transizione epitelio-mesenchimale In combinazione con marker delle cellule simil-staminali del cancro come predittori di recidiva dopo resezione radicale per cancro gastrico

Combinato epitelio-mesenchimale transizione con marker delle cellule simil-staminali del cancro come predittori di recidiva dopo resezione radicale per cancro gastrico
Abstract
sfondo
Lo scopo dello studio è stato quello di identificare l'incidenza e predittori di recidiva dopo curativa resezione e il significato clinico di transizione epitelio-mesenchimale (EMT) e stelo fenotipi di cellule simili a cancro gastrico.
Metodi
in un totale di 1.463 pazienti sottoposti a resezione curativa per il cancro gastrico tra gennaio 2001 e gennaio 2008 Drum Tower Hospital, 402 (27,5%) recidiva sperimentato. Erano divisi in recidiva precoce (entro due anni) e recidiva tardiva (più di due anni). Le caratteristiche clinico-patologici, tra cui cinque proteine ​​EMT-correlate (lumaca-1, ZEB-1, E-caderina, vimentina, e β-catenina) ei marcatori di cellule staminali del cancro gastrico CD44 e CD54, modalità terapeutiche, il tempo di sopravvivenza dopo la recidiva, e modelli di ricorrenza sono stati confrontati tra i due gruppi.
Risultati
perdita di espressione e-caderina ed espressione aberrante di vimentina e il noto produttore di gastrico delle cellule staminali del cancro CD44 sono risultati significativamente associati con le caratteristiche clinico-patologiche aggressivi. L'analisi multivariata ha mostrato che stadio III pazienti affetti da cancro gastrico con recidiva precoce avevano tumori più grandi e più metastasi linfonodali, insieme con aberranti EMT espressione e marker delle cellule staminali del cancro, rispetto ai pazienti con recidiva tardiva. recidiva precoce è stata associata con metastasi più distante recidiva tardiva e pazienti tendevano a morire entro due anni dalla ricorrenza.
Conclusioni
EMT In combinazione con marker delle cellule simil-staminali del cancro è un predittore di recidiva dopo resezione radicale per cancro gastrico. Avanzato stadio TNM è stato associato con la morte precoce del cancro dopo recidiva.
Sfondo
cancro gastrico è il quarto cancro più comune al mondo, e la chirurgia rimane il trattamento principale, con intento curativo. Anche dopo gastrectomia e linfoadenectomia, ogni anno molti pazienti muoiono di recidiva. La transizione epitelio-mesenchimale (EMT), un processo di sviluppo in cui le cellule epiteliali mostrano una ridotta adesione intercellulare e acquisiscono migratori proprietà fibroblastici, è ritenuta critica per la progressione invasiva e metastatica nel cancro [1]. Il processo di EMT è associato con la sottoregolazione di marcatori epiteliali, traslocazione anormale di β-catenina, e upregulation aberrante di marcatori mesenchimali. Le cellule staminali tumorali sono cellule all'interno di un tumore che possiedono auto-rinnovamento e capacità di tumore di apertura. Nel cancro gastrico, le cellule tumorali CD44-positivo sono stati dimostrato di avere proprietà delle cellule staminali del cancro, tra cui la possibilità di tumore-inizio [2], e Chen et al
. [3] ha dimostrato che le cellule CD44 + CD54 + mostrano le capacità delle cellule staminali del cancro nei tessuti di cancro gastrico. Queste cellule tumorali-avvio prevedono un serbatoio che può causare recidiva dopo la terapia [4].
Precedenza, Ryu et al
. [5] ha dimostrato che una combinazione di EMT e stelo fenotipi di cellule simil-è un importante predittore di comportamento biologico aggressivo di cancro gastrico; Tuttavia, pochi studi hanno indagato attualmente EMT con pennarello staminali carcinoma a cellule-come nel cancro gastrico con recidiva e la prognosi. Lo scopo di questo studio è stato quello di caratterizzare modelli di ricorrenza, di identificare i predittori del tempo di recidiva e di ricorrenza iniziale modelli di cancro gastrico con recidiva precoce e tardiva, e trovare i fattori di rischio di recidiva precoce predicato dopo resezione radicale per cancro gastrico. Questo potrebbe aiutare nella valutazione preoperatoria di strategie terapeutiche appropriate e nel fornire strategie più intensi e su misura di follow-up per i pazienti ad alto rischio.
