Zmanjšano izražanje prenil difosfat- sintaze podenote 2 povezana z zmanjšanim preživetjem bolnikov z želodca cancer

zmanjšala izražanje prenil difosfat- sintaze podenote 2 povezana z zmanjšano preživetje bolnikov z rakom želodca
Abstract
Ozadje
Identifikacija novih molekularnih biomarkerjev bo izboljšala upravljanje bolnikov z rakom želodca (GC). Prenil difosfat sintaza podenote 2 (PDSS2), ki je potrebna za koencim Q10 biosintezo in deluje kot zaviralnih; Vendar pa sta vloga in regulatorni mehanizmi PDSS2
v GC niso razumeli. Cilj te raziskave je bil ugotoviti stanje izražanja in regulativne mehanizme PDSS2
v GC.
Metode
Združenja med izražanja in metilacije PDSS2
so ovrednotene po GC celičnih linij. Klinični pomen PDSS2
izražanja je bil ovrednoten z 238 parov kirurško odstranjenimi želodčnega tkiva s analizi podskupin glede na GC podtipe.
Rezultati
izražanja PDSS2
mRNA se je zmanjšala na 73% GC celice črte v primerjavi s kontrolno ne-rakave celice. V PDSS2
promotor je hypermethylated v celicah z zmanjšanim PDSS2
izražanja in zdravljenju teh celic z zaviralcem metilacije aktivirali PDSS2
izraz. GC tkiva, izražena bistveno nižje povprečne stopnje PDSS2
mRNA v primerjavi s sosednjimi normalnih tkivih (P
< 0,001). Izraz vzorec PDSS2 beljakovin je bil skladen z njeno mRNA. Zmanjšanje PDSS2
mRNA izražanja v GC tkivih (manj kot polovica nivo izražanja, odkritih v ustreznih normalnih sosednjih tkiv), bistveno povezana s povišano ravnijo antigena ogljikovih hidratov 19-9 (P
= 0,015), bezgavk metastaze (P
= 0,022), in krajše preživetje ponovitve prosto po kurativno resekcijo (P
= 0,022). Nadalje, multivariatna analiza opredelila PDSS2
mRNA izraz kot neodvisni prognostični faktor (razmerje tveganj 1,95, 95% interval zaupanja 1.22-3.09, P
= 0,005), in njen izraz vzorec in prognostični pomen, so bili podobni med tremi GC podtipov .
sklepe
PDSS2
kodira domnevnega zaviralnih in bomo pokazali tu, da je bil njen izraz ureja hypermethylation njegovega promotorja v GC celicah. Zaviranje PDSS2
ekspresijo mRNA lahko služijo kot nove biomarker vseh vrst GC.
Ključne besede
Rak želodca prenil difosfat sintaze podenoto 2 Expression metilacija Podvrsta Ozadje
Čeprav se je incidenca raka želodca (GC) upada v večini razvitih držav, je še vedno eden od najpogostejših vzrokov smrti, povezanih z rakom na svetu [1] - [3]. Primerno stratifikacija bolnikov je ključni vidik individualno zdravljenje, kar vodi v zmanjšanje umrljivosti iz tega raka [4], [5].
V skladu z njeno epidemiologijo, patologijo, in mesto v telesu, GC je priznan kot tri različne malignih obolenj nastane v istem organu [6] - [8]. Shah et al. [9] predlagala prepričljivo razvrstitev GC po histopatološke in anatomskih merilih, kot sledi: (1) proksimalna nondiffuse GC, kjer je tumor nahaja v glavnem v želodčnem Kardije z znaki predhodnikov žleznega displazije ali in situ karcinoma v prisotnosti kroničnega vnetja , običajno brez atrofije; (2) razpršeno GC, ki se lahko nahajajo kjer koli v želodcu brez očitnega gastritisa, ki izkazuje povsem razpršeno vzorec infiltracijo celic s slabo diferencirano fenotipa; in (3) distalni nondiffuse GC, ki se nahaja v glavnem v distalnem želodcu z znaki kroničnega gastritisa, ki je pretežno diferencialni ali razstavlja za črevesne fenotip. V tej študiji so dokazali, da so trije GC podtipi odlikuje z njihovimi izražanja genov profilov. Zato je treba upoštevati genetsko raznolikost GC podtipov študije genetskih in epigenetskih sprememb povezanih z želodčno kancerogenosti in napredovanje.
