Verminderde expressie van prenyl difosfaat synthase subunit 2 correleert met een verminderde overleving van patiënten met maagkanker

Verminderde expressie van prenyl difosfaat synthase subunit 2 correleert met een verminderde overleving van patiënten met maagkanker
Abstracte achtergrond
Identificatie van nieuwe moleculaire biomarkers zal de behandeling van patiënten met maagkanker (GC) te verbeteren. Prenyl difosfaat synthase subunit 2 (PDSS2) is nodig voor co-enzym Q10 biosynthese en fungeert als een tumor suppressor; Echter, de rol en de regulerende mechanismen van PDSS2
in GC zijn niet begrepen. Het doel van dit onderzoek was om de status van meningsuiting en de regulerende mechanismen van PDSS2
in GC te bepalen.
Methods
Associaties tussen expressie en methylering van PDSS2
werden geëvalueerd met behulp van GC-cellijnen. De klinische betekenis van PDSS2
expressie werd geëvalueerd met behulp van 238 paren van chirurgisch weggesneden maag weefsels met subgroep analyse op basis van GC subtypes.
Resultaten
De expressie van PDSS2
mRNA werd verminderd bij 73% van de GC cel lijnen vergeleken met de controle niet-kankercel. De PDSS2
promotor werd gehypermethyleerd in cellen met een verminderde PDSS2
meningsuiting, en de behandeling van deze cellen met een methylatie remmer gereactiveerd PDSS2
expressie. GC weefsels uitgedrukt aanzienlijk lagere gemiddelde niveaus van PDSS2
mRNA in vergelijking met aangrenzende normale weefsels (P Restaurant < 0,001). Het expressiepatroon van PDSS2 eiwit kwam overeen met die van het mRNA ervan. De afname van PDSS2
mRNA expressie in weefsels GC (minder dan de helft van het niveau van expressie waargenomen in de overeenkomstige normale naastgelegen weefsels) significant gecorreleerd met verhoogde niveaus van koolhydraat antigeen 19-9 (P
= 0,015), lymfeknoop metastase (P
= 0,022), en kortere ziektevrije overleving na curatieve resectie (P
= 0,022). Verder, multivariate analyse geïdentificeerd PDSS2
mRNA expressie als een onafhankelijke prognostische factor (hazard ratio 1,95, 95% betrouwbaarheidsinterval 1,22-3,09, P
= 0,005), en de uitdrukking patroon en de prognostische betekenis waren vergelijkbaar tussen drie GC subtypes .
Conclusies
PDSS2
codeert voor een mogelijke tumor suppressor, en we zien hier dat haar expressie werd gereguleerd door hypermethylering van zijn promotor in GC cellen. Remming van PDSS2
mRNA expressie kan dienen als een nieuwe biomarker allerhande van GC.
Sleutelwoorden
Maagkanker prenyl difosfaat synthase subunit 2 Expressie methylering Subtype Achtergrond
Hoewel de incidentie van maagkanker (GC) daalt in de meeste ontwikkelde landen, blijft één van de meest voorkomende oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen wereldwijd [1] - [3]. Passende stratificatie van patiënten is een cruciaal aspect van geïndividualiseerde behandeling, wat leidt tot vermindering van de mortaliteit van deze kanker [4], [5].
Volgens de epidemiologie, pathologie en plaats in het lichaam, GC wordt als drie verschillende maligniteiten die zich in hetzelfde orgaan [6] - [8]. Shah et al. [9] voorgesteld een overtuigende indeling van GC volgens histopathologische en anatomische criteria als volgt: (1) proximaal nondiffuse GC waar de tumor hoofdzakelijk ligt in de gastrische cardia bewijs van precursor glandulaire dysplasie of in situ carcinoma in aanwezigheid van chronische ontsteking , meestal zonder atrofie; (2) diffuus GC, die overal kan bevinden in de maag zonder duidelijke gastritis er een volledig diffuus patroon van infiltratie van cellen met een slecht gedifferentieerd fenotype vertoont; en (3) distaal nondiffuse GC, die vooral in de distale maag met aanwijzingen voor chronische gastritis die overwegend gedifferentieerde of vertoont een intestinale fenotype. In deze studie, toonden zij dat de drie GC subtypen worden onderscheiden door hun genexpressieprofielen. Derhalve de genetische diversiteit van GC subtypes worden beschouwd in studies van genetische en epigenetische veranderingen in verband met maagkanker en progressie.
