Znížená expresia prenyl nukleoziddifosfát syntázy podjednotky 2 koreluje so zníženou prežitia u pacientov so žalúdočnými cancer

znížená expresia prenyl nukleoziddifosfát syntázy podjednotky 2 koreluje so zníženou prežitia pacientov s rakovinou žalúdka
abstraktné
pozadia
identifikácia nových molekulárnych biomarkerov zlepší starostlivosť o pacientov s rakovinou žalúdka (GC). Prenyl nukleoziddifosfát syntázy podjednotky 2 (PDSS2) je nutné pre biosyntézu koenzýmu Q10 a pôsobí ako nádorový supresor; Avšak role a regulačné mechanizmy PDSS2
v GC nie sú chápané. Cieľom tejto štúdie bolo zistiť stav prejavu a regulačné mechanizmy PDSS2
v GC.
Metódy
asociácie medzi expresiou a metylácii PDSS2
boli hodnotené pomocou GC bunkových línií. Klinický význam PDSS2
expresie bola hodnotená za použitia 238 párov chirurgicky resekcii žalúdka tkanív analýzy podskupín na základe GC subtypy.
Výsledky
expresiu PDSS2
mRNA bola znížená na 73% GC bunky línie v porovnaní s kontrolnou non-rakovinové bunky. V PDSS2
promótor hypermethylated v bunkách so zníženou PDSS2
prejavu a liečbu týchto buniek s inhibítorom metylácie reaktivovať PDSS2
výraz. GC tkaniva vyjadrená výrazne nižšie priemerné hladiny PDSS2
mRNA v porovnaní so susednými normálne tkanive (P Hotel &0,001). Expresného profilu PDSS2 proteínu je v súlade s tým jeho mRNA. Pokles PDSS2
expresie mRNA v tkanivách GC (menej ako polovica hladina expresie detekovaná v zodpovedajúcich normálnych okolitého tkaniva) významne koreluje so zvýšenou hladinou sacharidov antigénu 19-9 (P
= 0,015), lymfatických uzlín metastáz (P
= 0,022) a kratšie bez návratu prežitie po kuratívny resekcii (P
= 0,022). Ďalej, viacrozmerné analýza identifikovala PDSS2
expresie mRNA ako nezávislý prognostický faktor (pomer rizika 1,95, 95% CI 1.22-3.09, P
= 0,005) a jeho expresie vzor a prognostický význam boli podobné medzi tromi GC podtypy .
závery
PDSS2
kóduje predpokladaný nádorového supresor, a my sme tu ukázať, že jeho expresia bola regulovaná hypermetylace jeho promótor v GC buniek. Inhibícia PDSS2
mRNA expresie môže slúžiť ako nové biomarker všetkých typoch GC.
Kľúčové
Karcinóm žalúdka prenyl nukleoziddifosfát syntázy podjednotky 2 Expression metylácie Subtyp pozadí
Aj keď je výskyt rakoviny žalúdka (GC) klesá vo väčšine vyspelých krajinách, to ostáva jednou z najčastejších príčin úmrtí na nádorové ochorenie na celom svete [1] - [3]. Vhodné stratifikácia pacientov je kľúčovým aspektom individuálny liečbu, čo vedie k zníženiu úmrtnosti z tejto rakoviny [4], [5].
Podľa svojho epidemiológie, patológie, a umiestnenia v tele, GC sa uznáva ako troch rôznych malignít vznikajúce v rovnakom orgánu [6] - [8]. Shah et al. [9] navrhla presvedčivý klasifikáciu GC podľa histopatologických a anatomických kritérií nasledujúcim spôsobom: (1) proximálny nondiffuse GC, kde sa nádor nachádza hlavne v kardio s dôkazmi prekurzorového žliaz dysplázie, alebo in situ karcinómu v prítomnosti chronického zápalu , zvyčajne bez atrofia; (2) difúzna GC, ktorý môže byť umiestnený kdekoľvek v žalúdku bez zjavnej gastritída, ktorá vykazuje úplne difúzny štruktúru infiltrácie buniek sa zle diferencovaný fenotyp; a (3) distálnej nondiffuse GC, ktorý sa nachádza najmä v distálnej žalúdku sa dôkaz chronickej gastritídy, ktorá je prevažne diferencovanej alebo vykazuje črevnej fenotyp. V tejto štúdii, ktoré preukázali, že tieto tri podtypy GC sa vyznačujú ich profilov génovej expresie. Preto je genetická diverzita GC subtypov je potrebné zvážiť v štúdiách genetickej a epigenetické zmeny spojené s žalúdočnej karcinogenéze a progresii.
