Vähentynyt ilmentyminen prenyyli difosfaatiksi nopaliinisyntaasin alayksikön 2 korreloi alentunut potilaiden selviytymiseen mahalaukun cancer

vähentynyt ilmentyminen prenyyli difosfaatiksi nopaliinisyntaasin alayksikön 2 korreloi vähentynyt selviytymisen potilaita, joilla on mahalaukun syövän
tiivistelmä
tausta
tunnistaminen romaani molekyyli biomarkkerit parantaa potilaiden hoitoon mahalaukun syöpä (GC). Prenyyli Difosfaattia nopaliinisyntaasin alayksikön 2 (PDSS2) tarvitaan koentsyymi Q10 biosynteesin ja toimii tuumorisuppressorina; kuitenkin, rooli ja sääntelyn mekanismeja PDSS2
GC ei ymmärretä. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää ilmentymistilanne ja sääntelyn mekanismeja PDSS2
GC. Tool Menetelmät
assosiaatioiden ilmaisun ja metylaation PDSS2
arvioitiin käyttäen GC solulinjoja. Kliininen merkitys PDSS2
ilmentymisen arvioitiin käyttäen 238 paria kirurgisesti resektoitiin mahalaukun kudoksiin alaryhmäanalyysi perustuva GC alatyyppejä.
Tulokset
ilmentyminen PDSS2
mRNA väheni 73% GC solun linjat kontrolliin verrattuna ei-syöpäsolujen. PDSS2
promoottori hypermetyloitunut solujen vähentynyt PDSS2
ilmaisun, ja hoidettaessa näitä solut metylaation estäjän uudelleen PDSS2
ilme. GC kudokset ilmaisi huomattavasti alhaisempi keskimääräinen taso PDSS2
mRNA verrattuna viereisten normaaleissa kudoksissa (P
< 0,001). Ekspressiokuviota PDSS2 proteiini, joka on yhdenmukainen sen mRNA: ta. Väheneminen PDSS2
mRNA: n ekspression GC kudoksissa (alle puoli ilmentymisen taso havaitaan vastaavassa normaalissa viereisiin kudoksiin) korreloi merkittävästi kohonneet hiilihydraattiantigeeniä 19-9 (P
= 0,015), imusolmukkeesta etäpesäkkeiden (P
= 0,022), ja lyhyempiä uusiutumista elinaika jälkeen parantava resektio (P
= 0.022). Edelleen monimuuttujamenetelmin tunnistettu PDSS2
mRNA: n ilmentymisen itsenäisenä ennustetekijä (riskisuhde 1,95, 95%: n luottamusväli 1,22-3,09, P
= 0,005), ja sen ilme kuvio sekä varoituksia merkitys oli samankaltainen kolme GC alatyyppiä .
Johtopäätökset
PDSS2
koodaa oletetun tuumorisuppressori, ja osoitamme tässä, että sen ilmentyminen säädeltiin hypermetylaatiota sen promoottorin GC soluissa. Esto PDSS2
mRNA: n ilmentymisen voi toimia uutena biomarkkeri kaikenlaisten GC.
Avainsanat
Mahasyöpää prenyyli difosfaatti nopaliinisyntaasin alayksikön 2 Expression metylaatio alatyyppi tausta
Vaikka esiintyvyys mahasyövän (GC) vähenee useimmissa kehittyneissä maissa, se on edelleen yksi yleisimmistä syistä syöpään liittyvät kuolemat maailmanlaajuisesti [1] - [3]. Asianmukaiset kerrostuminen potilaista on keskeinen näkökohta yksilöllinen kohtelu, mikä vähentää kuolleisuutta tästä syöpään [4], [5].
Sen epidemiologian, patologian ja sijainti kehossa, GC on tunnustettu kolme erillistä syöpäsairauksia syntyvät samassa elimessä [6] - [8]. Shah et ai. [9] ehdotettu vakuuttava luokittelu GC mukaisesti histopatologisten ja anatomiset kriteerit seuraavasti: (1) proksimaalisen nondiffuse GC, jossa kasvain sijaitsee pääasiassa mahalaukun cardia todisteet prekursorin rauhasten dysplasia tai in situ karsinooma, kun läsnä on krooninen tulehdus yleensä ilman surkastuminen; (2) diffuusi GC, joka voi sijaita missä tahansa mahalaukussa ilman ilmeistä gastriitti, joka esittelee täysin hajanainen kuvio soluttautumisen solujen huonosti eriytetty fenotyyppi; ja (3) distaalinen nondiffuse GC, joka sijaitsee pääasiassa distaalisessa vatsaan näyttöä kroonisesta gastriitti, joka on pääasiallisesti eriytetty tai se osoittaa suoliston fenotyyppi. Tässä tutkimuksessa he osoittivat, että kolme GC-alatyyppien eroavat geeniekspressioprofiilit. Siksi geneettisen monimuotoisuuden GC alatyypeistä olisi harkittava tutkimuksissa geneettisten ja epigeneettiset muutokset liittyvät mahasyövän ja etenemiseen.
