La valeur du taux de pepsinogène sérique pour le diagnostic des maladies gastriques chez les Han chinois dans Midsouth China

La valeur des niveaux de pepsinogène sérique pour le diagnostic des maladies gastriques chez les Han chinois dans Midsouth Résumé
fond
Chine
Sérum pepsinogène (PG) niveaux sont utiles pour le diagnostic des maladies gastriques. Cependant, les niveaux PG sont affectées par de nombreux facteurs tels que la région et la race. Cette étude visait à étudier les niveaux PG sériques chez les patients atteints de différentes maladies gastriques qui étaient les Han chinois dans la province du Hunan, Midsouth Chine.
Méthodes
Un total de 248 patients atteints de maladies gastriques et 34 témoins sains ont été recrutés. Les patients inclus ceux avec la gastrite atrophique et non-atrophique chronique, l'ulcère gastrique et duodénal, précoce et le cancer gastrique avancé. niveaux II Serum PG I et ont été détectés par Biohit kit ELISA (Finlande), et PG rapport I /II a été calculée. Résultats de différences chez les patients atteints d'une maladie gastrique et des contrôles sains ont été analysés à l'aide du test t apparié.
Comparativement aux témoins, les patients atteints de cancer gastrique précoce et avancé avaient un PG nettement inférieur I niveau et PG rapport I /II (p < 0,005). En revanche, les patients présentant un ulcère gastrique et duodénal avaient une PG significativement plus élevée I niveau (p < 0,005). Par rapport aux patients atteints de gastrite atrophique, les patients atteints d'un carcinome précoce et avancé de l'estomac avaient un ratio nettement inférieur PG I /II (p < 0,001). Conclusions de la combinaison des niveaux cut-off de PG I (70 ug /L) et de PG I /rapport II (6) a fourni 62,1% de sensibilité de et 94,2% de spécificité pour le diagnostic de cancer de l'estomac.
diminué PG I niveau et PG rapport I /II sont des facteurs de risque de cancer de l'estomac. L'utilisation combinée du PG I sérique niveau et PG rapport I /II peut aider le diagnostic précoce du cancer de l'estomac.
Mots-clés
Gastrite Estomac Cancer gastrique Ulcère Sérum pepsinogène Fond
pepsinogènes (PG) sont protéinases aspartiques qui sont principalement sécrétée par les cellules gastriques. PG peuvent être classés en deux types biochimiquement et immunologiquement distincts: pepsinogène I (PGI) et pepsinogène II (PGII). PG I est sécrétée uniquement à partir de la muqueuse fundique, tandis que PGII est sécrété par la muqueuse cardiaque, fundique et antrale de l'estomac, et aussi de la muqueuse duodénale [1, 2]. PGs sont également libérés dans la circulation et il est largement admis que le niveau PG sérique reflète l'état fonctionnel et morphologique de la muqueuse de l'estomac. pepsinogènes humaines ont une valeur diagnostique pour divers troubles gastro-duodénaux, en particulier pour l'ulcère gastro-duodénal, gastrite atrophique et cancer gastrique [3-8]. Le pepsinogène I /II ratio peut fournir encore plus d'informations sur l'étendue de la gastrite chronique [4].
Le cancer gastrique est la deuxième cause de décès liés au cancer dans le monde. Cependant, le risque de cancer gastrique varie selon les pays et les populations dans le monde. les zones à haut risque comprennent la Corée, le Japon et la Chine [9]. Lorsqu'elle est diagnostiquée à un stade précoce, le taux de survie à 5 ans pour le cancer gastrique est supérieure à 90%, mais les taux de survie à 5 ans sont en dessous de 50% lorsqu'il est diagnostiqué à un stade avancé [10]. Ainsi, il est nécessaire de diagnostiquer le cancer gastrique à un stade précoce pour réduire la morbidité et la mortalité par cancer de l'estomac.
Gastrite atrophique est une condition à haut risque bien connu de développer un cancer gastrique. Le «gold standard» pour le diagnostic de l'atrophie gastrique est l'étude histologique des biopsies obtenues lors d'une endoscopie digestive haute, une méthode invasive ne convient guère pour le dépistage de la population [11]. Des rapports récents ont montré que le sérum humain glycémies étaient utiles dans le diagnostic de maladies gastro-intestinales, y compris une atrophie gastrique et le cancer gastrique [8/3]. En outre, le test PG sérique comme marqueur pour la gastrite atrophique chronique a été intégrée dans les programmes de dépistage du cancer gastrique, sur une base d'essai, pour identifier les personnes qui pourraient bénéficier d'un dépistage gastrique du cancer [12, 13].
