Снижение экспрессии пренил дифосфат-синтазы субъединицей 2 коррелирует со снижением выживаемости больных раком желудка

Снижение экспрессии пренил дифосфат-синтазы субъединицей 2 коррелирует со снижением выживаемости пациентов с раком желудка
Аннотация
Справочная информация
Идентификация новых молекулярных биомаркеров позволит улучшить лечение пациентов с раком желудка (GC). Пренил дифосфат-синтазы субъединица 2 (PDSS2) необходим для биосинтеза кофермента Q10 и действует как подавитель опухоли; Однако роль и регуляторные механизмы PDSS2
в GC не поняты. Цель данного исследования состояла в том, чтобы определить статус экспрессии и регуляторных механизмов PDSS2
в GC.
Методы
Ассоциации между экспрессией и метилирование PDSS2
оценивались с помощью ГХ клеточных линий. Клиническая значимость PDSS2
экспрессии оценивали с помощью 238 пар хирургическим путем резекции желудка тканей с анализом подгруппы на основе GC подвидов.
Результаты
экспрессии PDSS2
мРНК была уменьшена в 73% GC клетки линии по сравнению с контрольной незлокачественный клетки. В PDSS2
промотор гиперметилированы в клетках с пониженной PDSS2
экспрессии и лечения этих клеток с ингибитором метилирования реактивировать PDSS2
выражение. GC ткани выражена значительно более низкие средние уровни PDSS2
мРНК по сравнению с соседними нормальными тканями (P &
л; 0,001). Паттерн экспрессии белка PDSS2 согласуется с этим его мРНК. Уменьшение PDSS2
экспрессии мРНК в тканях GC (менее половины уровня экспрессии, обнаруженной в соответствующих нормальных окружающих тканей) в значительной степени коррелирует с повышенным уровнем антигена 19-9 (P
= 0,015), лимфоузлов метастаз (P = 0,022
), и короче, безрецидивная выживаемость после радикального резекции (P
= 0,022). Кроме того, многомерный анализ выявил PDSS2
экспрессию мРНК как независимый прогностический фактор (отношение рисков 1,95, 95% доверительный интервал 1.22-3.09, P
= 0,005), а также его характер экспрессии и прогностическое значение были схожи между тремя подтипами GC .
Выводы
PDSS2
кодирует предполагаемый подавитель опухоли, и мы покажем здесь, что его экспрессия регулируется гиперметилированием его промотора в GC клетки. Подавление PDSS2
экспрессии мРНК может служить новым биомаркером всех типов GC.
Ключевые слова
Желудочный рак пренил дифосфат синтазы субъединицу 2 Expression метилирование подтип фон
Хотя заболеваемость раком желудка (GC) сокращается в большинстве развитых стран, она остается одной из самых распространенных причин рака, связанных смерти во всем мире [1] - [3]. Соответствующее стратификация пациентов является ключевым аспектом индивидуального подхода, что привело к снижению смертности от этого вида рака [4], [5].
По его эпидемиологии, патологии и локализации в организме, GC признан трех различных злокачественных опухолей возникающие в том же органе [6] - [8]. Шах и др. [9] предложил убедительного классификацию GC согласно гистологических и анатомических критериев следующим образом: (1) проксимальный nondiffuse GC, где опухоль расположена в основном в кардии желудка с признаками предшественника железистой дисплазии или на месте карциномы в присутствии хронического воспаления в , как правило, без атрофии; (2) диффузный ГХ, который может быть расположен в любом месте в желудке без видимой гастрита, который обладает совершенно диффузный характер инфильтрации клеток с низкодифференцированная фенотипа; и (3) дистальный nondiffuse ГХ, который расположен в основном в дистальном отделе желудка с признаками хронического гастрита, который преимущественно дифференцированными или проявляет кишечную фенотип. В этом исследовании они показали, что три подтипа GC отличаются их профилей экспрессии генов. Таким образом, генетическое разнообразие GC подвидов следует рассматривать при изучении генетических и эпигенетических изменений, связанных с желудочной канцерогенеза и прогрессии.
Пренил дифосфат-синтазы субъединицу 2 (PDSS2
) был идентифицирован в 2005 году [10], а также данные свидетельствуют о что он действует как подавитель опухоли [11], [12]. PDSS2
необходим для синтеза коэнзима Q10 (CoQ10) [13], [14], который синтезируется в внутренней мембране митохондрий и играет жизненно важную роль в митохондриальной дыхательной цепи, пиримидинового нуклеозида биосинтез и модуляцию апоптоза [15]. PDSS2
