Combiné transition épithéliale-mésenchymateuse avec tige de cancer marqueur de cellules ressemblant comme facteurs prédictifs de récidive après résection radicale pour cancer gastrique

épithéliale-mésenchymateuse combiné transition avec tige de cancer marqueur de cellules ressemblant comme facteurs prédictifs de récidive après résection radicale pour cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
Le but de l'étude était d'identifier l'incidence et les facteurs prédictifs de la récidive après curative résection et la signification clinique de la transition épithéliale-mésenchymateuse (EMT) et la tige phénotypes cellulaires comme dans le cancer gastrique.
Méthodes
sur un total de 1.463 patients qui ont subi une résection curative pour le cancer gastrique entre Janvier 2001 et Janvier 2008 à récurrence Hôpital Tour du tambour, 402 (27,5%) ont connu. Ils ont été divisés en récidive précoce (dans les deux ans) et une récidive tardive (plus de deux ans). Les caractéristiques clinicopathologiques, dont cinq protéines liées à EMT-(Snail-1, ZEB-1, E-cadhérine, vimentine, et β-caténine) et les marqueurs de cellules souches du cancer gastrique CD44 et CD54, les modalités thérapeutiques, le temps de survie après récidive, et Résultats de motifs de récurrence ont été comparés entre les deux groupes.
Perte d'expression E-cadhérine et d'expression aberrante de vimentine et gastriques fabricant de cellules souches du cancer connu CD44 étaient significativement associés à des caractéristiques clinico-pathologiques agressifs. L'analyse multivariée a montré que la phase III patients atteints de cancer gastrique avec récidive précoce présentaient des tumeurs plus grandes et plus métastase ganglionnaire, couplé avec aberrante EMT d'expression et le marqueur de cellules souches du cancer, que les patients avec récidive tardive. récidive précoce était associée à des métastases plus éloignée que la fin de la récidive et les patients ont tendance à mourir dans les deux ans de récidive.
Conclusions
EMT Combiné avec marqueur de cellules comme souches du cancer est un facteur prédictif de récidive après résection radicale pour le cancer gastrique. stade avancé TNM a été associée à la mort précoce du cancer après récidive.
Contexte
Le cancer gastrique est le quatrième cancer le plus répandu dans le monde, et la chirurgie reste le traitement principal, à visée curative. Même après gastrectomie et lymphadénectomie, chaque année, de nombreux patients meurent de récidive. La transition épithéliale-mésenchymateuse (EMT), un processus de développement dans lequel les cellules épithéliales montrent adhésion intercellulaire réduite et acquièrent des propriétés fibroblastiques migrateurs, est considéré comme essentiel pour la progression invasive et métastatique dans le cancer [1]. Procédé selon l'une OGD est associée à la régulation à la baisse des marqueurs épithéliaux, une translocation anormale de β-caténine et une régulation positive des marqueurs aberrante mésenchymateuses. Les cellules souches sont des cellules de cancer du sein d'une tumeur qui possèdent l'auto-renouvellement et les capacités initiatrices de tumeurs. Dans le cancer gastrique, les cellules tumorales CD44-positives se sont avérés avoir des propriétés de cellules souches du cancer, y compris la capacité de la tumeur initiatrice [2], et Chen et al.
[3] a montré que les cellules CD44 + CD54 + présentent un cancer de capacités de cellules souches dans les tissus de cancer gastrique. Ces cellules initiatrices de tumeurs fournissent un réservoir qui peut provoquer une récidive de la tumeur après traitement [4].
Auparavant, Ryu et al
. [5] a montré qu'une combinaison de EMT et de la tige phénotypes cellulaires comme est un prédicteur important de comportement agressif biologique du cancer de l'estomac; Cependant, peu d'études ont étudié actuellement EMT avec le marqueur souches du cancer des cellules comme dans le cancer gastrique avec récidive et le pronostic. Le but de l'étude était de caractériser les modes de récurrence, d'identifier les prédicteurs de la période de récurrence et de récurrence initiale des modèles de cancer de l'estomac avec une récidive précoce et tardive, et de trouver des facteurs de risque de récidive précoce prédicat après résection radicale pour cancer gastrique. Cela pourrait aider dans l'évaluation préopératoire des stratégies thérapeutiques appropriées et offrir des stratégies de suivi plus intensifs et adaptés pour les patients à haut risque.