Prenyyli difosfaatiksi nopaliinisyntaasin alayksikön 2 (PDSS2
) tunnistettiin vuonna 2005 [10], ja todisteet osoittavat että se toimii tuumorisuppressorina [11], [12]. PDSS2
tarvitaan synteesissä koentsyymi Q10 (Q10) [13], [14], joka syntetisoidaan mitokondrion sisäkalvon ja on tärkeä rooli mitokondrion Hengitysketjun, pyridimidiininukleosidin biosynteesiin, ja modulaatio apoptoosin [15]. PDSS2
oleskelee Euroopan kromosomilokuksen 6q16.3-21, sivuston usein microsatellite DNA epävakautta ja Heterotsygotian menetys (LOH) GC [16], [17], vahvistaisi sen asemaa tuumorisuppressorina maha- epiteelisolujen . Lisäksi PDSS2
voi tukahduttaa kehitystä pahanlaatuisia ihosyövän ja keuhkosyöpää [11], [12]. Lisäksi Chen et al. kertoi, että täytäntöön yliekspressio PDSS2
johtaa apoptoosin GC solulinjassa aiheuttamalla solukierron pysähtymisen G0 /G1 vaiheessa [18]. Nämä raportit saivat meidät tekemään hypoteesi, joka PDSS2
on potentiaalinen GC liittyvän geenin ja ehdokas uusien kliinisesti relevantti ennustetekijöiden markkeri GC.
Tässä tutkimuksessa ilmaus ja metylaatiostatus PDSS2
vuonna GC määritettiin arvioimaan kliinistä merkitystä ja sääntelyn mekanismeja PDSS2
ilmaisun GC. Tuloksemme osoittavat, että PDSS2
ilmaisu tarjoaa mahdollista kliinistä biomarkkereiden etenemisen ja uusiutumisen GC.
Materiaali ja menetelmät
Ethics
Tutkimuksessa noudatettiin eettiset ohjeet Maailman lääkäriliiton Helsingin julistuksessa -Ethical periaatteet Medical Research ihmiseen kohdistuvan ja on hyväksynyt Institutional Review Board of Nagoya University, Japani. Kirjallinen suostumus käyttö kliinisten näytteiden ja tietojen edellyttämällä tavalla Institutional Review Board, saatiin kaikista potilaista [4].
Näytteiden kerääminen
Yksitoista GC solulinjoissa (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-NU ja SC-6-LCK) ja CCL-241 (ei-syöpä-solulinjasta peräisin ohutsuolesta) saatiin American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) tai Tohoku University, Japani. GC solulinjoja viljeltiin 37 ° C: ssa RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), johon oli lisätty 10% naudan sikiön seerumia atmosfäärissä, joka sisälsi 5% CO 2. CCL-241, 30 ng /ml epidermaalista kasvutekijää (Sigma-Aldrich) lisättiin väliaineeseen. Ensisijainen GC kudoksia ja vastaavassa normaalissa viereisten kudosten kerättiin 238 potilasta joille tehtiin mahalaukun resektio GC Nagoya yliopistollisen sairaalan välillä 2001 ja 2012. Potilailla, jotka saivat neoadjuvant hoidon jätettiin koska se oli vaikea saada syöpäsolujen arpinen kudoksista. Näytteet luokiteltiin histologisesti käyttäen 7. painos Unionin International Cancer valvonta (UICC) luokitus [19]. Asiaankuuluvat kliinis parametrit hankittiin potilastietoja. Sen arvioimiseksi, ilmentymistason PDSS2
korreloivat kasvaimen fenotyypin, potilaat luokiteltiin kolmeen ryhmään sen mukaan määritelmän GC alatyyppien kriteerien mukaan Shah et ai. [9] seuraavasti: proksimaalinen nondiffuse, hajanainen, ja distaalinen nondiffuse tyyppi. Vuodesta 2006 adjuvanttihoitoa käyttäen S-1 (suullinen fluorattu pyrimidiini) annetaan kaikille UICC vaiheen II-III potilaalla on GC ellei kontraindikaatioita potilaan kunnon [20]. Potilaita seurattiin vähintään 3 kuukauden välein 2 vuoden ajan leikkauksen jälkeen ja sitten 6 kuukauden välein 5 vuoden ajan tai kunnes kuolema. Lääkärintarkastus, laboratoriokokeet, ja parannettu tietokonetomografiaa (rinnassa ja vatsaontelon sisään) suoritettiin jokaisen käynnin. Kemoterapian potilaille, joilla etäpesäkkeiden tai sen jälkeen toistumisen määritettiin lääkärin harkinnan mukaan.
