Verminderte Expression von Prenyldiphosphatsynthase Untereinheit korreliert 2 mit reduziertem Überleben von Patienten mit Magen cancer

verminderte Expression von Prenyldiphosphatsynthase Untereinheit 2 mit reduziertem Überleben von Patienten mit Magenkrebs korreliert
Zusammenfassung
Hintergrund
Identifizierung neuer molekularen Biomarkern wird das Management von Patienten mit Magenkrebs (GC) zu verbessern. Prenyldiphosphatsynthase Untereinheit 2 (PDSS2) für Coenzym Q10-Biosynthese und wirkt als Tumorsuppressor erforderlich; jedoch
die Rolle und Regulationsmechanismen von PDSS2 in GC nicht verstanden werden. Das Ziel dieser Studie war es Ausdruck Status und Regulationsmechanismen von PDSS2
in GC zu bestimmen.
Methoden
Assoziationen zwischen Expression und Methylierung von PDSS2
wurden unter Verwendung von GC-Zelllinien untersucht. Die klinische Bedeutung der PDSS2
Ausdruck ausgewertet wurde 238 Paare von chirurgisch reseziert Magengewebe mit Subgruppen-Analyse auf Basis von GC-Subtypen.
Ergebnisse | Die Expression von PDSS2
mRNA wurde in 73% der GC Zelle verringert Linien mit der Steuerung nicht kanzerösen Zellen verglichen. Die Promoter
PDSS2 wurde in Zellen mit einer verringerten PDSS2
Ausdruck hypermethyliert, und diese Zellen mit einem Methylierungsinhibitor Behandlung reaktiviert PDSS2
Ausdruck. GC Geweben deutlich niedrigeren mittleren Ebenen der PDSS2
mRNA im Vergleich mit benachbarten normalen Geweben (P
< 0,001). Das Expressionsmuster von PDSS2 Protein wurde mit dem seiner mRNA konsistent. Die Abnahme der PDSS2
mRNA-Expression in GC Gewebe (weniger als die Hälfte der Höhe der Expression in den entsprechenden normalen benachbarten Geweben nachgewiesen) signifikant mit erhöhten Mengen an Kohlenhydrat-Antigen korreliert 19-9 (P
= 0,015), Lymphknoten Metastasen (P
= 0,022) und kürzere rezidivfreie Überleben nach kurativer Resektion (P
= 0,022). Ferner waren PDSS2
mRNA-Expression identifiziert multivariaten Analyse als unabhängiger prognostischer Faktor (Hazard-Ratio 1,95, 95% Konfidenzintervall 1,22-3,09, P
= 0,005) und sein Expressionsmuster und prognostische Bedeutung unter drei GC-Subtypen ähnlich Schlussfolgerungen
PDSS2. bei
ein mutmaßliches Tumorsuppressor kodiert, und wir zeigen hier, dass seine Expression durch Hypermethylierung der Promotor in GC-Zellen reguliert wurde. Die Hemmung der PDSS2
mRNA-Expression als neuartige Biomarker für alle Arten von GC dienen kann.
Schlüsselwörter Magenkrebs Prenyldiphosphatsynthase Untereinheit 2 Expression Methylierung Subtype Hintergrund
Obwohl die Häufigkeit von Magenkrebs (GC) in den meisten entwickelten Ländern rückläufig ist, bleibt es eine der häufigsten Ursachen von Krebs-Todesfälle weltweit [1] - [3]. Geeignete Stratifizierung von Patienten ist ein zentraler Aspekt der individualisierten Behandlung, was die Sterblichkeit bei dieser Krebs zu reduzieren [4], [5].
Nach seiner Epidemiologie, Pathologie und Stelle im Körper, wird GC anerkannt als drei verschiedene Malignitäten entstehen im selben Organ [6] - [8]. Shah et al. [9] vorgeschlagen, eine überzeugende Klassifizierung von GC nach histopathologischen und anatomischen Kriterien wie folgt: (1) proximal nichtdiffusen GC, wo der Tumor hauptsächlich in der Kardia mit dem Nachweis von Vorläuferdrüsen Dysplasie oder in situ-Karzinom in Gegenwart von chronischer Entzündung liegt in der Regel ohne Atrophie; (2) diffuse GC, die ohne erkennbare Gastritis im Magen liegt überall sein kann, das eine völlig diffuse Muster der Infiltration von Zellen mit einem schlecht differenzierten Phänotyp aufweist; und (3) distal nichtdiffusen GC, die vor allem im distalen Magen mit Anzeichen einer chronischen Gastritis befindet, die überwiegend differenziert oder weist eine intestinale Phänotyp. In dieser Studie zeigten sie, dass die drei GC-Subtypen durch ihre Genexpressionsprofile auszeichnen. Daher sollte die genetische Vielfalt der GC-Subtypen in Studien von genetischen und epigenetischen Veränderungen in Betracht gezogen werden Magen-Krebsentstehung und Progression im Zusammenhang mit.