Metodi
paziente selezione
tra il gennaio 2001 e gennaio 2008, escludendo i pazienti che sono stati persi al follow-up o di scarsa compliance, per un totale di 1.463 pazienti sono stati sottoposti a resezione curativa per il cancro gastrico a Drum Tower Hospital. Un totale di 402 (27,5%) di questi pazienti ha sperimentato recidiva e sono stati successivamente inclusi nello studio; in tal modo il tasso di recidiva nel nostro studio è stato del 27,5%. L'età media dei 402 pazienti era di 64,7 anni (range: 26 a 91 anni), con un rapporto maschi: femmine di 1.87: 1. cartelle cliniche e referti patologici sono stati rivisti per registrare i dati clinici e patologici. Per valutare se i profili di espressione dei vari marcatori EMT erano diverse tra tumori gastrici primari e metastatici, sono stati valutati anche i casi con linfonodi regionali metastasi linfonodali. In termini di tempi di ricorrenza, alcuni tumori ricorrono entro il primo anno dopo la resezione, e in questi casi, inadeguata approccio chirurgico radicale o metastasi sistematica al funzionamento possono essere sospettati. Nel nostro studio, abbiamo definito come recidiva precoce recidiva entro due anni dopo l'intervento chirurgico. Tardo recidiva è stata definita come recidiva più di due anni dopo l'intervento chirurgico. Questi 402 pazienti sono stati divisi in due gruppi, vale a dire il gruppo recidiva precoce, che conteneva 248 pazienti, e il gruppo recidiva tardiva, che conteneva 154 pazienti. I criteri di esclusione inclusi sincrono doppio cancro gastrico, una precedente storia di un intervento chirurgico per cancro gastrico, cancro moncone gastrico, o il cancro anatomicamente classificata come cancro esofageo secondo il Joint Committee on Cancer (AJCC) settima edizione [6].
Lo studio è stato approvato dai etici di ricerca clinica comitati della Torre del tamburo Hospital e il consenso informato è stato ottenuto da tutti i pazienti. gamma
tessuto ed immunoistochimica
tutti i campioni per lo studio sono stati rimossi dai tessuti di cancro gastrico inclusi in paraffina fissati in formalina. Per tutti gli array, tre nuclei di diverse aree del tumore in ciascun caso sono stati rimossi e collocati in un nuovo blocco di paraffina vuoto destinatario come precedentemente descritto da Hsu et al
. [7], e 4-micron sezioni spesse sono stati ottenuti per immunoistochimica. I campioni sono stati deparaffinate e disidratate da una serie graduata di soluzioni di etanolo (Nanjing Agenti chimici Co, Ltd, Nanjing, Cina). La colorazione immunoistochimica per le proteine ​​EMT-correlate Lumaca-1, zinc finger E-box-binding homeobox 1 (ZEB-1), vimentina, E-caderina, β-catenina, e staminali del cancro marcatori di cellule simil-CD44 e CD54, sono stati eseguiti e valutata secondo il metodo precedente [3, 5].
quanto riguarda l'analisi statistica dei marcatori multipli, il campione è stato registrato come avente immunoreattività positivo per ciascun anticorpo, escluse e-caderina, se più di 5% delle cellule tumorali erano immunoreattiva, e le cellule tumorali con meno del 5% sono stati considerati negativi. I criteri di valutazione per la E-caderina sono stati definiti come 'positivo (intatto)' quando immunoreattività sulla membrana cellulare era presente in più del 25% delle cellule di cancro gastrico.