находится в хромосомный локус 6q16.3-21, сайт частых микросателлитных нестабильности ДНК и потерей гетерозиготности (LOH) в GC [16], [17], поддерживая свою роль в качестве супрессора опухоли в эпителиальных клеток желудка , Кроме того, PDSS2
может подавлять развитие злокачественных меланом и рака легких [11], [12]. Кроме того, Чен и др. Сообщается, что в исполнение избыточную экспрессию PDSS2
приводит к апоптозу в клеточной линии GC, вызывая остановку клеточного цикла в фазе G0 /G1 [18]. Эти отчеты привели нас сделать предположение, что PDSS2
является потенциальным GC-связанных генов и кандидат нового клинически соответствующего прогностического маркера ГК.
В этом исследовании, экспрессии и статуса метилирования PDSS2
в GC были определены для оценки клинической значимости и регуляторных механизмов PDSS2
экспрессии в GC. Наши результаты указывают на то, что PDSS2
выражение обеспечивает потенциальную клиническую биомаркеров прогрессирования и рецидива GC.
Материалы и методы
этики
Данное исследование соответствовало этическим рекомендациям Всемирной медицинской ассоциации Хельсинкской декларации -Ethical принципы медицинских исследований с участием человека и было одобрено Институциональным наблюдательным советом университета Нагоя, Япония. Письменное согласие на использование клинических образцов и данных, в соответствии с требованиями этическими комитетами, было получено от всех пациентов [4].
Сбора образцов
клеточных линий Одиннадцать GC (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, СК-2-НУ и СК-6-LCK) и CCL-241 (незлокачественный клеточная линия получена из тонкой кишки) были получены из американской коллекции типовых культур (Manassas, VA, США) или университет Тохоку, Япония. Линии GC клеток культивировали при 37 ° С в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки в атмосфере, содержащей 5% CO <суб> 2. Для CCL-241, 30 нг /мл эпидермального фактора роста (Sigma-Aldrich) добавляли в среду. Первичные ткани GC и соответствующие нормальные окружающие ткани были собраны от 238 пациентов, перенесших резекцию желудка для GC в больнице Университета Нагоя в период между 2001 и 2012 больных, получавших неоадъювантной терапии, были исключены, потому что было трудно получить раковые клетки от травмированных тканей. Образцы были классифицированы гистологически с использованием 7-е издание Союза по международному контролю над раком (UICC) классификации [19]. Соответствующие параметры клинико-патологические были получены из медицинских записей. Для того, чтобы оценить ли уровень экспрессии PDSS2
коррелируют с опухолевым фенотипом, пациенты были разделены на три группы в соответствии с определением GC подвидов в соответствии с критериями Шах и др. [9] следующим образом: проксимальная nondiffuse, диффузной, и дистальный тип nondiffuse. С 2006 года, адъювантной химиотерапии с использованием S-1 (пероральный фторированной пиримидинового) вводят все стадии UICC II-III больных с ГК при отсутствии противопоказаний по состоянию пациента [20]. Пациенты наблюдались по крайней мере, один раз в 3 месяца в течение 2 лет после операции, а затем каждые 6 месяцев в течение 5 лет или до смерти. Физическое обследование, лабораторные анализы, и к улучшенному компьютерная томография (грудной клетки и брюшной полости) проводили при каждом визите. Химиотерапия для больных с отдаленными метастазами или после восстановления определяли по усмотрению врача. Образцы
ткани были немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° С. Образцы опухоли без некротических областей (около 5 мм 2) были извлечены при макроскопическом наблюдении и только образцов, подтвержденных на сегодняшний составляют более 80% компонентов опухоли от H &Amp; E окрашивание были включены в данное исследование. Соответствующих нормальных смежные образцы слизистой оболочки желудка &К раствору 5 ° см от края опухоли были получены из того же самого пациента [21]
Количественные в режиме реального времени обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (QRT-PCR)
