Diminuição da expressão da subunidade sintase prenil difosfato 2 correlatos à menor sobrevida dos pacientes com câncer gástrico

Diminuição da expressão da prenil difosfato sintase subunidade 2 correlaciona-se com a sobrevivência reduzida de pacientes com câncer gástrico da arte abstracta
Fundo
Identificação de novos biomarcadores moleculares irá melhorar o manejo de pacientes com câncer gástrico (GC). Prenil-difosfato-sintase subunidade 2 (PDSS2) é necessário para a biossíntese de coenzima Q10 e actua como um supressor de tumor; Entretanto, o papel e regulamentares mecanismos de PDSS2
no GC não são compreendidos. O objetivo deste estudo foi determinar o status da expressão e mecanismos de regulação da PDSS2
em GC.
Métodos
associações entre expressão e metilação de PDSS2
foram avaliados utilizando linhas celulares GC. O significado clínico PDSS2
expressão foi avaliada utilizando 238 pares de tecidos gástricos cirurgicamente ressecados com análise de subgrupo baseado em subtipos GC.
Resultados
A expressão de mRNA PDSS2
foi diminuída em 73% das células GC linhas de células em comparação com o controlo não-cancerosas. O PDSS2
promotor foi hipermetilado em células com diminuição PDSS2
expressão e tratamento destas células com um inibidor da metilação reactivada PDSS2
expressão. GC tecidos expressa significativamente mais baixos níveis médios de PDSS2
ARNm em comparação com tecidos normais adjacentes (P
< 0,001). O padrão de expressão de proteínas PDSS2 foi consistente com o do seu mRNA. A diminuição de PDSS2
expressão de ARNm em tecidos de GC (menos de metade do nível de expressão detectada nos correspondentes tecidos normais adjacentes) significativamente correlacionada com níveis elevados de antigénio de carbohidrato 19-9 (P = 0,015
), nódulo linfático metástase (P
= 0,022), ea sobrevida livre de recorrência mais curto após a ressecção curativa (P
= 0,022). Além disso, a análise multivariada identificou PDSS2
expressão de mRNA como um fator prognóstico independente (taxa de risco 1,95, 95% de intervalo de confiança 1,22-3,09, P
= 0,005), e seu padrão de expressão e significado prognóstico foram semelhantes entre os três subtipos de GC .
Conclusões
PDSS2
codifica um supressor tumoral putativo, e mostramos aqui que a sua expressão era regulada por hipermetilação do promotor em células GC. A inibição da PDSS2
expressão de mRNA pode servir como um romance biomarcador de todos os tipos de GC.
Palavras-chave
gástrica câncer prenila subunidade difosfato sintase 2 Expressão fundo metilação subtipo
Embora a incidência de câncer gástrico (GC) está em declínio na maioria dos países desenvolvidos, continua a ser uma das causas mais comuns de morte relacionada ao câncer em todo o mundo [1] - [3]. estratificação adequado dos pacientes é um aspecto central do tratamento individualizado, levando à redução da mortalidade por este cancro [4], [5]. De acordo com a sua
epidemiologia, patologia, e localização no corpo, a GC é reconhecido como malignidades três distintos provenientes do mesmo órgão [6] - [8]. Shah et ai. [9] propuseram uma classificação convincente de GC de acordo com critérios histopatológicos e anatómicas como se segue: (1) proximal nondiffuse CG em que o tumor está localizado principalmente no cárdia com evidência de precursor de displasia glandular ou carcinoma in situ na presença de inflamação crónica , geralmente sem atrofia; (2) GC difusa, que pode estar localizado em qualquer lugar no estômago sem gastrite aparente que exibe um padrão inteiramente difuso da infiltração de células com um fenótipo pouco diferenciado; e (3) GC nondiffuse distai, que está localizada principalmente no estômago distal com evidência de gastrite crónica que é predominantemente diferenciada ou exibe um fenótipo intestinal. Neste estudo, eles demonstraram que os três subtipos de GC são distinguidas pelos seus perfis de expressão de gene. Portanto, a diversidade genética dos subtipos GC deve ser considerado em estudos de alterações genéticas e epigenéticas relacionadas à carcinogênese gástrica e progressão.