Prenyl difosfaat synthase subunit 2 (PDSS2
) werd geïdentificeerd in 2005 [10], en bewijs geeft dat het fungeert als een tumorsuppressor [11], [12]. PDSS2
is nodig voor de synthese van co-enzym Q10 (CoQ10) [13], [14], dat wordt gesynthetiseerd in het mitochondriale binnenmembraan en speelt een belangrijke rol in de mitochondriale ademhalingsketen, pyrimidine nucleoside biosynthese en moduleren van apoptose [15]. PDSS2
woont binnen de chromosomale locus 6q16.3-21, een site van frequente microsatelliet DNA instabiliteit en verlies van heterozygositeit (LOH) in GC [16], [17], ter ondersteuning van haar rol als een tumor suppressor in de maag epitheelcellen . Bovendien kan PDSS2 of the ontwikkeling van kwaadaardige melanomen en longkankers [11], [12] onderdrukken. Bovendien, Chen et al. gemeld dat overexpressie van PDSS2
leidt tot apoptose in een GC cellijn door het veroorzaken van de celcyclus in de G0 /G1-fase [18] ten uitvoer gelegd. Deze rapporten leidde ons naar een hypothese dat PDSS2
een potentiële-GC-gerelateerde gen en een kandidaat van nieuwe klinisch relevante prognostische marker van GC te maken.
In deze studie, expressie en methylatie status van PDSS2
in GC waren vastbesloten om de klinische betekenis en de regulerende mechanismen van PDSS2
meningsuiting in GC evalueren. Onze resultaten geven aan dat PDSS2
uitdrukking zorgt voor een potentiële klinische biomarker van de progressie en de herhaling van GC.
Materiaal en methoden
Ethics Inloggen Deze studie voldeden aan de ethische richtlijnen van de World Medical Association Verklaring van Helsinki -Ethical Principes voor medisch-wetenschappelijk onderzoek met mensen en heeft door de Institutional review Board van Nagoya Universiteit, Japan is goedgekeurd. Schriftelijk toestemming voor het gebruik van klinische monsters en gegevens, zoals vereist door de institutionele review board, werd verkregen van alle patiënten [4].
Sample collectie
Elf GC cellijnen (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-NU en SC-6-LCK) en CCL-241 (niet-kanker-cellijn afgeleid van de dunne darm) werden verkregen van de American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) of Tohoku University, Japan. De GC cellijnen werden gekweekt bij 37 ° C in RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) aangevuld met 10% foetaal runderserum in een atmosfeer die 5% CO 2. Voor CCL-241, werd 30 ng /ml van de epidermale groeifactor (Sigma-Aldrich) in het medium toegevoegd. Primaire GC weefsels en overeenkomstige normale aangrenzende weefsels werden verzameld van 238 patiënten die een maagresectie voor GC onderging bij Nagoya University Hospital tussen 2001 en 2012. Patiënten die neoadjuvante therapie kregen werden uitgesloten, omdat het moeilijk is om kankercellen te verkrijgen van littekens weefsels was. Monsters werden geclassificeerd histologisch met behulp van de 7e editie van de Unie voor International Cancer Control (UICC) classificatie [19]. Relevante clinicopathologische parameters werden uit medische dossiers overgenomen. Te beoordelen of het expressieniveau van PDSS2
gecorreleerd met tumor fenotype, werden de patiënten ingedeeld in drie groepen volgens de definitie van GC subtypes volgens de criteria van Shah et al. [9] als volgt: proximale nondiffuse, diffuus en distale nondiffuse type. Sinds 2006 is adjuvante chemotherapie met S-1 (mondeling gefluoreerd pyrimidine) toegediend aan alle UICC stadium II-III patiënten met GC tenzij gecontraïndiceerd bij toestand van de patiënt [20]. Patiënten werden ten minste één keer per 3 maanden gevolgd gedurende 2 jaar na de operatie en daarna elke 6 maanden gedurende 5 jaar of tot de dood. Lichamelijk onderzoek, laboratoriumtests, en verbeterde computertomografie (borst- en buikholte) werden uitgevoerd bij elk bezoek. Chemotherapie voor patiënten met metastasen of na herhaling werd bepaald door discretie arts.