Méthodes
patients sélection
Entre Janvier 2001 et Janvier 2008, en excluant les patients qui ont été perdus de vue ou une mauvaise observance, un total de 1463 patients ont subi une résection curative pour le cancer gastrique à l'hôpital Tour du tambour. Un total de 402 (27,5%) de ces patients ont connu la récidive et ont ensuite été inclus dans l'étude; ainsi le taux de récidive dans notre étude était de 27,5%. L'âge moyen des 402 patients était de 64,7 ans (extrêmes: 26 à 91 ans), avec un ratio hommes: femmes de 1,87: 1. Les dossiers médicaux et les rapports de pathologie ont été examinés pour enregistrer les données cliniques et pathologiques. Pour évaluer si les profils d'expression des différents marqueurs de l'EMT étaient différents entre les cancers gastriques primaires et métastatiques, les cas avec lymphatiques régionaux métastases ganglionnaires ont également été évalués. En termes de calendrier de récurrence, certaines tumeurs réapparaissent dans la première année après la résection, et dans ces cas, l'approche chirurgicale radicale inadéquate ou d'une métastase systématique à l'opération peuvent être soupçonnés. Dans notre étude, nous avons défini la récidive dès récidive dans les deux ans après la chirurgie. récidive tardive a été définie comme la récurrence plus de deux ans après la chirurgie. Ces 402 patients ont été divisés en deux groupes, à savoir le groupe début récidive, qui contenait 248 patients, et le groupe de récidive tardive, qui contenait 154 patients. Les critères d'exclusion à double cancer synchrone gastrique, antécédents de chirurgie pour le cancer gastrique, le cancer du moignon gastrique, ou le cancer anatomiquement classé comme cancer de l'œsophage selon le American Joint Committee on Cancer (AJCC) septième édition [6].
L'étude a été approuvé par les cliniques éthique de la recherche des comités de l'hôpital Tour du tambour et le consentement éclairé a été obtenu de tous les patients. tableau
Tissue et immunohistochimie
tous les échantillons de l'étude ont été retirés à partir de tissus de cancer gastrique paraffine fixés au formol. Pour tous les tableaux, trois carottes de différentes régions de la tumeur dans chaque cas ont été enlevés et placés dans un nouveau bloc de paraffine bénéficiaire vide comme décrit précédemment par Hsu et al
. [7], et 4 um sections épaisses ont été obtenues pour immunohistochimie. Les spécimens ont été déparaffinées et déshydraté par une série graduée de solutions d'éthanol (Nanjing Chemical Reagent Co., Ltd, Nanjing, Chine). La coloration immunohistochimique pour les protéines EMT liées Snail-1, le doigt de zinc E-box-liaison homeobox 1 (ZEB-1), vimentine, E-cadhérine, β-caténine et souches cancéreuses des marqueurs de cellules comme CD44 et CD54, ont été réalisées et évalués selon la méthode précédente [3, 5].
en ce qui concerne l'analyse statistique des marqueurs multiples, l'échantillon a été enregistré comme ayant une immunoréactivité positive pour chaque anticorps, ce qui exclut la E-cadhérine, si plus de 5% des cellules cancéreuses étaient immunoréactifs et des cellules tumorales avec moins de 5% ont été considérés comme négatifs. Les critères de notation pour E-cadhérine ont été définis comme «positif (intact) 'lorsque immunoréactivité sur la membrane cellulaire était présent dans plus de 25% des cellules de cancer gastrique.