Prenyl nukleoziddifosfát syntázy subjednotku 2 (PDSS2
) bol identifikovaný v roku 2005 [10], a dôkazy naznačujú, že pôsobí ako nádorový supresor [11], [12]. PDSS2
je potrebný pre syntézu koenzýmu Q10 (CoQ10) [13], [14], ktorý je syntetizovaný vo vnútornej mitochondriálnej membrány a hrá dôležitú úlohu v mitochondriálnym respiračnom reťazci, pyrimidínová nukleozidové biosyntézu a modulácie apoptózy [15]. PDSS2
sídli v chromozomálnych 6q16.3-21, miesto častého mikrosatelitov DNA nestability a strata heterozygotnosti (LOH) v GC [16], [17], podporovať jeho úlohu ako nádorový supresor v žalúdku epitelové bunky , Okrem toho PDSS2
môže potlačiť vývoj malígnych melanómov a karcinómov pľúc [11], [12]. Okrem toho, Chen et al. uvádzajú, že nadmerná expresia vykonalo PDSS2
vedie k apoptóze v bunkovej línii GC tým, že spôsobujú zástavu bunkového cyklu v G0 /G1 fáze [18]. Tieto správy nás viedli k vytvoreniu hypotézu, že PDSS2
je potenciálnym GC súvisiace gén a kandidátom nových klinicky relevantné prognostický marker GC.
V tejto štúdii, expresiou a metylačného statusu PDSS2
GC boli stanovené zhodnotiť klinický význam a regulačných mechanizmov PDSS2
prejavu v GC. Naše výsledky ukazujú, že PDSS2
výraz poskytuje potenciálny klinickú biomarker progresie a opakovanie GC.
Materiál a metódy
etiky
Táto štúdia zodpovedala na etické pokyny deklarácia Svetovej lekárskej asociácie v Helsinki -Ethical Zásady pre lekársky výskum na človeku a bol schválený Institutional Review Board of Nagoya University, Japonsko. Písomný informovaný súhlas pre použitie klinických vzoriek a dát, ako to vyžaduje inštitucionálnu etickou komisiou, bol získaný od všetkých pacientov. [4] pre odber vzoriek
Jedenásť GC bunkových líniách (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-NU a SC-6-LCK) a CCL-241 (non-rakovinové bunková línia odvodená z tenkého čreva) boli získané z American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) alebo Tohoku University, Japonsko. Bunkové línie GC boli kultivované pri 37 ° C v médiu RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom v atmosfére obsahujúcej 5% CO 2. Pre CCL-241, sa pridá 30 ng /ml epidermálneho rastového faktora (Sigma-Aldrich), v médiu. Primárne GC tkaniva a zodpovedajúce normálne okolité tkanivá boli odobraté z 238 pacientov, ktorí podstúpili resekcii žalúdka pre GC v Nagoya University Hospital v rokoch 2001 a 2012. U pacientov, ktorí dostávali neoadjuvantná terapiu boli vylúčené, pretože bolo ťažké získať rakovinové bunky z zjazvené tkanivo. Vzorky boli klasifikované histologicky pomocou 7. vydanie Únie pre medzinárodnej klasifikácie onkologický (UICC) [19]. Relevantné klinicko-patologické parametre boli získané z lekárskych záznamov. Posúdiť, či hladina expresie PDSS2
koreláciu s nádorovým fenotypom Pacienti boli rozdelení do troch skupín podľa definície GC podtypov podľa kritérií Shah et al. [9] nasledujúcim spôsobom: proximálnej nondiffuse, difúzna, a distálnej typ nondiffuse. Od roku 2006, adjuvantnej chemoterapie s použitím S-1 (orálny fluórovaný pyrimidín) sa podáva pre všetky fázy UICC pacientov s GC II-III, pokiaľ nie je kontraindikovaná podľa stavu pacienta [20]. Pacienti boli sledovaní najmenej raz za 3 mesiace po dobu 2 rokov po operácii a potom každých 6 mesiacov po dobu 5 rokov alebo až do smrti. Fyzikálne vyšetrenie, laboratórne testy a vylepšené počítačová tomografia (hrudnej a brušnej dutiny) bola vykonaná pri každej návšteve. Chemoterapia pre pacientov s vzdialených metastáz alebo po obnovení bola stanovená podľa uváženia lekára. Vzorky
