Punkte fir verschidden Experimenter Analyse geholl a benotzt . Déi aner dräi Gruppe vu Mais (n = 15 vun all) sech fir entholl Aféierungs- Studien considéréiert. An all Saz, goufen zwou Gruppen Ran-Extrait verwalte ad libitum VerfÜgung zu Drénkwaasser mat oder ouni Zitroun. Den Ausdrock vun enger bestëmmter Genen war duerch konventionell RT-Hinnen alleguer an immunoblotting évaluéieren. De Mais waren de ganzen Ran-Extrait mat an ouni Zitroun fir de Mënsch Konsum Stil vun Ran rescht entscheet. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Histological Virbereedung vun Mo. Otemschwieregkeeten Teamchef Mo. Kriibs entschlof Ran. A moderate Erhéijung vun der Frequenz vun precocious anaphase an aneuploid Zellen war am Réckemuerch hiirgestallt Zellen mat engem gréissere increment folgenden Ran + Zitroun administeration observéiert. Niveau vun p53, Bax, Securin VerfÜgung an p65 VerfÜgung zu esophageal an Mo. Zellen sech am Ufank Deeg vum Ran aussetzt nik während deene vun anere mitotic Bomm Proteinen downregulated goufen. Apoptotic Zell Doud war an Net-kriibserreegend Mo. Zellen awer net zu entholl Zellen fonnt déi overexpression vun Bax VerfÜgung a Flichte vun PARP VerfÜgung zougedréckt. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Sëtzungen Etude proposéiert (e) Ran Mo. Kriibs induces, ee, Presenz vun Zitroun gefördert héich Zell Transformatioun an doduerch entwéckelt Kriibs virdrun, (b) Wierkung an Deeler vun der chromosome Segregatioun Maschinnen konnt an der éischter Prozess vun carcinogenicity an (c) d'Wichtegkeet vun precocious anaphase wéi engem Schädel Bewaacher fir Identifikatioun Équipe ginn vun mitotic Bomm Mängel während fréi Deeg. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Chromosome Onstabilitéit Mitotic Bomm Genen Securin VerfÜgung Apoptosis Background VerfÜgung Esophageal squamous Zell carcinoma (ESCC) an der gastric Cancers sinn déi gemeinsam Cancers an Indien, mat der héchster Heefegkeet vun ESCC am Nord-Oste vun Staaten vun Indien [1] gëtt. Et sinn staark Zeechen fir eng causal association tëscht areca-nut oder quid opgehalen Gewunnechten an dës Cancers. Rei vu Studien an verschidden Déierenaarten positiv Aféierungs- vun erhéijen an zwou Zil- (déck-pouch, esophagus an Mo) an Net-Zil (haett an Liewer) Stoffer wann arecoline (ARC) oder areca-nut Extrait dës Distanz vun verschidden heescht verwalt gouf esou wéi mëndlech intubation [2], gemëscht mat der Ernährung [3], an déck-pouch Applikatioun [4]. Dofir, schéngt et, datt metabolic Aktivatioun vun Alkaloïden fir d'Finale Ëmbau an der ultimate carcinogens néideg ass, déi staark vun gestallt Konditiounen a Präsenz vu bestëmmte Facteuren beaflosst ass [5]. Rapporten hunn Generatioun vun reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros) aus areca-nut Ingredienten ënner alkaline Konditiounen uginn [6, 7]. Wéinst der Präsenz vun Zitroun an io-quid Virbereedung, areca-nut chewers 'Spaut Ännerungen normalerweis aus neutral fir eng alkaline Conditioun déi fir generéieren Ros ideal kéint [7]. Nair et al. [6] muss feststellen och, datt nieft ARC, auto-oxydéiert areca-nut polyphenols konnten produzéiert H 2O 2 an superoxide Radikaler op alkaline pH. VerfÜgung An der Staat vun Meghalaya, Indien, der Villfalt vun areca nut, ass lokalen 'kwai "genannt, wéi unripe a behandelt Matière Formulaire benotzt déi héich Inhalter vun Alkaloïden, polyphenols an tannins huet wéi fir d'gedréchent Form Verglach [8]. D'io-quid zu Meghalaya benotzt enthält Matière areca-nut (quasi), Zitroun Paste an klengen Deel vun io-mengem ouni Tubak a aneren Atomer. Hei Leit drénkt der ganzer quid der opgehalen huet et vun späitzt aus wat e wichtege Faktor fir ESCC an Mo. Kriibs ginn hätt. Kuerzem, 40% esophageal Kriibs Echantillon vu Patienten vun Meghalaya Staat gesammelt nëmmen Ran-opgehalen