Csökkent expressziója prenil-difoszfát-szintáz-alegység 2 korrelál a csökkent betegek túlélési gyomorrák

Csökkent expressziója prenil-difoszfát-szintáz-alegység 2 korrelál a csökkent túlélését gyomorrákos betegeknél katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa azonosítása a molekuláris biomarkerek javítja a betegek kezelésében gyomorrák (GC). Prenil-difoszfát-szintáz-alegység 2 (PDSS2) szükséges koenzim Q10 bioszintézisét és viselkedik, mint egy tumor szupresszor; azonban a szerepe és szabályozó mechanizmusok PDSS2
GC nem ismert. A vizsgálat célja az volt, hogy meghatározzuk expressziós státus és szabályozó mechanizmusok PDSS2 katalógusa GC. Katalógusa módszerek katalógusa Egyesületek kifejezés és metilációját PDSS2 katalógusa értékeltük ki GC sejtvonalak. A klinikai jelentősége PDSS2 katalógusa kifejezése segítségével értékelték 238 pár műtétileg eltávolított gyomor szövetek alcsoport analízis alapján GC altípusa. Katalógusa Eredmények katalógusa kifejezése PDSS2 katalógusa mRNS csökkent 73% -a GC sejt vonalak a kontrollhoz képest nem rákos sejt. A PDSS2 katalógusa promoter hipermetilációját sejtek csökkent PDSS2 katalógusa kifejezést és kezelésében ezek a sejtek egy metilációs inhibitor reaktivált PDSS2 katalógusa kifejezést. GC szövetekben kifejezett lényegesen alacsonyabb átlagos szintje PDSS2 katalógusa mRNS képest szomszédos normál szövetekben (p
< 0,001). Az expressziós mintázata PDSS2 protein konzisztens volt, hogy a mRNS-t. A csökkenés PDSS2 katalógusa mRNS expressziójának GC szövetekben (kevesebb, mint a fele az expresszió mértéke kimutatható a megfelelő normál szomszédos szövetek) szignifikáns korrelációt mutatott emelkedett szintű szénhidrát antigén 19-9 (p
= 0,015), nyirokcsomó metasztázis (P = 0,022 katalógusa), és rövidebb kiújulás-mentes túlélés után kuratív rezekció (P = 0,022 katalógusa). Továbbá többváltozós elemzés azonosított PDSS2 katalógusa mRNS expresszió önálló prognosztikai tényező (kockázati arány 1,95, 95% -os konfidencia intervallum 1,22-3,09, P = 0,005 katalógusa), valamint expressziós mintázata és prognosztikai jelentősége hasonló volt három GC altípusok .
Következtetések katalógusa PDSS2 katalógusa kódol feltételezett tumor szupresszor, és megmutatjuk, hogy itt a kifejezést szabályozza hipermetiláció a promoter GC sejtekben. Gátlása PDSS2 katalógusa mRNS expressziójának szolgálhat egy újszerű biomarker minden típusú GC.
Kulcsszavak
Gyomorrák prenil-difoszfát-szintáz-alegység 2 expresszió metiláció altípus alapon
Bár az előfordulási gyakorisága a gyomorrák (GC) csökken a legtöbb fejlett országban, továbbra is az egyik leggyakoribb oka a rák okozta halál világszerte [1] - [3]. Megfelelő rétegződése betegek döntő szempont az egyénre szabott kezelés, ami csökkenti a mortalitást ebből rák [4], [5]. Katalógusa Szerint a epidemiológia, a patológia, és helyét a szervezetben, GC elismerten három különböző rosszindulatú felmerülő ugyanazon szerv [6] - [8]. Shah et al. [9] javasolt egy meggyőző osztályozását GC szerint hisztopatológiai és anatómiai szempontok a következők: (1) proximális nondiffuse GC, ahol a tumor található, főleg a cardia bizonyítékokat prekurzor mirigyes dysplasia vagy in situ karcinóma jelenlétében krónikus gyulladás de általában nem sorvadás; (2) diffúz GC, amely bárhol elhelyezhető a gyomorban nem nyilvánvaló gyomorhurut hogy mutat egy teljesen diffúz mintázata beszűrődése sejtek egy rosszul differenciált fenotípus; és (3) disztális nondiffuse GC található, amely elsősorban a gyomor distalis bizonyítékot krónikus gastritis, hogy túlnyomórészt differenciált vagy mutat bél fenotípust. Ebben a vizsgálatban, úgy bizonyították, hogy a három GC altípusok kitűnnek génexpressziós profilokat. Ezért a genetikai sokféleségének GC altípusok figyelembe kell venni a vizsgálatok a genetikai és epigenetikai változások összefüggő gyomor carcinogenesis és progresszióját.