tkanivá boli okamžite zmrazený v kvapalnom dusíku a skladované pri -80 ° C. vzorky nádorov bez nekrotických oblastí (približne 5 mm 2), boli extrahované hrubé pozorovania a odobratých vzoriek je potvrdené, že obsahujú viac ako 80% nádorových komponenty podľa H &E farbenie boli zahrnuté do tejto štúdie. Čo zodpovedá normálnej susedné vzorky žalúdočnej sliznice > 5 ° cm od okraja nádorov boli získané z rovnakého pacienta [21]
kvantitatívnej real-time reverznej transkripcie PCR (QRT-PCR)
Total RNA. (10 ug na vzorku) boli izolované z bunkových línií 11 GC, CCL-241, 238 primárnej GC tkaniva a zodpovedajúce normálne okolité tkanivá boli použité na vytvorenie cDNA, ktoré boli amplifikovanej s použitím špecifických PCR primérov (ďalší súbor 1: Tabuľka S1). detekcia v reálnom čase SYBR Green intenzity fluorescencie bola vykonaná za použitia ABI StepOnePlus real-time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Expresia GAPDH mRNA
bola kvantifikovaná v každej vzorke pre normalizáciu. Tieto QRT-PCR reakcie v každej vzorke boli vykonané v troch opakovaniach. Hladina expresie každej vzorky sú uvedené ako hodnoty PDSS2
amplikónu delená to GAPDH
[22]. PDSS2
expresie mRNA bola definovaná ako znížená GC tkanivách, kedy jej hladina bola menšia ako polovica, že v zodpovedajúcej normálnej susednej tkaniva.
Analýza promotorové oblasti PDSS2
nukleotidovej sekvencie PDSS2
promotorová oblasť bola analyzovaná na určenie prítomnosti alebo neprítomnosti CPG ostrovov definované nasledovne: aspoň 200 bp oblasť DNA s vysokým obsahom GC (viac ako 50%) a zistený pomer CPG /očakávaný CPG ≥0.6 [23] , Použili sme softvéru CPG Island Searcher (http: .. //cpgislands USC edu /) na určenie umiestnenia CPG ostrovov [24]
metylácie špecifickej PCR (MSP) a hydrogensiričitan sekvenčná analýza
. PDSS2
má CPG ostrova v blízkosti svojej promotorové oblasti, a my sme predpokladali, že aberantne metylácie je zodpovedné za reguláciu transkripcie PDSS2
v GC. Vzorky DNA z bunkových línií 11 GC liečených hydrogensiričitan boli podrobené MSP a analýza nukleotidovej sekvencie [25]. Tieto sekvencie primérov použité pre MSP a bisulfitová sekvencovania sú uvedené v ďalšej súbor 1: Tabuľka S1
5-Aza-2'-deoxycitidin (5-aza-DC) ošetrenie
posúdiť vzťah promotorové hypermetylace k PDSS2.
transkripcie, GC buniek (1,5 x 10 6) sa spracuje s 5-aza-dC (Sigma-Aldrich) inhibovať metylácie DNA a pestované po dobu 6 dní sa strednými zmenami v dňoch 1, 3, a 5. RNA bola extrahovaná a RT-PCR bola vykonaná, ako je popísané [7].
imunohistochemicky (IHC)
IHC analýzu lokalizácia PDSS2 bola vykonaná za použitia myší monoklonálne protilátky proti PDSS2 (ab119768, abca, Cambridge, UK ) nariedenou 1: 150 v riedidlom protilátok (Dako, Glostrup, Dánsko), aby sonda 30 reprezentatívnych formalínu fixované a parafínových sekcií dobre zachované GC tkaniva opísaného skôr [3]. Farbenie vzory boli porovnané medzi GC a zodpovedajúce normálne okolité tkanivá. Aby sa zabránilo subjektivitu, boli vzorky náhodne a pred analýzou kódujú dvoma nezávislými pozorovateľmi, ktorí boli vedomí stavu vzoriek. Každý pozorovateľ vyhodnotené všetky vzorky aspoň dvakrát, aby sa minimalizovalo intra-pozorovateľa variácii [7].