Gewunnecht mussen zougedréckt a Läsche vun der microsatellite lues D9S1748 an D9S1749, läit no um 9p21 1β vun CDKN2A /Arf VerfÜgung Gentherapie fir Exon. De Promoteur hypermethylation vun CDKN2A VerfÜgung Gentherapie war wiesentlech méi héich an d'Echantillonen mat der Gewunnecht vun Ran-opgehalen eleng wéi déi d'Gewunnecht vun benotzen souwuel Ran an Tubak mussen [9]. Bis elo wësse mer net vill op den initialen Passerelle an io-nut verbonne carcinogenesis zu esophagus an Mo. bënnt. Et ass och schwéier d'Auswierkunge vun reng a virun allem areca-nut-entschlof genetesch hire Restaurant zu Mënsch ien vun anere compounding Facteure wéi Tubak opgehalen oder fëmmen, Alkohol Konsum, verschidden Zorte vun Net-vegeterian Liewensmëttel etc. Desweideren ze bewäerten, d'Präsenz vun Zitroun mécht en alkaline Conditioun wat fir eng kënschtlech VerfÜgung Zell Kultur net ideal ass an dofir d'Wierkung vun areca-nut kann net zu Zell Kultur Systemer getest ginn. Opgrond vun dësen, war de Moment Etude am Mais duerchgefouert d'Fähegkeet vum Ran-Extrait mat oder ouni Zitroun, fir z'iwwerpréiwen, Kriibs ze induce a gläichzäiteg den Ausdrock Muster vu bestëmmte Genen déi eng wichteg Roll am initialen Prozess vun carcinogenesis Leeschtung diskutéieren. VerfÜgung der chemescher Zesummesetzung a pharmacological Aktiounen vun areca-nut hunn duerch verschidden Aarbechter gemellt an iwwerschafft ginn [10, 11]. Verschidden Déiere Studien hu confirméiert dass areca-nut Produiten an io spezifesch nitrosamines, hunn d'Fähegkeet neoplastic Ännerungen an experimentell Déieren [11] zu induce. Bedeitend Beweiser hindeit datt areca-nut-Alkaloïden, Kannerbetreiung arecoline (ARC) sinn déi grouss Facteuren zu Dat ass-toxicity [11]. Et war déi ARC dës kann DNA Schuedenersaz vun Maus Réckemuerch hiirgestallt Zellen [12] an esou DNA Schuedenersaz induce ka reduzéiert ginn, wann ARC mat N-acetyl-L-cysteine ​​[13] verwaltet gëtt. Dofir, et ass derwäert ze ernimmen, datt den haitegen Etude net aus dem Ran all aktiv Nulltarif ze isoléieren huet gehofft an hir Aktioun am Wanterschlof war. D'Zil vun der Etude war den initial Passerelle an Ran verbonne carcinogenesis zu Mais an dofir Mais Équipe ze identifizéiren sech mat der ganzer Ran-Extrait entscheet an ouni Zitroun, fir de Konsum Gewunnecht vu Mënsch zu rescht. VerfÜgung puer Genen, wéi p53 , p65, Securin VerfÜgung a vill anerer, si bekannt normalerweis während carcinogenesis [14-16] overexpressed gin. Ausserdeem, ass genetesch Onstabilitéit och mat chromosome Instabilitéit (Cin) assoziéiert déi zu aneuploidy féiert, e Pionéier vun Kriibs. Esou aneuploidy kann tumorigenesis duerch de Verloscht vun entholl suppressor Gentherapie Funktioun vereinfachen. Et huet observéiert gouf, datt de partiell Verloscht vun mitotic Bomm Kontroll Cin féiert zu Mënsch Kriibs Zellen [17, 18]. Dofir, an de Grëff ze studéieren, évaluéiert mir den Ausdrock Muster vun p53, p65, Securin VerfÜgung an e puer mitotic an spindle Versammlungs- Bomm Genen op verschidden Zäit-Punkten. Mir gesinn, datt Ran Mo. Kriibs vun perturbing d'Komponente vun der chromosome Segregatioun Maschinnen induce kann. VerfÜgung Method VerfÜgung Virbereedunge dovu VerfÜgung der fibrous Wopen aus behandelt Matière an unripe areca-nut (quasi) No eskaléiert, 100 g vun Ran sech Buedem an zu 125 ml destilléiert Waasser gemëscht Hënn ze ginn e fléissenden Paste fir Virbereedung vun meng Extrait vun Ran gespaart. No 24 h, war de Paste vun 3 h op 37 ° C an der meng Extrait war vun centrifugation gesammelt géinteneen. Dëst Extraktioun Prozedur war eemol méi widderholl vun 125 ml vu Waasser un d'Ermächtegung Schan. Béid dovu waren hinzeginn, vertrëtt 100 g vun Ran zu 250 ml destilléiert Waasser, Filter, an gefruer bei - 80 ° C. D'filtrate gouf zu engem Secfroid Lyolab BII Lyophilizer (Dänemark) lyophilized. D'lyophilized