Patterns de Patterns récurrence de la récurrence rapportés représentent la premiers sites de la maladie récurrente documentée après résection curative. Récurrence a été documentée à partir des premiers signes cliniques ou radiologiques de la maladie avec un cours implacable menant à la progression tumorale et /ou la mort. Confirmation par biopsie a été recommandé pour tout signe de maladie récurrente ou des métastases à distance. Récurrence ont été classés comme locorégionale, péritonéale ou hématogène. récidive locorégionale a été définie comme toute récidive du cancer, à la marge de résection ou les ganglions lymphatiques (y compris les nœuds régionaux, ainsi que des nœuds rétropancréatiques et para-aortiques) ou un lit d'opération dans la région de la résection (sous le diaphragme et le foie, et au-dessus du pancréas et plaie abdominale). récidive péritonéale a été définie comme toute récidive du cancer dans la cavité abdominale due à la distribution intrapéritonéale y compris la métastase viscérale, une étagère rectale, pericholedochal et infiltration periureteral. récurrence hématogène a été définie comme toute lésion métastatique détectée dans le foie, les poumons, les os et d'autres organes éloignés.
Suivi Après la chirurgie, tous les patients ont été suivis sur régulièrement. Les évaluations de suivi ont été effectuées tous les trois mois pour les cinq premières années après la chirurgie, et tous les six mois par la suite jusqu'à ce que la mort du patient. Les procédures de suivi comprenaient les antécédents médicaux, l'examen physique, des tests sanguins de routine, des tests de la fonction hépatique, la mesure des niveaux de marqueurs tumoraux (antigène carcinoembryonnaire et antigène glucidique 199), une radiographie du thorax, et d'autres études d'imagerie. Toutes les procédures de routine ont été réalisées par un chirurgien, esophagogastroduodenoscopy a été effectuée par un gastroentérologue, et la série gastro-intestinal supérieur, sonogramme abdominale, et la tomodensitométrie (TDM) ont été réalisées par un radiologue. Pour la maladie ou lointaines métastases récurrentes confirmées, les biopsies ne sont pas obtenues pour de nouvelles lésions multiples, pulmonaires ou lésions caractéristiques des métastases osseuses constatées sur CT ou scintigraphie osseuse du corps entier. Lorsque des métastases a été suspectée, d'autres techniques ont été utilisées, comme la scintigraphie osseuse, la tomographie par émission de positons (TEP), et biopsies.
Analyse statistique
Toutes les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type. Les variables catégorielles ont été analysées à l'aide du χ 2 tests et les variables continues en utilisant le indépendants échantillons t-test. Logistique analyse multivariée de régression a été réalisée pour déterminer les différences entre les deux groupes. L'analyse de survie a été réalisée par la méthode de Kaplan-Meier, et les différences entre les courbes ont été testées à l'aide d'un test log-rank bilatéral. P
< 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Expression: Résultats de logiciels de transition et de souches du cancer association marqueur cellulaire comme épithéliale-mésenchymateuse avec récidive de la tumeur <; analyse statistique a été effectuée en utilisant SPSS (SPSS Inc., Chicago, Illinois, États-Unis SPSS 13.0 pour Windows). br> le tableau 1 présente les caractéristiques clinico-pathologiques des patients ayant une récidive précoce et tardive récidive. Parmi les variables périopératoires enregistrées pour l'analyse univariée étaient: présence de CD44, CD54, et la vimentine, la perte de la E-cadhérine et d'expression β-caténine, avec une taille de la tumeur de 5 cm ou plus, T-stade plus avancé, et un plus avancé stade TNM avec récidive précoce de récidive tardive analyse multivariée a été utilisée pour identifier les facteurs de risque indépendants de récidive générale. L'analyse a montré que les patients présentent une taille de la tumeur de 5 cm ou plus, et un stade TNM plus avancé, couplés avec l'expression EMT et l'expression de souches du cancer marqueur de cellules CD44, étaient de premier plan dans la récurrence précoce (tableau 2) .Table 1 Les caractéristiques clinicopathologiques des patients récurrents de cancer gastrique