Prenyldiphosphatsynthase Untereinheit 2 (PDSS2
) wurde im Jahr 2005 identifiziert [10], und deutet darauf hin, dass es als Tumorsuppressor [11], [12]. PDSS2
wird für die Synthese von Coenzym Q10 (CoQ10) erforderlich [13], [14], die in der mitochondrialen inneren Membran synthetisiert und spielt eine wichtige Rolle in der mitochondrialen Atmungskette, Pyrimidinnucleosid-Biosynthese, und Modulation der Apoptose [15]. PDSS2
6q16.3-21 innerhalb der chromosomalen Locus befindet, ein Ort der häufigen Mikro DNA Instabilität und Verlust der Heterozygotie (LOH) in GC [16], [17], die Unterstützung ihrer Rolle als Tumorsuppressor in Magenepithelzellen . Darüber hinaus kann PDSS2
die Entwicklung von malignen Melanomen und Lungenkrebs unterdrücken [11], [12]. Außerdem Chen et al. berichtet, dass die Überexpression von PDSS2 erzwungen
in einer GC-Zelllinie zur Apoptose führt durch in der G0 /G1-Phase [18] Zellzyklusarrest verursacht. Diese Berichte führten uns eine Hypothese zu machen, die PDSS2
ist ein potentieller GC-verwandtes Gen und ein Kandidat neuer klinisch relevanter prognostischer Marker von GC.
In dieser Studie wurde die Expression und Methylierungsstatus von PDSS2
in GC bestimmt die klinische Bedeutung und Regulationsmechanismen von PDSS2
Ausdruck in GC zu bewerten. Unsere Ergebnisse zeigen, dass PDSS2
Ausdruck einen potentiellen klinischen Biomarker der Progression und ein erneutes Auftreten von GC.
Material und Methoden
Ethik bietet
Diese Studie zu den ethischen Richtlinien der World Medical Association Deklaration von Helsinki entsprach -Ethical Grundsätze für die medizinische Forschung am Menschen und vom Institutional Review Board der Universität Nagoya, Japan genehmigt. Einverständniserklärung für die Nutzung von klinischen Proben und Daten geschrieben, wie von der Institutional Review Board erforderlich ist, wurde von allen Patienten erhalten [4].
Probensammlung
Eleven GC-Zelllinien (H111, KatoIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-NU und SC-6-LCK) und CCL-241 (nicht-Krebs-Zelllinie aus dem Dünndarm abgeleitet) wurden von der American Type Culture Collection (Manassas, VA, erhalten, USA) oder der Tohoku-Universität, Japan. Die GC-Zelllinien wurden bei 37 ° C in RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) mit 10% fötalem Rinderserum in einer Atmosphäre, ergänzt mit 5% CO 2. Für CCL-241, 30 ng /ml des epidermalen Wachstumsfaktor (Sigma-Aldrich) wurde in dem Medium zugesetzt. Primäre GC Gewebe und entsprechenden normalen angrenzenden Geweben wurden von 238 Patienten gesammelt, die Magenresektion für GC an der Nagoya University Hospital zwischen 2001 und 2012 Patienten wurde die neoadjuvante Therapie erhielten, wurden ausgeschlossen, weil es schwierig war, um Krebszellen aus vernarbte Gewebe erhalten. Die Proben wurden histologisch mit der 7. Ausgabe der Union for International Cancer Control (UICC) Klassifikation [19] eingestuft. Relevante klinisch-pathologischen Parameter wurden aus den Krankenakten erworben. Zu beurteilen, ob das Expressionsniveau von PDSS2
mit Tumor-Phänotyp korreliert wurden die Patienten in drei Gruppen eingeteilt entsprechend der Definition von GC-Subtypen nach den Kriterien von Shah et al. [9] wie folgt: proximal nichtdiffusen, diffuse und distalen nichtdiffusen Typ. Seit dem Jahr 2006 eine adjuvante Chemotherapie mit S-1 (eine orale fluorierte Pyrimidin) an allen UICC-Stadium II-III verabreicht Patienten mit GC, es sei denn durch den Zustand des Patienten kontra [20]. Patienten wurden mindestens einmal für 2 Jahre nach der Operation alle 3 Monate beobachtet und dann alle 6 Monate für 5 Jahre oder bis zum Tod. Die körperliche Untersuchung, Labortests und erweiterte Computertomographie (Brust- und Bauchhöhle) wurden bei jedem Besuch durchgeführt. Chemotherapie bei Patienten mit Fernmetastasen oder nach Wiederholung wurde von ärztlichem Ermessen bestimmt.
