El efecto de reducción de las pérdidas de genes cromosómicos detectado en cánceres gástricos

El efecto de reducción de las pérdidas de genes cromosómicos detectado en cánceres gástricos
Abstract
Antecedentes
El nivel de pérdida de heterocigosidad (LOH) que reduce una dosis génica y ejerce un efecto adverso de las células es conocido por ser un parámetro para la puesta en escena genética de los cánceres gástricos. Este estudio investigó si el efecto adverso de las células inducidas con la reducción gen era un factor limitante de la velocidad de los acontecimientos LOH en dos tipos histológicos distintos de los cánceres gástricos, intestinales y las diffuse--tipos.
Métodos comentario El patológica muestras obtenidas de 145 pacientes con cáncer gástrico se examinaron para determinar el nivel de LOH utilizando 40 marcadores microsatélites en ocho cromosomas asociados con el cáncer (3p, 4p, 5q, 8p, 9p, 13q, 17p y 18q).
resultados
mayoría de los cromosomas asociados con el cáncer se encontró que pertenecen a los cromosomas genes de los pobres y para contener unos pocos genes específicos de estómago que fueron altamente expresado. Un LOH-nivel básico que afecta a uno o ningún cromosoma era frecuente en los de tipo difuso cánceres gástricos. El cromosoma 17 que contiene una densidad relativamente alta de genes se perdió comúnmente en los cánceres de tipo intestinal, pero no en los cánceres de tipo difuso. Un alto nivel LOH que afecta a cuatro o más cromosomas tendía a ser frecuente en los cánceres gástricos con diferenciación intestinal y mixta. recaída de la enfermedad era común que los cánceres gástricos con LOH de alto nivel a través tanto de la hematógena (38%) y (36%) rutas no hematógenas, y en los casos de nivel de línea de base LOH a través de la ruta no hematógena (67%).
Conclusiones Francia el efecto adverso de las células de la reducción del gen es más tolerado en de tipo intestinal, el cáncer gástrico que en los cánceres de tipo difuso, y la pérdida de los genes de dosis alta se asocia con metástasis hematógena.
Antecedentes
cánceres gástricos se someten hypermutations en secuencias de repetición simples y pérdidas cromosómicas desequilibradas, y estas alteraciones genéticas se detectan como una inestabilidad de microsatélites (MSI) y la pérdida de heterocigosidad (LOH), respectivamente, mediante el uso de marcadores de microsatélites altamente polimórficos [1-4]. El comportamiento pathobiological y el pronóstico de los cánceres gástricos se han asociado con el nivel de LOH y la presencia de MSI [3-6]. La profundidad de la invasión y metástasis en los ganglios linfáticos se avanzó considerablemente en los casos de cánceres de pequeño tamaño con alto nivel LOH, y estos parámetros histológicos tiende a estar linealmente relacionada con el tamaño del cáncer para los casos de bajo nivel LOH [7]. Debido a que un solo genotipo de microsatélites se detecta de manera similar en todo el tejido quirúrgico, así como la muestra de biopsia endoscópica [3, 7], es posible predecir la probabilidad de recaída de la enfermedad y para decidir el procedimiento de resección apropiado basado en el análisis de microsatélites de una tejido de la biopsia pretratamiento. Francia el hipótesis de dos accesos ha propuesto que la pérdida cromosómica y el resultado de una mutación puntual en el bialélicas inactivación de los genes supresores de tumores [8]. pérdidas cromosómicas que ejercen un efecto perjudicial sobre el crecimiento celular son mucho menos tolerado que las ganancias cromosómicas, y los dos accesos genéticos que proporcionan una ventaja de crecimiento podrían proteger a las células progenitoras cáncer de LOH eventos letales [9, 10]. Además, estudios previos han propuesto que las regiones de control de genes metilados son cada vez menos metilado de una manera LOH-dependiente del nivel en el cáncer gástrico [11, 12] a través de un mecanismo de compensación de la dosis que sostiene una dosis de genes o la transcripción durante los ciclos celulares siguientes [9 ]. Con respecto al mecanismo de compensación de la dosis, la ganancia cromosómica y desmetilación asociado-LOH pueden resultar de respuestas genéticas y epigenéticas compensatoria de dosis a una reducción en la dosis cromosómica [11-14]. Por lo tanto, los eventos LOH combinados con un efecto adverso de las células y una respuesta compensatoria de la dosis, además de tumor inactivación de genes supresores son probablemente para determinar el comportamiento de las células progenitoras pathobiological cáncer.