Prenil difosfat sintaze podenoto 2 (PDSS2
) je bila ugotovljena v letu 2005 [10], in dokazi kažejo, da deluje kot zaviralnih [11], [12]. PDSS2
je potreben za sintezo koencima Q10 (CoQ10) [13], [14], ki se sintetizira v mitohondrijski notranje membrane in igra ključno vlogo pri mitohondrijski dihalni verigi, biosintezo pirimidinski nukleozidni in modulacijo apoptoze [15]. PDSS2
prebiva v kromosomske locus 6q16.3-21, mesto pogostega mikrosatelitne nestabilnosti DNK in izgube heterozigotnosti (LOH) v GC [16], [17], ki podpira svojo vlogo kot supresorski tumorja v epitelijskih celic želodca . Poleg tega lahko PDSS2
zavirajo razvoj malignih melanomov in pljučnega raka [11], [12]. Poleg tega, Chen et al. poročali, da izvrši čezmerno PDSS2
vodi do apoptoze v celični liniji GC, ki ga povzroča aretacijo celičnega cikla v fazi G0 /G1 [18]. Ta poročila nas je vodilo, da bi hipotezo, da
je PDSS2 potencialno povezanih z GC gen in kandidatka za novo klinično relevantnim prognostični označevalec GC.
V tej študiji, izražanja in metilacijskega statusa PDSS2
v GC je bila odločena oceniti klinični pomen in regulativne mehanizme za PDSS2
izražanja v PK. Naši rezultati kažejo, da PDSS2
izraz omogoča potencialno klinično biomarker za napredovanje in ponovitve GC.
Material in metode
etike
Ta študija je skladna z etičnimi usmeritvami Svetovnega zdravniškega združenja Helsinški deklaraciji -Ethical Načela za medicinske raziskave, ki vključujejo ljudi in je bil odobren s revizijski odbor institucionalne Nagoya University, Japonska. Pisna obvestila, soglasje za uporabo kliničnih vzorcev in podatkov, kot jih zahteva institucionalni pregled krovu, je bila pridobljena iz vseh bolnikih, [4]. Zbiranje
Vzorec
celičnih linijah Enajst GC (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-NU in SC-6-LCK) in CCL-241 (celična linija nerakasta izvira iz tankega črevesa) smo dobili od American Type Culture Collection (Manassas, VA, ZDA) ali Tohoku University, Japonska. celične linije so bile GC kultiviramo pri 37 ° C v RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA) z dodatkom 10% fetalnega govejega seruma v atmosferi, ki vsebuje 5% CO 2. Za CCL-241, smo dodali 30 ng /ml epidermalnega rastnega faktorja (Sigma-Aldrich) v mediju. Primarni GC tkiva in pripadajoče normalne sosednja tkiva so bili zbrani od 238 bolnikov, ki so doživeli v želodcu resekcijo za GC na University Hospital Nagoya med letoma 2001 in 2012. Pri bolnikih, ki so prejeli novi dopolnilni terapiji, so bili izključeni, ker je bilo težko pridobiti rakavih celic brazgotinasto tkivo. Osebki so razdeljeni histološko uporabo 7. izdaja unije za mednarodno klasifikacijo Cancer Control (UICC) [19]. Pomembne clinicopathological parametre smo pridobili iz medicinske dokumentacije. Za oceno, ali
raven izraz PDSS2 povezana z tumorja fenotip, so bolniki razvrščeni v tri skupine glede na opredelitev GC podtipov v skladu z merili iz Shah et al. [9], kot sledi: proksimalna nondiffuse, difuzno in distalno vrsto nondiffuse. Od leta 2006, je adjuvantno kemoterapijo z uporabo S-1 (ustna fluoriranih pirimidinski) damo vse stopnje UICC II-III bolnikov z GC razen če bolnikovega stanja [20] kontraindicirana. Bolnike so vsaj enkrat vsake 3 mesece za 2 leti po operaciji in nato vsakih 6 mesecev za 5 let ali do smrti. Fizični pregled, laboratorijske preiskave in okrepljeno CT (prsni koš in trebušno votlino) smo izvedli ob vsakem obisku. Kemoterapija za bolnike z oddaljene metastaze ali po ponovitve bila določena z preudarku zdravnika. Vzorce