Mass war bei 4 ° C bis benotzt huet. Den Extrait aus 0,9 g /100 g Waasser-extractable Material. VerfÜgung Déieren Ënnerhalt a Behandlung VerfÜgung Schwäizer Attilio Mais (25-30 GM), 2-3 Méint al waren am Labo an Communautéit Käfeg an engem Sall haten mat kontrolléiert Temperatur (20 ± 2 ° C) a kontrolléiert Beliichtung (12 h Liicht; 12 h donkel). Standard Maus Ernährung (NMC Oil Mills Ltd., Pune, Indien) a Waasser ad libitum VerfÜgung zu all Experimenter benotzt goufen. D'Experiment conforme institutionell Richtlinnen gehaal an vun eiser ofgeseent "Finanzpolitiker Bestëmmungen fir Déieren Care an Use" Board. VerfÜgung An Set-1, dräi Gruppe vu Mais (n = 25 vun all) sech geholl, wat bei verschiddene agesat goufen Zäit-Punkte fir verschidden Experimenter Analyse. An Set-2, dräi Gruppe vu Mais (n = 15 an all) sech fir entholl Aféierungs- Studien considéréiert. Figur 1 gëtt e Sënn Iwwersiicht iwwer déi gesamt experimentell Protokoll deen an dëser Etude considéréiert gouf. An all Saz, war ee Grupp mat einfachen Drénkwaasser behandelt als onbehandelt gin hierkommen zwou Gruppe waren Ran ad Extrait verwalte libitum VerfÜgung am Drénkwaasser mat oder ouni Zitroun (pH 9,8). Et gouf ugeholl, datt all Maus 1 mg vun Extrait pro Dag verbrannt. Wéi mëndlech administeration war fir 60 Deeg weider no déi Dosis vun 1 mg zu 2 mg pro Dag bis 120 Deeg fräi war. Anerersäits, war vun 1 mg pro Dag Konsum all 60 Deeg méi spéit d'Kribbelen fräi. Figur 1 Flow Diagramm vun experminteller Design fir d'Analyse vun der Matière areca-nut mediated Carcinogenesis zu Mais. RAN- Matière areca-nut; d- Deeg. VerfÜgung Virbereedunge metaphases a spillen vun chromosomal geometrescher Figur VerfÜgung Fir metaphase Virbereedung, Schanken hiirgestallt Zellen (Fedrigo) sech aus onbehandelt aus zwou Mais pro Punkt gesammelt, 15 an 30 Deeg vun behandelt Grupp an dräi Mais pro Punkt fir de Rescht. An der behandelt Gruppen, goufen Fedrigo gesammelt no 15, 30, 60, 120 an 180 Deeg vum Traitement. Fedrigo waren och aus der zwou Mais mussen Mo. entholl gesammelt. Fedrigo waren der 2 h colchicine Behandlung (15 mg /kg) gesammelt. Déieren sech duerch cervical dislocation ëmbruecht. D'femurs sech Leschten aus a Fedrigo sech duerch iergendee 2 ml 0,075 M KCl prewarmed bis 37 ° C Ofwaasser aus. (: 3 1) Zellen sech am hypotonic Léisung fir 15 min an den fixen an acetic Seier an methanol behandelt. Drënner waren déi vun der Flam drëschenen Method, Kierchefënster zu 5% Giemsa bereet fir 5 min an Descher an syntheteschen mëttelfristeg. Biller vun metaphase a goufen ënner microscope König Axioskop geholl (Däitschland). VerfÜgung Fir chromosomal studéieren, goufen d'drënner an ënnerschiddleche kodéiert an op d'mannst 100 gutt verbreet metaphase Placke waren fir Etude aus all Maus ausgewielt. Mir standing chromosome zielt op metaphase verbreet. Chromosome geometrescher Figur sech als isochromatid ugesprach chromatid ugesprach huet. Zréck Grenzgänger hun Démarchen fir Detailer vun der Weider Fichier 1:. Zousätzlech Informatiounen VerfÜgung Immunoblotting VerfÜgung Zelle vu Schanken-hiirgestallt, esophagus (vun zentrale futti Schëtter) an Mo. (vun zentrale Deel Schëtter) waren zweemol mat PBS Katakombe (phosphate gefiermt Salins) an huet am radioimmuno-Nidderschlag Prellbock (0,1% SDS, 2 mm héich, 1% NP-40, 1% Natrium deoxycholate, 50 mm Natrium fluoride an 100 U /ml aprotinin) lysed. No 30 min vu incubation op Äis, goufen d'Zell lysates fir 15 min bei 4 ° C an der Zomm vun FAQ centrifuged war mat der bicinchoninic Seier FAQ assay alles. Selwecht Quantitéit vun FAQ (40 μg) aus all Prouf an all gutt iwwerlaascht war; gläiche Luede gouf weider vun immunoblotting mat actin antibodies ubelaangt. Echantillon waren am Novex Tris-Glycine 4-20% packt gels an electrophoresis iwwerlaascht war zu NuPAGE electrophoresis System (Invitrogen, USA) gesuergt. Proteinen sech zu engem Polyvinylidene difluoride (PVDF) Membran (Fläch) folgenden Standard Protokoll transferéiert. D'Schläimhait sech mat engem 1 Komedie: dilution 1000 vun enger Maus monoclonal antibody géint p53 VerfÜgung (PAb 240; ab-26; Abcam, USA), Bax VerfÜgung (6A7; ab5714; Abcam, USA), Securin