Cánceres gástricos se han clasificado en dos tipos histológicos distintos , es decir, los diffuse- e intestinales de tipo [15, 16]. De tipo difuso cánceres son comunes en pacientes jóvenes-edad que carecen de una lesión precancerosa, mientras que los de tipo intestinal cánceres son comunes en pacientes de edad de edad asociados con la metaplasia intestinal precancerosa que se asemejan a las glándulas intestinales [17]. Suponiendo que las células madre derivadas de la médula se están adaptando a los tejidos del estómago y el medio ambiente [18], las células madre recién fijos, que son potencialmente no cohesivo e invasiva en individuos jóvenes, se convierten en cáncer de tipo difuso. De tipo intestinal cánceres son frecuentes entre los de edad mediana pacientes que tienen la adaptación a largo plazo de las células madre recién fijos a las condiciones del tejido gástrico. En este sentido, un evento de LOH dado puede afectar a dosis distintas de transcripción entre los cánceres diffuse- y de tipo intestinal gástricos que establecen distintos patrones de expresión génica.
En este estudio, se hicieron correlaciones entre los eventos LOH y el comportamiento de los cánceres gástricos pathobiological en cuanto a los efectos adversos de las células de la reducción de gen. Los ocho cromosomas asociados con el cáncer que examinamos tenían una baja densidad de genes y los genes no-específica del estómago, lo que podría resultar en un efecto de células adversos leves de LOH. Los eventos LOH eran frecuentes en los cánceres gástricos de tipo intestinal, en los que la pérdida de un cromosoma afectaría una dosis baja de la transcripción y ejercer un efecto de células adversos leves.
Métodos
selección de los casos
Ciento y cuarenta y cinco pacientes con cáncer gástrico que se sometieron a una resección quirúrgica curativa entre febrero de 1996 y junio de 2003, fueron inscritos en este estudio. La información clínico patológica y radiológica se obtuvo mediante la revisión de los registros detallados de los pacientes. Ciento dieciséis casos se analizaron previamente por examen genético multifocal de los sitios de tumor heterogéneos [3]. Los 29 pacientes restantes fueron examinados utilizando un bloque de tejido único de cada tumor.
Se revisaron los portaobjetos de microscopio y luego se eligió un sitio de tumor que era representativo de la característica histológica. El tipo histológico de cáncer gástrico se definió como intestinal (glandular, cohesivo o sólido), difusa, y se mezcla de acuerdo con la clasificación de Lauren [15, 16] y el grado de diferenciación fue clasificado de acuerdo a la clasificación de la OMS. Las ubicaciones de los tumores considerados fueron el cardias, cuerpo y antro. El estadio tumoral clínico patológica se determinó según los criterios del tumor-nódulo-metástasis (TNM) [19]. La mayoría de los pacientes con cáncer gástrico (140 de 145, 97%) habían sido sometidos a una gastrectomía R0 y D2 o linfadenectomía más extensa. Una media global de 28,6 (mediana: 33) se extirparon ganglios linfáticos junto con la muestra. Ninguno de los pacientes recibió quimioterapia y la radioterapia preoperatoria.
De seguimiento de datos sobre la recurrencia y la supervivencia
Una terapia de combinación de mitomicina intravenosa, fluorouracilo y citarabina (MFC), seguido de fluorouracilo por vía oral se administró como un estándar tratamiento adyuvante postoperatoria de acuerdo con el juicio del médico en el pronóstico global de cada caso. Durante el período de seguimiento, un examen físico, pruebas de laboratorio, radiografía de tórax, ecografía abdominal o tomografía computarizada, y gastrofiberscopy se llevaron a cabo cada 3 o 6 meses y recaída de la enfermedad fue confirmada histológicamente, si es posible. Cuando más de un sitio de recurrencia se detectó en la primera vez de la falta, las recurrencias individuales se contaron por separado. El sitio de recurrencia se clasificó en la metástasis hematógena que implica el pulmón, el hígado u otros órganos distantes, y la metástasis hematógena no que incluía la afectación ganglionar y la diseminación peritoneal. los cánceres de estómago restante se excluyeron del análisis del patrón de recurrencia. México La supervivencia global se calculó a partir de la fecha de la resección quirúrgica hasta que el día de la última visita de seguimiento o la muerte relacionada con el cáncer. Los datos de los pacientes que murieron por otras causas fue censurado en el momento de la muerte. El análisis estadístico se llevó a cabo en abril de 2007. El tiempo medio de seguimiento de todos los pacientes que sobrevivieron fue de 40 meses (rango: 5 a 96 meses) y se completó en un 98% de los pacientes incluidos. Durante el análisis de supervivencia, 50 pacientes habían muerto como resultado de sus tipos de cáncer y 12 pacientes habían muerto por otras causas.
Microdisección de tejidos y la amplificación de ADN
