Asociación de IL-1 beta polimorfismo génico con la caquexia por cáncer gástrico localmente avanzado

Asociación de IL-1 beta polimorfismo génico con la caquexia por cáncer gástrico localmente avanzado
Abstract
Antecedentes
IL-1 beta ha sido implicada en el episodio inflamatorio. En vista de la naturaleza inflamatoria de la caquexia por cáncer, se determinó el valor predictivo de IL-1B-31 T /C, -511 C /T, 3954 C /T e IL-1RN VNTR polimorfismos de genes en la aparición de caquexia asociada con localmente avanzado cáncer gástrico.
Métodos Francia El estudio incluyó 214 pacientes y 230 voluntarios sanos. El ADN genómico se preparó a partir de leucocitos de sangre periférica. Los genotipos y frecuencias de alelos se determinaron en pacientes y controles sanos usando un análisis de longitud de fragmentos de restricción polimórficos de productos de reacción de cadena de polimerasa.
Resultados
Las frecuencias globales de IL-1B-31 T, -511 T, 3954 T y IL alelos VNTR -1RN en pacientes con cáncer gástrico localmente avanzado eran comparables con los de los controles. No se encontraron diferencias significativas en la distribución de IL-1B-31 T, T -511 e IL-1RN VNTR entre los pacientes con caquexia y por fuera. Los pacientes con caquexia mostraron una prevalencia significativamente mayor de IL-1B + 3954 alelo T que aquellos sin (P = 0,018
). En un análisis de regresión logística ajustado por peso real, la ubicación y el carcinoma etapa, la IL-1B + 3954 genotipo CT se asoció con un odds ratio de 2,512 (IC del 95%, 1,180-5,347). Conclusión de la caquexia