Cependant, PG niveaux sont affectés par de nombreux facteurs tels que la région, la race, l'âge, le sexe, la taille, le poids corporel, la surface corporelle, le tabagisme, les habitudes de consommation et de l'infection de Helicobacter pylori [3, 4, 7]. Malheureusement, peu d'études ont examiné les changements de PG sériques chez les patients atteints de différentes maladies gastriques en Midsouth Chine. Par conséquent, pour fournir une évaluation des niveaux PG sériques pour l'étude du cancer gastrique dans ce domaine, dans la présente étude, nous avons mesuré les niveaux sériques PG I et PG II dans 34 contrôles sains et 248 patients atteints de diverses maladies gastriques de la province du Hunan, Midsouth Chine la population de l'étude de méthodes de.
les sujets étaient inscrits au département de gastro-entérologie, Hôpital Xiangya, Central South University de Septembre 2005 à Août 2007. Ils ont inclus 248 patients (163 hommes) avec un âge moyen de 52,3 ± 12,3 années (extrêmes 19-80 ans) qui avait des plaintes supérieures abdominales et des preuves de troubles gastro-duodénale, et 34 témoins sains (19 hommes) avec un âge moyen de 52,4 ± 15,1 années (extrêmes 29-77 ans) qui ont eu aucune abdominale supérieure des plaintes ou des preuves de maladies des troubles hépatiques et gastro-duodénaux. Ils étaient tous les Han chinois dans la province du Hunan.
Le protocole d'étude a été approuvé par le Comité d'éthique de l'Université centrale du Sud, et le consentement éclairé écrit a été obtenu à partir de tous les participants.
Détermination des niveaux sériques PG
Environ 5 ml jeûne sang a été prélevé de chaque participant. Le sérum a été séparé et stocké à -20 ° C jusqu'à l'analyse. Les concentrations PG I et II ont été détectés par immunosorbant kit de dosage lié à une enzyme (ELISA kit Biohit, Finlande). L'absorbance a été mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre pour microplaques à 450 nm. niveaux II PG I et ont été calculées sur la base de la courbe standard. Le rapport de PG I /II a ensuite été calculée. Chaque échantillon a été évalué deux fois pour chaque patient, un coefficient de variation de < 15% a été jugée acceptable.
Endoscopic et examens clinicopathologiques
Tous les sujets ont subi une gastroscopie et la biopsie. Les biopsies ont été notées semi-quantitative par deux histopathologistes, selon le système de classification mise à jour de Sydney. endoscopie gastro-intestinale a été réalisée pour l'ensemble de l'estomac. l'infection de H. pylori a été détectée par un test rapide à l'uréase et anti-H. Le test IgG de pylori comme décrit précédemment [11], et H. pylori
infection actuelle a été confirmé si les deux test uréase rapide et anti-H. Le test IgG de pylori a donné des résultats positifs. endoscopistes expérimentés effectuées chaque examen sans connaissance des données sérologiques sur les sujets de l'étude. Sur la base de l'examen endoscopique et aspects histologiques, les patients ont été classés en sept catégories, comme suit: 55 cas de gastrite non-atrophique (NAG), 20 cas de gastrite atrophique chronique (ACG), 36 cas d'ulcère gastrique (GU), 31 cas de l'ulcère duodénal (dU), 69 cas de cancer gastrique avancé (AGC), 13 cas de cancer gastrique précoce (EGC) avant l'opération et 24 cas avec gastrectomie partielle pour cancer de l'estomac, l'un d'entre eux avec la récurrence du cancer gastrique.