тотальную РНК. (10 мкг на образец), выделяли из линий 11 GC клеток, CCL-241, 238 первичных GC тканей и соответствующие нормальные окружающие ткани были использованы для генерации кДНК, который амплифицировали с использованием специфических праймеров для ПЦР (дополнительный файл 1: Таблица S1). Обнаружение в реальном времени SYBR® интенсивности зеленой флуоресценции проводили с использованием системы ABI StepOnePlus ПЦР в реальном времени (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Экспрессия мРНК GAPDH
количественно оценивали в каждом образце по стандартизации. Реакции QRT-PCR в каждом образце были проведены в трех экземплярах. Уровень экспрессии каждого образца представлены в виде значения PDSS2
ампликона, деленное на что из GAPDH,
[22]. PDSS2
экспрессия мРНК была определена как снижение в GC тканях, когда ее уровень был меньше, чем вдвое меньше, соответствующей нормальной смежной ткани.
Анализ области промотора PDSS2
нуклеотидной последовательности в PDSS2
область промотора, анализировали, чтобы определить наличие или отсутствие CpG островков определяется следующим образом: по меньшей мере 200 п.н. участок ДНК с высоким содержанием GC (> 50%) и Наблюдаемое отношение CpG /ожидаемая CpG-≥0.6 [23] , Мы использовали программное обеспечение CpG острова Searcher (HTTP:.. //Cpgislands USC Edu /) для определения местоположения CpG островков [24]
метилирования конкретных ПЦР (ССП) и бисульфит анализ последовательности
. PDSS2
обладает остров CpG вблизи его промоторной области, и мы предположили, что аберрантных метилирования отвечает за регулирование транскрипции PDSS2
в GC. Образцы ДНК из линий 11 GC клеток, обработанных бисульфит были подвергнуты и MSP анализа нуклеотидной последовательности [25]. Последовательности праймеров, используемых для MSP и бисульфита последовательности перечислены в дополнительном файле 1: Таблица S1
5-аза-2'-дезоксицитидин (5-аза-О.К.) лечение
Чтобы оценить отношение промотора гиперметилированием к PDSS2.
транскрипции, GC клетки (1,5 × 10 6) обрабатывали 5-аза-ПСТ (Sigma-Aldrich), чтобы ингибировать метилирование ДНК и культивировали в течение 6 дней со средними изменениями в дни 1, 3 и 5. РНК экстрагировали, и оТ-ПЦР проводили, как описано [7].
иммуногистохимии (IHC)
IHC анализ локализации PDSS2 проводили с использованием мышиных моноклональных антител против PDSS2 (ab119768, Abcam, Кембридж, Соединенное Королевство ) разводили 1: 150 в разбавителе антитела (Dako, Glostrup, Дания), чтобы исследовать 30 представительных фиксированных формалином и залитых парафином участки хорошо сохранившегося ГХ ткани, описанной ранее [3]. Окрашивание модели были сопоставлены между ШС и соответствующих нормальных окружающих тканей. Чтобы избежать субъективности, образцы были рандомизированы и кодируются перед проведением анализа двумя независимыми наблюдателями, которые не знали о состоянии образцов. Каждый наблюдатель оценивали все образцы, по крайней мере в два раза, чтобы свести к минимуму изменения внутри наблюдателя [7].
Оценка клинической значимости экспрессии PDSS2
Корреляция между рисунком PDSS2
экспрессии мРНК и клинико-патологическими параметрами были оценены в соответствии с различия между тремя подтипами GC. Подгруппа анализ выживаемости в соответствии с ГК подтипа было проведено с целью определения влияния PDSS2
выражение результатов пациентов.
Статистический анализ
относительных уровней экспрессии мРНК (PDSS2 /GAPDH
) между GC и прилегающих к нему нормальные ткани были проанализированы с помощью теста Манна-Уитни U
. Χ
2 тест использовали для анализа значимости ассоциации между экспрессией и метилирования статус PDSS2
и клинико-патологическими параметрами. Конкретные болезни и показатели выживаемости без признаков заболевания были рассчитаны с использованием метода Каплана-Мейера, а разница в кривых выживаемости анализировали с помощью лог-рангового теста. Мы провели многомерный регрессионный анализ для выявления прогностических факторов с использованием модели пропорциональных рисков Кокса и переменные с P &
ЛТ; 0,05 были введены в окончательной модели. Все статистические анализы были проведены с использованием JMP 10 программного обеспечения (SAS Institute Inc, Кэри, Северная Каролина, США). Значение P &
ЛТ; 0,05 считали статистически значимыми.