la IL-1B + 3954 alelo T es un riesgo importante para la caquexia por cáncer gástrico localmente. Los factores genéticos estudiados no es probable que desempeñen un papel importante en la determinación de la susceptibilidad al cáncer gástrico localmente avanzado.
Antecedentes
caquexia del cáncer es un síndrome caracterizado por una marcada pérdida de peso, anorexia, astenia y anemia, que corresponda por lo menos el 20% de las muertes en pacientes neoplásicos [1]. A diferencia de la inanición, que agota las reservas de grasa forman el tejido adiposo, mientras que la conservación de la proteína de la atrofia del músculo esquelético, en la caquexia grasa ni proteínas se salva. pérdida progresiva de peso es una característica común de cáncer y es responsable no sólo de una mala calidad de vida y la mala respuesta a la quimioterapia, sino también el tiempo de supervivencia corta con independencia de la masa del tumor o la presencia de metástasis, y también interfiere con la terapia del cáncer [2 ]. Aunque el mecanismo de la caquexia por cáncer sigue siendo en gran parte sin resolver, se han identificado varios mediadores clave. Un conjunto es citoquinas proinflamatorias [3], incluyendo TNF-α, IL-1β, IL-6 e IFN-γ [4, 5]. En los seres humanos, hay evidencia creciente de que la respuesta de citoquinas del huésped está determinada genéticamente. secuencias de genes polimórficos de ciertas citoquinas podrían ser posibles marcadores de susceptibilidad y el resultado clínico en diferentes enfermedades infecciosas humanas. Sin embargo, a lo mejor de nuestro conocimiento, ningún estudio ha abordado la correlación de polimorfismos de citoquinas de IL-1β gen con la probabilidad de la caquexia por cáncer gástrico localmente avanzado. Hotels, IL-1β es una potente citoquina proinflamatoria liberada por los macrófagos en sistémico respuestas inflamatorias. No sólo tiene importante efecto biológico pero también regula reacción inflamatoria y la respuesta inmune a través de la promoción de otras expresiones citoquinas, tales como IL-6 e IL-12. Los estudios han documentado la producción de la proteína IL-1β constitutiva en líneas celulares de cáncer humanas y animales como los sarcomas y carcinomas de células de ovario y de transición. Los tumores sólidos en los que la IL-1β ha demostrado ser regulada hasta incluyen mama, colon, pulmón, cabeza y cuello, y los melanomas, y los pacientes con IL-1β producir tumores tienen generalmente malas pronósticos. También se ha informado de que esta citocina era el factor responsable de la degradación de proteínas mejorada en ratas, y se repite la administración de IL-1 a ratas inducidas anorexia y pérdida de peso [6]. In vivo, los efectos proinflamatorios potencialmente perjudiciales de IL-1β se compensan por la acción del antagonista del receptor de interleucina-1 (IL-1RN) [7]. Amplias pruebas indican que la función biológica de secretada IL-1RN es inhibir competitivamente la unión de circulación de IL-1β a los receptores de la superficie celular [8, 9], y los niveles de IL-1RN aumentar tarde durante el curso de un evento inflamatorio para terminar inflamación aguda [7]. Francia El producción de IL-1β e IL-1RN se dependía de varios factores, existe una creciente evidencia de que los factores genéticos juegan un papel importante. La IL-1B y los genes de IL-1RN se encuentran en el cromosoma 2q14, dentro de una región 360 kb. En el gen IL1B hay dos polimorfismos en las posiciones -511 diallelic, -31 en la región promotora y en la posición + 3954 en el quinto exón. El gen IL-1RN tiene un sitio polimórfico penta-alélica en el intrón 2 que contiene un número variable de una secuencia de repetición en tándem 86 pb. En los últimos años, in vitro e in vivo han indicado que la IL-1B -511 T y +3954 alelos T mejoran IL-1ß e IL-1RN producciones y los niveles circulantes de las dos citoquinas en los seres humanos [10, 11]. Se ha informado de que los genotipos de los proinflamatorias interleucina-1 loci se asociaron con un aumento significativo del riesgo de una respuesta hypochlorhydric crónica a la infección por H. pylori y cáncer gástrico en una población caucásica, presumiblemente mediante la alteración de los niveles de IL-1ß en el estómago [12 , 13], pero una influencia de IL-1ß polimorfismos de genes sobre la susceptibilidad de la caquexia por cáncer gástrico no se ha evaluado. En vista de las funciones de IL-1β jugado en la caquexia, que postula que sus polimorfismos podrían tener alguna relación con el desarrollo de la caquexia por cáncer.
Las causas de la caquexia se piensa que es multifactorial pero principalmente relacionada con hipercatabolismo y pérdida de apetito debido a las sustancias circulantes y citoquinas [14, 15] relacionados con el tumor. Trabajando a partir de la asunción de contribución inflamatoria sustancial a la caquexia por cáncer, la hipótesis de que la IL-1B-31 T /C, -511 C /T, 3954 C /T e IL-1RN polimorfismos de genes tiene alguna relación con el desarrollo de la caquexia asociada con localmente avanzado cáncer gástrico. También se determinó si los polimorfismos de los genes estudiados se asociaron con la susceptibilidad al cáncer gástrico localmente avanzado.
Métodos Estudio de población
Francia El protocolo fue aprobado por el Comité de Ética local, y el consentimiento informado se obtuvo de cada una de las paciente o un pariente cercano. Todos los pacientes consecutivos con cáncer gástrico localmente avanzado desde 1 junio 2004 hasta 1 junio 2006 se consideraron de forma prospectiva. Para ser elegible para la inscripción, todos los sujetos tuvieron que ser chino Han Población. Los criterios de exclusión fueron los siguientes: (1) la anorexia nerviosa; (2) la obstrucción del píloro; (3) enfermedad importante gastrointestinal, insuficiencia renal crónica, diabetes y el VIH; (4) hepática, peritoneal, metástasis pélvica y distante; (5) el apareamiento entre consanguíneos. Inmediatamente después de la admisión y antes de que se comience cualquier procedimiento quirúrgico o médico, los pacientes fueron investigados por la presencia de anorexia, pérdida de peso, fumar y beber el estado del agua. Los controles fueron reclutados de los asistentes del hospital en dos centros, sin antecedentes familiares de cáncer gástrico. Ellos fueron comparados con los pacientes por edad y sexo, sin ningún tipo de enfermedades malignas y trastornos infecciosos.
Información sobre el tabaquismo y el estado del agua potable se obtuvo mediante entrevista. No obtuvimos historias dietéticas, tales como detalles de la carne o el consumo de pescado. Definimos "actual" como personas que eran fumadores actuales, "ex", como los que habían fumado en el pasado, y "nunca" como aquellos que nunca habían fumado en cualquier momento de su vida.
La pérdida de peso durante el procedimiento 6 meses se expresó como un porcentaje del peso habitual y los pacientes se dividieron en 2 grupos de acuerdo con la gravedad de la pérdida de peso: grupo de no-caquexia, pérdida de peso ≤ 10%; grupo caquexia, > 10%.
Estado de Evaluación de H pylori
prueba de 14C-UBT se repitió dos veces para los pacientes y los controles reclutados por un solo equipo de personal especializado. Ninguno de los sujetos inscritos nunca había sido tratado para la erradicación de H pylori.
Extracción de ADN
El ADN genómico se purificó a partir 5 ml de muestras de sangre periférica usando el kit de purificación de ADN genómico Wizard (Promega) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
IL-1B + 3954 C /T
Este polimorfismo se investigó usando análisis de longitud de fragmentos de restricción polimórficos de productos de reacción en cadena de polimerasa como estudiado anteriormente [16].
IL-1B-31 T /C
Forward , TCTTTTCCCCTTTCCTTTAACT; revertir, GAGAGACTCCCTTAGCACCTAGT [17] (Nanjing Bio Eng Co.). Las condiciones de PCR: 10 min a 95 ° C; 40 ciclos de 30 segundos a 72ºC, 15 segundos a 95 ° C, 20 seg a 52 ° C (BIO-RAD, Japón). Productos de PCR fueron digeridos por endonucleasas de restricción AluI (Promega) y se visualizaron por electroforesis en un gel de agarosa al 2,5% teñido con bromuro de etidio 0,1%. Los alelos se codificaron como sigue: C alelo: 234 pb; Alelo T:. 150 pb y 84 pb hotels, IL-1B-511C /T
Delantero, 5-TGGCATTGATCTGGTTCATC-3, revertir, 5-GTTTAGGAATCTTCCCACTT-3 [18] (Nanjing Bio Eng Co.). Las condiciones de PCR: 95 ° C 1 minuto; 30 ciclos de 95 ° C 30 seg, 55 ° C 30 seg, 72 ° C 30 seg; 70 ° C 7 min (BIO-RAD, Japón). Productos de PCR fueron digeridos por endonucleasas de restricción Aval (Promega) y se visualizaron por electroforesis en un gel de agarosa al 2,5% teñido con bromuro de etidio 0,1%. Los alelos fueron codificados de la siguiente manera: T: 304 pb, C:. 190 y 114 pb hotels, IL-1RN VNTR
Delantero, 5-CTCAGCAACACTCCTAT-3, revertir, 5-TCCTGGTCTGCAGGTAA-3 [19] (Nanjing Bio Eng Co.). Las condiciones de PCR: 94 ° C durante 4 min, 32 ciclos de 94 ° C durante 1 min, 50 ° C durante 1 min, 72 ° C durante 1 min; 72 ° C durante 10 min (BIO-RAD, Japón). Los productos de PCR se analizaron por electroforesis en un gel de agarosa al 2% teñido con bromuro de etidio. Los alelos 1-5 (IL-1RN * 1-IL-1RN * 5) fueron detectados en función de sus tamaños relativos a una escalera de ADN de 100 pb alelo: 1 (cuatro repeticiones) 410 pb; alelo 2 (dos repeticiones) 240 pb; alelo 3 (cinco repeticiones) 500 pb; alelo 4 (tres repeticiones) 325 pb. Alelo 5 (seis repeticiones; 595 pb) no se observó en la población de estudio se informaron análisis estadístico