Tkivo smo takoj zamrznili v tekočem dušiku in shranili pri -80 ° C. Vzorci tumor brez odmrlih področjih (približno 5 mm 2) so bili pridobljeni z bruto opazovanja in le vzorcih potrjeno, da vsebujejo več kot 80% tumorskih sestavne dele, ki jih H & E obarvanje so bili vključeni v to študijo. Ustreza normalne sosednje želodčne sluznice vzorcev > 5 ° cm od roba tumorjev smo pridobili iz istega bolnika [21]
kvantitativno realnem času povratne transkripcijske verižna reakcija s polimerazo (QRT-PCR)
Skupaj RNA. (10 mikrogramov na vzorec) smo izolirali iz celične linije 11 GC, CCL-241, so uporabili 238 primarni GC tkiva in ustreza normalne sosednja tkiva ustvariti cDNA, ki so ojačani s pomočjo posebnih PCR začetnih oligonukleotidov (Dodatni datotek 1: Tabela S1). detekcija v realnem času SYBR® intenzivnosti Green fluorescence je bila izvedena z uporabo ABI StepOnePlus PCR v realnem času System (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA). Izraz GAPDH
mRNA je količinsko v vsakem vzorcu za standardizacijo. Reakcije QRT-PCR v vsakem vzorcu smo izvedli v treh izvodih. Nivo izražanja vsakega vzorca je predstavljen kot vrednost PDSS2
amplikon deljeno s tem, da od GAPDH
[22]. PDSS2
mRNA izraz je definirano kot zmanjšanje v GC tkivih, ko je njegova količina manj kot polovica ustreznega normalnega sosednje tkivo.
Analiza promotorsko regijo PDSS2
nukleotidno sekvenco PDSS2
promotor regijo smo analizirali za ugotavljanje prisotnosti ali odsotnosti CpG otokov opredeljene takole: vsaj 200-bp regijo DNA z visoko vsebnostjo GC (> 50%) in opaznega CpG /Pričakovana CpG razmerje ≥0.6 [23] . Uporabili smo CpG Otok iskalec programske opreme (http:.. //cpgislands USC edu /) za določanje lokacije CpG otokov [24]
metilacije specifične PCR (MSP) in bisulfit zaporedno analizo
. PDSS2
poseduje otok CpG blizu svojega promotorja regiji, smo predpostavili, da je zmotno metilacija odgovoren za regulacijo transkripcije PDSS2
v GC. vzorce DNK iz linije 11 GC celic, zdravljenih z bisulfit bili podvrženi PPN in analiza nukleotidno zaporedje [25]. Sekvence začetnih oligonukleotidov, ki se uporabljajo za PPN in bisulfita sekvenciranja so navedene v dodatni datoteki 1: Tabela S1
5-aza-2'-deoksicitidin (5-aza-DC) zdravljenje
Za oceno odnos promotorja hypermethylation na PDSS2.
prepisu, GC celice (1,5 x 10 6), smo obdelali s 5-aza-DC (Sigma-Aldrich), da inhibira DNA metilacije in kultiviramo 6 dni s srednjimi sprememb na dan 1, 3 in 5. RNA je bila vzeta, in RT-PCR smo izvedli, kot je opisano [7].
imunohistokemija (IHK)
IHC analizo lokalizacijo PDSS2 smo izvedli z uporabo mišjega monoklonskega protitelesa proti PDSS2 (ab119768, Abcam, Cambridge, Velika Britanija ) razredčimo 1: 150 v redčila protiteles (Dako, Glostrup, Danska), da sonda 30 reprezentativnih formalinu fiksno in parafinske vgrajene dele dobro ohranjeno GC tkiva prej [3] opisanega. Barvanje vzorcev smo primerjali med GK in ustreznimi normalnimi sosednjih tkiv. Da bi se izognili subjektivnosti, so bili osebki naključno označeni pred analizo dveh neodvisnih opazovalcev, ki so bili ne zavedajo stanja vzorcev. Vsak opazovalec ocenili vse vzorce vsaj dvakrat zmanjšati razlike znotraj opazovalca [7].