(DCS-280; ab3305; Abcam, USA), β-actin VerfÜgung (AC-15; ab6276; Abcam, USA) an Kanéngchen polyclonal antibody géint NF-κβ P65 VerfÜgung (ab31481; bcam, USA). Blots sech all an TBST gefiermt pH 7.6 (1 M Tris Cl, 5 M NaCl an 0,05% Tween 20) 3 Mol fir 10 min gewäsch a mam Lycée antibody (alkaline-phosphatase conjugated anti-Maus IgG oder alkaline-phosphatase antirabbit IgG conjugated incubated 1: 2000; Abcam, USA) fir 1 h bei Raumtemperatur. No extensiv wäschen, war zu 4 ml Realitéiten Léisung vun BCIP /NBT (Bangalore Genei, Indien) déi blot Beweegung. Genuch staining war bannent 15 min kritt. All immunoblotting war an dräi Mais pro-Punkt gesuergt. VerfÜgung Histopathological Evaluatioun VerfÜgung Mo. Otemschwieregkeeten war vun onbehandelt Kontroll gesammelt an aus zwee Ran + Zitroun behandelt Mais mat entholl. An enger anerer Formatioun, war Mo. Otemschwieregkeeten och aus onbehandelt souwéi vun de Gruppen gesammelt dat fir 300 Deeg mat Ran-Extrait behandelt mat an ouni Zitroun. Dräi Mais sech zoufälleg aus all Grupp ausgewielt. Dës Mais hat keng Indikatioun entholl erhale bleiwen. Ray Rubriken (5-7 μm) sech als pro Standard Protokoll fir histological sectioning Filteren [19] an Kierchefënster mat hematoxylin an eosin [20]. Sektiounen sech dann ënnert engem Liicht microscope observéiert an fotografeschen (Carl König, Däitschland). VerfÜgung RNS erauszéien a konventionell RT-Hinnen alleguer Analyse VerfÜgung BTS sech duerch Schëtter den zentrale futti vun esophagus an Mo aus onbehandelt Kontroll, Ran an Ran gesammelt + Zitroun behandelt Maus (dräi Mais pro Punkt). Réckemuerch hiirgestallt Zellen sech aus der femur Schanken vun der Maus gesammelt. Total RNS war mat Trizol isoléiert an dann d'RNeasy Mini Kit sidd benotzt (QIAGEN) laut den Hiersteller d'Protokoll. Ëmgekéierte Transkriptiouns war mat 1 μg vun insgesamt RNS aus all Prouf benotzt Quantiscript ëmgedréint Transcriptase, Quantiscript RT-gefiermt an RT Primer-Mix vun QuantiTect ëmgedréint Transkriptioun Kit (QIAGEN GmbH, Hilden, Däitschland) standing laut den Hiersteller d'Protokoll. Amplification vun cDNA zu 20 μl Léisung mat 2 μl cDNA, 10 pmol primer Puer fir Aurora A gehaal huet, Aurora B, Mad2, Bub1 an GAPDH (fir primer Message, gesinn Weider Fichier 1: zousätzlech Informatiounen) respektiv, a 10 μl vun RT qPCR Master Mëschung (QIAGEN GmbH, Hilden, Däitschland). D'Hinnen alleguer aus initial denaturation bei 94 ° C fir 5 min, gefollegt vun 30 Reaktioun Monaco (30 Sekonnen op 94 ° C, 30 Sekonnen an 60 ° C, an 30 Sekonnen op 72 ° C) an eng final Zyklus bei 72 ° C fir 10 min. GAPDH war wéi intern Kontroll benotzt. All Hinnen alleguer Produite goufen electrophoretically op ethidium bromide-Kierchefënster agarose gelies getrennt a mat UV Luucht visualized. VerfÜgung Flow cytometric Analyse vun Zellen VerfÜgung Mouse Réckemuerch hiirgestallt Zellen an der gesammelt Zellen vun den zentrale Layer vun der esophagus an Mo. souwuel Schëtter onbehandelt a fir 260 Deeg mat Ran mat oder ouni Zitroun behandelt huet mat 70% Ethanol fest. Mo. entholl Zellen sech och gesammelt an fix. Déi fix Zellen sech am PBS an resuspended zu 500 μl vun propidium Kaliumiodid Léisung (50 μg /ml propidium Kaliumiodid, 0,2 mg /ml RNase) Katakombe fir 1 h bei Raumtemperatur an donkel. 