récidive précoce (n = 248) n (%)
récidive tardive (n = 154) n (%)
P valeur

Age, 0,392
<de de ans; 65
109
61
≥65
139
93
Sexe, mâle /femelle
162 /86
100/54
0,937 taille
Tumor, cm
0,013
< 5
76
68
≥5
172
86
gastrectomie
91
71
total partiel 157
83
Localisation 0,061
total
46
0,232
Upper 49
20
Lower
130
95
diffuse
23
12
aspect brut de 27
Moyen
0,001
Superficial 18
25
Bormann Type de I et II de la tumeur
25
40
Type Bormann III et IV
205
89
type histologie
0,315 76
40
indifférencié
Differentiated
172
114
classification de Lauren
0,572 Type
Intestinal
104
69
diffuse type
144
85
métastases ganglionnaires
0,002
négatif
52 196
100
lymphovasculaire invasion
54
positive
0,003
Absent
57
56
Présenter
191
96
Profondeur de l'invasion
< 0,001
T1 et T2
46
53
T3 et 202
101
stade TNM de T4
< 0,001
I
14
27
II
43
59
III
191
68
ganglionnaire dissection
0,414
D1
109
75
D2
86
54
53
25
EMT expression de D3 (en%)
expression Aberrant du marqueur mésenchymateuses
Snail-1
117(47.2)
64(41.6)
0.271
ZEB-1
168(67.7)
109(70.8)
0.522
Vimentin
87(35.1)
21(13.6)
<0.001
Expression perte de marqueur épithélial
E-cadhérine
112 (45,2)
35 (22,7)
< 0,001
β-caténine
29 (11.7)
19 (12,3) expression
0,846 du marqueur de cellules souches du cancer (%)
CD44
163 (65,7)
71 (46,1)
0,001
CD54
120 (48.3)
63 (40,9)
chimiothérapie 0,037
adjuvant, oui /non
221/27
142/12
0,308
Tableau 2 analyse multivariée des facteurs indépendamment associés à la synchronisation de récurrence (précoce ou tardive)
tardif
valeur
P
Early
Odds ratio
95,0% CI pour l'expérience B
taille de la tumeur
≥5 cm
172 (69,4)
86 (55,8)
0,001
8.750
(2,265 à 33,799)
stade TNM III
191 ( 77,0)
68 (44,2)
0,040
0,493
(de 0,251 à 0,970)
expression EMT (%)
vimentine
87 (35,1)
21 (13.6 )
0,031
2.359
(1,082 à 5,145)
E-cadhérine
112 (45,2)
35 (22,7)
< 0,001
0,125
(0,046 à 0,338)
expression du marqueur de cellules souches du cancer (%)
CD44
163 (65,7)
71 (46,1)
0,017
0,297
(0,108 à 0,806 )
Patterns de récidive
Le délai médian de récidive était de 17,0 mois (fourchette: 2,0 à 89,0). La plupart des récurrences dans notre groupe d'étude (248 sur 402, 61,7%) ont eu lieu dans les deux ans après la chirurgie curative (tableau 3). Dans le groupe de récidive précoce, le motif le plus fréquent était la métastase hématogène, suivie de récidive locorégionale et péritonéale. Y compris les modèles qui se sont développées en même temps, récidive locorégionale et hématogène était le modèle le plus courant, suivi par récurrence péritonéale. Dans le groupe de récidive tardive, le modèle le plus courant était récidive locorégionale et péritonéale, suivie par récurrence hématogène comme des modèles simples, et quand les modèles qui se sont développées en même temps ont été inclus, récidive locorégionale était toujours le modèle le plus courant. Les métastases à distance est plus fréquente chez récidive précoce, mais la diffusion péritonéale est non significative. Parmi les patients atteints de métastases hématogène, les métastases du foie est plus fréquent chez recurrence.Table début 3 Le modèle de récurrence initiale du cancer gastrique
récidive précoce (n = 248) n (%)
récidive tardive (n = 154) n (%)
valeur P
récidive locorégionale
161 (64,9)
85 (55,2)
0,052
hépato ligament
57 (23,0)
37 (24)
0.810
zone périgastriques
25 (10.1)
24 (15,6)
0,101
anastomose
23 (9.3)
15 (9.7)
0,877
estomac Remnant
15 (6)
12 (7.8)
0,601
zone péripancréatique
12 (4.8)
9 (5.8)
0.660
paroi abdominale
10 (4)
7 (4.5)
0,804
ganglionnaire
51 (20,6)
27 (17.5)
0,455
mixte
10 (4)
3 (1.9)
0,251 métastase
Distant
207 (83,5)
109 (70,8)
0,003
diffusion péritonéale