Ocena kliničnega pomena PDSS2 izražanja
korelacije med vzorcu PDSS2
mRNA izražanja in clinicopathological parametri so bili ocenjeni v skladu z razlike med temi tremi GC podtipov. Analiza podskupin preživetja po GC podtipa so želeli določiti vpliv PDSS2
izražanja na rezultate pacientov.
Statistična analiza
relativnih ravni mRNA izražanja (PDSS2 /GAPDH
) med GC in v bližini normalne tkiva smo analizirali s testom
Mann-Whitney U. 2. Preskus χ
je bila uporabljena za analizo pomen povezave med statusom ekspresije in metilacijskega PDSS2
in clinicopathological parametrov. Bolezen specifične in stopnje preživetja brez bolezni so bile izračunane po metodi Kaplan-Meier, in razlika v krivulje preživetja smo analizirali s testom log-rang. Smo izvedli multivariatno regresijsko analizo za odkrivanje napovednih dejavnikov z uporabo Cox sorazmernih tveganj modela in spremenljivke s P
< 0.05 so bili vpisani v končnem modelu. Vse statistične analize smo izvedli s pomočjo JMP 10 programske opreme (SAS Institute Inc, Cary, NC, ZDA). Vrednost P
< 0.05 zdela statistično značilne.
Rezultati
Identifikacija otoku CpG v promotor PDSS2
A smo otok CpG opredeljenih v PDSS2
promotorja regiji z uporabo CpG Island iskalec. Lastnosti otoka CpG so naslednji: 1655 bp, 55,9% GC in 0,70 opaznega CpG /Pričakovano razmerje CpG (slika 1A). Zato smo predpostavili, da hypermethylation od CpG otokov regulira ekspresijo PDSS2
v GC. Slika 1 Metiliranje analize PDSS2 v GC celičnih linijah. (A) Otok CpG z modro črto navedeno je osredotočen na PDSS2
prepis začetno stran, ki se razteza navzgor proti promotorja regiji. (B) Bar grafikoni PDSS2
ravni mRNA izražanja v CCL-241 (nadzor nad ne-rakavo celico) in celičnih linij GC pred ali po zdravljenju 5-aza-DC. Status metilacija PDSS2
promotor je bil ovrednoten z PPN, in rezultati so priložene v škatli. M, metiliran; pM, delno metiliran; U nemetiliran. (C) Reprezentativni rezultati bisulfita sekvenčno analizo. Vse CpG mesta v KATOIII celici bili izbrani, saj CG in tiste MKN74 so bili pretvorjeni v TG.
PDSS2 mRNA izražanja in metilacijskega statusa v celičnih linijah GC PODJETJA
so bile odkrite v sedmih Pomembnejše zmanjšanje PDSS2
mRNA (73 %) 11 GC celičnih linij v primerjavi z nivojem ekspresije v CCL-241 celice (Podatki za GC tkiva so opisani spodaj). Ni bilo jasno, razlike v stopnjah izražanja med celičnih linij, pridobljenih iz diferencirane in nediferencirane GK (slika 1B). Hypermethylation zaradi tega PDSS2
promotor je bila odkrita v MKN1, SC-2-NU, KATOIII, MKN45 in NUGC3 celic (slika 1B). Da bi ugotovili, ali hypermethylation zaradi tega PDSS2
promotor zaviral transkripcije, so mRNA izraz v primerjavi pred in po zdravljenju celice z metilacije inhibitor 5-aza-DC. PDSS2
ravni mRNA bila obnovljena v celicah z navzdol urejeno PDSS2
izraz, ki spremlja hypermethylation po zdravljenju 5-aza-DC (slika 1B), kar kaže, da promotor hypermethylation zaviral PDSS2
transkripcijo v GC. Reprezentativne kromatogrami analize zaporedju PDSS2
promotorja regiji MKN28 (popolna metilacije) in NUGC4 (odsotnost metilacije) celice so prikazani na sliki 1C.