Kudosnäytteitä pakastettiin välittömästi nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa. Kasvainnäytteestä ilman nekroottinen alueilla (noin 5 mm 2) uutettiin brutto havainnointi ja vain näytteet varmistuvat muodostavat yli 80% kasvain komponenttien H &E-värjäystä mukana tässä tutkimuksessa. Vastaavassa normaalissa vieressä mahalaukun limakalvon näytteitä > 5 ° Cm reunasta kasvainten saatiin samasta potilaasta [21].
Kvantitatiivinen reaaliaikainen käänteistranskriptiotuotteiden polymeraasiketjureaktio (qRT-PCR)
Yhteensä RNA: ita (10 ug per näyte) eristettiin 11 GC solulinjat, CCL-241, 238 ensisijaista GC kudosten ja vastaavassa normaalissa viereisiin kudoksiin käytettiin tuottamaan cDNA, joka monistettiin käyttämällä spesifisiä PCR-alukkeita (Additional tiedosto 1: Taulukko S1). Reaaliaikainen havaitseminen SYBR® Green fluoresenssi-intensiteetin suoritettiin käyttäen ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Ilmaisu GAPDH
mRNA kvantitoitiin kunkin näytteen standardointia varten. QRT-PCR-reaktiot kunkin näytteen tehtiin kolmena kappaleena. Ilmentymisen taso kunkin näytteen on esitetty arvo PDSS2
amplikoni jaettuna, että GAPDH
[22]. PDSS2
mRNA: n ekspressio määritettiin väheni GC kudoksissa, kun sen taso on alle puolet vastaavan normaalin viereisen kudoksen.
Analyysi promoottorialueen PDSS2
nukleotidisekvenssi PDSS2
promoottorialue analysoitiin läsnä tai poissa CpG-saarekkeiden määritellään seuraavasti: vähintään 200-bp DNA-alue, jolla on korkea GC-pitoisuus (> 50%) ja Havaitut CpG /odotettu CpG-suhde ≥0.6 [23] . Käytimme CpG Island Searcher ohjelmisto (http: //cpgislands. USC. Edu /) määrittää sijainnit CpG-saarekkeiden [24].
Metylaatiospesifinen PCR (MSP) ja bisulfiitin sekvenssianalyysi
PDSS2
hallussaan CpG saaren lähellä sen promoottorialueen, ja me arveltu, että poikkeava metylaatio joka sääntelee transkriptioon PDSS2
GC. DNA-näytteet 11 GC solulinjoja käsiteltiin bisulfiitin alistettiin MSP ja nukleotidisekvenssin analyysi [25]. Alukesekvenssejä käytetään MSP ja bisulfiitti sekvensointi luetellaan Additional tiedosto 1: Taulukko S1.
5-atsa-2'-deoksisytidiini (5-atsa-dC) käsittely
arvioimiseksi suhteessa promoottorin hypermetylaatio on PDSS2
transkription, GC-soluja (1,5 x 10 6) käsiteltiin 5-atsa-dC (Sigma-Aldrich) ja estää DNA: n metylaation ja viljeltiin 6 päivää vaihtaen väliaineen päivinä 1, 3 ja 5. RNA uutettiin, ja RT-PCR suoritettiin, kuten on kuvattu [7].
immunohistokemia (IHC) B IHC-analyysi lokalisoinnin PDSS2 suoritettiin käyttäen hiiren monoklonaalinen vasta-aine PDSS2 (ab119768, Abcam, Cambridge, Iso-Britannia ) laimennettuna 1: 150 vasta-laimentimeen (Dako, Glostrup, Tanska) koetin 30 edustava formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut osat hyvin säilynyt GC kudoksen kuvattu aiemmin [3]. Värjäyskuviot vertailtiin GC ja vastaavien normaali viereisiin kudoksiin. Välttämiseksi subjektiivisuus, näytteet satunnaistettiin ja koodataan ennen analyysiä kahdesta toisistaan ​​riippumattomasta tarkkailijaa, jotka olivat tietoisia tilan näytteistä. Kukin tarkkailija arvioi kaikki näytteet vähintään kahdesti minimoida sisäisten tarkkailija vaihtelu [7].