Результаты идентификации острова CpG в промоторе PDSS2
остров CpG был идентифицирован в PDSS2
области промотора с использованием CpG острова Searcher. Свойства острова CpG являются следующие: 1655 п.н., 55,9% GC, и 0,70 Наблюдаемые /ожидаемый коэффициент CpG CpG (Рис. 1А) Поэтому мы предположили, что гиперметилирование островов CpG регулирует экспрессию PDSS2
в GC. Рисунок 1 Метилирование анализ PDSS2 в ГХ клеточных линиях. (A) На острове CpG обозначено синей линии с центром на PDSS2
инициации транскрипции сайта, простирающейся вверх по течению в области промотора. (B) Гистограммы показывают PDSS2
уровни экспрессии мРНК в CCL-241 (управление незлокачественный клетки) и линии клеток GC до или после обработки 5-аза-ПСТ. Статус метилирования промотора PDSS2
оценивали с использованием ССП, и результаты заключаются в коробке. M, метилированной; рм, частично метилированный; U, неметилированным. (С) Типичные результаты анализа последовательностей бисульфита. Все сайты CpG в KATOIII клетки были сохранены в качестве CG и тех MKN74 были преобразованы в TG.
Выражение PDSS2 мРНК и статус метилирования в линиях GC клеток
Значительное снижение PDSS2
уровней мРНК были обнаружены в семи (73 %) из 11 линий ГХ клеток по сравнению с уровнем экспрессии клетки CCL-241 (данные для GC тканей описаны ниже). Там не было никакого видимого различия в уровнях экспрессии между линиями клеток, полученных из дифференцированных и недифференцированной ГКС (Фиг.1В). Гиперметилирование PDSS2
промотор был обнаружен в MKN1, SC-2-NU, KATOIII, MKN45 и клеток NUGC3 (рис 1В). Для того, чтобы определить, ингибирует ли гиперметилирование PDSS2
промотор транскрипции, уровни экспрессии мРНК сравнивали до и после обработки клеток с ингибитором метилирования 5-аза-ПСТ. PDSS2
уровни мРНК были восстановлены в клетках с понижающей регуляции PDSS2
выражение сопровождающих гиперметилирование после обработки 5-аза-ПСТ (рис 1B), указывая, что промотор гиперметилирование тормозится PDSS2
транскрипцию в GC. Типичные хроматограммы анализа последовательность PDSS2
промоторной области в MKN28 (полная метилирования) и NUGC4 (отсутствие метилирования) клеток показаны на рисунке 1C.
Характеристики пациентов
популяции пациентов включали 179 мужчин и 59 женщины в возрасте от 20 до 84 лет (65,3 × 11,7 лет, средний × стандартное отклонение). Патологически, 139 и 99 пациентов были диагностированы с недифференцированной и дифференцированной GC соответственно. Пациенты были разделены на три GC фенотипов следующим образом: nondiffuse, 54; диффузный, 48; и дистальный nondiffuse, 136. В соответствии с 7-м издании классификации UICC, 58, 40, 71 и 69 пациентов находились в стадии I, II, III и IV, соответственно. Сто шестьдесят четыре пациентов в стадии I-III прошли R0 резекция. Шестьдесят из 69 пациентов в UICC стадии IV были диагностированы как стадия IV в связи с положительной перитонеального лаважа цитологии, локализованного перитонеального метастазирования или отдаленными метастазами лимфатических узлов. Восемь пациентов в стадии IV была синхронная метастаз печени, один был метастаз легких, и они подверглись гастрэктомия целью контролировать кровотечение или препятствие к прохождению
пищи. Уровней экспрессии мРНК PDSS2 и белка в хирургически удаленных тканях
средний уровень экспрессии мРНК PDSS2
была ниже, в ГЦ тканях по сравнению с нормальных окружающих тканей (Р
&л; 0,001); Тем не менее, не было никаких существенных различий в PDSS2
уровней экспрессии мРНК между пациентами с недифференцированном или дифференцированном GC (Рисунок 2А). Паттерн экспрессии PDSS2 оценивали с использованием IHC. Типичные случаи с пониженным PDSS2 окрашивания тканей GC показаны на рисунке 2B. В целом, окрашивающие образцы PDSS2 согласуются с данными QRT-PCR. Рисунок 2. Экспрессия анализ PDSS2 в клинических образцах. (A) Средний уровень PDSS2
мРНК в GC тканях по сравнению с соответствующими нормальными окружающими тканями и в тканях GC между пациентами с недифференцированной GC и дифференцированной GC. Данные (B) представитель IHC сравнивая экспрессию PDSS2 в опухоли и смежной нормальной смежной ткани (увеличено 100 × и 400 ×). N, нормальная смежной ткани; T, опухолевой ткани
. Прогностическое значение уровня экспрессии мРНК PDSS2
Выражение PDSS2
мРНК в тканях GC была снижена в 76 (32%) из 238 пациентов (менее половины уровня экспрессии, обнаруженных в соответствующие нормальные окружающие ткани). Болезньспецифическая выживаемость больных со сниженной уровни PDSS2
мРНК в ШС была значительно ниже по сравнению с теми, без (ставки 5-летняя выживаемость, 36% и 64% соответственно, P &
ЛТ; 0,001, рис 3A). Снижение уровня PDSS2
мРНК в ШС были связаны с углеводным антигеном (CA) 19-9 > 37 МЕ /мл и метастаз лимфатических узлов (таблица 1). Одномерный анализ выживаемости без признаков заболевания конкретных показали, что GC подтип (проксимального nondiffuse или диффузное), СА 19-9 > 37 МЕ /мл, размер опухоли (≥50 мм), pT4, недифференцированные опухоли, вовлечение лимфатической, инвазия сосудов, инвазивный рост, метастазов в лимфатических узлах, положительный перитонеальный лаваж цитологии и снижение PDSS2
экспрессию мРНК в GC ткани были значительными прогностический факторы неблагоприятных исходов. Многофакторный анализ выявил снизился PDSS2
экспрессии мРНК как независимый прогностический фактор (отношение рисков 1,95, 95% доверительный интервал 1.22-3.09, P
= 0,005, таблица 2). Пропорциональных рисков предположение в модели Кокса оценивали с помощью моделей, включая время-по-регрессоров взаимодействий и без каких-либо существенных нарушений были найдены в модели. Рисунок 3 прогностическое значение экспрессии PDSS2 мРНК у пациентов с GC. (А) Болезнь-специфическая выживаемость больных со сниженной PDSS2
мРНК в GC ткани. (B) (C) Болезни специфических (В) и безрецидивная (C) выживаемости среди 168 пациентов, перенесших резекцию R0.
Таблица 1 Взаимосвязь между уровнем экспрессии мРНК PDSS2 и клинико-патологическими параметрами 238 пациентов
Переменные