Vyhodnotenie klinického významu PDSS2 prejavu
korelácia medzi vzorom PDSS2
mRNA a klinicko-parametre boli hodnotené podľa rozdiely medzi týmito tromi GC subtypov. Podskupina analýza prežitia podľa GC subtyp bol vykonaný na stanovenie vplyvu PDSS2
prejave na výsledky pacientov.
Štatistická analýza
relatívnej úrovne expresie mRNA (PDSS2 /GAPDH
) medzi GC a priľahlé normálne tkanivá boli analyzované s použitím
Mann-Whitneyho testu U. Χ
2 test bol použitý pre analýzu významu asociácie medzi expresiou a metylácie stavu PDSS2 stroje a klinicko-parametrov. Špecifické pre ochorenia a miera prežitia bez známok ochorenia boli vypočítané metódou Kaplan-Meier, a rozdiel v krivkách prežitia bola analyzovaná s použitím log-rank testu. Vykonali sme multivariačný regresnej analýzy pre detekciu prognostické faktory pomocou Coxovho modelu proporcionálneho rizika a premenných s P Hotel < 0.05 boli vložené do výsledného modelu. Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou JMP 10 softvéru (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Hodnota P Hotel < 0,05 bola považovaná za štatisticky významné.
Výsledky
Identifikácia CPG ostrova v PDSS2 promótor
bola CPG ostrova identifikovaný v PDSS2
promotorové oblasti pomocou CPG Island Searcher. Vlastnosti CPG ostrova, sú nasledujúce: 1655 bp, 55,9% GC, a 0,70 Pozorovaná CPG /očakávaný pomer CPG (obrázok 1A). Preto sme predpokladali, že hypermetylace ostrovov CPG reguluje expresiu PDSS2
v GC. Obrázok 1 Metylácia analýzy PDSS2 v GC bunkových línií. (A) CPG ostrova označené modrou čiarou je zameraný na PDSS2
iniciácie transkripcie siahajúca do upstream promotorové oblasti. (B) Bar grafy ukazujú PDSS2
úrovne expresie mRNA v CCL-241 (Control non-rakovinové bunky) a bunkových línií GC pred alebo po liečbe 5-aza-dC. Stav metylácie PDSS2
promótorom bola hodnotená pomocou MSP, a výsledky sú uvedené v rámčeku. M, methylata; pM, čiastočne methylata; U, nemethylovaný. (C) Reprezentatívny výsledky hydrogensiričitanom sekvenčné analýzy. Všetky lokality CPG v KATOIII bunky boli ponechané ako CG a tí MKN74 boli premenené na TG.
Výraz PDSS2 mRNA a stav metylácie v bunkových líniách GC
Výrazný pokles PDSS2
hladiny mRNA boli zistené u siedmich (73 %) z 11 GC bunkových línií v porovnaní s úrovňou expresie v CCL-241 bunky (údaje za rok GC tkaniva sú popísané nižšie). Nebol žiadny viditeľný rozdiel v úrovni expresie medzi bunkových línií odvodených z diferencované a nediferencované GC (obrázok 1B). Hypermetylace zo PDSS2
promótorom bola zistená u MKN1, SC-2-nu, KATOIII, MKN45 a NUGC3 bunkách (Obrázok 1B). Na určenie, či hypermetylace zo PDSS2
promótor inhibuje transkripciu, mRNA hladiny expresie sa porovnali pred a po ošetrení buniek s inhibítorom metylačného 5-aza-dC. PDSS2
mRNA boli obnovené v bunkách s down-regulované PDSS2
expresie sprievodných hypermetylace po liečbe 5-aza-dC (obrázok 1B), čo ukazuje, že promótor hypermetylace inhibuje PDSS2
transkripciu v GC. Reprezentatívny chromatogramy sekvenčná analýza PDSS2
promotorové oblasti v MKN28 (úplnej metylácie) a NUGC4 (neprítomnosť metylácie) buniek sú uvedené na obrázku 1C.