L'analyse statistique
données ont été exprimées en moyenne ± SD. Les différences dans les patients présentant une maladie de l'estomac et des contrôles sains ont été analysés en utilisant le test t de Student. La distribution des variables a été testée par "Kolmogorov-Smirnov". Pour la distribution normale, la moyenne et l'écart des valeurs de déviation ont été analysés pour différence significative entre les deux groupes en utilisant le test t de Student. Dans le cas contraire, les valeurs médianes ont été analysés pour différence significative en utilisant le test de Mann-Whitney. L'analyse statistique a été effectuée en utilisant le programme SPSS pour Windows version 17.0. p < Résultats de 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
taux sériques de PG et PGI rapport /II chez des patients atteints de maladies gastriques différentes
Par test ELISA Nous avons détecté des niveaux de PG I et PG II et calculée PG I sériques /rapport II pour tous les sujets (tableau 1). Par rapport au groupe normal de contrôle, PG I et PG niveaux II et PG rapport I /II n'a montré aucune signification statistique dans NAG et le groupe de l'ACG (p > 0,05). Cependant, PG II niveaux PG I et PG et rapport I /II étaient significativement plus élevés chez les patients présentant un ulcère duodénal que chez les témoins (p < 0,05). En outre, le niveau de PGI sérique et PGI rapport /II étaient significativement plus faibles chez les patients atteints de cancer gastrique précoce ou avancé que chez les témoins et le groupe NAG (p < 0,001), mais il n'y avait pas de différences significatives dans PG I et les niveaux de PG II et PG rapport I /II entre EGC et le groupe AGC. Comparativement aux patients de l'ACG, le niveau de PGI sérique était plus faible chez les patients avec AGC et PG rapport I /II était plus faible chez les patients avec AGC ou EGC (p < 0,05). Notamment, les niveaux PG I et PG II étaient extrêmement faibles chez les patients ayant subi une gastrectomie partielle pour cancer gastrique (p < 0,005), mais étaient anormalement élevés chez un patient avec une récidive du cancer gastrique après gastrectomie (tableau 1) .Table 1 Serum PG niveaux II dans divers troubles gastriques I et (n = 282)
Groupe
N
PG I (ug /L)
PG II (ug /L)
PG I /PG II
contrôles sains
34
118,39 ± 47,80
12.39 ± 5.90
11,74 ± 6,23
gastrite atrophique non
55
112,46 ± 51,71
12,57 ± 5,98
10,63 ± 5,74
atrophique gastrite
20
93,63 ± 49,34
10,85 ± 4,58
11,07 ± 5,78
cancer gastrique précoce
13
71,48 ± 28,78 ‡ ▼
14,22 ± 4,90 5,19 ± 1,70
‡ †
cancer gastrique avancé
69
53,39 ± 34,03 ‡ †
12,29 ± 5,63
4,88 ± 3,76 ‡ † ulcère gastrique
36
147,58 ± 57,81 ▲ †
15,60 ± 13,42
14,47 ± 13,02
ulcère duodénal
31
217,43 ± 51,12 ‡ †
21,90 ± 19,45 ▲ †
18,57 ± 16,63 ▲ †
gastrectomie
23
40,70 ± 15,38 ‡ *
8,52 ± 4,52 ± 4,43
2,38 ‡
Récurrence après gastrectomie 1
289,32
65,89
4.39
données ont été montrées en moyenne ± SD
‡ p <. 0,005, ▲ p < 0.05 contrôles vs. santé; † p < 0,005, ▼ p < 0,05 vs. NAG; * P < 0,05 vs CAG de. Faible PG I niveau et PG rapport I /II pourrait prédire le cancer gastrique
Suivant nous avons étudié les points de coupure et des performances optimales de PG I niveau et PG rapport I /II pour le diagnostic de GC (tableaux 2 et 3, figure 1). Nous avons constaté que la capacité discriminatoire ne diffère pas entre PG I et PG I /II des valeurs, avec des zones sous les courbes ROC de 0,880 et 0,876, respectivement (p = 0,28). Le optimal PG I coupure concentration était de 70,1 ug /L, avec une sensibilité de 82,1% et une spécificité de 72,5%. Le rapport optimal de coupure PG I /II était de 6,0, avec une sensibilité de 82,9% et une spécificité de 76,8%. PG niveau I avait une valeur prédictive positive de 68,2%, une valeur prédictive négative de 82,3%, et une précision de 77,2% .Table 2 Comparaison de la fréquence des niveaux PG en non-GC et les variables de GC groupes

groupe non-GC (%)
groupe GC (en%)
Nombre de sujets: 142
82
PG I (ug /L) ≤
30
2 (1.4)
27 (32,9)
≤40
2 (1.4)
33 (40,2)
≤50
9 (6.3)
43 (52,4)
≤60
19 (13,4)
47 (57,3)
≤70
25 (17,6)
56 (68,2)
≤80
33 (23,2)
61 (74,3)
≤90
41 (28,9)
67 (81,7)
> 90
101 (71,1)
15 (18.3)
Radio PG I /II
≤3
2 (1.4)
21 (25,6)
≤4
7 (5.0)
31 (37,8)
≤5
18 (12.7)
43 (52,4)
≤6
25 (17,6)
53 (64,6)
≤7
33 (23,2)
56 ( 68,3)
≤8
38 (26,8)
61 (74,4)
≤9
49 (34,5)
65 (80,4)
> 9
91 (64.1)
4 (4.7)
non-GC groupe comprenait 55 de la gastrite non-atrophique, 20 de gastrite atrophique, 36 de l'ulcère gastrique, 31 de l'ulcère duodénal. groupe GC inclus 13 du cancer gastrique précoce, 69 du cancer gastrique avancé.