Značilnosti bolnikov
Populacijo bolnikov je sestavljalo 179 samcev in 59 ženske, stare od 20 do 84 let (65,3 x 11,7 let, povprečna × standardnega odklona). Patološko, je bilo 139 in 99 bolnikov z diagnozo nediferencirani in diferencirano GC oz. Bolniki so bili razdeljeni v tri GC fenotipov, kot sledi: nondiffuse, 54; difuzna, 48; in distalni nondiffuse, 136. Po 7. različico klasifikacije UICC so bile 58, 40, 71 in 69 bolnikov v fazi I, II, III in IV oz. Sto štiriinšestdeset bolnikov v stadijih I-III doživela kurativna R0 resekcijo. Šestdeset od 69 bolnikov v UICC fazi IV so diagnosticirali v fazi IV zaradi pozitivnega peritonealno izpiralni citologijo, lokalizirana peritonealno metastaz ali daljni bezgavkah metastaze. Osem bolnikov v stadiju IV imel sinhrono jetra metastaz, ena je imela pljuč metastaze, in so preživeli želodca namenjen za nadzor krvavitev ali ovire za prehod hrane.
Ravni izražanja PDSS2 mRNA in beljakovin v kirurško odstranjenimi tkivih
pomeni raven izraz PDSS2
mRNA je bila nižja v GC tkiva v primerjavi z običajnimi sosednjih tkiv (P
< 0,001); Vendar pa ni bilo bistvene razlike v PDSS2
ravni mRNA izražanja med bolniki z nediferencirani ali diferencirano GC (Slika 2A). Izraz vzorec PDSS2 je bil ovrednoten z IHC. Reprezentativni primeri z zmanjšano PDSS2 barvanjem GC tkiv so prikazani na sliki 2B. Na splošno so bili barvanje vzorci PDSS2 skladni s podatki o QRT-PCR. Slika 2 Izražanje analize PDSS2 v kliničnih vzorcih. (A) povprečna stopnja PDSS2
mRNA v GC tkiva v primerjavi z ustreznimi normalnimi sosednjih tkiv in GC tkivih med bolniki z nediferencirani GC in diferencirano GC. Podatki (B) Predstavnik IHC primerjavo PDSS2 izraz v tumor in sosednjih zdravih sosednje tkivo (povečava 100 × in 400 ×). N, normalno sosednja tkiva; T, tumorsko tkivo.
Prognostične posledice stopnjah izražanja PDSS2 mRNA
Izraz PDSS2
mRNA v GC tkivih se je zmanjšala pri 76 (32%) od 238 bolnikov (manj kot polovico ravni izražanja, odkritih v ustrezne običajne sosednjih tkiv). Stopnja specifične bolezni preživetje bolnikov z zmanjšano raven PDSS2
mRNA v GK je bila precej nižja v primerjavi s tistimi, ki brez (mere 5-letno preživetje, 36% in 64%, p
< 0,001, slika 3A). Zmanjšana so ravni PDSS2
mRNA v GK značilno povezana z antigenom ogljikovih hidratov (CA) 19-9 > 37 ie /ml in bezgavk metastaze (tabela 1). Univariatna analiza preživetja posamezne bolezni, je pokazala, da je GC podtip (proksimalni nondiffuse ali difuzna), CA 19-9 > 37 ie /ml, velikost tumorja (≥50 mm), PT4, nediferencirani tumor, limfna vključenost, invasion plovilo, invazivne rasti, bezgavko metastaze, pozitiven peritonealna izpiranje citologija in zmanjšala PDSS2
mRNA izražanja v GC tkivih so pomemben prognostični dejavniki neželenih izidov. Multivariatna analiza opredelila zmanjšala PDSS2
mRNA izraz kot neodvisni prognostični faktor (razmerje tveganj 1,95, 95% interval zaupanja 1.22-3.09, P
= 0,005, tabela 2). predpostavka o sorazmernih tveganj v modelu Cox je bila ocenjena z modeli vključno s časom-by-kovariablo interakcij in brez bistvenih kršitev so našli v modelu. Slika 3 prognostični posledice PDSS2 ekspresijo mRNA pri bolnikih z GC. (A) za bolezen specifična preživetje bolnikov z zmanjšanim PDSS2
mRNA v GC tkiva. (B) (C) Bolezen specifične (B) in ponovitev brez (C) preživetje pri 168 bolnikih, ki so kurativna R0 resekcijo.