106 (42,7)
62 (40,3)
0,624
hématogène metastasis
112(45.2)
49(31.8)
0.008
Liver
64(25.8)
23(14.9)
0.010
Lung
25(10.1)
17(11)
0.760
Bone
9(3.6)
4(2.6)
0.570
Adrenal gland
7(2.8)
3(1.9)
0.584
Brain
2(0.8)
0
0.264
Skin
2(0.8)
0
0.264
Mixed
3(1.2)
2(1.3)
0.938
Le temps de survie après récidive
La majorité des patients avec une récidive du cancer gastrique (321 sur 402, 79,9%) sont décédés dans les deux ans après récidive. La durée médiane de survie après récidive était de 8,1 mois en récidive précoce et 13,3 mois à la fin de récidive, respectivement. Un total de 16 patients ont survécu plus de cinq ans après récidive: 10 avec récidive précoce et six avec récidive tardive. Parmi les 10 patients avec récidive précoce, le modèle de récurrence inclus une métastase hépatique, deux métastases pulmonaires, trois récurrences d'anastomose, deux récurrences épiploon, une abdominale récidive du mur, et un ensemencement péritonéale. Parmi les six patients avec récidive tardive, les motifs de récurrence inclus une récidive abdominale incision, deux métastases hépatiques, une rechute de l'estomac reste, un ligament hépato récidive, et une récidive d'anastomose avec envahissement du foie. Le temps de survie après récidive était significativement plus courte au début du groupe (P
< 0,001, log-rank test) (Figure 1). Figure 1: Comparaison de la survie après récidive de Kaplan-Meir.
Rapport de cancer gastrique représente la quatrième cause de mortalité par cancer dans le monde entier. rechute locorégionale peut se produire après résection curative, y compris à proximité des ganglions lymphatiques résection et le traitement multidisciplinaire, éventuellement sous la forme d'une carcinose péritonéale et /ou des métastases à distance, qui est l'une des raisons du taux élevé de récidive. Carcinome rechute est essentiellement létale, et jusqu'à présent il n'y a pas de traitements spécifiques pour éviter la récurrence [8-10].
La signification clinique de EMT a été rapportée dans divers cancers humains, et des mécanismes spécifiques impliqués dans la progression du cancer, tels que le l'évasion de l'apoptose, la résistance à la chimiothérapie, et l'acquisition de propriétés de cellules souches ressemblant et leur influence sur la survie des patients ont été proposées [1, 5, 11, 12]. CD44 est une glycoprotéine transmembranaire qui est bien connue en tant que marqueur des cellules souches cancéreuses dans le cancer gastrique [2]. CD44 est positivement et significativement associée à des métastases tumorales, la récidive et la mortalité dans le cancer gastrique [13, 14].
Dans la présente étude, l'expression du marqueur mésenchymateuses vimentine était plus fréquente dans récidive précoce que dans les cancers de la récidive tardive (P
< 0,001), et E-cadhérine expression a été perdu dans 112 (45,2%) des 248 cancers de la récidive précoce, mais seulement 35 récidive tardive (22,7%) des cancers a montré une perte d'expression E-cadhérine (P
< 0,001). Ces résultats démontrent que la transformation des cellules épithéliales gastriques pourrait favoriser la récidive tumorale et les métastases. CD44 et CD54 expressions ont également été trouvés plus fréquemment chez les patients atteints de récidive précoce que ceux de la fin de la récidive (P
= 0,001, P
= 0,037), ce qui suggère que les marqueurs de cellules souches pourraient être prises comme un promoteur pour le progrès de la tumeur. Il y a eu [1, 5] sur la complexité des interactions entre les protéines EMT liées et leurs effets sur la récidive du cancer. La présente étude a déterminé que la combinaison des altérations de l'expression protéique de la vimentine, la E-cadhérine et le CD44 est le facteur de pronostic le plus efficace dans le cancer gastrique. En outre, cette combinaison était un facteur prédictif indépendant de récidive, avec un paramètre clinicopathologique classique tel que le stade pTNM et la différenciation histologique.