Modelli di ricorrenza
Modelli di recidiva riportati rappresentano la primi siti di malattia ricorrente documentata dopo resezione curativa. Ricorrenza è stato documentato dai primi segni clinici o radiologici di malattia con un corso inesorabile che porta alla progressione del tumore e /o la morte. La conferma attraverso la biopsia è stato consigliato per qualsiasi evidenza di malattia ricorrente o metastasi a distanza. modelli di ricorrenza sono stati classificati come locoregionale, peritoneale o ematogena. recidiva loco-regionale è stata definita come qualsiasi ricorrenza del cancro ai nodi margine di resezione o linfatiche (tra cui i nodi regionali e nodi retropancreatici e para-aortica) o letto il funzionamento all'interno della regione della resezione (sotto il diaframma e il fegato, e, soprattutto, il pancreas e ferita addominale). recidiva peritoneale è stata definita come qualsiasi ricorrenza del cancro all'interno della cavità addominale a causa di distribuzione intraperitoneale tra cui metastasi viscerali, mensola rettale, pericholedochal, e l'infiltrazione periureterale. recidiva ematogena è stata definita come qualsiasi lesione metastatica rilevata nel fegato, polmoni, ossa e altri organi distanti
Follow-up
Dopo l'intervento chirurgico., tutti i pazienti sono stati seguiti su regolarmente. valutazioni di follow-up sono state eseguite ogni tre mesi per i primi cinque anni dopo l'intervento chirurgico, e successivamente ogni sei mesi fino alla morte del paziente. Le procedure di follow-up incluso un anamnesi, esame fisico, esami del sangue di routine, test di funzionalità epatica, la misurazione dei livelli di marker tumorali (antigeni carcinoembrionario e l'antigene di carboidrati 199), una radiografia del torace, e altri studi di imaging. Tutte le procedure di routine sono state eseguite da un chirurgo, esofagogastroduodenoscopia è stata eseguita da un gastroenterologo, e la serie gastrointestinale superiore, ecografia addominale, e la tomografia computerizzata (TC) sono stati eseguiti da un radiologo. Per la malattia o distanti metastasi ricorrenti confermati, le biopsie non sono stati ottenuti per nuove lesioni polmonari, multipli o per le lesioni tipiche delle metastasi ossee riportate a TC o scintigrafia ossea di tutto il corpo. Quando le metastasi era sospettato, altre tecniche sono state utilizzate, come la scintigrafia ossea, la tomografia ad emissione di positroni (PET) e la biopsia di campionamento.
Analisi statistica
Tutti i valori sono espressi come media ± deviazione standard. Le variabili categoriche sono stati analizzati utilizzando il χ 2 di prova e le variabili continue con il campioni indipendenti t-test. Logistica analisi di regressione multivariata è stata condotta per determinare le differenze tra i due gruppi. L'analisi di sopravvivenza è stata effettuata con il metodo di Kaplan-Meier, e le differenze tra le curve sono stati testati utilizzando un log-rank test a due code. P
< 0,05 è stato considerato statisticamente significativo. L'analisi statistica è stata effettuata utilizzando SPSS (SPSS 13.0 per Windows, SPSS Inc., Chicago, Illinois, Stati Uniti). software
Risultati
Espressione di transizione e di staminali del cancro associazione marker delle cellule simil-epitelio-mesenchimale con recidiva del tumore
la tabella 1 mostra le caratteristiche clinico-patologiche dei pazienti con recidiva precoce e tardiva recidiva. Tra le variabili perioperatorie registrati per l'analisi univariata erano: presenza di CD44, CD54, e vimentina, perdita di E-caderina ed espressione β-catenina, con una dimensione del tumore di 5 cm o più, T-fase più avanzata, ed una più avanzata stadio TNM con recidiva precoce di recidiva tardiva L'analisi multivariata è stato impiegato per identificare i fattori di rischio indipendenti per la recidiva generale. L'analisi ha mostrato che i pazienti che si presentano con una dimensione del tumore di 5 cm o più, e un più avanzato stadio TNM, accoppiati con l'espressione EMT e l'espressione di staminali del cancro marcatore di cellule CD44, erano di primo piano nella recidiva precoce (Tabella 2) .table 1 caratteristiche clinico-patologiche dei ricorrenti pazienti affetti da cancro gastrico
recidiva precoce (n = 248) n (%)
recidiva tardiva (n = 154) n (%)
valore P

Età, anni
0,392
< 65
109
61
≥65
139
93
genere, maschio /femmina
162 /86
100/54
0,937 dimensioni
tumore, cm
0.013
< 5
76
68
≥5
172
86
gastrectomia
0,061
totale
91
71
subtotale
157
83
Località
0,232
Alto
46
27
Medio
49
20
inferiore
130
95
Diffuse
23
12
apparizione lordo
0.001
superficiale tumore
18
25
Bormann tipo I e II
25
40
tipo Bormann III e IV
205
89
tipo Istologia
0.315
differenziata
76
40
indifferenziato
172
114
classificazione di Lauren
0,572 tipo
intestinale
104
69
Diffuse tipo
144
85
metastasi linfonodali
0.002
negativo
52
54
positivo
196
100

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