Prenil-difoszfát-szintáz-alegység 2 (PDSS2 katalógusa) azonosították 2005-ben [10], és a bizonyítékok azt mutatják, hogy úgy viselkedik, mint egy tumorszuppresszor [11], [12]. PDSS2
van szintéziséhez szükséges koenzim Q10 (CoQ10) [13], [14], amely szintetizálódik a mitokondriális belső membrán és létfontosságú szerepet játszik a mitokondriális légzési lánc, pirimidin nukleozid-bioszintézis, és a moduláció az apoptózis [15]. PDSS2 katalógusa lakozik kromoszóma lókusz 6q16.3-21, a helyszínen, a gyakori mikroszatellit DNS instabilitás és a veszteség heterozigótaság (LOH) a GC [16], [17], amely támogatja szerepét a tumor szupresszor a gyomornyálkahártya-sejtek . Sőt, PDSS2
elnyomhatja a malignus melanoma és tüdőrák [11], [12]. Sőt, Chen és munkatársai. számolt be, hogy végrehajtható overexpressziója PDSS2 katalógusa vezet apoptózist GC sejtvonal által okozva sejtciklus G0 /G1 fázisában [18]. Ezek a jelentések vezetett bennünket, hogy a hipotézist, hogy PDSS2 katalógusa potenciális GC kapcsolatos gént és egy jelölt az új klinikailag releváns prognosztikai markere GC.
Ebben a vizsgálatban, a véleménynyilvánítás és metilációs állapotát PDSS2
GC határoztuk, hogy értékelje a klinikai jelentősége és szabályozó mechanizmusok PDSS2 katalógusa kifejezést GC. Eredményeink azt mutatják, hogy PDSS2 katalógusa kifejezés egy potenciális klinikai biomarker a progresszió és megismétlődésének GC. Katalógusa Anyag és módszer katalógusa Etikai katalógusa Ez a tanulmány igazodtak etikai irányelvek a World Medical Association a Helsinki Nyilatkozat -etikai elvei bevonó orvosi kutatás az emberi alanyokat és jóváhagyta az Institutional Review Board Nagoya University, Japán. Írásos beleegyezését adta a használat klinikai minták és az adatok által megkövetelt intézményi felülvizsgálati tanács volt, minden beteg. [4] katalógusa mintavétel katalógusa tizenegy GC sejtvonalak (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-nu és az SC-6-LCK), és CCL-241 (nem rákos sejtvonal származik a vékonybélben) kaptuk az American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) vagy Tohoku University, Japán. A GC sejtvonalakat tenyésztjük 37 ° C hőmérsékleten RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), kiegészítve 10% magzati borjúszérumot tartalmazó atmoszférában, 5% CO 2. A CCL-241, 30 ng /ml epidermális növekedési faktor (Sigma-Aldrich) adtunk hozzá, a közegben. Elsődleges GC szövetek és a megfelelő normál szomszédos szövetek gyűjtöttünk 238 átesett betegek gyomor reszekció GC Nagoya University Hospital között 2001 és 2012 kapó betegek neoadjuváns kezelés kizárták, mert nehéz volt megszerezni a rákos sejtek heges szövetek. A mintákat sorolták szövettanilag a 7. kiadás az Unió Nemzetközi Rákellenes (UICC) osztályozás [19]. Releváns klinikopatológiai paraméterek szerzett orvosi feljegyzések. Annak értékelésére, hogy az expressziós szintet PDSS2
korrelált tumor fenotípusú betegeket három csoportra oszthatók meghatározás szerint a GC altípusok kritériumai szerint Shah et al. [9] az alábbiak szerint: proximális nondiffuse, diffúz, és disztális nondiffuse típusát. 2006 óta, az adjuváns kemoterápia segítségével az S-1 (egy orális fluorozott pirimidin) adagoljuk minden UICC stádium, II-III betegek GC ha nem ellenjavallt a beteg állapota [20]. A betegeket legalább 3 havonta egyszer 2 évvel a műtét után, majd 6 havonta 5 évig, vagy addig, amíg a halál. Fizikális vizsgálat, laboratóriumi vizsgálatok, és a továbbfejlesztett komputertomográfia (mellkasi és hasi üreg) végeztünk minden egyes látogatás alkalmával. Kemoterápia betegek számára távoli metasztázis vagy után kiújulás határoztuk orvos belátása szerint.
Tissue mintákat azonnal lefagyasztottuk folyékony nitrogénben, és -80 ° C-on. A tumor minták nélkül nekrotikus területek (körülbelül 5 mm 2) extraháljuk bruttó megfigyelés és csak mintákat megerősítette, hogy az tartalmazzon több mint 80% -nyi daganatot alkatrészek H &E festés vontunk be a vizsgálatba. Megfelelő normál szomszédos gyomornyálkahártya mintákban > 5 ° cm-re a széle a tumorokat az ugyanabban a beteg [21].