Tabela 1 zveza med stopnjo ekspresije PDSS2 mRNA in clinicopathological parametrov 238 bolnikov
spremenljivk
DecreasedPDSS2
mRNA v GC tkiva (n)
Drugo (n)
P
vrednosti
Starost
0,408
< 65 let
29
71
≥ 65 let
47
91
Spol
0.551
Male
59
120
Moški
17
42
Podvrsta
0,298
Proksimalni nondiffuse
22
32
razpršenih
14
33
Distalno nondiffuse
40
96
karcinoembrionalen antigen (ng /ml)
0,490
≤ 5
59
132
> 5
17
30
ogljikovih hidratov antigen 19-9 (ie /ml)
0,015 *
≤ 37
55
139
> 37
21
23
velikost tumorja (mm)
0,104
< 50
29
80
≤ 50
47
82
Tumor globina (UICC)
0,419
PT1
14
32
PT2
6
24
PT3
19
33
PT4
37
73
Diferenciacija
0,217
diferencirana
36
63
nediferencirani
40
99
Limfna sodelovanje
0,201
Odsoten
8
27
Predstavite
68
135
invazija plovilo
0,535
Odsoten
31
73
Predstavite
45
89
infiltracijsko tip rasti
0,443
invazivne rasti
24
59
ekspanzivne rasti
52
102
bezgavko metastaze (UICC)
0,022 *
pN0
19
70
pN1
8
19 Druga
pN2
12
24-
pN3
37
49
peritonealni izpiranje citologijo
0.306
Negative
57
131
Pozitivna
19
31
Distant metastaze (UICC)
0,228
M0
50
119
M1
26
43
* Statistično pomembno (P
< 0,05). GC, želodčni rak; UICC, Združenje za mednarodni nadzor raka.
Tabela 2 napovednih dejavnikov za preživetje specifičnih bolezni 238 bolnikov
spremenljivk
n (%)
Univariatna
multivariabilen
razmerje tveganj
95% CI
P
vrednost
razmerje ogroženosti
95% CI

P
vrednost
Age (≥65)
138 (58%)
1.04
0,67-1,61
0,843
spol (ženski)
59 (25%)
1,29
0.79 - 2.05
0,301
Podvrsta (distalni nondiffuse)
136 (57%)
0,43
0,28-0,67
< 0,001
0,64
0,40-1,01
0,056
karcinoembrionalen antigen (> 5 ng /ml)
47 (20%)
1,48
0.86 - 2.42
0.149
ogljikovih hidratov antigen 19-9 (> 37 IU /ml)
44 (18%)
1,98
1.17 - 3.20
0.012
1.23
0,71-2,06
0,445
velikost tumorja (≥50 mm)
129 (54%)
2,86
1,78-4,80
< 0,001
1.40
0,83-2,42
0,211
Tumor globina (PT4, UICC)
110 (46%)
4.17
2,61 - 6,88
< 0,001
1.38
0,78-2,50
0,273
Tumor diferenciacija (nediferencirani)
139 (58%)
2,03
1.28 - 3.32
0,002
1,45
0,83-2,60
0,197
limfatičnega sodelovanje
203 (85%)
6.31
2,36 - 25,8
< 0,001
1,45
0,45-6,50
0,559
invazija plovila
134 (56%)
2.65
1,66-4,37
< 0,001
1,75
1,07-2,97
0,026 *
invazivno rast
83 (35%)
3,03
1.97 - 4.70
< 0,001
1.19
0,70-2,05
0,520
limfnega vozla metastaze
149 (63%)
7,02
3,70-15,1
<0,001
1.38
0,56-3,81
0,503
peritonealni izpiranje citologijo (pozitivno)
50 (21%)
4.33
2,76 - 6,74
< 0,001
1,87
1,14-3,06
0,014 *
UICC faza (III-IV)
140 (59%)
9,68
4,97-21,8
< 0,001
2.63
0,94-7,83
0,065
Zmanjšana PDSS2
mRNA v GCS
76 (32%)
2.18
1,40 - 3,37
< 0,001
1.91
1,19-3,04
0,008 *
* Statistično pomembno v multivariatno analizo. GC, želodčni rak; CI, interval zaupanja; UICC, Združenje za mednarodni nadzor raka.