DecreasedPDSS2
мРНК в тканях GC (п)

Другие (п)

P значение


Возраст
0,408
&л; 65 год
29
71
≥ 65 год
47
91
Пол
0,551
Мале
59
120
Женский <бр> 17
42
Подтип
0,298
Проксимальный nondiffuse
22
32
Диффузный
14
33
Дистальный nondiffuse
40 <бр> 96
Карциноэмбриональный антиген (нг /мл)
0,490
≤ 5
59
132
> 5
17
30
углеводный антиген 19-9 (МЕ /мл)
0,015 *
≤ 37
55
139
> 37
21
23
Опухоль Размер (мм) 0,104

&л; 50
29
80
≤ 50
47
82
Глубина Опухоль (UICC)
0,419
pT1
14
32
pt2
6
24
pT3
19
33
pT4
37
73
Дифференциация
0,217
Дифференцированный
36 <бр> 63
недифференцированных
40
99
участие лимфатической
0,201
Absent
8
27
Представить
68
135
судно вторжения
0,535
Absent
31
73
Представить
45
89
инфильтративный тип роста
0,443
инвазивный рост
24
59
резкого роста
52
102
лимфатического узла метастаз (UICC)
0,022 *
pn0
19
70
pN1
8
19
PN2
12
24
pN3
37
49
перитонеального лаважа цитологии
0,306
Отрицательная
57
131
Положительный
19
31
Отдаленные метастазы (UICC)
0,228
M0
50
119
M1
26
43 <бр> * Статистически значимое (P &
л; 0,05). GC, рак желудка; UICC, Союз по международному контролю рака.
Таблица 2 прогностическими факторами для выживаемости без признаков заболевания специфичной 238 пациентов
переменных

п (%)