Weefsel monsters werden onmiddellijk ingevroren in vloeibare stikstof en bewaard bij -80 ° C. Tumormonsters zonder necrotische gebieden (ongeveer 5 mm 2) werden geëxtraheerd door grove waarneming en uitsluitend monsters bevestigd meer dan 80% tumor componenten op H &omvatten; E kleuring werden in deze studie opgenomen. Overeenkomstige normale aangrenzende maagslijmvlies monsters > 5 ° cm van de rand van de tumoren werden verkregen van dezelfde patiënt [21]
Kwantitatieve real-time reverse transcriptie polymerase ketenreactie (qRT-PCR)
Totaal RNA. (10 ug per monster) werden geïsoleerd uit 11 GC cellijnen, CCL-241, 238 primaire GC weefsels en overeenkomstige normale aangrenzende weefsels werden gebruikt om cDNA's die werden geamplificeerd met behulp van specifieke PCR primers (aanvullende bestandsinformatie 1: Tabel S1) te genereren. Real-time detectie van SYBR® Green fluorescentie intensiteit werd uitgevoerd met een ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). De expressie van GAPDH
mRNA werd gekwantificeerd in elk monster voor standaardisatie. De qRT-PCR reacties in elk monster werden in drievoud uitgevoerd. Het expressieniveau van elk monster weergegeven als de waarde van de PDSS2
amplicon gedeeld door die van GAPDH
[22]. PDSS2
mRNA expressie werd gedefinieerd als afgenomen GC weefsels wanneer het niveau minder dan de helft van de overeenkomstige normale aangrenzend weefsel.
Analyse van de promotorregio van PDSS2 Ondernemingen De nucleotidesequentie van de PDSS2
promotorgebied werd als volgt geanalyseerd om de aanwezigheid of afwezigheid van CpG eilanden gedefinieerde bepalen: ten minste een 200-bp van DNA met een hoog GC-gehalte (> 50%) en een waargenomen CpG /Verwachte CpG verhouding ≥0.6 [23] . We gebruikten CpG Island Searcher software (http:.. //Cpgislands usc edu /) om de locaties van CpG eilanden [24] bepalen
methylatie-specifieke PCR (MSP) en bisulfiet sequentie-analyse
. PDSS2
bezit een CpG eiland in de buurt van haar promotor regio, en we de hypothese dat afwijkende methylering verantwoordelijk is voor het reguleren van de transcriptie van PDSS2
in GC. DNA monsters uit 11 GC cellijnen behandeld met bisulfiet werden onderworpen aan MSP en nucleotidesequentieanalyse [25]. De primer sequenties voor MSP en bisulfietsequencing zijn opgenomen in aanvullende bestandsinformatie 1: Tabel S1
5-aza-2'-deoxycytidine (5-aza-dC) behandeling Belgique Om de verhouding van promotor hypermethylatie PDSS2 te beoordelen.
transcriptie, GC cellen (1,5 x 10 6) werden behandeld met 5-aza-dC (Sigma-Aldrich) DNA methylatie en gekweekt gedurende 6 dagen met mediumveranderingen op dagen 1, 3 en 5 remmen. RNA werd geëxtraheerd en RT-PCR werd uitgevoerd zoals beschreven [7].
immunohistochemie (IHC)
IHC analyse van de localisatie van PDSS2 werd uitgevoerd met een monoklonaal antilichaam tegen PDSS2 (ab119768, Abcam, Cambridge, UK ) verdund 1: 150 in antilichaam oplosmiddel (Dako, Glostrup, Denemarken) tot 30 vertegenwoordiger in formaline gefixeerde en in paraffine ingebedde secties van goed bewaarde GC weefsel eerder [3] beschreven onderzoeken. Kleurpatronen werden vergeleken tussen GC en de overeenkomstige normale aangrenzende weefsels. Subjectiviteit te vermijden, werden de monsters gerandomiseerd en gecodeerd vóór de analyse door twee onafhankelijke waarnemers die zich onbewust van de status van de monsters waren. Elke waarnemer ten minste twee keer geëvalueerd alle exemplaren aan intra-observer variatie te minimaliseren [7].