Gewebeproben wurden sofort in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C gelagert. Tumorproben ohne Nekrosen (ca. 5 mm 2) wurden durch grobe Beobachtung extrahiert und nur Proben bestätigt umfassen mehr als 80% Tumoranteile von H & E-Färbung wurden in die Studie eingeschlossen. normale benachbarte Magenschleimhaut Proben >entspricht; 5 ° cm vom Rand der Tumoren wurden aus dem gleichen Patienten erhalten [21]
Quantitative Echtzeit-Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR)
Gesamt-RNAs. (10 &mgr; g pro Probe) wurden von 11 GC-Zelllinien isoliert, CCL-241, 238 primären GC Gewebe und entsprechenden normalen angrenzenden Geweben wurden verwendet, um cDNAs zu erzeugen, die spezifischen PCR-Primern amplifiziert wurden unter Verwendung von (Zusatzdatei 1: Tabelle S1). Echtzeit-Erkennung von SYBR® Green Fluoreszenzintensität wurde unter Verwendung eines ABI StepOnePlus Real-Time PCR-System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) durchgeführt. Die Expression von GAPDH
mRNA wurde in jeder Probe für die Standardisierung quantifiziert. Die qRT-PCR-Reaktionen in jeder Probe wurden in dreifacher Ausführung durchgeführt. Das Expressionsniveau von jeder Probe wird als der Wert des PDSS2 präsentiert
Amplikon durch die von GAPDH
unterteilt [22]. PDSS2
mRNA-Expression definiert wurde, wie in GC Geweben verringert wird, wenn das Niveau geringer als die Hälfte des entsprechenden normalen benachbarten Gewebes.
Analyse der Promotorregion von PDSS2
Die Nucleotidsequenz des PDSS2
Promotorregion wurde analysiert, um die Anwesenheit oder Abwesenheit von CpG islands definiert wie folgt zu bestimmen: wenigstens ein 200-bp-DNA-Region mit einem hohen GC-Gehalt (> 50%) und ein beobachtetes CpG /Expected CpG Verhältnis ≥0.6 [23] . Wir verwendeten CpG-Insel Searcher Software (http:.. //Cpgislands usc edu /) die Standorte von CpG-Inseln zu bestimmen [24]
Methylierungs-spezifische PCR (MSP) und Bisulfit-Sequenzanalyse
. PDSS2
eine CpG-Insel in der Nähe seiner Promotorregion besitzt, und wir vermuten, dass abweichende Methylierung zur Regulierung der Transkription von PDSS2
in GC zuständig ist. DNA-Proben von 11 Linien GC Zelle mit Bisulfit behandelt wurden einer Analyse nach MSP und Nukleotid-Sequenz [25]. Die Primersequenzen für MSP und Bisulfit-Sequenzierung verwendet werden, in den weiteren Datei aufgelistet 1: Tabelle S1
5-Aza-2'-Desoxycytidin (5-Aza-dC) Behandlung
das Verhältnis von Promotor-Hypermethylierung auf PDSS2 zu beurteilen.
Transkription, GC-Zellen (1,5 × 10 6) wurden mit 5-Aza-dC (Sigma-Aldrich) DNA-Methylierung und kultiviert für 6 Tage mit Mediumwechsel an den Tagen 1, 3 und 5 zu hemmen. RNA wurde extrahiert und RT-PCR wurde wie beschrieben durchgeführt [7].
Immunhistochemie (IHC)
IHC-Analyse der Lokalisierung von PDSS2 durchgeführt wurde, einen monoklonalen Maus-Antikörper gegen PDSS2 mit (ab119768, Abcam, Cambridge, UK ), verdünnt 1: 150 in Antikörperverdünnung (Dako, Glostrup, Dänemark) 30 Vertreter in Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten Schnitten von gut erhaltenen GC Gewebe zuvor beschriebenen Sonde [3]. Färbungsmuster wurden zwischen GCs und die entsprechenden normalen angrenzenden Geweben verglichen. Um zu vermeiden, Subjektivität wurden die Proben randomisiert und codiert vor der Analyse durch zwei unabhängige Beobachter, die keine Kenntnis von der Status der Proben wurden. Jeder ausgewertete Beobachter alle Proben mindestens zweimal Intrabeobachter-Variation zu minimieren. [7]
Evaluierung der klinischen Bedeutung von PDSS2 Ausdruck
Korrelationen zwischen dem Muster von PDSS2
mRNA-Expression und klinisch-pathologischen Parameter wurden nach ausgewertet die Unterschiede zwischen den drei GC-Subtypen. Eine Subgruppen-Analyse des Überlebens nach GC-Subtyp wurde durchgeführt, um den Einfluss von PDSS2
Ausdruck auf Patienten Ergebnisse zu bestimmen.