Tableau 3 Prédire cancer gastrique sur la base de PG I sérique niveau et PG rapport I /II
PG I niveau
PG rapport I /
aire sous la courbe ROC
0,880 (0,835 à 0,925)
0,876 (0,827 à 0,925) valeur culte-off
optimal
70,1 ug /l II
6
Sensibilité,%
82,1
82,9
Spécificité,%
72,5
76,8
valeur prédictive positive,%
68,2
64,6
valeur prédictive négative,%
Précision 82,3
82,3,%
77,2
75,8
Figure 1 courbes caractéristiques de PG I et niveau PG rapport I /II pour discriminer le cancer gastrique. Les points de coupure optimales de PG I et niveau PG rapport I /II ont été déterminées par analyse du récepteur caractéristique de fonctionnement (ROC). La capacité discriminatoire ne différaient pas entre les PG I et PG I /II des valeurs, avec des zones sous les courbes ROC de 0,880 et 0,876, respectivement (p = 0,28).
L'utilisation d'un niveau de 70 ug /L PG I comme sérologiques cut-off pour le cancer gastrique, nous avons constaté que 68,2% des patients avec PG I < patients 70 ug /L et 31,8% avec PG I ≥ 70 pg /L avaient un cancer gastrique. L'utilisation d'une coupure de 6 pour PG rapport I /II, nous avons constaté que 76,8% des patients avec PG I /II < 6 et 23,2% des patients avec PG I /II ≥ 6 avaient des tumeurs. En combinant les deux indices de PG sérique I ≤ 70 ug /L et PG I /PGII ≤ 6, nous avons trouvé que la sensibilité et la spécificité diagnostiques du cancer gastrique ont été de 62,1% et 94,2%, respectivement (tableau 4). Ces résultats suggèrent que la faible PG I niveau et PG rapport I /II sont des marqueurs sérologiques précieux pour prédire le cancer gastrique lorsqu'il est utilisé en combination.Table 4 Comparaison des performances de diagnostic pour le cancer gastrique en fonction des différentes valeurs de PG I niveau et PG I /II rapport
Sensibilité (%)
Spécificité (%)
PGI ≤ 70 et PGI /PGII ≤ 4
40,2
98,5
PGI ≤ 70 et PGI /PGII ≤ 5
54,8
96,4
PGI ≤ 70 et PGI /PGII ≤ 6
62,1
94,2
PGI ≤ 70 ou PGI /PGII ≤ 4
68,3
77,1
PGI ≤ 70 ou PGI /PGII ≤ 5
73,1
69,2
PGI ≤ 70 ou PGI /PGII ≤ 6
81,7
64,2
La valeur clinique des niveaux PG sériques dans le diagnostic de l'ulcère gastro-duodénal
Comme le montre le tableau 1, PG I sérique niveau dans les patients présentant un ulcère gastrique et ceux avec ulcère duodénal étaient 147,58 ± 57,81 pg /l (n = 36) et 217,43 ± 51,12 ug /L (n = 31), respectivement, significativement plus élevé que chez les sujets avec une muqueuse par voie endoscopique normale (118,39 ± 47,8 pg /L). Ces données suggèrent que le sérum PG I niveau est utile dans le diagnostic différentiel du cancer gastrique de l'ulcère gastrique, et les niveaux PG I augmenté est un facteur de risque pour l'ulcère gastro-duodénal.