Evaluatie van de klinische betekenis van PDSS2 meningsuiting
correlaties tussen het patroon van PDSS2
mRNA expressie en clinicopathologische parameters werden geëvalueerd op basis van de verschillen tussen de drie subtypen GC. Subgroepanalyse overleven volgens GC subtype werd uitgevoerd om de invloed van PDSS2
expressie op resultaten patiënt bepalen.
Statistische analyse
relatieve niveaus van mRNA-expressie (PDSS2 /GAPDH
) tussen GC en aangrenzende normale weefsels werden geanalyseerd met de Mann-Whitney U Electronics Test. De 2 χ
test werd gebruikt om de betekenis van de associatie tussen de expressie en methylatie status van PDSS2 Kopen en clinicopathologische parameters te analyseren. Ziekte-specifieke en ziektevrije overleving werden berekend met behulp van de Kaplan-Meier-methode, en het verschil in overleving curves werd geanalyseerd met behulp van de log-rank test. We voerden multivariate regressie-analyse om prognostische factoren volgens het Cox proportional hazards model, en variabelen met P Restaurant <te detecteren; 0.05 werden in de uiteindelijke model ingevoerd. Alle statistische analyses werden uitgevoerd onder toepassing van JMP 10 software (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Een waarde van P Restaurant < 0,05 werd beschouwd als statistisch significant.
Resultaten
Identificatie van een CpG eiland in de PDSS2 promotor Hotels A CpG eiland werd geïdentificeerd in de PDSS2
promotor gebied met behulp van de CpG Island Searcher. De eigenschappen van de CpG eiland zijn: 1655 bp, 55,9% GC en 0,70 waargenomen CpG /CpG verwachte verhouding (Figuur 1A). Daarom hebben we de hypothese dat Hypermethylering van de CpG eilanden regelt de expressie van PDSS2
in GC. Figuur 1 Methylering analyses van PDSS2 in GC cellijnen. (A) De CpG eiland aangegeven door de blauwe lijn is gericht op de PDSS2
transcriptie-initiatieplaats stroomopwaarts uitstrekt in het promotorgebied. (B) Bar grafieken geven PDSS2
mRNA expressie in CCL-241 (van toepassing op niet-kankercel) en GC cellijnen voor of na 5-aza-dc behandeling. De methylatie status van de PDSS2
promotor werd geëvalueerd met behulp van MSP, en de resultaten zijn ingesloten in de doos. M, gemethyleerde; pM gedeeltelijk gemethyleerd; U, ongemethyleerde. (C) Representatieve resultaten van bisulfiet sequentieanalyse. Alle CpG sites in KATOIII cel werden behouden als CG en die van MKN74 werden omgezet naar TG.
PDSS2 mRNA expressie en methylatie status van GC cellijnen
significante dalingen van PDSS2
mRNA niveaus werden gedetecteerd in zeven (73 %) van 11 GC cellijnen vergeleken met het expressieniveau van de CCL 241-cellen (gegevens voor GC weefsels worden hieronder beschreven). Er was geen duidelijk verschil in expressieniveaus tussen cellijnen afgeleid van gedifferentieerde en ongedifferentieerde GC (Figuur 1B). Hypermethylering van de PDSS2
promoter werd gedetecteerd in MKN1, SC-2-NU, KATOIII, MKN45 en NUGC3 cellen (Figuur 1B). Om te bepalen of hypermethylering van de PDSS2
promoter geremd transcriptie, werden mRNA expressie niveau vergeleken vóór en na de behandeling van cellen met de methylatie inhibitor 5-aza-DC. PDSS2
mRNA niveaus werden gerestaureerd in cellen met down-gereguleerd PDSS2
expressie begeleidende hypermethylering na 5-aza-dc behandeling (Figuur 1B), wat aangeeft dat de promotor hypermethylering geremd PDSS2
transcriptie in GC. Representatieve chromatogrammen van de sequentieanalyse van de PDSS2
promotorgebied in MKN28 (volledige methylering) en NUGC4 (afwezigheid van methylatie) cellen worden getoond in Figuur 1C.