Одномерный

Multivariable

коэффициент опасности

95% ДИ

P
значение
отношение
опасности

95% ДИ

P
значение

Возраст (≥65)
138 (58%)
1,04
0,67 - 1,61
0,843
Пол (женский)
59 (25%)
1,29
0,79 - 2,05
0,301
Подтип (дистальный nondiffuse)
136 (57%)
0,43
0,28 - 0,67
&лт; 0,001
0,64
0.40 - 1.01
0,056
Карциноэмбриональный антиген (> 5 нг /мл)
47 (20%)
1,48
0,86 - 2,42
0,149
углеводный антиген 19-9 (> 37 МЕ /мл)
44 (18%)
1,98
1.17 - 3.20
0,012
1,23
0,71 - 2,06 <бр> 0,445
размер опухоли (≥50 мм)
129 (54%)
2,86
1,78 - 4,80
&л; 0,001
1,40
0,83 - 2,42
0,211
глубина опухоли (pT4, UICC)
110 (46%)
4.17
2,61 - 6,88
&лт; 0,001
1,38
0,78 - 2,50
0,273 <бр> Опухоль дифференциация (недифференцированные)
139 (58%)
2,03
1,28 - 3,32
0,002
1,45
0,83 - 2,60
0,197
лимфатической участие
203 (85%)
6,31
2,36 - 25,8
&лт; 0,001
1,45
0,45 - 6,50
0,559
судно вторжения
134 (56%) <бр> 2,65
1,66 - 4,37
&л; 0,001
1,75
1,07 - 2,97
0,026 *
инвазивный рост
83 (35%)
3.03
1,97 - 4,70
&л; 0,001
1,19
0,70 - 2,05
0,520
лимфоузлов метастаз
149 (63%)
7,02
3,70 - 15,1
&л; 0,001
1,38
0,56 - 3,81
0,503
перитонеального лаважа цитологии (положительный) 50
(21%)
4,33
2,76 - 6,74
&лт; 0,001
1,87
1,14 - 3,06
0,014 *
UICC этап (III-IV)
140 (59%)
9,68
4,97 - 21,8
&л; 0,001 <бр> 2,63
0,94 - 7,83
0,065
Снижение PDSS2
мРНК в GCS
76 (32%)
2.18
1.40 - 3.37
&лт; 0,001
1,91
1,19 - 3,04
0,008 *
* Статистически значимое в многомерном анализе. GC, рак желудка; CI, доверительный интервал; UICC, Союз по международной борьбе против рака.
Из 168 пациентов, перенесших резекцию R0, коэффициент выживаемости конкретных заболеваний была значительно ниже для тех, с уменьшением PDSS2
экспрессию мРНК в ШС (п = 50) по сравнению с теми, без (п = 118) (5-летняя выживаемость, 50% и 77%, соответственно, P
= 0,006, рис 3B). Пациенты со сниженной PDSS2
экспрессия мРНК в ШС испытывали значительно более ранние рецидивы после операции по сравнению с пациентами без (ставки 2-летних безрецидивной выживаемости, 64% и 84%, соответственно, P = 0,022
, Рисунок 3C). Первоначальные рекуррентные участки 43 рецидивирующих пациентов со сниженной PDSS2
экспрессия мРНК в ШС были перитонеальный в 21 (49%), печень у 6 (14%), лимфатический узел в 13 (30%) и другие (например, легкие и кости) у 3 больных. С другой стороны, те из 61 пациентов без рецидивирующей снизилась PDSS2
были перитонеальный в 35 (57%), печень в 10 (16%), лимфатический узел в 8 (13%) и другие у 8 больных. Пациенты со сниженной PDSS2
экспрессия мРНК в ШС, вероятно, рецидив узла, хотя оно не достигало статистической значимости.
Подгруппа анализ экспрессии PDSS2 в соответствии с ГК подтипа
Среднее PDSS2
экспрессии мРНК уровни были эквивалентны в GC и нормальных окружающих тканей (рис 4а). Точно так же, прогностическое значение уменьшилось PDSS2
экспрессии мРНК в ШС была сопоставима между тремя подтипами GC (Рисунок 4B). Рисунок 4 Анализ в подгруппах GC подвидов. Уровни экспрессии (A) PDSS2
мРНК среди трех подтипов GC как в GC и нормальных окружающих тканей. (B) Сравнение выживаемости без признаков заболевания конкретных больных и без снижения PDSS2