Arviointi kliinistä merkitystä PDSS2 ilmaisun
väliset korrelaatiot rakenteessa PDSS2
mRNA: n ilmentymisen ja kliinis parametreja arvioitiin mukaan erot joukossa kolme GC alatyyppiä. Alaryhmäanalyysissä selviytymisen GC: n mukaan alatyypin suoritettiin määrittämään vaikutuksen PDSS2
ilmaisun potilaiden tuloksiin.
Tilastollinen
suhteelliset mRNA ilmaisun (PDSS2 /GAPDH
) välillä GC ja viereisten normaaleissa kudoksissa analysoitiin käyttämällä Mann-Whitneyn U-
testi. Χ
2 testiä käytettiin analysoimaan merkitystä yhdistyksen välillä ilmaisun ja metylaatiostatuksen PDSS2
ja kliinis parametrit. Tautikohtaiset ja taudista vapaan eloonjäämisen laskettiin käyttämällä Kaplan-Meier menetelmällä, ja ero eloonjäämiskäyrien analysoitiin käyttäen log-rank-testi. Me tehdään monimuuttuja regressioanalyysiä havaitsemiseksi ennustetekijöitä Coxin suhteellisten riskien mallia, ja muuttujien P
< 0,05 vietiin lopulliseen malliin. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen JMP-10 ohjelmisto (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Arvo P
< 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.
Tulokset
tunnistaminen CpG saaren PDSS2 promoottori
CpG saari tunnistettiin PDSS2
promoottorialueen käyttäen CpG Island Searcher. Ominaisuudet CpG-saarekkeen, ovat seuraavat: 1655 bp, 55,9% GC, ja 0,70 Havaittu CpG /Odotettu CpG-suhde (kuvio 1A). Siksi me arveltu, että hypermetylaatiota CpG-saarekkeiden säätelee ilmentymistä PDSS2
GC. Kuva 1 metylointi analyysejä PDSS2 GC solulinjoissa. (EN) CpG-saarekkeen merkitty sininen viiva on keskitetty PDSS2
transkription aloituskohdan ulottuu ylävirtaan osaksi promoottorialueen. (B) Pylväsdiagrammit osoittavat PDSS2
mRNA ekspressiotasot CCL-241 (ohjaamaan muita kuin syöpäsolu) ja GC solulinjoja ennen tai jälkeen 5-atsa-dC hoitoa. Metylointi tila PDSS2
promoottori arvioitiin käyttäen MSP, ja tulokset ovat kehyksen sisällä. M, metyloitu; pM, osittain metyloitua; U, metyloimattomia. (C) edustavat tulokset bisulfiitin sekvenssianalyysillä. Kaikki CpG sivustoja KATOIII solussa säilytettiin kuten CG ja niille MKN74 muutettiin TG.
PDSS2 mRNA ilmaisun ja metylaatiostatuksen GC solulinjoissa
pienensi merkitsevästi PDSS2
mRNA havaittiin seitsemässä (73 %) 11 GC solulinjojen verrattuna ilmentymisen taso CCL-241 solua (Data GC kudoksia on kuvattu alla). Ei havaittu selvää eroa ekspressiotasot väliin johdetut solulinjat eriytetty ja erilaistumaton GC (kuvio 1 B). Hypermetylaatiota PDSS2
promoottorin havaittiin MKN1, SC-2-NU, KATOIII, MKN45, ja NUGC3 solut (kuvio 1 B). Voit selvittää, onko hypermetylaatiota PDSS2
promoottori esti transkriptiota, mRNA ekspressiotasoja verrattiin ennen ja jälkeen käsittelemällä solut Metylointilaitteistoon estäjän 5-atsa-dC. PDSS2
mRNA palautettiin solujen alassäädetty PDSS2
ilmaisu mukana hypermetylaation jälkeen 5-atsa-dC käsittely (kuvio 1 B), mikä osoittaa, että promoottori hypermetylaation esti PDSS2
transkription GC. Edustaja kromatogrammit sekvenssin analyysi PDSS2
promoottorialueen MKN28 (täydellinen metylaatio) ja NUGC4 (puuttuminen metylaatio) solut on esitetty kuviossa 1C.