10.000 Zellen sech fir all Prouf an analyséiert mat engem FACS Calibur (Becton-Dickinson) chrétienne. CELLQuest Pro Software war benotzt Zell Zyklus compartments zu ofgedonkelt de Prozentsaz vun Zellen vun de verschiddene Zell Zyklus Phasen verdeelt ze schätzen. VerfÜgung Annexin V Etikette Studien VerfÜgung Apoptotic Zell Doud bewäert gouf benotzt annexinV-fluorescein isothiocyanate Method am Mo. entholl Zellen an och am zentrale futti vun Zellen vun de Mo a esophagus vun onbehandelt a quasi mat an ouni Zitroun behandelt Maus no 260 Deeg vun kontinuéierlech administeration. D'Zell PELLET war vun PBS resuspended. FITC Apoptosis Detektioun Kit (BD-Pharmingen Biosciences, San Diego, CA) als pro Fabrikant d'Uweisunge: Zellen sech mat propidium Kaliumiodid an Annexin-V-FITC benotzt BD PharmingenTM Annexin V geschriwwen. Kuerz, no zweemol mat PBS Sammelen a wäschen, an der bindend Prellbock (500 μl) Zellen sech resuspended. FITC-Annexin-V (5 μl) war fir d'Zellen vun Zousätzlech vun 5 μl PI Schluss derbäi no de Protokoll. D'Echantillon waren duerno fir 15 min am däischteren bei Raumtemperatur incubated an ënnerworf cytometry Evaluatioun ze stréimen. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Werter wéi heeschen ± Sem ausgedréckt sinn oder mengen ± Sem fir Kontroll an experimentell Echantillon a statistesch Analyse waren gesuergt vum Student d't Test mat GraphPad Prism Software 5.1. Déi Wäerter waren statistesch relevant considéréiert, wann der p Wäert 0,05 war oder manner. VerfÜgung Resultater VerfÜgung General Observatioune VerfÜgung Out vu fofzéng Mais, zwou Mais Mo. Kriibs der 220 an 256 Deeg vun erofzesetzen vun Ran mat Zitroun Extrait entwéckelt (Well 2A engem an b). Nee entholl war an Maus entwéckelt entweder onbehandelt oder nëmme mat Ran verwalt. D'histological Rubrik kloer tëscht normal (Dorënner 2A c) an tumorous Mo. (Dorënner 2A d-f) ënnerscheet. histological Virbereedung vun Mo. Otemschwieregkeeten Allerdéngs war och vun dësem Grupp no ​​300 Deeg vun erofzesetzen mat Ran-Extrait mat an ouni Zitroun ausgewielt aus dräi vermeintlech normal sicht Mais gemaach. Béid Ran mat an ouni Zitroun huet seng Fähegkeet Kriibs am Mo. zu induce. Zwee aus dräi Mais mat nëmmen Ran behandelt zougedréckt a dem Précoce-kriibserreegend Etapp (dysplasia), wobäi all déi dräi Mais behandelt mat Ran + Zitroun zougedréckt carcinoma (Dorënner 2B). Figur 2 Leschten Maus an histopathology souwuel normal an entholl Otemschwieregkeeten vun Mo. folgenden Behandlung mat quasi mat an ouni Zitroun. A. Leschten Maus mat (e) normal Mo an (b) tumorous Mo mat engem Pfeil uginn. Histopathology vun normal (c) an entholl Mo. (d, E an F) déi mat Zitroun vun Ran Extrait entschlof. D'Feiler weg ulcerated Patient an (d) an entholl Ris Zellen an (E an f). D'Vergréisserung ass uginn entweder 10X oder 40X. B. Histopathology vun normal an tumorous Mo vun Mais folgenden Ran an Ran + Zitroun Behandlung fir 300 Deeg. An all Brieder, "normal" Mais mat kee entholl bedeit, "Dysplasia" bedeit Mais mat precancerous Mo. Otemschwieregkeeten. "Carcinoma" bedeit Mais mat tumorous Moo. Dysplasia weist anisokaryosis (Variant zu Gréisst vun Käre) an anisocytosis (Variant zu Gréisst vun Zellen). D'Vergréisserung uginn ass entweder 10X, 40X an 100X. Op metaphase Am VerfÜgung a VerfÜgung Fir erauszefannen, ob kontinuéierlech administeration vun Ran Extrait (vun 15 bis 180 Deeg) mat oder ouni Zitroun keen Effet op chromosomes huet, studéiert mir metaphase a , no 2 h Behandlung mat colchicine, am Réckemuerch hiirgestallt Echantillon. Donnéeën réischt e moderate Erhéijung vun mitotic Zuelen mat fréi getrennt Schwëster chromatids (Dorënner 3A an C) souwuel zu Ran an Ran + Zitroun verwalte Maus, am Verglach mat keent an onbehandelt Mais. Et ass och aus der Etude ervir, datt Ran + Zitroun verwalte Maus Réckemuerch hiirgestallt bedeitend méi héich Frequenz vun esou precocious anaphase zougedréckt a wéi nëmmen verwalte Ran (Dorënner 3A). No 180 Deeg vun kontinuéierlech administeration vun