Kvantitatív valós idejű reverz-transzkripciós polimeráz-láncreakció (QRT-PCR)
Az összes RNS-ek (10 ng per minta) izoláltunk 11 GC-sejtvonalak, CCL-241, 238 primer GC szövetekben és a megfelelő normál szomszédos szövetek előállításánál használt cDNS-eket, amelyek amplifikáltunk specifikus PCR-primerek (Plusz fájl 1: táblázat S1). Valós idejű detektálását SYBR® zöld fluoreszcencia intenzitás végeztünk ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). A kifejezés a GAPDH katalógusa mRNS mennyiségét az egyes mintákban a szabványosítás. A QRT-PCR reakciókat minden egyes mintából három párhuzamosban végeztük. Az expressziós szint mindegyik minta kerül bemutatásra, mint az érték a PDSS2 katalógusa amplikon osztva, hogy a GAPDH katalógusa [22]. PDSS2
mRNS expresszióját úgy definiáljuk, mint csökkent GC szövetekben, ha annak szintje kevesebb volt, mint a fele, hogy a megfelelő normál szomszédos szövet.
Elemzés a promoter régió PDSS2
A nukleotid-szekvenciáját a PDSS2 katalógusa promoter régió elemezték, hogy meghatározzák a jelenléte vagy hiánya CpG-szigetek meghatározása a következő: legalább egy 200 bp DNS-régiót a magas GC-tartalom (> 50%) és a megfigyelt CpG /várható CpG arányt ≥0.6 [23] . Használtuk CpG Island kereső szoftver (http: //cpgislands. USC. Edu /), hogy meghatározzák a helyét a CpG-szigetek [24]. Katalógusa Metiláció-specifikus PCR (MSP) és hidrogén-szulfit szekvencia analízis katalógusa PDSS2 katalógusa rendelkezik CpG sziget közelében a promoter régiót, és azt feltételeztük, hogy a kóros metiláció szabályozásáért felelős átírását PDSS2 katalógusa GC. DNS-minták a 11 GC sejtvonalak kezelt biszulfit vetettük alá az MSP és nukleotid-szekvencia analízissel [25]. A primer szekvenciák használt MSP és biszulfit szekvenálás felsorolt ​​kiegészítő fájl 1: Táblázat S1. Katalógusa 5-aza-2'-dezoxicitidin (5-aza-dC) kezelés katalógusa Annak felmérése kapcsán a promoter hipermetilációt hogy PDSS2
transzkripció, a GC-sejtek (1,5 × 10 6) kezeltünk 5-aza-dC (Sigma-Aldrich), hogy gátolják a DNS metiláció és 6 napig tenyésztjük a közepes változások az 1., 3., és 5. sz. RNS-t extraháltunk, és az RT-PCR-t végeztünk leírtak [7].
immunhisztokémiai (IHC)
IHC elemzése a lokalizáció PDSS2 végeztünk egér monoklonális antitest ellen PDSS2 (ab119768, ABCAM, Cambridge, UK ) hígított 1: 150 antitest hígítóval (Dako, Glostrup, Dánia), hogy a szonda 30 reprezentatív, formalinnal fixált és paraffinba ágyazott szakaszain jól megőrzött GC szövet korábban leírt [3]. Festési mintákat összehasonlították a GC és a megfelelő normál szomszédos szövetek. Annak elkerülése érdekében, a szubjektivitás, az egyedeket véletlenszerűen és kódolt elemzés előtt két független megfigyelők, akik nem voltak tisztában a helyzetét a mintákat. Minden megfigyelő értékelte Minden mintát legalább kétszer minimalizálása belüli megfigyelő változása [7]. Katalógusa értékelése klinikai jelentősége PDSS2 kifejezés katalógusa közötti összefüggés mintázata PDSS2 katalógusa mRNS expresszió és a klinikopatológiai paraméterek szerint értékeltük a különbség a három GC altípus. Alcsoport elemzése túlélés szerint GC altípus végeztünk annak megállapítására, a befolyása a PDSS2 katalógusa kifejezés a betegek eredményeinek.