Patiëntenkenmerken
De patiëntenpopulatie bestond 179 mannen en 59 vrouwen 20-84 jaar (65,3 × 11,7 jaar, gemiddelde × standaarddeviatie). Pathologisch werden 139 en 99 patiënten met gedifferentieerde en gedifferentieerde GC, respectievelijk. De patiënten werden ingedeeld in de drie GC fenotypen als volgt: nondiffuse, 54; diffuse, 48; en distale nondiffuse, 136. Volgens de 7e editie van de UICC indeling, 58, 40, 71 en 69 patiënten in fasen I, II, III en IV, respectievelijk. Honderd vierenzestig patiënten in fasen I-III onderging R0 resectie. Zestig van de 69 patiënten in UICC stadium IV werden gediagnosticeerd als stadium IV door positieve peritoneale lavage cytologie, gelokaliseerde peritoneale metastase of verre lymfeklieren metastase. Acht patiënten in fase IV had synchrone levermetastasen, één had longmetastasen, en zij onderging gastrectomie gericht op bloeden of obstructie om de doorgang van voedsel.
Expressieniveaus van PDSS2 mRNA en eiwit in chirurgisch weggesneden weefsel Ondernemingen De gemiddelde expressieniveau van mRNA PDSS2
lager bij GC weefsels vergeleken met die van normale aangrenzende weefsels (P
< 0,001); er was echter geen significant verschil in PDSS2
mRNA expressie tussen patiënten met ongedifferentieerde of gedifferentieerde GC (Figuur 2A). Het expressiepatroon van PDSS2 werd geëvalueerd met behulp van IHC. Representatieve gevallen verminderde PDSS2 kleuring van GC weefsels worden getoond in Figuur 2B. Kortom, de kleurpatronen van PDSS2 waren consistent met qRT-PCR data. Figuur 2 Expressie analyse van PDSS2 in klinische monsters. (A) Het gemiddelde niveau van PDSS2
GC mRNA in weefsels vergeleken met de overeenkomstige normale aangrenzende weefsels en weefsels GC tussen patiënten met ongedifferentieerde GC en GC gedifferentieerd. (B) Representatieve IHC gegevens vergelijken PDSS2 expressie in tumor en aangrenzende normaal aangrenzend weefsel (uitvergroot 100 × en 400 ×). N, normaal aangrenzend weefsel; Prognostische implicaties van PDSS2 mRNA expressieniveaus T, tumorweefsel.
De expressie van PDSS2
mRNA in weefsels GC was verlaagd bij 76 (32%) van de 238 patiënten (minder dan de helft van het niveau van expressie gedetecteerd in de overeenkomstige normale aangrenzende weefsels). De ziekte-specifieke overleving van patiënten met een verminderde niveaus van PDSS2
mRNA in GC was significant lager in vergelijking met degenen zonder (5-jaarsoverleving, 36% en 64%, respectievelijk, P Restaurant < 0,001, figuur 3A). Verminderde niveaus van PDSS2
mRNA in GC waren significant geassocieerd met koolhydraten antigeen (CA) 19-9 > 37 IU /ml en lymfeklier (tabel 1). Univariate analyse van de ziekte-specifieke overleving toonde aan dat GC subtype (proximale nondiffuse of diffuse), CA 19-9 > 37 IU /ml, tumorgrootte (≥50 mm), pT4, ongedifferentieerde tumor, lymfatische betrokkenheid, schip invasie, invasieve groei, lymfeklier metastase, positieve peritoneale lavage cytologie, en verminderde PDSS2
mRNA expressie in GC weefsels waren significant prognostische factoren van negatieve resultaten. Multivariate analyse geïdentificeerd daalde PDSS2
mRNA expressie als een onafhankelijke prognostische factor (hazard ratio 1,95, 95% betrouwbaarheidsinterval 1,22-3,09, P
= 0,005, tabel 2). De proportionele risico's veronderstelling in het Cox model werd beoordeeld met modellen, waaronder time-by-covariaat interacties en geen significante overtredingen werden gevonden in het model. Figuur 3 prognostische implicaties van PDSS2 mRNA expressie bij patiënten met GC. (A) De ziekte-specifieke overleving van patiënten met een verminderde PDSS2
mRNA in GC weefsel. (B) (C) Ziekte-specifieke (B) en de herhaling-vrij (C) overleving bij 168 patiënten die een R0 resectie ondergingen.