Ran + Zitroun, 34,4% precocious anaphase Verglach mat 18,4% (p = 0.002) zu Ran-verwalte Maus Fedrigo sech gesinn. Figur 3 Karyotype Analyse vun Frankräich Instabilitéit am Réckemuerch hiirgestallt Zellen vun Maus der aussetzt Ran Extrait mat (Ran + L) oder ouni Zitroun (quasi). (A) Prozentsaz vun metaphases mat virzäitegen Schwëster-chromatid Trennung. Zwou Mais pro Punkt fir onbehandelt, 15 an 30 Deeg vun behandelt Grupp an dräi Mais pro Punkt fir de Rescht. Op d'mannst 100 metaphases sech un all Maus Faarwen. (B) Normal metaphase Verbreedung vun Maus Réckemuerch hiirgestallt Zellen. (C) Dat Schwëster-chromatid Trennung vu Maus zu Ran ausgesat. Klammeren weisen Schwëster-chromatids zu mitotic Zuelen datt d'phenotype weisen getrennt doruechter. (D an E) Metaphase verbreet zougedréckt 37 an 38 chromosomes, bzw.. (F, G an H) Metaphase verbreet huet méi wéi 60 chromosomes. (Ech) huet méi wéi 80 chromosomes. VerfÜgung Mir gezielt der Zuel vun chromosomes zu metaphase a d'Bedeitung vun precocious anaphases par rapport zu chromosome Stabilitéit ze verstoen. D'onbehandelt Mais eng stabil (2n = 40) karyotype (Dorënner 3B) a weisen hutt keng aneuploid Zellen. Mir hu fest héich Frequenz vun aneuploid Zellen (Dorënner 3D-ech; Table 1) zu Ran-verwalt, mat an ouni Zitroun, fir 120 Deeg an et war ee feststellen, datt déi meescht vun aneuploid Zellen war lues fräi. Déi heeschen Frequenz (13,8%) vun aneuploid Zellen war an souwuel de Mo. entholl Träger Mais Faarwen. Am Allgemengen, war d'Frequenz vun aneuploid Zellen méi folgenden Ran + Zitroun administeration wéi dësen Ran (Table 1) .Table 1 Chromosome Analyse vun Maus Réckemuerch hiirgestallt Zellen der aussetzt Ran Extrait mat oder ouni Zitroun VerfÜgung Prefabrizéierten Muster VerfÜgung
Prefabrizéierten Deeg
Total verbreet VerfÜgung Chromosome keng Faarwen VerfÜgung.
Aneuploidy
Dat Schwëster


37
38
39
40
41
42
> 60 VerfÜgung
% (Mëttler)
Chromatid Trennung%
onbehandelt VerfÜgung 0 VerfÜgung 110 zu 110 VerfÜgung 0 VerfÜgung 0 VerfÜgung 104 zu 104 VerfÜgung 0 VerfÜgung 0 VerfÜgung Ran VerfÜgung 120 zu 105 VerfÜgung 1 zu 1 zu 103 VerfÜgung 1,9 VerfÜgung 17,5 VerfÜgung 120 VerfÜgung 2
1 zu 2 zu 115 VerfÜgung 4,1 VerfÜgung 18.7 VerfÜgung 105 VerfÜgung 1 zu 2 zu 102 VerfÜgung 2,8 (2,9) VerfÜgung 18,3 (18.2)
Ran + Zitroun VerfÜgung 100 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung 1 VerfÜgung 95 VerfÜgung 5.0 VerfÜgung 31,7 VerfÜgung 105 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung 3
98 VerfÜgung 6,6 VerfÜgung 28,6 VerfÜgung 110 VerfÜgung 3 VerfÜgung 2 VerfÜgung 1 zu 103 VerfÜgung 1 VerfÜgung 6.4 (6.0) VerfÜgung 28.3 (29.5)
p = 0.015a VerfÜgung Ran VerfÜgung 180 zu 101 VerfÜgung 1 VerfÜgung 2 VerfÜgung 1 VerfÜgung 97 VerfÜgung 3,9 VerfÜgung 18,0 VerfÜgung 124 VerfÜgung 2
2 VerfÜgung 1 zu 119 VerfÜgung 4.0 VerfÜgung 17,7 VerfÜgung 114 VerfÜgung 3 VerfÜgung 2 VerfÜgung 1 zu 108 VerfÜgung 5.3 (4,4) VerfÜgung 19,4 (18,4) VerfÜgung Ran + Zitroun VerfÜgung 112 VerfÜgung 3 VerfÜgung 3 VerfÜgung 3 VerfÜgung 103 VerfÜgung 8.0 VerfÜgung 32,6 VerfÜgung 105 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2
1 VerfÜgung 98 VerfÜgung 1 zu 1 VerfÜgung 6,6 VerfÜgung 34,9 VerfÜgung 110 VerfÜgung 4 VerfÜgung 2 VerfÜgung 101 VerfÜgung 2 VerfÜgung 1 VerfÜgung 8.2 (7.6) VerfÜgung 35.6 (34.4) VerfÜgung p = 0.002a VerfÜgung Ran + Zitroun VerfÜgung 220 zu 232 VerfÜgung 6 VerfÜgung 9 VerfÜgung 12 VerfÜgung 194