Statisztikai analízis
relatív szintjét mRNS-expresszió (PDSS2 /GAPDH
) között GC és a szomszédos normális szövetet analizáltunk a Mann-Whitney U
teszt. A χ katalógusa 2 tesztet használják, hogy elemezzék a jelentősége a szövetség között a kifejezés és metilációs állapotát PDSS2 katalógusa klinikopatológiai paraméterek. Betegség-specifikus és betegségmentes túlélés aránya számításához a Kaplan-Meier-módszerrel, és a különbség a túlélési görbéket elemeztük a log-rank teszt. Végeztünk többváltozós regressziós elemzés felismerni prognosztikai faktorok a Cox-féle arányos kockázati modell, és a változók P katalógusa < 0,05 kerültek a végső modellben. Minden statisztikai analízist végeztük JMP 10 szoftver (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). A p katalógusa < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa eredményei katalógusa azonosítása CpG sziget a PDSS2 promoter katalógusa CPG-sziget azonosítottak a PDSS2 katalógusa promoter régió a CpG Island kereső. A tulajdonságait a CpG-sziget a következők: 1655 bp, 55,9% GC, és 0,70 Megfigyelt CpG /várható CpG arányt (1a ábra). Ezért azt feltételeztük, hogy hipermetiláció a CpG-szigetek expresszióját szabályozza PDSS2 katalógusa GC. 1. ábra Metiláció elemzései PDSS2 GC sejtvonalakban. (A) a CPG-sziget által jelzett kék vonal középpontja a PDSS2
transzkripciós iniciációs hely kiterjesztve upstream a promoter régió. (B) oszlopdiagram jelzi PDSS2
mRNS expressziós szinteket CCL-241 (ellenőrzés nem rákos sejt), és a GC sejtvonalak előtt vagy után 5-aza-dC kezelés. A metilációs állapotát PDSS2 katalógusa promoter alkalmazásával értékeltük MSP, és az eredményeket a mellékelt a dobozban. M, denaturált; pM, részlegesen metilezett; U, metilálatlan. (C) A reprezentatív eredményeket a biszulfit-szekvencia analízis. Minden CpG helyek KATOIII cellában tartották fenn a CG és azok MKN74 alakítunk TG.
PDSS2 mRNS expressziója és metilációs állapotát GC sejtvonalak
szignifikáns csökkenését PDSS2 katalógusa mRNS szinteket detektáltunk hét (73 %) 11 GC sejtvonalak képest expressziós szintjének a CCL-241 sejt (az adatok GC szövetekben az alábbiakban ismertetjük). Nem volt nyilvánvaló különbség expressziós szint közötti származó sejtvonalakban differenciált és differenciálatlan GC (1b ábra). Hipermetilációja a PDSS2 katalógusa promoter volt kimutatható MKN1, SC-2-nu, KATOIII, MKN45, és NUGC3 sejtek (1B ábra). Annak meghatározására, hogy hipermetiláció a PDSS2 katalógusa promoter gátolta a transzkripció, az mRNS expressziós szinteket összehasonlítva előtt és után kezeljük a sejteket a metiláció inhibitor 5-aza-dC. PDSS2
mRNS-szinteket helyreállították sejtek alulszabályozott PDSS2
expressziós kísérő hipermetiláció után 5-aza-dC kezelés (1B ábra), jelezve, hogy promoter hipermetiláció gátolta PDSS2
transzkripciót GC. Reprezentatív kromatogramokat a szekvencia elemzése a PDSS2 katalógusa promoter régió MKN28 (teljes metiláció) és NUGC4 (hiánya metiláció) sejtek ábrán mutatjuk be az 1C.
Betegjellemzők
A betegcsoport benne 179 hím és 59 éves nők 20-84 év (65,3 × 11,7 év, átlag × standard deviáció). Patológiailag 139 és 99 beteget diagnosztizáltak differenciálatlan és a differenciált GC, ill. A betegeket soroltuk három GC fenotípus a következők: nondiffuse, 54; diffúz, 48; és disztális nondiffuse, 136. szerint a 7. kiadás a UICC osztályozás, 58, 40, 71 és 69 beteg szakaszosan I, II, III és IV, ill. Száz hatvannégy betegek szakaszban I-III ment R0 reszekció. Hatvan 69 beteg UICC stádium IV diagnosztizálták színpadi IV miatt pozitív peritoneális öblítéssel citológia, lokalizált peritonealis metasztázis vagy távoli nyirokcsomó-metasztázis. Nyolc beteg szakasz IV volt szinkron máj metasztázis, az egyik volt a tüdő áttét, és átestek gastrectomián célja, hogy ellenőrizzék a vérzés, vagy elzáródás az élelmiszer áthaladását. Katalógusa expressziós szintjét PDSS2 mRNS és fehérje műtétileg eltávolított szövetek
jelenti expressziós szintjének PDSS2 katalógusa mRNS alacsonyabb volt a GC szövetekben összehasonlítva a normál szomszédos szövetek (p
< 0,001); Azonban nem volt szignifikáns különbség a PDSS2
mRNS expressziós szintek között betegek differenciálatlan vagy differenciált GC (2A ábra). Az expressziós mintázata PDSS2 alkalmazásával értékeltük IHC. Reprezentatív esetben csökkentett PDSS2 festődése GC szövetek 2B ábrán látható. Összességében, a festődés mintázata PDSS2 összhangban voltak a QRT-PCR adatokat. 2. ábra Expression elemzései PDSS2 klinikai mintákban. (A) Az átlagos szintje PDSS2 katalógusa mRNS GC szövetekben összehasonlítva a megfelelő normál szomszédos szövetek és GC szövetekben betegek között differenciálatlan GC és differenciált GC. (B) Reprezentatív IHC adatok összehasonlításával PDSS2 kifejezés a daganat és szomszédos normál szomszédos szövet (nagyított 100 × és 400 ×). N, normál szomszédos szövetek; T, tumorszövet.