Tabel 1 Verband tussen expressie van PDSS2 mRNA en klinisch-pathologische parameters van 238 patiënten
Variabelen
DecreasedPDSS2
mRNA in GC weefsels (n)
Andere (n)
P
waarde
Leeftijd
0,408
< 65 bouwjaar 29
71
≥ 65 jaar
47
91
Geslacht
0,551
Man
59
120
Female
17
42
Subtype
0,298
proximale nondiffuse
22
32
Zend
14
33
distale nondiffuse
40
96
carcino-antigeen (ng /ml)
0.490
≤ 5
59
132 Restaurant > 5
17
30
Carbohydrate antigeen 19-9 (IU /ml)
0.015 *
≤ 37
55
139 Restaurant > 37
21
23
Tumor grootte (mm)
0,104
< 50
29
80
≤ 50
47
82
Tumor diepte (UICC)
0,419
pT1
14
32
pT2
6
24
pT3
19
33
pT4
37
73
Differentiatie
0,217
Gedifferentieerde
36
63
Onzichtbare
40
99
Lymfatische betrokkenheid
0,201
Absent
8
27
Presenteer
68
135
vaartuig invasie
0,535
Absent
31
73
Presenteer
45
89
Infiltratieve groei soort
0,443
invasieve groei
24
59
expansieve groei
52
102
lymfekliermetastase (UICC)
0.022 *
pN0
19
70
pN1
8
19
pN2
12
24
pN3
37
49
peritoneale lavage cytologie
0,306
Negatief
57
131
Positieve
19
31
Distant metastase (UICC)
0,228
M0
50
119
M1
26
43
* statistisch significant (p Restaurant < 0,05). GC, maagkanker; UICC, Union for International Cancer controle.
Tabel 2 prognostische factoren voor de ziekte-specifieke overleving van 238 patiënten
Variabelen
n (%)
Univariate
multivariabele
Hazard ratio
95% CI
P
waarde
Hazard ratio
95% CI

P
waarde
Age (≥65)
138 (58%)
1.04
0,67-1,61
0,843
Geslacht (vrouw)
59 (25%)
1.29
0,79-2,05
0,301
Subtype (distale nondiffuse)
136 (57%)
0.43
0,28-0,67 Restaurant < 0.001
0,64
0,40-1,01
0,056
carcino-antigeen (> 5 ng /ml)
47 (20%)
1.48
0,86-2,42
0,149
Koolhydraten antigeen 19-9 (> 37 IU /ml)
44 (18%)
1,98
1,17-3,20
0.012
1.23
0,71-2,06
0,445
tumorgrootte (≥50 mm)
129 (54%)
2,86
1,78-4,80 Restaurant < 0,001
1,40
0,83-2,42
0,211
Tumor diepte (pT4, UICC)
110 (46%)
4.17
2,61-6,88 Restaurant < 0,001
1,38
0,78-2,50
0,273
Tumor differentiatie (ongedifferentieerde)
139 (58%)
2,03
1,28-3,32
0,002
1.45
0,83-2,60
0,197
Lymfatische betrokkenheid
203 (85%)
6,31
2,36-25,8 Restaurant < 0,001
1.45
0,45-6,50
0,559
Vessel invasie
134 (56%)
2.65
1,66-4,37 Restaurant < 0,001
1.75
1,07-2,97
0.026 *
invasieve groei
83 (35%)
3,03
1,97 - 4.70 Restaurant < 0,001
1.19
0,70-2,05
0.520
lymfekliermetastasen
149 (63%)
7,02
3,70-15,1 Restaurant <0,001
1,38
0,56-3,81
0,503
peritoneale lavage cytologie (positief)
50 (21%)
4.33
2,76-6,74 Restaurant < 0,001
1.87
1,14-3,06
0,014 *
UICC stadium (III-IV)
140 (59%)
9.68
4,97-21,8 Restaurant < 0,001
2,63
0,94-7,83
0.065
Verminderde PDSS2
mRNA in GC
76 (32%)
2.18
1,40-3,37 Restaurant < 0,001
1.91
1,19-3,04
0,008 *
* Statistisch significant in multivariate analyse. GC, maagkanker; BI, betrouwbaarheidsinterval; UICC, Union for International Cancer controle.