Charakteristiky pacientov
celkovej populácii pacientov bolo 179 mužov a 59 ženy vo veku od 20 do 84 rokov (65,3 × 11,7 rokov, stredná × SD). Patologicky, 139 a 99 pacientov bola stanovená diagnóza nediferencovaných a diferencované GC, resp. Pacienti boli zaradení do troch GC fenotypmi takto: nondiffuse, 54; difúzna, 48; a distálnej nondiffuse, 136. Podľa 7. vydanie klasifikácie UICC, 58, 40, 71 a 69 pacientov bolo v niekoľkých fázach I, II, III a IV, v danom poradí. Sto šesťdesiat štyri pacientov v štádiách I-III podstúpilo R0 resekcii. Šesťdesiat z 69 pacientov v štádiu UICC IV boli diagnostikované ako štádium IV vzhľadom k pozitívnemu peritoneálnej laváže cytológie, lokalizované peritoneálnej metastázy alebo vzdialené lymfatických uzlín. Osem pacientov v štádiu IV mal synchrónny pečeňové metastázy, jeden mal pľúcne metastázy, a prešli gastrektómii s cieľom kontrolovať krvácanie alebo brániť v priechode potravy.
Úrovne expresie PDSS2 mRNA a proteínu v chirurgicky resekcii tkaniva
znamená úroveň expresie PDSS2
mRNA bola nižšia u GC tkanivách v porovnaní s normálnou okolitého tkaniva (P Hotel &0,001); Avšak, neexistuje žiadny významný rozdiel v PDSS2
expresie mRNA hladín medzi pacientmi s nediferencovanej alebo diferencovaným GC (Obrázok 2A). Expresného profilu PDSS2 bola hodnotená pomocou IHC. Reprezentatívne prípady so zníženou farbenie PDSS2 GC tkanív sú ukázané na obrázku 2B. Celkovo možno povedať, že farbenie vzorca PDSS2 boli v súlade s údajmi o QRT-PCR. Obrázok 2 Expresia analýzy PDSS2 v klinických vzorkách. (A) Priemerná úroveň PDSS2
mRNA v GC tkanivách v porovnaní so zodpovedajúcimi normálnymi okolité tkanivá a GC tkanivách medzi pacientmi s nediferencovanej GC a GC diferencované. Data (B) Zástupca IHC nákupný PDSS2 expresiu v nádore a priľahlej normálne susedné tkaniva (zväčšené 100 x 400 a ×). N, normálne priľahlá tkanivo; T, nádorové tkanivo.
Prognostické dôsledky hladiny expresie mRNA PDSS2
Expresia PDSS2
mRNA v tkanivách GC bola znížená na 76 (32%) zo 238 pacientov (menej ako polovica úrovne expresie zistených v zodpovedajúce normálne okolité tkanivá). Miera prežitia špecifické pre ochorenie pacientov so zníženou úrovňou PDSS2
mRNA v GC bola významne nižšia v porovnaní s pacientmi bez sadzieb (5-ročné prežitie 36% a 64%, v uvedenom poradí, P Hotel < 0,001, obr 3A). Znížené hladiny PDSS2
mRNA v GC boli významne spojené s antigénom sacharidov (CA) 19-9 > 37 IU /ml a lymfatických uzlín (tabuľka 1). Jednorozmerné analýzy prežitie špecifické pre ochorenie ukázalo, že GC podtyp (proximálny nondiffuse alebo difúzne), CA 19-9 > 37 IU /ml, veľkosť nádoru (≥50 mm), PT4, nediferencovaný nádor, lymfatickým postihnutím, invázie loď, invazívne rast, lymfatických uzlín, pozitívne peritoneálnej výplach cytológie, a zníženej PDSS2
expresie mRNA v tkanivách GC boli významné prognostické faktory nepriaznivých výsledkov. Multivariačný analýza identifikovala znížil PDSS2
expresie mRNA ako nezávislý prognostický faktor (pomer rizika 1,95, 95% CI 1.22-3.09, P
= 0,005, tabuľka 2). Predpoklad proporcionálneho rizika v modeli Cox bola hodnotená s modelmi vrátane doby-by-kovarianciou interakcie a žiadne významné porušenie boli nájdené v modeli. Obrázok 3 Prognostické dôsledky expresie PDSS2 mRNA u pacientov s GC. (A) choroba špecifické pre prežitie u pacientov so zníženou PDSS2
mRNA v tkanive GC. (B) (C) choroba špecifické (B) a bez návratu ochorenia (C) prežitia u 168 pacientov, ktorí podstúpili R0 resekcia.