Prognosztikai vonatkozásai PDSS2 mRNS expressziós szintek
expresszióját PDSS2 katalógusa mRNS GC szövetekben csökkent 76 (32%) mennyiségben a 238 beteg (kevesebb, mint fele a szintű expressziót detektáltunk a megfelelő normál szomszédos szövetek). A betegség-specifikus túlélési arány a betegek csökkent szintje PDSS2 katalógusa mRNS GC szignifikánsan alacsonyabb volt, mint azoknál nélkül (5 éves túlélési arány, 36% és 64% -kal, p
< 0,001, ábra 3A). Csökkent szintje PDSS2 katalógusa mRNS GC szignifikáns összefüggést mutattak a szénhidrát antigén (CA) 19-9 > 37 NE /ml és a nyirokcsomó-metasztázis (1. táblázat). Egyváltozós elemzés betegségmentes túlélés azt mutatták, hogy a GC altípus (közelebbi nondiffuse vagy diffúz), CA 19-9 > 37 IU /ml, a tumor mérete (≥50 mm), pT4, differenciálatlan daganat, nyirok bevonása, hajó invázió, invazív növekedés, nyirokcsomó áttét, pozitív peritoneális öblítéssel citológia, és csökkent PDSS2 katalógusa mRNS expressziójának GC szövetekben szignifikáns prognosztikai tényezők kedvezőtlen kimenetel. A többváltozós elemzés azonosított csökkent PDSS2 katalógusa mRNS expressziója önálló prognosztikai tényező (kockázati arány 1,95, 95% -os konfidencia intervallum 1,22-3,09, P = 0,005 katalógusa, 2. táblázat). A proporcionális veszély feltételezése Cox modellben értékelték modellek beleértve az idő-by-kovariáns kölcsönhatások és nincs jelentős megsértése találtak a modellben. 3. ábra prognosztikai vonatkozásai PDSS2 mRNS expressziós betegeknél GC. (A) a betegség-specifikus betegek túlélési csökkent PDSS2
mRNS GC szövetben. (B) (C) Betegség-specifikus (B) és a kiújulás-mentes (C) a túlélés között 168 beteg átesett R0 reszekció. Katalógusa 1. táblázat közötti társulás expressziós szintje PDSS2 mRNS klinikopatológiai paraméterek 238 beteg katalógusa változók Matton DecreasedPDSS2 katalógusa mRNS GC szövetekben (n) Matton Egyéb (n) Matton P katalógusa érték Matton Kor katalógusa 0,408
< 65 év katalógusa 29 katalógusa 71 katalógusa ≥ 65 év katalógusa 47 katalógusa 91 katalógusa nemek katalógusa 0.551 katalógusa Férfi katalógusa 59 katalógusa 120 fiatal női
17 katalógusa 42 katalógusa altípus katalógusa 0,298 katalógusa Proximal nondiffuse katalógusa 22 katalógusa 32 katalógusa Diffúz katalógusa 14 katalógusa 33 katalógusa distalis nondiffuse katalógusa 40
96 katalógusa karcinoembrionális antigén (ng /ml) hotelben 0.490 katalógusa ≤ 5 katalógusa 59
132 katalógusa > 5 katalógusa 17 katalógusa 30 katalógusa szénhidrát antigén 19-9 (NE /ml) hotelben 0,015 * katalógusa ≤ 37 katalógusa 55
139 katalógusa > 37 katalógusa 21 katalógusa 23 katalógusa daganat mérete (mm) hotelben 0,104 katalógusa < 50 katalógusa 29 katalógusa 80 katalógusa ≤ 50 katalógusa 47 katalógusa 82 katalógusa Tumor mélység (UICC) hotelben 0.419 katalógusa pT1
14 katalógusa 32 katalógusa pT2
6 katalógusa 24 katalógusa pT3
19 katalógusa 33 katalógusa pT4
37 katalógusa 73 katalógusa differenciálás
0,217 katalógusa differenciált katalógusa 36
63 katalógusa differenciálatlan
40 katalógusa 99 katalógusa nyirokrendszer bevonása katalógusa 0,201 katalógusa Hiányzik katalógusa 8 katalógusa 27 katalógusa Ajándékozza katalógusa 68 katalógusa 135 katalógusa A hajó invázió
0,535 katalógusa Hiányzik katalógusa 31 katalógusa 73 katalógusa Ajándékozza katalógusa 45 katalógusa 89 katalógusa infiltratív növekedési típus katalógusa 0.443 katalógusa invazív növekedés katalógusa 24