Od 168 bolnikov, ki so doživeli kurativna R0 resekcijo je bila stopnja preživetja za posamezne bolezni bistveno nižje za tiste z zmanjšano PDSS2
mRNA izražanja v GK (n = 50) v primerjavi s tistimi, ki ne (n = 118) (5-letna stopnja preživetja, 50% in 77%, oziroma P
= 0,006, slika 3B). Bolniki z zmanjšano PDSS2
mRNA izraz v GK po operaciji je prišlo do znatno prejšnjih ponovitev v primerjavi s tistimi, ki brez (ponovitve brez preživetja 2 let, 64% in 84%, v tem zaporedju, P
= 0,022, 3C). Začetne ponovitve mesta za 43 ponavljajočo bolnikih z zmanjšanim PDSS2
mRNA izraz v GK so peritonealna v 21 (49%), jetra pri 6 (14%), bezgavke v 13 (30%) in drugih (npr pljuč in kosti) pri 3 pacientih. Po drugi strani pa tistih 61 bolnikov recidivno brez zmanjšane PDSS2
bili peritonealno pri 35 (57%), jetra pri 10 (16%), bezgavk pri 8 (13%) in drugim pri 8 bolnikih. Bolniki z zmanjšano PDSS2
mRNA izraz v GK je bilo verjetno, da bi vozlišče ponovitev, čeprav ni dosegla statistične značilnosti.
Analizi podskupine PDSS2 izražanja v skladu z GC podtip
Mean PDSS2
mRNA izražanja ravni enakovredna v GC in normalnih sosednjih tkiv (slika 4A). Podobno je prognostično vrednost znižala PDSS2
mRNA izraz v GK je bila primerljiva med tremi GC podtipov (slika 4B). Slika 4 Analiza podskupin GC podtipov. Ravni izraz (A) PDSS2
mRNA med tremi GC podtipov tako v GC in normalnih sosednjih tkiv. (B) Primerjava preživetja specifične bolezni bolnikov z in brez zmanjšala PDSS2
mRNA izražanja v GK vsakega GC podtipa.
Razprava
PDSSs so heterotetramerni encimi, ki obsega podenote kodirane s PDSS1
(10p12. 1) in PDSS2
[10], [12]. PDSS dejavnost zahteva tako podenote [10] [14] [15]. Združenje PDSS2
z GC je zdelo, ker je kromosomske lokacijo (6q21), in zaradi svoje inaktivacije ali izgube iz nekaterih malignih obolenj [16], [26]. Tukaj bomo pokazali, da je bila PDSS2
mRNA heterogeno izražena v GC celičnih linijah, in njen izraz je zaviral 73% in 32% celičnih linij GC in tumorskih tkivih, v tem zaporedju. Zaznali smo hypermethylation v tem PDSS2
promotorja v petih (45%) celičnih linij 11 GC z znatno znižane ravni PDSS2
izražanja. Nadalje je PDSS2
transkripcija aktiviran, ko smo celice obdelali z inhibitorja metilacije DNA. Te ugotovitve so prvi, ki nam je znano, da pokažejo, da je promotor hypermethylation ureja PDSS2
prepis. Vendar pa je bila PDSS2
Izraz se je v nekaterih GC celicah brez hypermethylation. Ker kromosom 6q je pogost mesto LOH v GC [17] [26] [27], LOH lahko urejajo PDSS2
izraza, kot dobro.
Prišlo je poročilo, ki dokazuje, da je bilo PDSS2
izrazil na zmanjšano ali nezaznavno izražanja v majhnem številu biopsijo vzorcev GC [18]. V tej raziskavi smo analizirali 238 kirurške primerkov tumorjev in ustrezno vpletala tkivo za pridobivanje dodatnih vpogled v kliničnem pomenu PDSS2
izražanja v PK. V skladu z analizami malignega melanoma in pljučnega raka [11], [12], večina bolnikov z GC gojila zmanjšano raven PDSS2
mRNA v GC tkivih in srednja bil PDSS2
nivo izražanja v GC znatno zmanjšal v primerjavi z običajnimi sosednjih tkiv. IHC je bila izvedena za ugotavljanje, ali je raven mRNA odraža PDSS2
beljakovin izraz. Ker rezultati IHC je pokazala, da so bili podatki o mRNA v skladu z ravnijo beljakovin, so poznejše analize izvedli po podatkih mRNA, ki so bolj podvrženi kvantitativno analizo [7], [23].