cinco secciones de serie de 7 micras de espesor de cada fijado en formol e incluido en parafina muestra de tejido se desparafinaron y se tiñó brevemente con hematoxilina y eosina. Un enfoque único de células tumorales ricos fue elegido por examen microscópico y un área de tumor que va desde 5 mm a 7 mm de diámetro se disecó manualmente bajo un estereomicroscopio (aumento, × 40) utilizando un escalpelo quirúrgico. Las piezas de tejido microdissected se examinaron microscópicamente si el contenido de las células tumorales era > 70%, que había sido confirmado para reflejar una diferencia en el contenido genético entre los tejidos normales y tumorales [3, 7].
Aproximadamente 1.000 células tumorales microdiseccionadas se incubaron en 20 l de tampón de extracción de ADN (0,5% de Tween-20 , 1 mM EDTA pH 8,0, 50 mM Tris pH 8,0, 0,5 mg /ml de proteinasa K) a 37 ° C durante 24 hr. Fijados con formalina ADN tejido incluido en parafina tiende a estar mal amplificado por PCR en muestras mayores. La mayoría de los ADN se extrajeron dentro de los cinco años después de la preparación de las muestras patológicas, lo que garantiza la calidad del ADN para PCR. La cantidad de ADN, con diferentes cualidades, el lisado de tejido se determina en base a la intensidad de la banda de PCR con 5-10 ng /l de ADN, la cual fue amplificada usando un conjunto de cebadores de microsatélites, D19S226 gratis (hacia adelante: 5 ' - CCA GCA GAT TTT GGT GTT GTC AT - 3 '; inversa: 5' - ACA GAG GAG CCA CCA GTA GGA GT - 3 '; tamaño de amplificación: 164 pb). La amplificación por PCR se llevó a cabo bajo una condición de arranque en caliente con el uso de un radioisótopo (α- 32P dCTP, PerkinElmer, Boston, MA, EE.UU.) como se describe anteriormente [3, 7]. Brevemente, un total de 10 l mezcla de PCR se sometió a 32 ciclos de una etapa de amplificación en serie, que consistía en 94 ° C durante 50 seg, una temperatura de recocido-cebador específico para 50 seg, y 72 ° C durante 1 min. Las secuencias de microsatélites marcados con radioisótopos se separaron en un gel de poliacrilamida al 6% que contenía urea 7 M y se visualizaron por repetidas exposiciones de cada autorradiografía y utilizando un escáner radioluminograph (BAS 2500, Fuji Photo Film Co. Ltd., Kanakawa, Japón) . Análisis FODA de los alelos de microsatélites México la directrices para calificar el estado de LOH y MSI se han detallado en los estudios previos que utilizaron el mismo panel de marcadores de microsatélites [7]. Como un tipo de referencia de los alelos de microsatélites, se recuperaron los marcadores de repetición del dinucleótido que iban desde 88 pb a 247 pb de tamaño de amplificación y que tenían una frecuencia de heterocigotos > 50%. Los marcadores de microsatélites altamente polimórficos en 8 cromosomas asociados con el cáncer (3p, 4p, 5q, 8p, 9p, 13q, 17p y 18q), que con frecuencia sufren de LOH en el cáncer gástrico [3, 7, 20], se han utilizado para aumentar la número de alelos heterocigotos en cada brazo (Figura 1A). Los cinco marcadores de microsatélites en cada brazo cromosómico mostraron las bandas claras de PCR de los alelos heterocigotos y abarcaban toda la longitud de los ocho cromosomas [3, 5]. Para asegurar la reducción cromosómica, la pérdida cromosómica fue asignado cuando el evento LOH participaron más de dos marcadores de microsatélites en un brazo cromosómico [13]. Cuarenta pares de cebadores de microsatélites se mezclaron en un total de 22 tubos de reacción y cada uno de los cuales contenía uno (4 mezclas) o dos (18 mezclas) conjuntos de cebadores que abarcaban amplicones de diferentes tamaños a las mismas temperaturas de recocido. Las bandas de microsatélites inequívocos resultantes indican la alta especificidad de la condición de la PCR multiplex, que era útil para pequeñas cantidades de tejidos patológicos microdissected. Figura 1 El análisis de microsatélites basada en PCR (A) y la clasificación genética de los cánceres gástricos (B). autorradiografías representativas de las muestras que se analizaron mediante análisis de PCR basado en microsatélites (A) y la clasificación genética de los cánceres gástricos de tipo intestinal y difuso de tipo basado en la pérdida de heterocigosidad (LOH) y la inestabilidad de microsatélites (MSI) (B). (A) La electroforesis en gel de la izquierda muestra de alta frecuencia de MSI en más de 40% de los 15 marcadores homocigotos. La electroforesis en gel de la derecha muestra alto nivel LOH afectan a los cromosomas 3p, 4p, 5q, 9p, 13q, 17p y 18q. La normal (N) y los ADN tumor correspondiente (T) se indican por encima de cada banda alélica. El asterisco indica MSI y LOH. El ADN genómico a partir de tejido microdissected en parafina fijado en formol e incrustados se amplificó y se marcó por [α-32P] dCTP