Statistische Analyse
Relative Ebenen der mRNA-Expression (PDSS2 /GAPDH
) zwischen GC und den angrenzenden normale Gewebe wurden unter Verwendung des Mann-Whitney U-Test analysiert
. Die χ
2-Test verwendet wurde, die Bedeutung des Zusammenhangs zwischen dem Ausdruck und Methylierungsstatus von PDSS2
und klinisch-pathologischen Parameter zu analysieren. Krankheitsspezifische und krankheitsfreie Überlebensraten wurden berechnet, um die Kaplan-Meier-Methode, und der Unterschied in der Überlebenskurven wurden mit dem Log-Rank-Test analysiert. Wir führten Analyse multivariate Regressionsprognostische Faktoren mit P
<mit dem Cox-Proportional-Hazards-Modell und Variablen zu erfassen; 0,05 wurden in das endgültige Modell eingegeben. Alle statistischen Analysen wurden durchgeführt unter Verwendung von JMP 10-Software (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Ein Wert von P
< 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.
Ergebnisse | Identifizierung einer CpG-Insel in der PDSS2 Promotor
Eine CpG-Insel in der Promotorregion mit der CpG-Insel Searcher
PDSS2 identifiziert wurde. Die Eigenschaften der CpG-Insel sind wie folgt: 1655 bp, 55,9% GC, und 0,70 Beobachtete CpG /Expected CpG-Verhältnis (Abbildung 1A). Daher nahmen wir an, dass Hypermethylierung der CpG-Inseln, die Expression von PDSS2
in GC reguliert. Abbildung 1 Methylierungsanalysen von PDSS2 in GC-Zelllinien. (A) Die durch die blaue Linie angezeigt CpG-Insel befindet sich auf der Transkriptionsinitiationsstelle
PDSS2 zentriert stromaufwärts in der Promotorregion erstreckt. (B) Balkendiagramme zeigen PDSS2
mRNA-Expressionsniveaus in CCL-241 (Kontrolle nicht kanzerösen Zelle) und GC-Zelllinien vor oder nach der 5-Aza-dC Behandlung. Der Methylierungsstatus des PDSS2
Promotor wurde mit MSP bewertet und die Ergebnisse sind in der Box eingeschlossen. M, methylierte; pM, teilweise methyliert; U, unmethylierte. (C) Repräsentative Ergebnisse der Bisulfit-Sequenzanalyse. Alle CpG-Stellen in KatoIII Zelle wurden als CG und die von MKN74 beibehalten wurden TG umgewandelt. PDSS2 mRNA-Expression und Methylierungsstatus in GC-Zelllinien
einer signifikanten Abnahme der PDSS2
mRNA-Level in sieben nachgewiesen wurden (73
%) von 11 GC-Zelllinien mit dem Expressionsniveau des 241 CCL-Zellen verglichen (Daten für GC Gewebe werden unten) beschrieben. Es gab keinen offensichtlichen Unterschied in der Expressionsniveaus zwischen Zelllinien aus differenzierten und undifferenzierten GCs (1B). Hypermethylation der PDSS2
Promotor wurde in MKN1, SC-2-NU, KatoIII, MKN45, und NUGC3 Zellen (1B) detektiert. Um zu bestimmen, ob hypermethylation der PDSS2
Promotor die Transkription inhibiert, mRNA-Expressionsniveaus wurden verglichen vor und nach Zellen mit dem Methylierungsinhibitor 5-Aza-dC Behandlung. PDSS2
mRNA-Spiegel wurden in Zellen mit herunterreguliert wiederhergestellt PDSS2
Ausdruck begleitet hypermethylation nach 5-Aza-dC-Behandlung (1B), was darauf hinweist, dass Promotor hypermethylation PDSS2
Transkription in GC gehemmt. Representative Chromatogramme der Sequenzanalyse der Promotorregion PDSS2
in MKN28 (vollständige Methylierung) und NUGC4 (Abwesenheit von Methylierung) Zellen werden in 1C gezeigt.