59 katalógusa Kiterjedt növekedés katalógusa 52 katalógusa 102 katalógusa nyirokcsomó áttét (UICC) hotelben 0,022 * katalógusa pN0 katalógusa 19 katalógusa 70 katalógusa pN1 katalógusa 8 katalógusa 19
pN2 katalógusa 12 katalógusa 24 katalógusa PN3 katalógusa 37 katalógusa 49 katalógusa peritoneális öblítéssel citológia katalógusa 0,306 katalógusa Negatív katalógusa 57 katalógusa 131
Pozitív katalógusa 19 katalógusa 31 katalógusa távoli áttét (UICC) hotelben 0.228 katalógusa M0
50 katalógusa 119 katalógusa M1
26 katalógusa 43
* Statisztikailag szignifikáns (P katalógusa < 0,05). GC, gyomorrák; UICC, Union Nemzetközi Rákellenes. Katalógusa 2. táblázat prognosztikai tényezők a betegség-specifikus túlélés a 238 beteg katalógusa változók
n (%) Matton egyváltozós Matton többváltozós Matton hazárd
95% CI Matton P katalógusa érték Matton hazárd
95% CI katalógusa
P katalógusa érték Matton Életkor (≥65) hotelben 138 (58%) hotelben 1,04 katalógusa 0,67-1,61 katalógusa 0.843 katalógusa Gender (nő) katalógusa 59 (25%) hotelben 1,29 katalógusa 0,79-2,05 katalógusa 0,301 katalógusa altípus (disztális nondiffuse) hotelben 136 (57%) hotelben 0,43 katalógusa 0,28-0,67 katalógusa < 0.001 katalógusa 0.64 katalógusa 0,40-1,01 katalógusa 0,056 katalógusa karcinoembrionális antigén (> 5 ng /ml) hotelben 47 (20%) hotelben 1,48 katalógusa 0,86-2,42 katalógusa 0,149
szénhidrát antigén 19-9 (> 37 NE /ml) hotelben 44 (18%) hotelben 1,98 katalógusa 1,17-3,20 katalógusa 0.012 katalógusa 1,23 katalógusa 0,71-2,06
0,445 katalógusa tumor méretét (≥50 mm) hotelben 129 (54%) hotelben 2,86 katalógusa 1,78-4,80 katalógusa < 0,001 katalógusa 1,40 katalógusa 0,83-2,42 katalógusa 0,211
tumor mélység (pT4, UICC) hotelben 110 (46%) hotelben 4,17 katalógusa 2,61-6,88 katalógusa < 0,001 katalógusa 1,38 katalógusa 0,78-2,50 katalógusa 0,273
A tumor differenciálás (differenciálatlan) hotelben 139 (58%) hotelben 2,03 katalógusa 1,28-3,32 katalógusa 0,002 katalógusa 1,45 katalógusa 0,83-2,60 katalógusa 0,197 katalógusa nyirokrendszer bevonása katalógusa 203 (85%) hotelben 6,31 katalógusa 2,36-25,8 katalógusa < 0,001 katalógusa 1,45 katalógusa 0,45-6,50 katalógusa 0,559 katalógusa hajó invázió
134 (56%)
2,65 katalógusa 1,66-4,37 katalógusa < 0,001 katalógusa 1,75 katalógusa 1,07-2,97 katalógusa 0,026 * katalógusa invazív növekedés katalógusa 83 (35%) hotelben 3,03 katalógusa 1,97 - 4,70 katalógusa < 0,001 katalógusa 1,19 katalógusa 0,70-2,05 katalógusa 0.520 katalógusa nyirokcsomó áttét katalógusa 149 (63%) hotelben 7,02 katalógusa 3,70-15,1 katalógusa <0,001 katalógusa 1,38 katalógusa 0,56-3,81 katalógusa 0,503 katalógusa peritoneális öblítéssel citológia (pozitív) hotelben 50 (21%) hotelben 4,33 katalógusa 2,76-6,74 katalógusa < 0,001
1,87 katalógusa 1,14-3,06 katalógusa 0,014 * katalógusa UICC stádium (III-IV) hotelben 140 (59%) hotelben 9,68 katalógusa 4,97-21,8 katalógusa < 0,001
2,63 katalógusa 0,94-7,83 katalógusa 0.065 katalógusa Csökkent PDSS2 katalógusa mRNS GC katalógusa 76 (32%) hotelben 2,18 katalógusa 1,40-3,37 katalógusa < 0,001 katalógusa 1,91 katalógusa 1,19-3,04 katalógusa 0,008 * katalógusa * Statisztikailag szignifikáns többváltozós elemzés. GC, gyomorrák; CI, konfidencia intervallum; UICC, Union Nemzetközi Rákellenes.