en la condición de arranque en caliente de PCR multiplex. Un total de 80 amplicones de microsatélites de cada muestra se realizaron simultáneamente en dos geles de secuenciación. (B) usando un panel de 40 marcadores de microsatélites en ocho cromosomas asociados con el cáncer, LOH se interpretó en los marcadores heterocigotos si 40% o menos de los marcadores homocigotos mostró MSI. La magnitud de las pérdidas cromosómicas, como se anotó en función del número de cromosomas LOH-positivos, se dividió en alto nivel (LOH-H) y de bajo nivel (LOH-L) las pérdidas tanto para el intestinal y difuso tipos. En los casos de tipo difuso cánceres gástricos, cero o una pérdida cromosómica se clasificó en el nivel basal (LOH-B).
Sobre la base de la misma clasificación de los genotipos de microsatélites que se aplicó en el estudio anterior (Figura 1B) [ ,,,0],7], se analizaron los perfiles alélicas de los marcadores de microsatélites para 40 MSI en los marcadores de homocigotos que mostraron unas pocas bandas de sombra o tartamudeo en un par de los ADN normales y tumorales. Debido a MSI oscurece el estado heterocigoto alélico, los perfiles alélicos de las 40 secuencias microsatélites fueron analizados inicialmente para MSI en los marcadores de homocigotos. El estado de LOH se determinó sobre la base de la pérdida alélica en el marcador de heterocigotos (Figura 1B). La magnitud de las pérdidas cromosómicas en cada caso se obtuvo de acuerdo con el número de pérdidas cromosómicas constitucionales que implican más de un alelo del microsatélite.
Análisis de in-silico
datos de la densidad de genes y transcripción de cromosomas individuales
A total de 17,723 genes de referencia identificados en una base de datos pública (http:.. //genoma UCSC edu /, marzo de 2006 montaje) [21] fueron analizados para calcular el número de genes por 1 Mb segmento de nucleótidos. Serial análisis de la expresión génica (SAGE) de datos de la mucosa gástrica normal se obtuvo de una base de datos pública (http:.... //www NCBI NLM NIH gov /geo /, "SAGE_Stomach_normal_B_antrum"). La actividad transcripcional de genes individuales se calculó combinando el mapa de genes de referencia y las etiquetas de genes expresados. Sobre la base de una comparación de los datos SAGE evalúan los perfiles de expresión génica y microarrays, se encontró el número de transcripciones contados en el SAGE datos para estimar con precisión una gran diferencia en la actividad de genes entre los genes de estómago específica y los genes del hogar [21]. el análisis estadístico
la prueba exacta de Fisher y la χ
2 pruebas se utilizaron para comparar las características clínico-patológicas con el genotipo de microsatélites de los cánceres gástricos. curvas de probabilidad se calcularon de acuerdo con el método de Kaplan-Meier y se compararon mediante la prueba de log-rank. El análisis multivariante se realizó mediante el método de riesgos proporcionales de Cox con el uso de procedimientos paso a paso. Los valores de probabilidad fueron de dos colas, con un valor de p inferior a 0,05
se consideró estadísticamente significativo. Se utilizó el paquete estadístico SPSS 11.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.) para el análisis de datos.
Resultados
Análisis de los eventos LOH en el cáncer gástrico
La mayoría de los cánceres gástricos (116 de 145 casos) se examinaron en un análisis multifocal anterior en los sitios tumorales heterogéneos de un cáncer gástrico dado [3]. El noventa y cinco por ciento de los cánceres gástricos examinados se constata que tienen un nivel similar de LOH o MSI comúnmente compartida por los sitios del tumor heterogéneas y después cada cáncer gástrico se clasificó en un solo genotipo de microsatélites, y no un genotipo mixto. Los genotipos de microsatélites de los 27 casos adicionales se puntuaron de acuerdo con el nivel de LOH y la presencia de MSI, que se detecta en una pieza de tejido único que contiene un componente histológico representativo.
Cada pérdida cromosómica se correlacionó con los parámetros clínico-patológicas de la cánceres gástricos (Tabla 1). La mayoría de las pérdidas cromosómicas (4p, 5q, 9p, 13q, 17p y 18q) se asociaron con la enfermedad de aparición tardía (P Hotel < 0,05). Dos o más pérdidas cromosómicas fueron simultáneamente relacionados con la ubicación del antro (9p y 18q pérdidas), el intestino o de tipo mixto histología (5q, 17p y 18q pérdidas), y una pobre supervivencia (3p, 9p y 13q pérdidas) (P Hotel < 0,05). La pérdida de 17p fue más frecuente en los cánceres de tipo intestinal (67%). La pérdida de 13q fue más frecuente en los cánceres de tipo difuso (47%). Tabla 1 Relaciones de las características clínico-patológicas y la pérdida cromosómica única
Características