Potilaan ominaisuudet
Potilaista 179 urosta ja 59 naaraiden vuotiaista 20-84 vuotta (65,3 x 11,7 vuotta, keskiarvo x keskihajonta). Patologisesti, 139 ja 99 potilailla diagnosoitiin erilaistumattoman ja eriytetty GC, vastaavasti. Potilaat luokitellaan kolmeen GC fenotyypit seuraavasti: nondiffuse, 54; hajanainen, 48; ja distaalinen nondiffuse, 136. Mukaan seitsemäs painos UICC luokitusta, 58, 40, 71 ja 69 potilasta oli vaiheittain I, II, III ja IV, vastaavasti. Sata kuusikymmentäneljä potilasta vaiheittain I-III tehtiin R0 resektio. Kuusikymmentä on 69 potilaiden UICC vaiheessa IV diagnosoitiin vaiheessa IV positiivisten vatsakalvon huuhtelu sytologia paikallinen vatsakalvon etäpesäke tai kaukaisia ​​imusolmuke etäpesäke. Kahdeksan potilasta IV vaiheessa ollut synkronoitu maksa etäpesäke, yhdellä oli keuhkometastaasitestissä, ja heille tehtiin gastrectomy pyritään ohjaamaan verenvuodon tai haittaa ruoan kulkua.
Expression tasot PDSS2 mRNA ja proteiini kirurgisesti resektoitiin kudoksissa
keskimääräinen ekspressiotaso PDSS2
mRNA oli matalampi GC kudoksissa verrattuna normaalin viereisten kudosten (P
< 0,001); kuitenkin, ei ollut merkitsevää eroa PDSS2
mRNA: n ekspression tasojen potilailla, joilla on erilaistumaton tai eriytetty GC (kuvio 2A). Ekspressiokuviota PDSS2 arvioitiin käyttäen IHC. Edustavia tapauksia vähensi PDSS2 värjäys GC kudosten on esitetty kuvassa 2B. Kaiken värjäytymiskuvioissa PDSS2 olivat yhdenmukaisia ​​qRT-PCR data. Kuva 2 Expression analyysejä PDSS2 kliinisistä näytteistä. (A) keskimääräinen taso PDSS2
mRNA GC kudoksissa verrattuna vastaavaan normaaliin viereisten kudosten ja GC kudoksissa potilaiden välillä erilaistumattomilla GC ja eriytetty GC. (B) edustaja IHC data verrataan PDSS2 ilmentymistä kasvain ja vieressä normaali viereinen kudos (suurennettu 100 x ja 400 x). N, normaali viereinen kudos; T, kasvainkudosta.
Prognostic vaikutukset PDSS2 mRNA: n ekspression tasojen
ilmentyminen PDSS2
mRNA: n GC kudoksissa laski 76 (32%) 238 potilaasta (alle puoli ilmentymisen taso havaittiin vastaavassa normaalissa viereisten kudosten). Olevan taudin eloonjäämisaste potilaita, joilla on alentuneet PDSS2
mRNA GC oli merkittävästi pienempi verrattuna ilman (5-vuoden eloonjäämisluvut, 36% ja 64%: lla, P
< 0,001, kuva 3A). Alentuneet PDSS2
mRNA GC liittyivät merkittävästi hiilihydraattiantigeeniä (CA) 19-9 > 37 IU /ml ja imusolmuke etäpesäke (taulukko 1). Univariate analyysi tautikohtaisia ​​selviytymisen osoitti, että GC alatyypin (proksimaalinen nondiffuse tai hajanainen), CA 19-9 > 37 IU /ml, kasvaimen koko (≥50 mm), pT4, erilaistumaton kasvain, imusuonten osallistuminen, alus invaasio, invasiivisia kasvu, imusolmuke etäpesäke, positiivinen vatsakalvon huuhtelu sytologia ja laski PDSS2
mRNA: n ekspression GC kudoksissa olivat merkittäviä prognostisia tekijät haittavaikutuksia. Monimuuttujamenetelmin tunnistettu laski PDSS2
mRNA: n ilmentymisen itsenäisenä ennustetekijä (riskisuhde 1,95, 95%: n luottamusväli 1,22-3,09, P
= 0,005, taulukko 2). Suhteellinen vaarat oletus Cox mallissa arvioitiin mallien mukaan lukien aika-by-kovariaatin vuorovaikutukset eikä merkittäviä rikkomuksia havaittiin mallissa. Kuva 3 Prognostiset vaikutukset PDSS2 mRNA: n ilmentymisen potilailla GC. (A) Taudista erityinen eloonjäämistä potilailla, joilla on vähentynyt PDSS2
mRNA GC kudoksessa. (B) (C) Taudista erityinen (B) ja toistuminen-vapaa (C) eloonjäämisennustetta 168 potilasta joille tehtiin R0 resektio.