экспрессии мРНК в ШС каждого подтипа GC.
Обсуждение
PDSSs являются гетеротетрамерными ферменты, содержащие субъединиц, кодируемых PDSS1
(10p12. 1) и PDSS2
[10], [12]. Активность PDSS требует от обеих субъединиц [10], [14], [15]. Ассоциация PDSS2 с услугой GC был рассмотрен из-за его хромосоме (6q21), а также из-за его инактивации или потери от некоторых злокачественных новообразований [16], [26]. Здесь показано, что PDSS2
мРНК гетерогенно выраженный в ГХ клеточных линий, и его экспрессия ингибируется в 73% и 32% клеточных линий ГХ и опухолевых тканей, соответственно. Мы обнаружили гиперметилирование PDSS2
промотора в течение пяти (45%) линий 11 GC клеток со значительно уменьшенными уровнями PDSS2
выражения. Кроме того, PDSS2
транскрипции была возобновлена ​​после того, как клетки обрабатывали ингибитором метилирования ДНК. Эти данные являются первыми, насколько нам известно, чтобы показать, что промотор гиперметилирование регулирует PDSS2
транскрипции. Тем не менее, PDSS2
выражение было снижено в некоторых клетках GC без гиперметилированием. Поскольку хромосома 6Q является частым местом LOH в GC [17], [26], [27], LOH может регулировать PDSS2
выражение, а также.
Там был доклад, демонстрирующий, что было выражено PDSS2
при пониженных или незаметного экспрессии в небольшом количестве образцов биопсии GC [18]. В настоящем исследовании мы проанализировали 238 хирургических образцов опухолей и соответствующего незатронутой ткани, чтобы получить более глубокое представление о клинической значимости PDSS2
экспрессии в GC. В соответствии с анализом злокачественной меланомы и рака легких [11], [12], большинство пациентов с ГК таил сниженный уровень PDSS2
мРНК в GC тканях, а средний PDSS2
уровень экспрессии был значительно снизился в сравнении GC с нормальными окружающими тканями. IHC было проведено с целью определить, отражает ли уровень мРНК PDSS2
экспрессию белка. Поскольку результаты IHC показали, что данные мРНК в соответствии с уровнем белка, последующие анализы были выполнены в соответствии с данными мРНК, которые более пригодны для количественного анализа [7], [23].
Снижение PDSS2
экспрессия мРНК в ШС была в значительной степени связано с повышенными уровнями предоперационной CA19-9 и метастазов в лимфатических узлах и был идентифицирован как независимый прогностический фактор. Кроме того, пациенты со сниженной PDSS2
экспрессию мРНК в GC ткани испытывали значительно раньше рецидива после резекции R0. В последнее время, Чен и др. исследовали активность подавлять опухоли PDSS2
при раке легкого [28]. Они сообщили, что принудительное сверхэкспрессия PDSS2
вызвало массовую гибель клеток путем апоптоза и образование существенно тормозится колоний и существует обратная зависимость между PDSS2
выражение выражение и gelsolin, которое, как известно, ингибирует апоптоз и увеличить инвазию клеток и метастазирование [29], хотя PDSS2 не влияет на чувствительность раковых клеток к химиотерапевтическим препаратам [28]. Эта опухоль подавляющих механизм PDSS2
может быть применен к GC, а также.