3p pérdida de la pérdida
4p
pérdida 5q pérdida
8p
9p pérdida
13q pérdida
17p pérdida de la pérdida
18q
No. de los pacientes
130
47
47
51
30
50
57
77
55
Edad Media

60
61
63
63
63
64
63
63
63
± SD
± 12.60 ± 10.18

10,49 ± 9,28 ±

± 10,24 ± 10,28

± 10,43 ± 10,94

± 11.20
P
0,290 0,029

0,014 0,102

0,003 0,030
Hotel < 0,0001
0,030 Sexo seguro
Hombre
86
37
34
36
18
37
42
52
36
Mujer
44
10 página 13
15 página 12 página 13
15
25 página 19
P
0,033
0,335 0,450

0.510
0,182 0,136

0.710 1.000

tumor Ubicación y Cardia página 13 página 4 página 3
5
1
2 5 página 8 página 3
Cuerpo
48
16
16 página 13
10
14
16
24
16
antro
69
27
28
33 página 19
34
36
45
36
P
0,743 0,424

0,078 0,267

0,018 0,119

0,253 0,043

histológico tipo
intestinal
54 página 19 página 19 página 13
23
22
20
36
27
difuso
32 página 9
9 página 6 página 5 página 8
15 página 11 página 7
Mixta
44 página 19 página 19
22
12
20
22
30
21
P
0,395 0,395

0,018 0,480

0,176 0,404

0,004 0,026

El tamaño del tumor
media
5.3 5.8

5.1 4.9

5.1 4.9

5,7
5.2
5.5
± SD
± 3,01 ± 2,86

± 2,64 ± 2,29

± 2,42 ± 2,73

± 3,02 ± 2,86

± 3.13
P
0,129 0,631

0,131 0,705

0,181 0,179

0,564 0,483

Etapa
I & II
64
20
21
20 página 14
22
21
36
24
III & IV
66
27
26
31
16
28
36
41
31
P
0,277
0,469 0,075

0,836
0,372 0,014

0,593 0,292

recidiva peritoneal

24
10 página 9 página 8 página 5
10 página 12 página 11
16
ganglios linfáticos
10 página 4 página 3 página 3
2 5
4 página 6 página 3
hematógena
22 página 13 página 11 página 14 página 8 página 11 página 14
15
10
total
56
27
23
25
15
26
30
37
24
P

0,422 0,507

0,070 0,428

0,826 0,415

0,899 0,663
estado
Vital
119
42
41
47
29
44
51
68
48
Alive
70 página 19
21
26
16
20
24
36
27
muerto
49
23
20
21 página 13
24
27
32
21
P
0,021 0,152