Dans notre série, il y a une grande différence dans la taille du cancer, l'apparence brute, métastase ganglionnaire, invasion lymphovasculaire, profondeur de l'invasion, et le stade entre les groupes de récurrence précoce et tardive, et les patients avec CD44 et vimentine, et la perte de la E-cadhérine et d'expression β-caténine, ont une plus forte tendance à la récidive précoce. Nos résultats ont montré que les patients présentent une taille de la tumeur de 5 cm ou plus, et un stade TNM plus avancé, couplés avec l'expression EMT et l'expression de souches du cancer marqueur de cellules CD44, étaient de premier plan dans récidive précoce dans l'analyse multivariée.
Comme pour des motifs de récurrence, en général, il existe trois principaux motifs de récurrence du cancer de l'estomac après chirurgie curative: récidive locorégionale, dissémination péritonéale, et la métastase hématogène. Nos données ont montré que les patients avec récidive précoce avaient des métastases plus lointain, mais pas la diffusion péritonéale, que ceux avec récidive tardive. métastase hématogène était plus fréquente chez récidive précoce, qui était semblable à certaines études [9, 10]. Il n'y a pas de différence significative entre la récidive précoce et tardive par rapport à la récidive locorégionale. Nous avons constaté que le foie, le poumon et l'os sont des organes les plus fréquemment hématogène métastatiques. Ce résultat est d'accord avec les autres [10, 15]. Les métastases hépatiques montrent une tendance à se produire plus tôt, alors que les poumons et les métastases osseuses se produisent plus tard. Le foie est le premier filtre de cellules cancéreuses à travers le portail de flux de sang veineux de l'estomac; les fonctions pulmonaires comme un filtre secondaire. Ce résultat suggère que les patients doivent être étroitement surveillés pour la métastase hématogène au cours des deux premières années de suivi, et pour locorégionale ou récidive péritonéale ultérieurement.
Temps de survie après récidive ont rarement été documentés dans des études antérieures, même si une nouvelle étude réalisée par Wu et al
. [16] ont rapporté que la plupart des patients ont succombé à moins d'un an après avoir reçu un diagnostic de récidive, avec le temps médian de survie après récidive étant seulement 6,7 mois. Dans nos résultats, la durée de survie médiane du groupe de récidive précoce était significativement plus faible (8,06 contre 14,97 mois, P
< 0,001). Malgré une faible survie après récidive du cancer et une réponse défavorable à la chimiothérapie chez certains patients, 16 patients avaient une survie à long terme de plus de cinq ans après la récidive. Nous suggérons que les conclusions du suivi étroit avec B-échographie et endoscopies sont importants, en particulier dans les deux premières années, afin de prolonger la survie.
Métastase hématogène a été trouvé pour être fréquente chez les patients qui ont connu la récidive dans les deux années de résection curative, et les patients atteints de la grande taille de la tumeur (≥5 cm) et avancé stade TNM (stade III) se sont révélés être plus sujettes à récidive précoce. EMT et tige phénotypes cellulaires ressemblant sont corrélés avec des caractéristiques agressives cliniques dans le cancer gastrique, et les trois protéines, E-cadhérine, vimentine et CD44, peut être la meilleure combinaison pour prédire la récidive des patients
. Remarques
Gui- fang Xu, Wei-jie Zhang a contribué également à ce travail
abréviations
EMT:.
transition épithéliale-mésenchymateuse
ZEB-1:
zinc doigt E-box-binding protein 1
CD44:
Cluster de différenciation 44
CD54:
Cluster de différenciation 54
AJCC:
American Joint Committee on Cancer
CT:
tomodensitométrie

PET:
tomographie par émission de positons
SPSS:
solutions statistiques de produits et services
TNM:
'tumeur, noeud, métastases'
Déclarations de
Remerciements Ce travail a été soutenu par le national Natural science Foundation de Chine (numéro de subvention: 81201909)., et Nanjing science médicale et programme de technologie de développement (numéros de subvention: QYK11166, YKK12072).
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Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts.
Auteurs de GFX et WJZ les contributions ont participé à la conception de l'étude, les données cliniques et la collecte de l'échantillon, et l'analyse des données. QS et XYX comme pathologistes re-classés tous les spécimens d'adénocarcinome. GFX et WJZ a écrit le projet de document. XPZ et WXG ont contribué également: à la fois conçu et mené l'étude, et ont révisé le manuscrit entier. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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