Taulukko 1 Association between ilmentymistason PDSS2 mRNA ja kliinis parametrit 238 potilasta
muuttujat
DecreasedPDSS2
mRNA GC kudoksissa (n)
muut (n)
P
arvo
Ikä
0,408
< 65 vuotta
29
71
≥ 65 vuotta
47
91
Sukupuoli
0,551
Mies
59
120
Female
17
42
alatyyppi
0,298
proksimaalinen nondiffuse
22
32
Diffuusi
14
33
Distal nondiffuse
40
96
Karsinoembryonaalinen antigeeni (ng /ml) B 0.490
≤ 5
59
132
> 5
17
30
hiilihydraattiantigeeniä 19-9 (IU /ml) B 0,015 *
≤ 37
55
139
> 37
21
23
Tuumorin koko (mm) B 0,104
< 50
29
80
≤ 50
47
82
Kasvaimen syvyys (UICC)
0,419
pT1
14
32
pT2
6
24
pT3
19
33
pT4
37
73
erilaistuminen
0,217
Differentiated
36
63
eriyttämätön
40
99
Lymphatic osallistuminen
0,201
Absent
8
27
Esitä
68
135
aluksen invaasio
0,535
Absent
31
73
Esitä
45
89
Infiltrative kasvu tyyppi
0,443
Invasive kasvu
24
59
Laaja kasvu
52
102
Imusolmuke etäpesäke (UICC) B 0,022 *
pN0
19
70
PN1
8
19
pN2
12
24
PN3
37
49
Peritoneaalisille huuhtelu sytologia
0,306
Negative
57
131
Positiivinen
19
31
Distant etäpesäkkeiden (UICC) B 0,228
M0
50
119
M1
26
43
* Tilastollisesti merkitsevä (P
< 0,05). GC, mahasyöpä; UICC, Union for International Cancer Ohjaus.
Taulukko 2 ennustavat tekijät tautikohtaisia ​​selviytymisen 238 potilasta
muuttujat
n (%)
Univariate
Monimuuttujalähettimet
Riskisuhde
95% CI
P
arvo
Riskisuhde
95% CI

P
arvo
Ikä (≥65) B 138 (58%)
1,04
0,67-1,61
0,843
Sukupuoli (naaras) B 59 (25%)
1,29
0,79-2,05
0,301
alatyypin (distaalinen nondiffuse) B 136 (57%) B 0,43
0,28-0,67
< 0,001
0,64
0,40-1,01
0,056
Karsinoembryonaalinen antigeeni (> 5 ng /ml)
47 (20%)
1,48
+0,86-+2,42
0,149
Hiilihydraattien antigeeni 19-9 (> 37 IU /ml)
44 (18%) B 1,98
1,17-3,20
0,012
1,23
0,71-2,06
0,445
Tuumorikoko (≥50 mm) B 129 (54%) B 2,86
1,78-4,80
< 0,001
1,40
0,83-2,42
0,211
Kasvaimen syvyys (pT4, UICC) B 110 (46%)
4,17
2,61-6,88
< 0,001
1,38
0,78-2,50
0,273
Kasvaimen eriyttäminen (eriyttämätön) B 139 (58%)
2,03
1,28-3,32
0,002
1,45
0,83-2,60
0,197
Lymfaattinen osallistuminen
203 (85%)
6,31
2,36-25,8
< 0,001
1,45
0,45-6,50
0,559
Aluksen invaasiota
134 (56%)
2,65
1,66-4,37
< 0,001
1.75
1,07-2,97
0,026 *
Invasive kasvun
83 (35%)
3,03
1,97 - 4,70
< 0,001
1.19
0,70-2,05
0,520
Imusolmuke etäpesäke
149 (63%)
7,02
3,70-15,1
<0,001
1,38
0,56-3,81
0,503
vatsakalvodialyysilla huuhtelu sytologia (positiivinen)
50 (21%)
4,33
2,76-6,74
< 0,001
1,87
1,14-3,06
0,014 *
UICC vaiheen (III-IV) B 140 (59%) B 9.68
4,97-21,8
< 0,001
2,63
+0,94-+7,83
0,065
Vähentynyt PDSS2
mRNA GC
76 (32%)
2,18
1,40-3,37
< 0,001
1,91
1,19-3,04
0,008 *
* Tilastollisesti merkittävä monimuuttujamenetelmin. GC, mahasyöpä; CI, luottamusväli; UICC, Union for International Cancer Ohjaus.