Van de 168 patiënten die een R0 resectie ondergingen, de ziekte-specifieke overleving was significant lager voor mensen met een verminderde PDSS2
mRNA expressie in GC (n = 50) in vergelijking met degenen zonder (n = 118) (5-jaarsoverleving van respectievelijk 50% en 77%, p = 0,006
, Figuur 3B). Patiënten met een verminderde PDSS2
mRNA expressie in GC ervaren significant eerder recidieven na de ingreep in vergelijking met degenen zonder (2-jaars ziektevrije overleving tarieven, 64% en 84%, respectievelijk, P
= 0,022, figuur 3C). Eerste herhaling plaatsen van relapsing 43 patiënten met verminderde PDSS2
mRNA expressie in peritoneale GC waren in 21 (49%), lever 6 (14%), lymfeklier in 13 (30%) en andere (bijv longen en botten) in 3 patiënten. Aan de andere kant, die van 61 relapsing patiënten zonder verminderde PDSS2
peritoneale in 35 (57%) waren, lever 10 (16%), lymfeklier in 8 (13%) en andere bij 8 patiënten. Patiënten met een verminderde PDSS2
mRNA expressie in GC waren waarschijnlijk een knooppunt terugval hebben, hoewel het niet de statistische significantie bereikte.
Subgroepanalyse van PDSS2 expressie volgens GC subtype
Mean PDSS2
mRNA expressie niveaus waren equivalent in GC en normale aangrenzende weefsels (Figuur 4A). Ook de prognostische waarde van verminderde PDSS2
mRNA expressie in GCs vergelijkbaar tussen de drie GC subtypen (Figuur 4B) was. Figuur 4 Subgroepanalyse van GC subtypes. (A) PDSS2
mRNA expressie tussen de drie subtypen zowel GC GC en normale aangrenzende weefsels. (B) Vergelijking van de ziekte-specifieke overleving van patiënten met en zonder verminderde PDSS2
mRNA expressie in GC van elk GC subtype.
Discussie
PDSSs zijn heterotetramere enzymen bestaande uit subeenheden gecodeerd door PDSS1
(10p12. 1) en PDSS2
[10], [12]. PDSS activiteit vereist beide subeenheden [10], [14], [15]. De associatie van PDSS2 hotels met GC werd beschouwd vanwege de chromosomale locatie (6q21), en vanwege de inactivatie of het verlies van bepaalde maligniteiten [16], [26]. Hier laten we zien dat PDSS2
heterogeen mRNA expressie werd gebracht in cellijnen GC en de expressie werd geremd in 73% en 32% GC cellijnen en tumorweefsels, respectievelijk. Detecteerden we hypermethylering van de PDSS2
promoter in vijf (45%) van 11 GC cellijnen significant verlaagde PDSS2
expressie. Verder werd PDSS2
transcriptie geactiveerd nadat cellen werden behandeld met een remmer van DNA-methylatie. Deze bevindingen zijn eerste onze kennis tonen dat hypermethylering promoter reguleert PDSS2
transcriptie. Echter, werd PDSS2
expressie daalden bij sommige GC cellen zonder hypermethylering. Omdat chromosoom 6Q is een frequente plaats van LOH in GC [17], [26], [27], LOH kan PDSS2
expressie te reguleren ook.
Er is een rapport waaruit blijkt dat PDSS2
werd uitgedrukt geweest bij verlaagde of niet detecteerbare expressie in een klein aantal biopsie monsters GC [18]. In de huidige studie analyseerden we 238 chirurgische exemplaren van tumoren en de bijbehorende niet-betrokken weefsel om meer inzicht te krijgen in de klinische betekenis van PDSS2
expressie in GC. Consistent met analyses van maligne melanoom en longcarcinoom [11], [12] De meeste patiënten met GC herbergde een verminderd niveau van PDSS2
mRNA in weefsels GC en de gemiddelde PDSS2
expressie was significant verlaagd vergeleken met GC normale aangrenzende weefsels. IHC werd uitgevoerd om te bepalen of mRNA niveau gereflecteerde PDSS2
eiwitexpressie. Omdat de IHC resultaten gaven aan dat het mRNA gegevens waren consistent met het eiwitniveau, werden verdere analysen uitgevoerd volgens de mRNA gegevens, die beter geschikt voor de kwantitatieve analyse [7], [23].