Patientencharakteristika
der Patientenpopulation enthalten 179 Männer und 59 Frauen von 20 bis 84 Jahren (65,3 × 11,7 Jahre, mittlere × Standardabweichung). Pathologisch wurden 139 und 99 Patienten mit undifferenzierten und differenzierten GC diagnostiziert sind. Die Patienten wurden in die drei GC Phänotypen wie folgt klassifiziert: nichtdiffusen, 54; diffuse, 48; und distalen nichtdiffusen, 136. Nach der 7. Auflage der UICC Klassifikation, 58, 40, 71 und 69 Patienten waren in den Stufen I, II, III und IV, respectively. Einhundert vierundsechzig Patienten in den Stadien I-III wurde eine Resektion R0. Sechzig der 69 Patienten in UICC-Stadium IV wurden als Stadium IV aufgrund positiver Peritonealspülung Zytologie, lokalisierte Peritonealdialyse Metastasen oder entfernten Lymphknoten-Metastasen diagnostiziert. Acht Patienten im Stadium IV hatte synchroner Lebermetastasen, einer Lungenmetastasen hatte, und sie unterzog Gastrektomie gerichtet Blutungen oder Behinderung der Passage der Nahrung zu steuern.
Expression von PDSS2 mRNA und Protein in chirurgisch entfernten Geweben
Der bedeuten Expressionsniveau von PDSS2
mRNA war niedriger bei GC Gewebe im Vergleich mit der normalen angrenzenden Geweben (P
< 0,001); jedoch gab es keinen signifikanten Unterschied in PDSS2
mRNA-Expressionsniveaus zwischen Patienten mit undifferenzierten oder differenzierten GC (2A). Das Expressionsmuster von PDSS2 wurde unter Verwendung von IHC ausgewertet. Repräsentative Fälle mit reduziertem PDSS2 Färbung von GC Gewebe werden in 2B gezeigt. Insgesamt waren die Färbungsmuster von PDSS2 im Einklang mit den qRT-PCR-Daten. Abbildung 2 Expressionsanalysen von PDSS2 in klinischen Proben. (A) Die mittlere Höhe der PDSS2
mRNA in GC Geweben im Vergleich zu den entsprechenden normalen angrenzenden Geweben und in GC Gewebe zwischen Patienten mit undifferenzierten GC und GC differenziert. (B) Repräsentative IHC Daten zu vergleichen PDSS2 Expression in Tumor und angrenzenden normalen angrenzenden Gewebe (vergrößert 100 × und 400 ×). N, normal benachbarte Gewebe; T, Tumorgewebe.
Prognostische Bedeutung von PDSS2 mRNA Expression
Die Expression von PDSS2
mRNA in GC Gewebe wurde in 76 (32%) von 238 Patienten (weniger als die Hälfte der Höhe der Expression verringert erfasst die entsprechenden normalen angrenzenden Geweben). Die krankheitsspezifische Überlebensrate von Patienten mit verringerten Niveaus von PDSS2
mRNA in GCs im Vergleich deutlich niedriger war mit denen ohne (5-Jahres-Überlebensraten, 36% und 64%, bzw. P
< 0,001, Abbildung 3A). Erniedrigte von PDSS2
mRNA in GCs signifikant mit Kohlenhydrat-Antigen (CA) 19-9 >verbunden waren; 37 IU /ml und Lymphknotenmetastasen (Tabelle 1). Univariate Analyse von krankheitsspezifischen Überleben zeigten, dass GC-Subtyp (proximalen nichtdiffusen oder diffuse), CA 19-9 > 37 IU /ml, Tumorgröße (≥50 mm), pT4, undifferenzierten Tumor, Lymph-Beteiligung, Gefäßinvasion, invasives Wachstum, Lymphknotenmetastasen, positive Peritonealspülung Zytologie und verminderte PDSS2
mRNA-Expression in GC Geweben signifikante prognostische Faktoren von unerwünschten Ergebnissen. Multivariate Analyse identifiziert verminderte PDSS2
mRNA-Expression als unabhängiger prognostischer Faktor (Hazard-Ratio 1,95, 95% Konfidenzintervall 1,22-3,09, P
= 0,005, Tabelle 2). Die Proportional-Hazards Annahme im Modell Cox wurde bewertet mit Modellen einschließlich der Zeit-für-Kovariable Wechselwirkungen und keine signifikanten Verletzungen wurden im Modell gefunden. Abbildung 3 prognostische Bedeutung von PDSS2 mRNA-Expression bei Patienten mit GC. (A) krankheitsspezifische Überleben von Patienten mit einer verminderten PDSS2
mRNA in GC Gewebe. (B) (C) Krankheitsspezifische (B) und das rezidivfreie (C) das Überleben bei 168 Patienten, die R0-Resektion unterzogen.