Niistä 168 potilasta, joille tehtiin R0 resektio, sairaus-erityinen eloonjäämisaste oli merkitsevästi pienempi niille, joilla on vähentynyt PDSS2
mRNA: n ekspression GC (n = 50) verrattuna ilman (n = 118) (5-vuoden eloonjäämisluvut, 50% ja 77%: lla, P
= 0,006, kuvio 3B). Potilaat, joilla on vähentynyt PDSS2
mRNA ilmaisun GC kokenut huomattavasti aikaisemmin uusiutumista leikkauksen jälkeen verrattuna ilman (2 vuotta uusiutumista elinaika hinnat, 64% ja 84%: lla, P
= 0.022, kuvio 3C). Alustava toistuminen sivustoja 43 relapsoivan potilaalla on vähentynyt PDSS2
mRNA ilmaisun GC oli vatsakalvon 21 (49%), maksan 6 (14%), imusolmukkeesta 13 (30%) ja muut (esim keuhkot ja luu) 3 potilaalla. Toisaalta, niille 61 aaltomaisesti potilailla, joilla ei vähentynyt PDSS2
oli vatsakalvon 35 (57%), maksan 10 (16%), imusolmukkeesta 8 (13%) ja muut 8 potilaalla. Potilaat, joilla on vähentynyt PDSS2
mRNA ilmaisun GC olivat todennäköisesti solmuun uusiutumisen, vaikka se ei saavuttanut tilastollista merkitsevyyttä.
Alaryhmäanalyysissä of PDSS2 ilmaisun mukaan GC alatyypin
Mean PDSS2
mRNA ilmaisun tasot olivat vastaavat GC ja viereisistä normaaleista kudoksista (kuvio 4A). Vastaavasti, prognostisia arvo laski PDSS2
mRNA: n ekspression GC oli verrannollinen kolme GC alatyyppiä (kuvio 4B). Kuva 4 Alaryhmäanalyysissä GC alatyyppejä. (A) PDSS2
mRNA ekspressiotasot joukossa kolme GC alatyyppiä sekä GC ja normaalin viereisen kudoksiin. (B) vertailu tautikohtaisia ​​potilaiden selviytymiseen ja ilman vähentynyt PDSS2
mRNA ilmaisun GC kunkin GC-alatyyppiä.
Keskustelu
PDSSs ovat hetero- entsyymejä käsittävät alayksiköt koodaama PDSS1
(10p12. 1) ja PDSS2
[10], [12]. PDSS toiminta edellyttää sekä alayksiköistä [10], [14], [15]. Yhdistys PDSS2
GC pidettiin, koska sen sijainti kromosomissa (6q21), ja koska sen inaktivaation tai tappio tiettyjä syöpäsairauksia [16], [26]. Tässä osoitamme, että PDSS2
mRNA heterogeenisesti ilmaistu GC solulinjoissa, ja sen ilmentyminen estyi 73% ja 32% GC solulinjojen ja tuumorikudoksia, vastaavasti. Havaitsimme hypermetylaatiota PDSS2
promoottori viidestä (45%) 11 GC solulinjojen huomattavasti alentuneet PDSS2
ilmaisua. Edelleen PDSS2
transkriptio aktivoitui jälkeen soluja käsiteltiin estäjä DNA: n metylaatio. Nämä havainnot ovat ensimmäinen tietämyksemme osoittaa, että promoottori hypermetylaation säätelee PDSS2
transkriptiota. Kuitenkin PDSS2
ilmentyminen väheni joissakin GC soluja ilman hypermetylaation. Koska kromosomi 6Q on usein sivusto LOH GC [17], [26], [27], LOH voi säädellä PDSS2
ilme samoin.
On ollut raportti osoittaa, että PDSS2
ilmaistiin at vähentynyt tai havaita ilmentymisen pieni määrä koepalan GC näytteiden [18]. Tässä tutkimuksessa kartoitettiin 238 kirurgisista näytteistä kasvaimia ja vastaavien mitäänsanomattoman kudoksen päästääkseen paremmin osaksi kliinistä merkitystä PDSS2
ilmaisun GC. Yhdenmukainen analyysit pahanlaatuisen melanooman ja keuhkosyövän [11], [12], useimmat potilaat GC kanna alentunut taso PDSS2
mRNA GC kudoksissa, ja keskimääräinen PDSS2
ilmentymisen taso oli merkittävästi vähentynyt GC verrattuna normaali viereisten kudosten. IHC suoritettiin sen määrittämiseksi, onko mRNA-tasolla heijastuu PDSS2
proteiinin ilmentymisen. Koska IHC tulokset osoittivat, että mRNA tiedot olivat yhdenmukaisia ​​proteiinin taso, myöhemmät analyysit suoritettiin mRNA tiedot, jotka sopivat paremmin kvantitatiivisen analyysin [7], [23].