Tabuľka 1 pridružení medzi úrovne expresie mRNA PDSS2 a klinicko parametrov 238 pacientov
premenné
DecreasedPDSS2
mRNA v tkanivách GC (n)
Ostatné (n)
P
hodnotou
Vek
0,408
< 65 rokov
29
71
≥ 65 rokov
47
91
Pohlavie
0,551
Male
59
120
Žena
17
42
subtyp
0,298
Proximálna nondiffuse
22
32
Difúzna
14
33
distálnej nondiffuse
40
96
Karcinoembryonální antigén (ng /ml)
0,490
≤ 5
59
132 Hotel > 5
17
30
Sacharidy antigén 19-9 (IU /ml)
0,015 *
≤ 37
55
139 Hotel > 37
21
23
Veľkosť nádoru (mm)
0,104 Hotel < 50
29
80
≤ 50
47
82
nádor hĺbka (UICC)
0,419
PT1
14
32
PT2
6
24
PT3
19
33
PT4
37
73
Diferenciácia
0,217
rozlíšené
36
63
nediferencovaných
40
99
Lymfatická zapojenie
0,201
Absent
8
27
Prezentujte
68
135
plavidlo invázie
0,535
Absent
31
73
Prezentujte 45
89
infiltratívny typ rastu
0,443
invazívny rast
24
59
mohutný rast
52
102
lymfatických uzlín (UICC)
0,022 *
pN0
19
70
PN1
8
19
PN2
12
s 24
PN3
37
49
peritoneálnej výplach cytológie
0,306
Negatívne
57
131
Pozitívne
19
31
vzdialenej metastázy (UICC)
0,228
M0
50
119
M1
26
43
* Štatisticky významné (P Hotel < 0,05). GC, rakovina žalúdka; UICC, Únia pre medzinárodný boj proti rakovine.
Tabuľka 2 prognostické faktory pre prežitie špecifické pre ochorenie zo 238 pacientov
Premenné
n (%)
Jednorozmerná
Multivariable
pomer rizika
95% CI
P
hodnotu
pomer rizika
95% CI

P
hodnota
Age (≥65)
138 (58%)
1,04
0,67-1,61
0,843
Pohlavie (samica)
59 (25%)
1,29
0,79 - 2,05
0,301
Subtyp (distálnej nondiffuse)
136 (57%)
0,43
0,28 do 0,67 Hotel < 0,001
0,64
0,40-1,01
0,056
Karcinoembryonální antigén (viac ako 5 ng /ml)
47 (20%)
1,48
0,86 - 2,42
0,149
Sacharidy antigén 19-9 (> 37 IU /ml)
44 (18%)
1,98
1.17 - 3.20
0,012
1,23
0,71-2,06
0,445
veľkosť nádoru (≥50 mm)
129 (54%)
2,86
1,78-4,80 Hotel < 0,001
1,40
0,83-2,42
0,211
Tumor hĺbka (PT4, UICC)
110 (46%)
4,17
2,61 - 6,88 Hotel < 0,001
1,38
0,78-2,50
0,273
diferenciácie nádoru (nediferencovanej)
139 (58%)
2.03
1.28 - 3.32
0,002
1,45
0,83-2,60
0,197
Lymfatická zapojenie
203 (85%)
6.31
2,36 - 25,8 Hotel < 0,001
1,45
0,45-6,50
0,559
Vessel invázie
134 (56%)
2,65
1,66-4,37 Hotel < 0,001
1,75
1,07-2,97
0,026 *
invazívnym rastom
83 (35%)
3.03 1.97
- 4.70 Hotel < 0,001
1,19
0,70-2,05
0,520
lymfatických uzlín
149 (63%)
7,02
3,70 až 15,1 Hotel <0.001
1,38
0,56-3,81
0,503
peritoneálnej výplach cytológie (pozitívne)
50 (21%)
4,33
2,76 - 6,74 Hotel &0,001
1,87
14 /1-6 /03
0,014 *
UICC etapa (III-IV)
140 (59%)
9,68
4,97 až 21,8 Hotel < 0,001
2,63
0,94-7,83
0,065
Znížená PDSS2
mRNA v GCS
76 (32%)
2,18
1.40 - 3.37 Hotel < 0,001
1,91
19 /1-4 /3
0,008 *
* Štatisticky významné v viacrozmerné analýzy. GC, rakovina žalúdka; CI, interval spoľahlivosti; UICC, Únia pre medzinárodný boj proti rakovine.