7 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung 16,4 VerfÜgung 8.2 VerfÜgung (mat fortgeschratt entholl) VerfÜgung 256 zu 234 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 4 VerfÜgung 7 VerfÜgung 208 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 2 VerfÜgung 3 VerfÜgung 11.1 (13,8) VerfÜgung 7.1 (7.6) am vläit T-Test eng statistesch relevant VerfÜgung; zwee-tailed p Wäert huet dës Distanz. VerfÜgung Chromosome geometrescher Figur sech domatter haaptsächlech als chromatid ugesprach. Ganz niddereg Frequenz vun isochromatid Break gouf observéiert a keen Austausch geometrescher Figur goufen fonnt. D'Frequenz vun chromatid ugesprach aberrant metaphases war mat oder ouni Zitroun Rhythmus vun 60 bis 180 Deeg vun Ran-administeration fräi. D'Heefegkeet vun der geometrescher Figur war méi folgenden Ran + Zitroun administeration wéi dësen Ran. D'Heefegkeet vun der geometrescher Figur war méi zu zwee de Bal Mo. entholl Träger Mais. (Fir aberration Detailer, gesinn Weider Fichier 1: Zousätzlecht Informatiounen). VerfÜgung reduzéiert Ausdrock vun mitotic an spindle Bomm Genen vun Ran-behandelt Mais Opgrond vun den uewe Studien VerfÜgung, iwwerpréift mir den Ausdrock vun AuroraA, AuroraB, MAD2 VerfÜgung an Bub1 VerfÜgung Genen am Blutt hiirgestallt, esophageal an Mo. Zellen vun deene Mais déi mat onbehandelt oder verwalt Ran Extrait waren an ouni Zitroun fir 120, 180 an 260 Deeg. Déi konventionell RT-Hinnen alleguer Resultater (Dorënner 4) gewisen, datt aus esophagus an Mo. gesammelt Zellen zougedréckt meeschtens ënnert-Ausdrock vun dësen Genen mat Respekt ze onbehandelt een an esou ënner-Ausdrock war konsequent a wesentleche zu Ran + Zitroun verwalte Mais. Allerdéngs huet den Ausdrock vun all dësen Genen vun Fedrigo net an all bedeitend Manéier änneren ausser iwwer-Ausdrock vun Mad2 VerfÜgung an Bub1 VerfÜgung an der Fedrigo vun Maus no 260 Deeg vun administeration gesammelt bemierken war. Figur 4 Uewerstad panel- Expression vun mitotic Bomm Genen an Maus Réckemuerch hiirgestallt (well), esophagus an Mo. Zellen der Belaaschtung mat Ran Extrait mat oder ouni Zitroun fir 120, 180 an 260 Deeg. Ënneschten panel- Chemeschen densitometric Analyse vun den Ausdrock Profil vun mitotic Bomm Genen mRNA Niveau vun esophagus an Mo. Zellen no 260 Deeg aussetzt gewise gouf. D'Wäerter sinn déi mengen ± Sem vun dräi onofhängeg Experimenter. D'Wäerter sinn ze respektiven GAPDH Wäerter normalized. * P &Si besteet; 0,05; ** P &Si besteet; 0,01; *** P &Si besteet; 0,001. Vill verschidde Verglach mat negativen /positiver Kontroll (wéi duerch vläit T-Test décidéiert). VerfÜgung Analys vun iwwer-Ausdrock vun Genen duerch immunoblotting VerfÜgung Niveauen vun p53, p65, Bax VerfÜgung an Securin VerfÜgung zu Fedrigo aus Mais no administeration vun Ran mat oder ouni Zitroun fir 60, 90 an 180 Deeg ofzebauen, an deenen esophagus an Mo no 180 Deeg vun erofzesetzen sech duerch immunoblotting iwwerpréift. Niveau vun deene Proteinen waren och aus der Zellen gesammelt Otemschwieregkeeten-schlau aus der onbehandelt Mais getest. Resultater weisen, datt den Ausdrock vun p53, p65, Bax VerfÜgung an Securin VerfÜgung vill an all Stoffer zu Ran verwalte Mais gefördert ginn. Esou Opléisung war zu Ran + Zitroun bedeitend méi héich wéi nëmmen zu verwalte Mais Ran (Dorënner 5). Figur 5 Uewerstad panel- Vertriederin westlech blotting erkennen p65, p53, securin, Bax an β-actin zu Maus Réckemuerch hiirgestallt (well), esophagus an Mo. Zellen der Belaaschtung mat Ran Extrait mat oder ouni Zitroun. Fir well, sech Zellen no 60, 120 an 180 Deeg gesammelt hierkommen fir esophagus an Mo huet Zellen nëmmen no 180 Deeg aussetzt gesammelt. β-actin war den Luede Kontroll benotzt. Ënneschten panel- Chemeschen densitometric Analyse vun den Niveau vun Proteinen vun den uewen ernimmten Genen am Blutt hiirgestallt, esophagus an Mo. Zellen no 180 Deeg erausgestallt huet gewisen. D'Wäerter sinn déi mengen ± Fils vun dräi onofhängeg Experimenter. D'Wäerter sinn ze respektiven β-actin Wäerter normalized. * P &Si besteet; 0,05; ** P &Si besteet; 0,01 signifikativ verschiddene Verglach mat negativen /positiver Kontroll (wéi duerch vläit T-Test décidéiert). VerfÜgung cytometric Studien op Zell Zyklus