Tabelle 1 Assoziation zwischen Expression von PDSS2 mRNA und klinischen Parametern von 238 Patienten
Variablen
DecreasedPDSS2
mRNA in GC Gewebe (n)
Andere (n)
P
Wert
Alter
0,408
< 65 Jahre
29
71
≥ 65 Jahre
47
91
Geschlecht
0.551
männlich
59
120
Female
17
42
Subtype
0.298
proximale
22
nichtdiffusen 32
Diffuse
14
33
Distal
40 nichtdiffusen
96
Carcinoembryonic Antigen (ng /ml)
0.490
≤ 5
59
132
> 5
17
30
Carbohydrate Antigen 19-9 (IU /ml)
0,015 *
≤ 37
55
139
> 37
21
23
Tumorgröße (mm)
0.104
< 50
29
80
≤ 50
47
82
Tumortiefe (UICC)
0.419
pT1 14
32
pT2
6 24
pT3
19
33
pT4 37
73
Differenzierung
0.217
Differenzierte
36
63
Undifferenzierte
40
99
Lymphatische Beteiligung
0.201
Absent
8 27
68
135
Präsentieren Gefäßinvasion
0.535
Absent
31
73
Präsentieren
45
89
Infiltrative Wachstumstyp
0.443
invasives Wachstum
24
59
expansives Wachstum
52
102
Lymphknotenmetastase (UICC)
0,022 *
pN0
19
70
pN1
8
19
pN2
12
24
pN3
37
49
Peritonealspülung Zytologie
0.306
Negative
57
131
Positive
19
31
Fernmetastasen (UICC)
0.228
M0
50
119
M1
26
43
* Statistisch signifikant (P
< 0,05). GC, Magenkrebs; UICC, Union for International Cancer Control.
Tabelle 2 prognostische Faktoren für krankheitsspezifische Überleben von 238 Patienten
Variablen
n (%)
Univariate
Multivariable
Hazard Ratio
95% CI
P
Wert
Hazard Ratio Bei
95% CI

P
Wert
Alter (≥65)
138 (58%)
1,04
0,67-1,61
0.843
Geschlecht (weiblich)
59 (25%)
1,29
0,79-2,05
0.301
Subtyps (distalen nichtdiffusen)
136 (57%)
0,43
0,28-0,67
< 0,001
0,64
0,40-1,01
0,056
Carcinoembryonic Antigen (> 5 ng /ml)
47 (20%)
1,48
0,86-2,42
0.149
Carbohydrate Antigen 19-9 (> 37 IU /ml)
44 (18%)
1,98
1,17-3,20
0,012
1,23
0,71-2,06
0.445
Tumorgröße (≥50 mm)
129 (54%)
2,86
1,78-4,80
< 0,001
1,40
0,83-2,42
0.211
Tumortiefe (pT4 UICC)
110 (46%)
4,17
2,61-6,88
< 0,001
1,38
0,78-2,50
0,273
Tumordifferenzierung (undifferenziert)
139 (58%) 2,03
1,28-3,32
0.002
1,45
0,83-2,60
0.197
Lymphatische Beteiligung
203 (85%)
6,31
2,36-25,8
< 0,001
1,45
0,45-6,50
0.559
Vessel Invasion
134 (56%)
2,65
1,66-4,37
< 0,001
1,75
1,07-2,97
0,026 *
83
invasives Wachstum (35%)
3,03
1,97 - 4.70
< 0,001
1,19
0,70-2,05
0.520
Lymphknotenmetastase
149 (63%)
7,02
3,70-15,1
< 0,001
1,38
0,56-3,81
0.503
Peritonealspülung Zytologie (positive)
50 (21%)
4,33
2,76-6,74
< 0,001
1,87
1,14-3,06
0,014 *
UICC-Stadium (III-IV)
140 (59%)
9,68
4,97-21,8
< 0,001
2,63
0,94-7,83
0.065
PDSS2
mRNA in GCs
76 (32%) Verminderte
2,18
1,40-3,37
< 0,001
1,91
1,19-3,04
0,008 *
* Statistisch in der multivariaten Analyse signifikant. GC, Magenkrebs; CI, Konfidenzintervall; UICC, Union for International Cancer Control.