L'association de H. pylori
infection et PG sérique niveaux
Enfin, nous avons détecté l'infection de H. pylori
dans les sujets. Le taux de l'infection de H. pylori était de 52,9% (18/34) chez les témoins sains, 67,3% (37/55) chez les patients atteints de gastrite superficielle, 80,0% (16/20) chez les patients atteints de gastrite atrophique, 85,4% (70 /82) chez les patients atteints de cancer gastrique, et 89,6% (60/67) chez les patients atteints d'un ulcère duodénal. Le taux d'infection était significativement plus élevée dans le groupe malade que chez les témoins sains (p < 0,01).
En outre, nous avons constaté que les niveaux PG sériques étaient significativement plus élevés dans le groupe Hp + que dans le groupe HP-, alors que PG I /II ratio était significativement plus faible dans le groupe Hp + que dans le groupe HP- (p < 0,05, tableau 5). Là données suggèrent que l'infection à H. pylori est associée avec du sérum augmenté PG levels.Table 5 Sérum PG I niveau et le rapport PG I /II chez H. pylori
groupe positif et négatif du Groupe
N (%)
IGP (ug /L)
PG I /PG II
Hp +
201 (77,9)
174,82 ± 41,73 *
6,74 ± 1,72 *
Hp -
57 (22,1)
101,23 ± 10,77
10,08 ± 3,31
* p < 0,05 vs. Hp -. Discussion de
groupe Dans cette étude, nos résultats ont montré que le sérum PG niveau I et le rapport PG I /II a diminué chez les patients atteints CAG par rapport à ceux avec NAG, même si aucune signification statistique n'a été observée. Cependant, PG I sérique niveau et PG rapport I /II chez des patients atteints de cancer gastrique avancé et PG rapport I /II chez des patients atteints de cancer gastrique précoce étaient inférieurs à ceux de l'ACG. Ces résultats sont en accord avec les rapports précédents [3, 4]. La concentration sérique d'emballage I diminue avec la progression de l'atrophie gastrique, ainsi que le cancer de l'estomac en raison de la perte des cellules principales dans les glandes fundiques.
En utilisant la courbe ROC, nous avons analysé la corrélation entre la précision du diagnostic basé sur les niveaux sériques de PG avec une gastroscopie et une évaluation histologique. L'aire sous la courbe ROC (AUC) est utilisé pour mesurer la capacité de chacun des marqueurs biologiques pour différencier les patients atteints d'un cancer de l'estomac et des patients atteints de cancer gastrique non. Les résultats ont montré que la faible PG I niveau et faible rapport PG I /II étaient des marqueurs sérologiques précieux pour prédire le cancer gastrique, en particulier un faible rapport PGI /II était paramètre efficace pour le dépistage des personnes à risque élevé de cancer gastrique
. Les taux sériques de PG sont connus pour être affectés par des facteurs démographiques, y compris le sexe, l'âge, le tabagisme, l'alcool, et les habitudes alimentaires, PG méthodologies de test telles que radioimmunoessai ou immuno-enzymatique, ce qui pourrait expliquer les différentes valeurs de coupure de profils de PG sériques dans différentes populations [14]. Par exemple, au Japon, les points de coupure proposés pour déterminer l'atrophie et le risque de cancer de l'estomac sont 70 ug /L pour PG I et 3.0 pour PGI /rapport II [15]. Dans les pays européens, les valeurs seuils sont 25 ug /L pour PG I et 3.0 pour PG I /II [16]. Dans une étude coréenne, PG I ≤ 70 ng /mL a montré une sensibilité suffisante (72,4%), mais une faible spécificité (20,2%), et de la sensibilité et la spécificité d'un ratio coupe PGI /II au large de ≤ 3 étaient de 59,2 à 61,7% et 61,0%, respectivement [17]. En outre, différents systèmes d'essai pour les niveaux sériques de PG sont généralement utilisés dans différentes parties du monde. Par exemple, ELISA est utilisé principalement en Europe, tout essai d'agglutination au latex est couramment utilisé au Japon. L'utilisation de différentes méthodes d'essai pourrait apporter un écart potentiel dans les niveaux sériques PG [18].