Zo 168 pacientov, ktorí podstúpili resekciu R0, miera prežitia špecifické pre ochorenie bol významne nižší pre tých, ktorí sa zníženou PDSS2
expresie mRNA v GC (n = 50) v porovnaní s pacientmi bez (n = 118) (5-ročné prežitie, 50% a 77%, v tomto poradí, P = 0,006
, obrázok 3B). Pacienti so zníženou PDSS2
mRNA expresie v GC zažil podstatne skôr recidívy po chirurgickom zákroku v porovnaní s tými, bez (sadzby sa 2-ročné opakovanie prežitie bez 64% a 84%, respektíve P
= 0,022, 3C). Počiatočné opakovanie lokality 43 recidivujúce pacientov so zníženou PDSS2
mRNA expresie v GC boli peritoneálnej u 21 (49%), pečeň u 6 (14%), lymfatické uzliny u 13 (30%) a ďalšie (napr pľúc a kostí) u 3 pacientov. Na druhej strane, tých z 61 pacientov relapsujúcou, bez toho aby sa znížila PDSS2
boli peritoneálnej u 35 (57%), pečene u 10 (16%), lymfatické uzliny v 8 (13%) a ďalšie u 8 pacientov. Pacienti so zníženou PDSS2
mRNA expresie v GC bolo pravdepodobné, že majú uzla recidívu, hoci to nedosiahlo štatistickú významnosť.
Analýza podskupiny PDSS2 pojmu podľa GC subtyp
Mean PDSS2
mRNA expresie hladiny boli rovnocenné GC a normálne okolité tkanivá (obrázok 4A). Rovnako tak prognostický význam znížila PDSS2
expresie mRNA v GC bola porovnateľná medzi troma podtypy GC (obrázok 4B). Obrázok 4 Analýza Podskupina GC podtypov. (A) PDSS2
mRNA expresnej hladiny medzi tromi subtypy GC ako v GC a normálne okolité tkanivá. (B) Porovnanie prežitia špecifické pre ochorenia u pacientov s a bez znížil PDSS2
expresie mRNA v GC každého GC podtypu.
Diskusia
PDSSs sú heterotetramerní enzýmy, ktoré obsahujú podjednotky kódované PDSS1
(10p12. 1) a PDSS2
[10], [12]. PDSS činnosť vyžaduje, aby obe podjednotky [10], [14], [15]. Združenie PDSS2
GC bol považovaný pretože jeho chromozomálnej polohe (6q21), a pretože jeho inaktivácie alebo straty z niektorých malignít [16], [26]. Tu ukazujeme, že PDSS2
mRNA bol heterogénne vyjadrený v GC bunkových líniách, a jeho expresie bola inhibovaná na 73% a 32% bunkových línií GC a nádorových tkanivách, v danom poradí. Zistili sme, hypermetylace v tomto PDSS2
promótor z piatich (45%) bunkových línií 11 GC s výrazne zníženou hladinou PDSS2
výrazu. Ďalej, PDSS2
transkripcie bol aktivovaný potom, čo boli bunky ošetrené inhibítorom metylácie DNA. Tieto zistenia sú prvé, naše znalosti ukázať, že promotér hypermetylace reguluje PDSS2
transkripciu. Avšak, PDSS2
expresie bola znížená v niektorých GC buniek bez hypermetylace. Vzhľadom k tomu, chromozóm 6 q je častým miestom LOH v GC [17], [26], [27], LOH môžu regulovať PDSS2
výraz rovnako.
Došlo k správa dokazujúca, že PDSS2
bolo vyjadrené pri zníženej alebo nedetegovateľnou expresiou v malom počte bioptických vzoriek GC [18]. V tejto štúdii sme analyzovali 238 chirurgických vzoriek nádorov a zodpovedajúce nepostihnuté tkaniva získať ďalšie vhľad do klinického významu PDSS2
prejavu v GC. V súlade s analýzami malígneho melanómu a rakovinou pľúc [11], [12], väčšina pacientov s GC kryl zníženú hladinu PDSS2
mRNA v tkanivách GC, pričom priemerná hodnota PDSS2
hladina expresie bola v GC v porovnaní výrazne znížil s normálnou okolitého tkaniva. IHC bola vykonaná za účelom zistenia, či je úroveň mRNA odráža PDSS2
proteínovú expresiu. Vzhľadom na to, že výsledky IHC uvedené, že dáta sú v súlade s mRNA úrovni proteínu, následné analýzy boli vykonané v súlade s údajmi mRNA, ktoré sú vhodnejšie pre kvantitatívnej analýzy [7], [23].