Flow an erkennen apoptotic Zellen duerch duebel staining an immunoblotting VerfÜgung Flow cytometric Analyse vun DNA Inhalt vun Réckemuerch hiirgestallt , esophagus an Mo. Zellen vun Maus no 260 Deeg vun Ran + Zitroun Administratioun (Dorënner 6A) gesammelt, awer datt et eng Hausse vun G1 Phase Zellen souwuel am Réckemuerch hiirgestallt an esophagus mat Respekt ze onbehandelt Kontroll huet. Allerdéngs, am Mo, ass de Prozentsaz vun Zellen am Sous-G1 Phase fräi, déi wéinst apoptotic Zell Doud zougeschriwwen ginn hätt. Ze confirméieren, huet duebel staining mat annexinV an PI gesuergt. Donnéeën zu Dorënner 5B weg méi positiv staining mat Annexin-V an ugeholl 2 an 3 am Mo. Zellen awer net zu esophageal Zellen vun Ran + Zitroun verwalte Mais. Figur 6 Analys vun Zell Zyklus a apoptosis zu Mais mat Ran mat Zitroun (A) Analys vun Zell Zyklus no 260 Deeg aussetzt mat Ran behandelt Extrait mat Zitroun am Réckemuerch hiirgestallt, esophagus an Mo. Zellen vun Maus an och aus Mo. entholl Zellen. (B) Vertriederin cytograms vun Annexin V versus PI fluorescence intensities wéi duerch onkontrolléiert cytometric Analyse vun Maus esophagus an Mo. Zellen no 260 Deeg aussetzt mat Ran mat Zitroun, sech an aus Mo. entholl Zellen. Bannent engem cytogram, ugeholl 1 an 2 Vertrieder fréi a spéit apoptotic Zellen, bzw.; ugeholl 3, liewensfäeg Zellen; ugeholl 4, dout Zellen. (C) Western blotting fir apoptotic lues an normal (onbehandelt) an entholl Mo. Zellen. β-actin als Luede Kontroll benotzt gouf. VerfÜgung Spannen, cytometric Analyse vun entholl Zellen aus der Mais gesammelt Flux déi no 220 an 256 Deeg vun kontinuéierlech administeration vum Géigespiller an Zitroun entholl am Mo. entwéckelt, Teamchef däitleche Minus an G1 Zellen mat engem concomitant Opstig an d'Sous-G1 Zellen (Dorënner 6A). Dual staining beweist dass sub-G1 Zellen si meeschtens necrotic dout Zellen (ugeholl 4) (Dorënner 6B). A signifikativ méi héich Niveau vun p53 VerfÜgung an Bax VerfÜgung Proteinen sech zu entholl wéi normal Mo. Zellen (Dorënner 6C) observéiert. Allerdéngs, PARP VerfÜgung war zu veréiert ze ginn souwuel d'entholl Zellen vun de Mo. obwuel PARP VerfÜgung a seng 29 Beien zB stéiert eenalecn Produit präsent waren an normal Mo. Echantillon (Dorënner 6C). VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Déi heiteg fonnt Etude war ze gesinn land wann ad libitum VerfÜgung administeration vun Ran Extrait mat oder ouni Zitroun an Waasser drénken kann esophagus oder Mo. Kriibs an Maus induce a wann et heescht, wat initial Prozesser verwéckelt sinn. An dëser Etude, huet de Mais d'ganzt Ran-Extrait mat an ouni Zitroun fir de Mënsch Konsum Stil vun Ran rescht entscheet. Ausserdeem, war d'Kribbelen och periodesch fräi wéi et zu Mënsch geschitt. Eis Resultater weisen, dass souwuel Ran mat an ouni Zitroun Mo. Kriibs induce, obwuel, ass et bemierken dass Präsenz vun Zitroun mat Ran héich Zell Transformatioun Opstieg an domat Mo. Kriibs entwéckelt fréi wéi Ran gehalen. Et schéngt, datt de Kriibs, well vun der grousser Belaaschtung an Mo. entschlof war seng Doropshin zu Ran hu während der esophagus Doropshin während Drénkwaasser den Ran gemëschte Waasser just kuerz ausgesat war. VerfÜgung Et ass virdrun bewisen ass, dass en alkaline pH fir generéieren ideal ass Ros vun autoxidation vun areca-nut polyphenols [6, 7]. Et war och gewisen, datt d'catechin Ëmwandlung vun areca-nut Extrait aktiv Ros pH um alkaline generéiert déi kënschtlech DNA VerfÜgung Schued induces [21, 22]. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Ausdrock vun enger Variant LINN-1 endonuclease zu gastric Kriibs: seng Associatioun mat clinicopathological parameters
• Gastroprotective Mechanismus vun Paederia foetida bäibehalen. (Rubiaceae) - eng populär iessen Planz benotzt vun der perfekt Communautéit vun North-Osten India