Dans cette étude, tous les sujets étaient des Chinois Han personnes dans le Hunan qui ont vécu dans un environnement similaire, avait des habitudes alimentaires similaires et le style de vie, et étaient de la même race. En outre, il n'y avait aucune différence significative dans l'âge et le sexe entre les patients atteints de différentes maladies gastriques et les contrôles. Nos résultats ont montré que la fois un faible PG I niveau et PG rapport I /II pourraient indiquer la survenue d'un cancer gastrique. La valeur de seuil optimale dans cette population pour le diagnostic du cancer gastrique était de 70 ug /L pour le PG I avec 82,1% de sensibilité et 72,5% de spécificité et 6,0 PG rapport I /II avec 82,9% de sensibilité et 76,8% de spécificité. La sensibilité et la spécificité étaient de 62,1% et 94,2%, respectivement, lorsque peignage PG I niveau et PG rapport I /II. Ces résultats suggèrent que l'utilisation combinée de faible PG I niveau et PG rapport I /II sont utiles pour prédire les tumeurs gastriques. Alors que la valeur de coupure optimale de 70 mg /L pour PG I était similaire à celle rapportée au Japon et en Corée, la valeur de 6,0 cut-off pour PG rapport I /II était supérieur à 3,0 rapporté au Japon et en Corée [15, 17]. D'autre part, les valeurs seuils sont 25 ug /L pour PG I et 3.0 pour PG I /II dans les pays européens [16]. La différence entre nos données et les données précédentes peut être dû à la différence de méthode utilisée pour détecter les niveaux PG, mais aussi pourrait être dû à l'origine ethnique des Chinois.
En outre, dans cette étude, nous avons constaté que l'ulcère gastrique se produit rarement dans ce population de la concentration sérique de PG I ≤ 100 g /L ou PG II ≤ 10 g /L, tandis que l'ulcère duodénal se produit rarement chez ceux dont la concentration sérique du PGI ≤ 120 g /L ou PG II ≤ 9 g /L. Ces résultats suggèrent que l'augmentation des taux de PG sérique risque accru d'ulcère gastro-duodénal. Il a été rapporté que hyperpepsinogenaemia peut être considéré comme un marqueur subclinique de la prédisposition génétique aux ulcères duodénaux [19]. De plus, nous avons constaté que l'infection de H. pylori a été associée à une augmentation des niveaux de PG sérique, en accord avec les études antérieures [19-21]. Il est connu que le taux de H. pylori
infection est extrêmement élevée dans l'ulcère duodénal gastrique. Par conséquent, le test PG sérum est une méthode utile pour le dépistage et le diagnostic de l'ulcère gastro-duodénal.
Les limites de cette étude devraient être signalées. Tout d'abord, la taille de cette étude de l'échantillon est relativement faible. Deuxièmement, nous avons seulement examiné la population qui vivent dans la zone locale du Hunan, Midsouth de Chine. Nos résultats peuvent ne pas représenter l'ensemble de la population chinoise. Conclusions de Par conséquent, d'autres études multicentriques qui emploient des sujets à grande échelle sont nécessaires pour confirmer nos résultats rapportés dans cette étude.
Notre étude suggère que PG I sérique niveau et PG I /II rapport sont des marqueurs précieux de l'estomac modifications de la muqueuse (comme «biopsie sérologiques»). tests non invasifs sériques PG pourrait fournir un outil de sélection de la population à risque élevé de cancer de l'estomac, et de réduire le coût et les efforts de l'endoscopie au cours du dépistage du cancer de l'estomac à grande échelle. Cependant, parce que la sensibilité et la spécificité du test de PG sont différentes dans différentes zones et les populations, d'autres études sont nécessaires pour accroître l'efficacité de l'essai PG pour le diagnostic de la maladie gastrique.
Remarques
Xiao-mei Zhang, Jia-xin Li contribué également à ce travail.
Déclarations Remerciements
cette étude a été soutenue par une subvention du Hunan Bureau provincial de la Santé (No. B2010-011).
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Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts.
Auteurs 12876_2013_1040_MOESM1_ESM.tiff Auteurs contribution
XZ effectuées la plupart des expériences et ont rédigé le manuscrit. XL a recueilli les échantillons. HG a effectué l'analyse statistique. JL et GZ conçu l'étude. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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