Znížená PDSS2
expresie mRNA v GC bola významne spojené so zvýšenými úrovňami predoperačnej CA19-9 a lymfatických uzlín a bol identifikovaný ako nezávislý prognostický faktor. Okrem toho, pacienti so zníženou PDSS2
expresie mRNA v tkanive GC zažil podstatne skôr recidíva po R0 resekcii. V poslednej dobe, Chen et al. skúmali aktivitu nádoru-potláčaní PDSS2
v karcinómu pľúc [28]. Podali správu, že nútené nadmerná expresia PDSS2
spôsobili masívne bunkovú smrť prostredníctvom apoptózy dráh a tvorbou významne inhibujú kolónií a došlo k inverzný korelácia medzi PDSS2
prejavu a gelsolin výraz, ktorý je známe, že inhibujú apoptózu a zlepšiť invázie buniek a metastázy [29], aj keď PDSS2 nemali vplyv na citlivosť nádorových buniek na chemoterapeutiká [28]. Tento tumor potláčajúce mechanizmus PDSS2
môže byť aplikovaný na GC rovnako.
Expresného profilu PDSS2
mRNA a jeho prognostického vplyvu boli podobné medzi tri podtypy (GC proximálny nondiffuse, difúzna, a distálnej nondiffuse) , čo naznačuje, že PDSS2
expresie ovplyvňuje patogenézy všetkých typoch GC. Shah et al. hlásené, že jedna tretina amplifikovaných génov, prípadne vrátane PDSS2
, vykazuje rovnakú expresný vzor medzi tromi podtypy GC [9]
. GC je jeden z nádorov s vysokou frekvenciou aberantne metylácie, a to často vykazuje CPG ostrov methylator fenotyp [30], [31]. Expresie veľkého množstva génov je potlačená CPG ostrov hypermetylace v GC buniek vrátane tých nádorových supresor kódovanie, regulátory bunkového cyklu, induktory a katy apoptózy, proteíny, ktoré podporujú invazívne fenotyp, a nesúladu DNA opravy enzýmov [32]. Tieto epigenetické zmeny môžu slúžiť ako biomarkery, ktoré osvetľujú zvýšenú metastatické potenciál a agresívny nádor fenotyp [33], ako aj terapeutických cieľov [34]. Preto identifikácia ďalších génov, ktoré sú regulované metyláciou v GC buniek bude pravdepodobne zlepšenie riadenia GC
tumor potláčajúce funkciu PDSS2
sú podporované týmto zistením nasledujúcim spôsobom :. (1) znížená expresie PDSS2
bola často zistená v GC tkaniva, (2) úroveň strednej PDSS2
expresie bola významne nižšia v GC tkanivách, a (3) sa znížila expresie PDSS2
bola spojená s počiatkom recidívy a následnú zlou prognózou. PDSS2
hladiny expresie v tkanive z biopsie získať pomocou vzoriek endoskopická dozor alebo pri chirurgických vzorkách môžu byť užitočné pre predikciu skoré recidívy a zlú prognózu, ktorá bude pravdepodobne snaha pomôcť navrhnúť účinnejšie terapeutické stratégie.
Táto štúdia bola obmedzená jeho nedostatok funkčnú analýzu PDSS2
, ktorý zmierňuje záveru, že pôsobí ako nádorový supresor v GC. Ďalšie štúdie, vrátane analýzy dráhy v žalúdočnej karcinogenéze a funkčné analýzy sa očakáva, že na objasnenie molekulárnych mechanizmov, ktoré sú základom biologickej aktivity PDSS2
v GC.
Záver
Záverom možno povedať, naše nálezy podporujú záver, že vyjadrením domnelý nádorový supresorový gén PDSS2
je riadená promotorovou hypermetylace v GC buniek a uviesť. Naše výsledky ďalej ukazujú, že znížená expresia PDSS2
mRNA môže predstavovať nový biomarker progresie a opakovanie všetkých typoch GC. Príspevky
autorov
MK, HO, FS, DS, HT, RH a KM vykonané experimenty a analýzy dát. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF a YK zhromaždené prípady a klinické údaje. MK a SN pochopil a navrhol štúdium, a pripravil počiatočné rukopis. YK dohliadal na projekt.

• Žalúdočné tonometria vedený terapie u pacientov s intenzívnej starostlivosti: systematický prehľad a metaanalýza
• Užitočnosť cytokeratinům 7 a 20 (CK7 /20) imunohistochémia v rozdiele krátkodobých segmente Barrettova pažeráka od žalúdka, črevné metaplázia: Je to spoľahlivý?