Von den 168 Patienten, die R0-Resektion unterzogen, die krankheitsspezifische Überlebensrate signifikant niedriger war für die mit verringerten PDSS2
mRNA-Expression in GCs (n = 50) im Vergleich zu denen ohne (n = 118) (5-Jahres-Überlebensraten von 50% und 77%, bzw. P
= 0,006, 3B). Patienten mit PDSS2
mRNA-Expression in GCs sank deutlich früher Rezidive nach der Operation erlebt im Vergleich zu denen ohne (2 Jahre rezidivfreien Überlebensraten, 64% und 84%, bzw. P
= 0,022, 3C). Anfängliche Wiederholung Websites von 43 rezidivierende Patienten mit einer verminderten PDSS2
mRNA-Expression in GCs in 21 (49%) Peritonealdialyse waren, Leber in 6 (14%), Lymphknoten in 13 (30%) und andere (zB Lunge und Knochen) bei 3 Patienten. jene von 61 schub Patienten Auf der anderen Seite, ohne verminderte PDSS2
35 Peritonealdialyse waren (57%), der Leber in 10 (16%), Lymphknoten in 8 (13%) und andere bei 8 Patienten. Patienten mit einer verminderten PDSS2
mRNA-Expression in GCs wahrscheinlich waren, einen Knoten einen Rückfall zu haben, obwohl es nicht die statistische Signifikanz erreichte.
Subgruppenanalyse von PDSS2 Ausdruck nach GC-Subtyp
Mittelwert PDSS2
mRNA-Expression Niveaus waren in GC und normalen angrenzenden Geweben (4A) äquivalent. Ebenso verringerte sich der prognostische Wert der PDSS2
Ausdruck mRNA in GCs unter den drei GC-Subtypen vergleichbar war (4B). Abbildung 4 Subgruppen-Analyse der GC-Subtypen. (A) PDSS2
mRNA-Expressionsniveaus zwischen den drei GC-Subtypen sowohl in GC und normalem umgebendem Gewebe. (B) Vergleich der krankheitsspezifischen Überleben von Patienten mit und ohne PDSS2
mRNA-Expression in GCs jeder GC-Subtyp verringert.
Diskussion
pDSSS sind heterotetrameres Enzyme Untereinheiten umfasst, kodiert durch PDSS1
(10p12. 1) und PDSS2
[10], [12]. PDSS Aktivität erfordert beide Untereinheiten [10], [14], [15]. Der Verband der PDSS2
mit GC wurde wegen seiner chromosomalen Stelle (6q21) betrachtet, und wegen seiner Inaktivierung oder Verlust von bestimmten malignen Erkrankungen [16], [26]. Hier zeigen wir, dass PDSS2
mRNA heterogen wurde in GC-Zelllinien exprimiert wird, und seine Expression wurde in 73% und 32% der GC-Zelllinien und Tumorgewebe inhibiert, respectively. Wir haben festgestellt hypermethylation des Promotors
PDSS2 in fünf (45%) von 11 GC-Zellinien mit deutlich Ebenen PDSS2
Expression verringert. Ferner wurde PDSS2
Transkription nachdem die Zellen aktiviert mit einem Inhibitor der DNA-Methylierung behandelt wurden. Diese Ergebnisse sind die ersten, unser Wissen, dass Promotor-Hypermethylierung zeigen reguliert PDSS2
Transkription. Allerdings wurde PDSS2
Ausdruck in einigen GC-Zellen ohne Hyper verringert. Da Chromosom 6q eine häufige Stelle von LOH in GC ist [17], [26], [27], kann LOH PDSS2
Ausdruck als auch regulieren. TÜV-Bericht zeigt, dass PDSS2
ausgedrückt Es hat wurde bei verminderte oder nicht nachweisbare Expression in einer kleinen Anzahl von Biopsie GC-Proben [18]. In der vorliegenden Studie untersuchten wir 238 chirurgischen Proben von Tumoren und die entsprechende unbeteiligte Gewebe weitere Einblicke in die klinische Bedeutung von PDSS2
Expression in GC zu gewinnen. In Übereinstimmung mit Analysen des malignen Melanoms und Lungenkrebs [11], [12], hegten die meisten Patienten mit GC ein vermindertes Niveau des PDSS2
mRNA in GC Gewebe und die mittlere PDSS2
Expressionsniveau war deutlich zurückgegangen in GC verglichen mit normalen angrenzenden Geweben. IHC wurde durchgeführt, um zu bestimmen, ob die mRNA-Ebene PDSS2
Protein-Expression wider. Da die IHC Ergebnisse zeigten, daß die mRNA-Daten mit der Proteinebene übereinstimmten, wurden nachfolgende Analysen nach den mRNA-Daten durchgeführt, die empfänglicher für die quantitative Analyse sind [7], [23].