168 átesett betegek R0 reszekció, a betegség-specifikus túlélési arány szignifikánsan alacsonyabb volt azok számára, akik csökkent PDSS2
mRNS expressziójának GC (n = 50), szemben azokkal anélkül (n = 118) (5 éves túlélési arány 50% és 77%, P = 0,006 katalógusa, 3B). Betegekben, akiknél csökkent PDSS2
mRNS expressziójának GC tapasztalt lényegesen korábban kiújulás műtét után képest nélkül (2-év kiújulás túlélés, 64%, illetve 84% -kal, p
= 0,022, 3C, ábra). Kezdeti kiújulás oldalak 43 relapszáló betegek csökkent PDSS2
mRNS expressziójának GC voltak peritoneális 21 (49%), máj 6 (14%), nyirokcsomó 13 (30%) és mások (például a tüdő és a csont) 3 betegnél. Másrészt, azok, 61 relapszáló nélküli betegek csökkent PDSS2
voltak peritoneális 35 (57%), a máj 10 (16%), nyirokcsomó 8 (13%) és mások 8 betegnél. Betegeknél csökkent PDSS2 katalógusa mRNS expressziójának GC volt valószínű, hogy egy csomópont visszaesés, de nem érte el a statisztikai szignifikancia. Katalógusa Alcsoport elemzést PDSS2 kifejezés GC szerint altípus katalógusa Mean PDSS2 katalógusa mRNS expresszió szintje egyenértékű GC és normál szomszédos szövetek (4A). Hasonlóképpen, a prognosztikai értéke csökkent PDSS2 katalógusa mRNS expressziójának GC hasonló volt a három GC altípus (4B ábra). 4. ábra alcsoport analízise GC altípusok. (A) PDSS2 katalógusa mRNS expressziós szintek között három GC altípus egyaránt GC és normál szomszédos szövetek. (B) összehasonlítása betegség-specifikus betegek túlélése és a nélkül csökkentette PDSS2
mRNS expresszió GC egyes GC altípus.
Megbeszélés
PDSSs vannak heterotetramer enzimek tartalmazó alegységeket által kódolt PDSS1 katalógusa (10p12. 1) és PDSS2 katalógusa [10], [12]. PDSS tevékenység megköveteli mindkét alegység [10], [14], [15]. Az egyesület PDSS2 katalógusa GC ítélték, mert a kromoszomális elhelyezkedésénél (6q21), és mivel a inaktiválása vagy veszteség bizonyos rosszindulatú [16], [26]. Itt megmutatjuk, hogy PDSS2
mRNS-t heterogén kifejezve GC sejtvonalakban, és az expressziója gátolt volt 73% és 32% a GC-sejtvonalak és tumoros szövetekben, ill. Azt észleltük, hipermetiláció a PDSS2 katalógusa promoter öt (45%) 11-GC sejtvonalak jelentősen csökkent szintje PDSS2 katalógusa kifejezés. Továbbá, PDSS2
transzkripciót reaktivált után sejteket kezeltünk inhibitor DNS metilációs. Ezek az eredmények az első tudásunk azt mutatják, hogy promóter hipermetilációt szabályozza PDSS2 katalógusa átírás. Azonban PDSS2 katalógusa expresszió csökkent néhány GC sejtek nélkül hipermetiláltsági. Mivel kromoszóma 6q gyakori helyén LOH GC [17], [26], [27], LOH szabályozhatják PDSS2 katalógusa kifejezés is.
Volt egy jelentés, amely igazolja, hogy a PDSS2 katalógusa fejeztük a csökkent vagy nem kimutatható expressziót kisszámú biopsziás GC minták [18]. A jelen tanulmányban elemeztük 238 sebészeti mintákban a daganatok és a megfelelő ép szövet, hogy további betekintést a klinikai jelentősége PDSS2 katalógusa kifejezést GC. Összhangban elemzések rosszindulatú melanoma és a tüdőrák [11], [12], a legtöbb beteg a GC hordozott csökkent szintje PDSS2 katalógusa mRNS GC szövetekben, és az átlagos PDSS2
expressziós szintje szignifikánsan csökkent GC összehasonlítva normál szomszédos szövetek. IHC végeztek annak megállapítására, hogy az mRNS-szintű visszavert PDSS2
fehérje expresszióját. Mivel az IHC eredmények azt jelezték, hogy az mRNS-adatok összhangban állnak a fehérje szinten, a későbbi elemzések szerint végeztük az mRNS adatok, amelyek alkalmasabbak a mennyiségi elemzést [7], [23].