Zmanjšana PDSS2
mRNA izraz v GK je bistveno povezano s povišano predoperativnih ravni CA19-9 in bezgavkah metastaze in je bila opredeljena kot neodvisni prognostični dejavnik. Še več, bolniki z zmanjšano PDSS2
mRNA izražanja v GC tkivu izkušnjami bistveno prej ponovitev po R0 resekcijo. Nedavno Chen et al. raziskovali aktivnost tumorjem zatirati z PDSS2
na pljučnega raka [28]. So poročali, da je prisilno čezmernim PDSS2
povzročil ogromno celično smrt z apoptotska poti in oblikovanje bistveno blokiranem kolonije in ni bilo Obratno sorazmerje med PDSS2
izražanja in gelsolin izražanja, ki je znano, da zavirajo apoptozo in okrepiti celično invazijo in metastaze [29], čeprav PDSS2 ni vplival na občutljivost rakavih celic na citostatikov, [28]. Ta mehanizem tumor omejevalno od PDSS2
lahko uporablja za GC, kot tudi.
Izraz vzorec PDSS2
mRNA in njenega prognostičnega vplivom so bili podobni med tremi GC podtipov (proksimalni nondiffuse, razpršeno in distalni nondiffuse) To kaže, da PDSS2
izraz vpliva na patogenezo vseh vrst GC. Shah et al. poročali, da je ena tretjina pomnoženih genov, morda tudi PDSS2
, je pokazala, enakovreden izraz vzorec med tremi GC podtipov [9].
GC je eden od tumorjev z visoko frekvenco odklonskega metilacije, in se pogosto kaže CPG otok methylator fenotip [30], [31]. Izraz velikega števila genov zavirajo CpG otoku hypermethylation v GC celic, vključno s tistimi, tumorskih razbijal kodiranja, regulatorji celičnega ciklusa, induktorji in rablji apoptoze, beljakovin, ki spodbujajo invazivno fenotip in DNA neusklajenost popravila encimi [32]. Te epigenetske spremembe lahko služijo kot biomarkerjev, ki osvetljujejo povečano metastatskega potenciala in agresivnega tumorja fenotip [33], kot tudi terapevtske cilje [34]. Zato bo identifikacija drugih genov, ki jih ureja metilacije v GC celicah verjetno izboljšanje upravljanja GC
Funkcija tumor omejevalno od PDSS2
so podprte s temi ugotovitvami, kot sledi:. (1) zmanjšalo izražanje PDSS2
je pogosto odkrita v GC tkivih, (2), srednja stopnja PDSS2
izražanja je bila bistveno nižja v GC tkivih, in (3) zmanjšalo izraz PDSS2
je bila povezana z zgodnjim ponovitve in kasnejšo slabo prognozo. PDSS2
stopnje izraženosti v biopsije tkiva, pridobljen z uporabo vzorcev nadzora endoskopsko ali pri kirurških osebki lahko uporabni za napovedovanje zgodnje ponovitve in slabo prognozo, ki bo verjetno prizadevanja za pomoč pri oblikovanju bolj učinkovito terapevtsko strategij.
Ta študija je bila omejena z njeno nezadostna funkcionalno analizo PDSS2
, ki zmernejši zaključka, da deluje kot supresorski tumorja v PK. Nadaljnje raziskave, vključno z analizo pot v želodcu kancerogenosti in funkcionalne analize se pričakuje, da pojasnijo molekularne mehanizme, ki podpirajo biološke aktivnosti PDSS2
v GC.
Zaključek
Skratka, naše ugotovitve podpirajo sklep, da je izraz domnevni zaviralnih genov PDSS2
ureja promotorja hypermethylation v GC celicah in navesti. Naši rezultati nadalje kažejo, da se je zmanjšala izražanje PDSS2
mRNA lahko predstavlja nov biomarker za napredovanje in ponovitve vseh vrst GC. Prispevkov
avtorjev
MK, HO, FS, DS, HT, RH in KM izvedli poskuse in analiza podatkov. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF in YK zbranih primerov in klinične podatke. MK in SN zasnovana in izdelana študija, in pripravila začetno rokopis. YK nadzoruje projekt.

• Želodca merjenje očesnega tlaka vsaki vodeno zdravljenje pri bolnikih kritičnih nego: sistematični pregled in metaanaliza
• Uporabnost citokeratinov 7 in 20 (CK7 /20) imunohistokemija v razlikovanju kratkega odseka Barrett požiralniku iz želodca intestinalno metaplazijo: Ali je zanesljiv?