Heikkeneminen PDSS2
mRNA: n ekspression GC oli merkitsevästi kohonnut preoperative CA19-9 tasoja ja imusolmuke etäpesäke ja todettiin itsenäisenä ennustetekijä. Lisäksi potilailla, joilla on vähentynyt PDSS2
mRNA: n ekspression GC kudoksessa kokenut huomattavasti aikaisemmin uusiutumisen jälkeen R0 resektio. Äskettäin, Chen et ai. tutki kasvainta estävä aktiivisuus PDSS2
keuhkosyövässä [28]. He kertoivat, että pakko yliekspressio PDSS2
aiheutti massiivisen solukuoleman kautta apoptoottisia reittejä ja esti merkittävästi pesäkkeiden muodostumista ja siellä oli käänteinen korrelaatio PDSS2
ilmaisun ja gelsoliini lauseke, jonka tiedetään estävän apoptoosia ja parantaa solujen invaasiota ja etäpesäkkeiden [29], vaikka PDSS2 ei vaikuttanut herkkyyttä syöpäsolujen kemoterapeuttisten [28]. Tämän tuumoria tukahduttavan mekanismi PDSS2
voitaisiin soveltaa GC samoin.
Ekspressiokuvio PDSS2
mRNA: ta ja sen prognostiset vaikutus oli samankaltainen kaikissa kolmessa GC alatyyppiä (proksimaalinen nondiffuse, hajanainen, ja distaalinen nondiffuse) , mikä osoittaa, että PDSS2
ilmentyminen vaikuttaa synnyssä kaikenlaisten GC. Shah et ai. raportoitu, että yksi kolmasosa monistettujen geenien, mahdollisesti myös PDSS2
, osoitti vastaavaa ilmaisua kuvio joukossa kolme GC alatyyppiä [9].
GC on yksi kasvaimia, joilla on korkean taajuuden poikkeavan metylaation, ja se usein esiintyy CpG island methylator fenotyyppi [30], [31]. Ilmentymisen suuri määrä geenejä on tukahdutti CpG-saarekkeen hypermetylaation GC-soluissa, mukaan lukien koodaus tuumorisuppressorien, solusyklin säätimet, indusoijat ja teloittajina apoptoosin, proteiineja, jotka edistävät invasiivisia fenotyyppi, ja DNA mismatch korjaus entsyymejä [32]. Nämä epigeneettiset muutokset voivat toimia biomarkkereita, jotka valaisevat lisääntynyt metastaattista potentiaalia ja aggressiivinen kasvain fenotyyppi [33] sekä terapeuttisina kohteina [34]. Siksi tunnistaminen muita geenejä, joita säätelee metylaation GC soluissa todennäköisesti hallinnon parantamiseksi GC.
Kasvain tukahduttava toiminta PDSS2
tukee nykyisen havainnot seuraavasti: (1) vähentynyt ilmentyminen PDSS2
oli usein havaittu GC kudoksissa, (2) keskimääräinen taso PDSS2
ilmentyminen oli merkitsevästi alhaisempi GC kudoksissa, ja (3) vähentynyt ilmentyminen PDSS2
liittyi varhainen uusiutuminen ja näin ollen huonoon ennusteeseen. PDSS2
ekspressiotasot biopsiakudoksesta saatu käyttämällä endoskooppinen valvonta näytteitä tai kirurgisista näytteistä voivat olla hyödyllisiä ennustettaessa varhainen uusiutuminen ja huono ennuste, joka todennäköisesti tukea pyrkimyksiä suunnitella tehokkaampia hoitostrategioita.
Tutkimus rajattiin sen riittämätön funktionaalisen analyysin PDSS2
, joka lieventäisi päätellä, että se toimii tuumorisuppressorina GC. Lisätutkimukset mukaan lukien polku analyysi mahasyövän ja funktionaalisen analyysin odotetaan selvittämään molekyylitason mekanismit biologisista vaikutuksista PDSS2
GC.
Päätelmä
Johtopäätöksenä havaintomme tukevat päätelmää, että ilmaus otaksuttu tuumorisuppressorigeeniä PDSS2
säätelee promoottori hypermetylaation GC soluissa ja osoittaa. Tuloksemme osoittavat myös, että vähentynyt ilmentyminen PDSS2
mRNA voi edustaa uutta biomarkkeri etenemisen ja uusiutumisen kaikenlaisten GC.
Tekijät maksuosuudet
MK, HO, FS, DS, HT, RH ja KM suoritettiin kokeita ja tietojen analysointi. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF ja YK kerätyt tapaukset ja kliiniset tiedot. MK ja SN suunniteltu ja tutkimuksen ja laatinut alustavan käsikirjoituksen. YK valvoo projektin.

• Mahalaukun tonometria opastettu hoito tehohoidon potilaille: järjestelmällinen katsaus ja meta-analyysi
• Hyödyllisyyttä sytokeratiineja 7 ja 20 (CK7 /20) immunohistokemia ero lyhyen segmentin Barrett ruokatorven mahalaukun suoliston metaplasiaa: Onko se luotettava?