Verminderte PDSS2
mRNA-Expression in GCs war signifikant mit erhöhten präoperativen CA19-9 Ebenen und Lymphknotenmetastasen assoziiert und wurde als unabhängiger prognostischer Faktor identifiziert. Darüber hinaus Patienten mit einer verminderten PDSS2
mRNA-Expression in GC Gewebe signifikant früher Rezidiv nach R0-Resektion erlebt. Vor kurzem Chen et al. der Tumor-unterdrückenden Aktivität von PDSS2
bei Lungenkrebs untersucht [28]. Sie berichteten, dass die zwangsweise Überexpression von PDSS2
verursacht massiven Zelltod durch apoptotische Wege und signifikant gehemmt Koloniebildung und es wurde eine inverse Korrelation zwischen PDSS2
Expression und Gelsolin-Expression, die Apoptose zu hemmen, bekannt ist und zur Verbesserung der Zellinvasion und Metastasierung [29], obwohl PDSS2 nicht die Empfindlichkeit der Krebszellen gegenüber Chemotherapeutika beeinflusst hat [28]. Dieser Tumor unterdrückende Mechanismus der PDSS2
könnte genauso gut auf GC angewendet werden.
Die Expressionsmuster von PDSS2
mRNA und ihre prognostische Bedeutung waren ähnlich unter den drei GC-Subtypen (proximal nichtdiffusen, diffus, und distale nichtdiffusen) , was darauf hinweist, dass PDSS2
Expression der Pathogenese von verschiedenen Arten von GC beeinflußt. Shah et al. berichtet, dass ein Drittel Gene amplifiziert, möglicherweise einschließlich PDSS2
, unter den drei GC-Subtypen äquivalente Expressionsmuster zeigten, [9].
GC einem der Tumoren mit einer hohen Frequenz von aberranter Methylierung ist und es häufig aufweist die CpG-Insel Methylator Phänotyp [30], [31]. Die Expression einer großen Anzahl von Genen wird von CpG island hypermethylation in GC-Zellen unterdrückt, einschließlich der Codierungs Tumorsuppressoren, Zellzyklus-Regulatoren, Induktoren und Scharfrichter der Apoptose, Proteine, die den invasiven Phänotyp fördern, und DNA-Mismatch-Reparatur-Enzyme [32]. Diese epigenetischen Veränderungen können als Biomarker dienen, die eine erhöhte Metastasierungspotential und aggressiven Tumor-Phänotyp [33] sowie therapeutische Ziele [34] beleuchten. Daher Identifizierung anderer Gene, die durch Methylierung in GC-Zellen reguliert werden, wird wahrscheinlich das Management von GC zur Verbesserung der Tumorsuppressor-Funktion von PDSS2
durch die vorliegenden Ergebnisse werden wie folgt unterstützt:. (1) verminderte Expression von PDSS2
wurde häufig in GC Geweben nachgewiesen, (2) die mittlere Ebene der PDSS2
Ausdruck war signifikant niedriger bei GC Gewebe, und (3) verringerte Expression von PDSS2
mit frühen Rezidiv und anschließenden schlechten Prognose verbunden war. PDSS2
Expressionsniveaus in Biopsiegewebe erhalten endoskopische Überwachung Proben unter Verwendung von oder in chirurgischen Proben nützlich sein können für die frühe Wiederholung und einer schlechten Prognose die Vorhersage, was wahrscheinlich wird Hilfsmaßnahmen wirksamer therapeutischer Strategien zu entwerfen.
Diese Studie war begrenzt durch seine Mangel an ausreichender Funktionsanalyse von PDSS2
, die mildert die Schlussfolgerung, dass es als Tumorsuppressor in GC wirkt. Weitere Studien einschließlich Pfadanalyse im Magen-Karzinogenese und funktionelle Analyse wird erwartet, dass die molekularen Mechanismen, die biologischen Aktivitäten von PDSS2 zu klären zugrunde liegenden Hotels in GC.
Fazit
Abschließend unsere Ergebnisse lassen den Schluss zu, dass die Expression der mutmaßlichen Tumorsuppressor-Gen PDSS2
wird durch Promotor-Hypermethylierung in GC-Zellen reguliert und anzuzeigen. Unsere Ergebnisse zeigen weiterhin, dass die Expression von PDSS2
mRNA verringerte sich einen neuartigen Biomarker für die Progression und ein erneutes Auftreten aller Arten von GC.
Beiträge der Autoren darstellen
MK, HO, FS, DS, HT, RH und KM durchgeführten Experimente und Datenanalyse. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF und YK gesammelt Fälle und klinischen Daten. MK und SN konzipiert und entwickelt, um die Studie, und bereitete die anfängliche Manuskript. YK betreut das Projekt.

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