Csökkent PDSS2
mRNS expresszió GC szignifikánsan összefüggött a megemelkedett preoperatív CA19-9 szint és a nyirokcsomó metasztázis és azonosították független prognosztikai faktor. Sőt, a betegek csökkent PDSS2 katalógusa mRNS expressziójának GC szövetben tapasztalt lényegesen korábban kiújulás után R0 reszekció. Nemrégiben Chen et al. Vizsgáltuk a tumor-visszaszorító aktivitásának PDSS2 katalógusa tüdőrák [28]. Úgy tűnik, hogy a kényszerített overexpressziója PDSS2 katalógusa okozta hatalmas sejthalál keresztül apoptotikus utak és szignifikánsan gátolta a kolónia képződését, és nem volt fordított korrelációt PDSS2
expresszió és gelsolin kifejezés, amelyről ismert, hogy gátolja az apoptózist és fokozza sejtek invázióját és metasztázis [29], bár PDSS2 nem befolyásolta az érzékenységet a rákos sejtek kemoterápiás gyógyszerek [28]. Ez a tumor szuppresszív mechanizmus PDSS2 katalógusa lehetne alkalmazni, hogy a GC is.
A expressziós mintázata PDSS2 katalógusa mRNS és annak prognosztikai hasonló volt a három GC altípusok (proximális nondiffuse, diffúz, és disztális nondiffuse) , jelezve, hogy PDSS2
expressziója befolyásolja a patogenezisében minden típusú GC. Shah et al. számolt be, hogy egy-harmada amplifikált gének, adott esetben beleértve PDSS2 katalógusa, azt mutatta, egyenértékű expressziós mintázat a három GC altípusok [9].
GC egyike a tumorok nagy gyakorisággal aberráns metiláció, és azt gyakran mutat a CpG sziget metiláltsági fenotípus [30], [31]. A kifejezés egy nagyszámú gén elnyomja a CpG-szigetre hipermetiláció GC-sejtek, beleértve azokat kódoló tumorszupresszorok, sejtciklus szabályozók, induktorok és hóhérok az apoptózis, a fehérjék, amelyek elősegítik a invazív fenotípus, és a DNS-mismatch repair enzimek [32]. Ezek epigenetikus változások szolgálhatnak biomarkerek hogy megvilágítsa megnövekedett metasztatikus potenciállal és agresszív tumor fenotípus [33], valamint a terápiás célokat [34]. Ezért azonosítása más gének szabályozzák metiláció GC sejtek nagy valószínűséggel kezelésének javítása GC.
A tumor elnyomó funkciója PDSS2 katalógusa támogatja a jelenlegi eredmények a következők: (1) csökkent expressziója PDSS2
ben gyakran észlelt GC szövetekben, (2) az átlagos szintje PDSS2 katalógusa expresszió szignifikánsan alacsonyabb volt a GC szövetekben, és (3) csökkent expressziója PDSS2 katalógusa társult korai kiújulás és az azt követő rossz prognózissal. PDSS2
expressziós szinteket biopsziás alkalmazásával kapott endoszkópos megfigyelés mintákat vagy sebészeti mintákban hasznos lehet előrejelzésére korai kiújulás és rossz prognózissal, amely valószínűleg támogatás erőfeszítéseket, hogy tervezzen hatékonyabb terápiás stratégiák.
Ez a tanulmány korlátozza a nem megfelelő funkcionális elemzése PDSS2 katalógusa, amely mérsékli azt a következtetést, hogy úgy viselkedik, mint egy tumor szupresszor GC. További vizsgálatok, beleértve útvonal elemzés gyomor carcinogenesis és funkcionális elemzése várhatóan tisztázni molekuláris mechanizmusok mögöttes biológiai aktivitását PDSS2 katalógusa GC. Katalógusa Következtetés
Összefoglalva, eredményeink alátámasztják azt a következtetést, hogy a kifejezés az feltételezett tumor szupresszor gén PDSS2 katalógusa szabályozza promoter hipermetiláció GC sejtek jelzik. Eredményeink azt mutatják, hogy további csökkent expressziója PDSS2 katalógusa mRNS alkalmazásával egy új biomarker progresszió és megismétlődésének minden típusú GC. Katalógusa szerzôk hozzájárulása katalógusa MK, HO, FS, DS, HT, RH és KM végzett kísérletek és az adatok elemzése. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF és YK összegyűjtött esetek és klinikai adatok. MK és az SN terveztek és a tanulmány, és elkészítette az első kézirat. YK felügyelt projekt. Minden szerző hozzájárult a végleges kéziratot.

• Gyomor tonometriával irányított kezelés kritikus állapotú betegekben: rendszeres felülvizsgálatát és meta-analysis
• A segédprogram a citokeratin 7 és 20 (CK7 /20) immunhisztokémiai a különbséget a rövid szegmens Barrett oesophagus gyomor- bélrendszeri metaplasiaként Vajon megbízható-e?