Паттерн экспрессии PDSS2
мРНК и ее прогностическое воздействия были сходны между тремя подтипами GC (проксимальная nondiffuse, диффузные и дистальной nondiffuse) , указывая, что PDSS2
выражение влияет на патогенез всех типов ГХ. Шах и др. сообщили, что одна треть амплифицированных генов, возможно, в том числе PDSS2
, показали эквивалентную схему экспрессии среди трех подтипов GC [9].
ГХ одна из опухолей с высокой частотой аберрантных метилирования, и она часто демонстрирует КПГ остров methylator фенотип [30], [31]. Выражение большого числа генов подавляется CpG острова гиперметилированием в GC клетки, в том числе, кодирующие опухолевых супрессоров, регуляторы клеточного цикла, индукторов и палачей апоптоза, белки, которые способствуют инвазивный фенотип, и ремонт несовпадение ДНК ферментов [32]. Эти эпигенетические изменения могут служить в качестве биомаркеров, которые освещают увеличенный метастатический потенциал и агрессивного фенотипа опухоли [33], а также терапевтические цели [34]. Таким образом, идентификация других генов, которые регулируются с помощью метилирования в GC клетки, вероятно, улучшить управление GC
Функция опухоли подавляющий из PDSS2
поддержаны присутствующими выводы следующим образом:. (1) снижение экспрессии PDSS2
часто обнаруживается в тканях GC, (2) средний уровень PDSS2
экспрессии значительно ниже в GC тканях, и (3) снижение экспрессии PDSS2
было связано с ранним рецидивом и последующим плохим прогнозом. PDSS2
уровни экспрессии в тканях биопсии получены с использованием образцов эндоскопического наблюдения или в хирургических образцах могут быть полезны для прогнозирования раннего рецидива и плохой прогноз, который, скорее всего, усилия по оказанию помощи в разработке более эффективных терапевтических стратегий.
Это исследование было ограничено его отсутствие достаточного функционального анализа PDSS2
, который закаляет вывод о том, что он действует как подавитель опухоли в GC. Дальнейшие исследования, включая анализ пути в желудочном канцерогенезе и функционального анализа, как ожидается, прояснить молекулярные механизмы, лежащие в основе биологической активности PDSS2
в GC.
Заключение
В заключение, наши результаты подтверждают вывод о том, что экспрессия мнимый супрессоров опухолей ген PDSS2
регулируется промотором гиперметилированием в GC клетках и указывают. Наши результаты указывают на то, что дальнейшее снижение экспрессии PDSS2
мРНК может представлять собой новый биомаркер для прогрессии и рецидива всех видов GC. Вклад
Авторского
MK, HO, FS, DS, HT, RH и КМ Проведенные эксперименты и анализ данных. DK, CT, SY, TF, GN, HS, МК, МФ и Ю.К. собраны случаи и клинические данные. MK и SN задуман и разработан исследование и подготовил первоначальную рукопись. YK курировал проект. Все авторы внесли свой вклад в окончательный вариант рукописи.

• Желудочный тонометрию руководствовались терапии у пациентов интенсивной терапии: систематический обзор и м…
• Полезность цитокератины 7 и 20 (CK7 /20) иммуногистохимия в отличие от короткого сегмента пищевода Барретта из жел…