Los datos descriptivos de las variables continuas como media ± desviación estándar y probada por la t-test
por SPSS 11.0 Estudiante.. Las diferencias en la frecuencia de los alelos entre los grupos fueron examinados para la significación estadística con la prueba de chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher cuando sea apropiado. El análisis se completó por SAS 6.12, y un P-2
cola. ≪ 0,05 se tomó para denotar importancia
Resultados
Hardy-Weinberg
Dentro de cada grupo de estudio, las distribuciones de genotipos fueron consistentes con los predichos por el equilibrio de Hardy-Weinberg (tabla 1 y la tabla 2.). tabla 1 análisis de equilibrio de Hardy-Weinberg en los pacientes con cáncer y controles.


cáncer (n = 214) guía empresas Contr. (N = 230) guía empresas

Observed

Expected

Observed

Expected

IL-1β-31
CC
48
45.3
53
49.8
CT
101
95,1
108
114,4
TT
75
73,6
69
65,8
P
0,980
0,835 hotels, IL-1β-511
CC
55
50,1
56
49,3
CT
97
106,8 114,4
101

TT
62
57,1
73
66,3
P
0,638 0,454
hotels, IL-1β + 3594
CC
178
179,5 201,9
201

CT
36
33
29
27,2
TT
0
1.5
0
0.9
P
0,442 0,619
hotels, IL-1RN VNTR
1/1
157
156,5
168 167

1/2
45
54
50
58,8
2/2 página 5
página 6 3.5 4.2

1/3
5
0 0
4 de
1/4
2 0
2 0 P

0,089 0,135

genotipos no se desvió de la Hardy -. Weinberg sobre Table 2 análisis de equilibrio de Hardy-Weinberg en el grupo no-caquexia y caquexia grupo


no caquexia (n = 123) guía empresas caquexia (n = 91) guía empresas

Observed

Expected

Observed

Expected

IL-1β-31
CC
26
24.1
12
12.7
CT
57
60,7
44
42,6
TT
40
38,1
35
35,7
P
0. 889
0,976 hotels, IL-1β-511
CC
31
27,8
24
22,3
CT
55
61,4
42
45,4
TT
37
33,8
25
23,3
P
0,716 0,881
hotels, IL-1β + 3594
CC
109
109,4
69
70,3
CT página 14
13,2
22
19,4
TT
0
0.4
0
1.3
P
0,809 0,480
hotels, IL-1RN VNTR
1/1
91
90,5
66
66.0
1/2
25
30,5
20
23,4
2/2 página 3
2.0
2 1.6
1/3
3
0.0
2 0.0
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