Verminderde PDSS2 Wat zijn mRNA expressie in GCs was significant geassocieerd met verhoogde niveaus preoperatieve CA19-9 en lymfeknoop metastasen en is geïdentificeerd als een onafhankelijke prognostische factor. Bovendien, patiënten met een verminderde PDSS2
mRNA expressie in GC weefsel ervaren significant eerder recidief na R0 resectie. Onlangs, Chen et al. onderzocht tumor-onderdrukkende activiteit van PDSS2
van longkanker [28]. Zij meldde dat de gedwongen overexpressie van PDSS2
veroorzaakte massale celdood door middel van apoptotische routes en remde significant kolonievorming en er een omgekeerde correlatie tussen PDSS2
expressie en expressie gelsoline, waarvan bekend is apoptose te remmen en verbeteren celinvasie en metastase [29], maar PDSS2 de gevoeligheid van kankercellen chemotherapeutica [28] niet heeft beïnvloed. Deze tumor onderdrukkend mechanisme PDSS2
kan worden toegepast op zowel GC. Ondernemingen De expressiepatroon van PDSS2
mRNA en prognostische gevolgen waren vergelijkbaar in de drie subtypen GC (proximaal nondiffuse, diffuus en distale nondiffuse) Dit geeft aan dat PDSS2
expressie beïnvloedt de pathogenese van alle soorten GC. Shah et al. gemeld dat een derde van de geamplificeerde genen, eventueel met PDSS2
, vertoonden gelijkwaardige expressiepatroon van de drie subtypen GC [9].
GC is een van de tumoren met een hoge frequentie van afwijkende methylering en het vaak vertoont de CpG eiland methylator fenotype [30], [31]. De expressie van een groot aantal genen wordt onderdrukt door CpG eiland hypermethylatie in GC cellen, waaronder die welke coderen voor tumor suppressors, celcyclus regulatoren, inductoren en uitvoerders van apoptose proteïnen die invasief fenotype te bevorderen, en DNA mismatch repair enzymen [32]. Deze epigenetische veranderingen kunnen dienen als biomarkers die een verhoogd metastatisch potentieel en agressieve tumor fenotype [33] en therapeutische doelwitten [34] verlichten. Daarom is de identificatie van andere genen die worden gereguleerd door methylatie in GC cellen zal waarschijnlijk verbeteren van het beheer van GC Ondernemingen De tumor onderdrukkende functie van PDSS2
worden ondersteund door de huidige bevindingen als volgt:. (1) daalde expressie van PDSS2
werd vaak waargenomen in GC weefsels, (2) het gemiddelde niveau van PDSS2
expressie was significant lager in GC weefsels, en (3) verminderde expressie van PDSS2
geassocieerd met vroege recidief en daaropvolgende slechte prognose. PDSS2
expressie niveaus in biopsie weefsel verkregen met behulp van endoscopische surveillance monsters of chirurgische monsters kan nuttig zijn voor het voorspellen van de vroege herhaling en een slechte prognose, die zal waarschijnlijk hulp inspanningen om meer doeltreffende therapeutische strategieën te ontwikkelen.
Deze studie werd beperkt door de gebrek aan voldoende functionele analyse van PDSS2
, die tempert de conclusie dat het fungeert als een tumor suppressor in GC. Verdere studies waaronder pathway-analyse in de maag carcinogenese en functionele analyse wordt verwacht dat de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de biologische activiteiten van PDSS2
in GC verduidelijken.
Conclusie
Samenvattend, onze bevindingen ondersteunen de conclusie dat de expressie van het vermeende tumor suppressor gen PDSS2
wordt gereguleerd door promoter hypermethylering in GC cellen en aan te geven. Onze resultaten geven verder aan dat de expressie van PDSS2
mRNA verlaagd kan een nieuwe biomarker voor progressie en de herhaling van alle soorten GC vertegenwoordigen. Bijdragen
Authors '
MK, HO, FS, DS, HT, RH en KM uitgevoerde experimenten en gegevensanalyse. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF en YK verzameld gevallen en klinische gegevens. MK en SN bedacht en ontwierp de studie, en bereidde de oorspronkelijke manuscript. YK begeleidde het project. Alle auteurs hebben bijgedragen aan het definitieve manuscript.

• Gastric tonometry begeleide therapie bij intensive care-patiënten: een systematische review en meta-analysis
• Het nut van cytokeratines 7 en 20 (CK7 /20) immunohistochemie in het onderscheid van het korte segment Barrett slokdarm van de maag-darm metaplasie: Is het betrouwbaar