0,330 0,402

0,019 0,019

0,094 0,389

P
los valores inferiores a 0.05 se indican en letra negrita.
una gran fracción (52%) de tipo difuso cánceres gástricos tenido uno o pérdidas cromosómicas, que fueron clasificados en un nivel básico-LOH (LOH-B), porque la mayor parte del intestino -y los cánceres de tipo mixto (86%) tenían dos o más pérdidas cromosómicas (Figura 2) [7]. Los casos de LOH de alto nivel con cuatro o más pérdidas cromosómicas fueron más frecuentes en los casos de diferenciación mixtos con ambos tipos de cáncer gástrico intestinal- y difusa de tipo (44%). En general, 15 LOH-B (10%), 65 LOH-L (45%), 50 LOH-H (35%), y 15 MSI (10%) se identificaron casos en los 145 especímenes quirúrgicos. Figura 2 Las relaciones entre el tipo histológico y no. de las pérdidas cromosómicas en los cánceres gástricos. El tipo histológico de cáncer gástrico se definió como la diffuse- (n = 32, caja cerrada), intestinal- (n = 54, cuadro gris), y mixtos de tipo (n = 44, caja abierta), según la clasificación de Lauren. Análisis FODA de la densidad de genes y los genes altamente expresados ​​en los cromosomas asociados con el cáncer comentario el densidad de genes por Mb-1 segmento, los 100 mejores genes activos que fueron altamente expresado en el estómago, y la frecuencia de la LOH genotipos detectados en los cánceres gástricos se analizaron en cada cromosoma (Tabla 2). En la comparación de los ocho cromosomas asociados con el cáncer que hemos examinado y los restantes 14 cromosomas, la densidad de los genes (4.8 genes frente a 6,9 genes por 1-Mb segmento) y el número medio de los genes altamente expresados ​​(3.3 genes frente a 5.3 genes) eran más baja en los cromosomas asociados con el cáncer que en los otros cromosomas. El número medio de transcripciones estimados en cada gen altamente expresado también fue baja en los cromosomas asociados con el cáncer (54 frente a 69 por transcripciones de cada gen). Los autosomas individuales se agrupan en el orden de las densidades de genes. Los cromosomas 2, 3, 4, 5, 8, 13 y 18 se clasificaron en el grupo de bajo gen densidad de menos de cinco genes por segmento de 1 Mb. Los cromosomas 11, 16, 17, 19, 20 y 22 tenían una alta densidad de genes de más de ocho genes por segmento de 1 Mb. En consecuencia, de los ocho genes asociados con el cáncer que fueron examinados, seis (los cromosomas 3, 4, 5, 8, 13 y 18) pertenecían a los cromosomas genes de los pobres, y los dos genes restantes pertenecían al intermedio (el cromosoma 9 ) y alta (los grupos 17) de genes densidad de cromosomas. Los cromosomas 17 y 13 contenían altas y bajas densidades de genes (13,4 y 2,7 ​​por genes segmento de 1 Mb), respectivamente. Cromosoma 17 mostró una alta frecuencia de LOH en la LOH-L (49%) pero no en los casos LOH-B (13%). La frecuencia de la pérdida del cromosoma 13 fue similar en los casos LOH-B (27%) LOH-L (25%) y. Tabla 2 La densidad de genes, los genes altamente expresados, y el nivel de LOH en los cromosomas individuales estimados en el estómago cancerosos y tejidos no cancerosos
N °
de genes por un segmento de 1 Mb *
Top 100 genes altamente expresados ​​
(Nº de transcripciones de genes) *
Nivel de LOH (%) §




línea de base gratis (n = 15) guía empresas de baja gratis (n = 65) guía empresas de alta gratis (n = 50)
cromosomas asociados a cáncer
La
3 4.9 página 3 (76)
1 (7): perfil 18 (28)
28 (56)
4 de 3.6 página 5 (53) página 2 (13) página 12 (18)
33 (66) página 5
4.4
4 (44)
0 (0) página 14 (22)
37 (74) página 8
4.1 página 3 (32)
0 (0)
9 (14)
21 (42) página 9
5.2 página 4 (60)
1 (7)
15 (23)
34 (68)
13
2.7 página 2 (121) página 4 (27)
16 (25)
37 (74) 17

13.4 página 5 (42)
2 (13)
32 (49)
43 (86) 18

3.2
0 (0) 1
(7): perfil 18 (28)
36 (72) Los valores medios

4,8
3.3 (54) en otras cromosomas
1

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