Prenila difosfato sintase subunidade 2 (PDSS2
) foi identificado em 2005 [10], e evidências indicam que actua como um supressor de tumores [11], [12]. PDSS2
é necessário para a síntese da coenzima Q10 (CoQ10) [13], [14], que é sintetizado na membrana mitocondrial interna e desempenha um papel vital na cadeia respiratória mitocondrial, pirimidina biossíntese de nucleósido, e na modulação da apoptose [15]. PDSS2
reside dentro do locus cromossómico 6q16.3-21, um local de instabilidade microssatélite DNA frequente e perda de heterozigosidade (LOH) em GC [16], [17], que suporta o seu papel como supressor de tumor em células epiteliais gástricas . Além disso, PDSS2
pode suprimir o desenvolvimento de melanomas malignos e cancros do pulmão [11], [12]. Além disso, Chen et al. relataram que a sobre-expressão forçada de PDSS2
leva à apoptose numa linha celular de GC, causando a paragem do ciclo celular na fase G0 /G1 [18]. Estes relatórios nos levou a fazer uma hipótese que PDSS2
é um potencial gene relacionado com o GC e um candidato do romance marcador de prognóstico clinicamente relevante de GC.
Neste estudo, expressão e estado de metilação de PDSS2
em GC foram determinados para avaliar o significado clínico e mecanismos de regulação da expressão PDSS2
no GC. Nossos resultados indicam que PDSS2
expressão fornece um potencial biomarcador clínica da progressão e recorrência de GC.
Material e métodos
Ética
Este estudo conformado com as diretrizes éticas da Declaração da Associação Médica Mundial de Helsinki Princípios -Ethical para pesquisas clínicas envolvendo seres humanos e foi aprovado pelo Institutional Review Board da Universidade de Nagoya, Japão. Consentimento informado por escrito para o uso de amostras clínicas e de dados, conforme exigido pelo conselho de revisão institucional, foi obtido de todos os pacientes [4]. Coleta
Amostra
linhas celulares Eleven GC (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-NU e SC-6-LCK) e CCL-241 a linha de células (não-canceroso derivado do intestino delgado) foram obtidas a partir da American Type Culture Collection (Manassas, VA, EUA) ou Universidade Tohoku, no Japão. As linhas de células de GC foram cultivadas a 37 ° C em meio RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) suplementado com soro fetal bovino a 10% numa atmosfera contendo 5% de CO 2. Para CCL-241, 30 ng /ml do factor de crescimento epidérmico (Sigma-Aldrich) foi adicionado no meio. tecidos GC primárias e correspondentes tecidos normais adjacentes foram coletados de 238 pacientes submetidos à ressecção gástrica para GC no Hospital da Universidade de Nagoya, entre 2001 e 2012. Os pacientes que receberam a terapia neoadjuvante foram excluídos porque era difícil a obtenção de células cancerosas de cicatrizes de acne. Os espécimes foram classificados histologicamente usando a 7ª edição da União para classificação de Controle do Câncer (UICC) Internacional [19]. os parâmetros clínico relevantes foram adquiridos a partir de registros médicos. Para avaliar se o nível de expressão PDSS2
correlacionada com o fenótipo tumoral, os pacientes foram classificados em três grupos de acordo com a definição de subtipos GC de acordo com os critérios de Shah et al. [9] da seguinte forma: nondiffuse proximal, difusa, e tipo nondiffuse distal. Desde 2006, a quimioterapia adjuvante com o S-1 (uma pirimidina fluorada oral) é administrado a todas as fases UICC II-III pacientes com GC, a menos que contra-indicado pela condição do paciente [20]. Os pacientes foram acompanhados pelo menos uma vez a cada 3 meses para 2 anos após a cirurgia e depois a cada 6 meses para 5 anos ou até a morte. exame físico, exames laboratoriais e tomografia computadorizada reforçada (peito e cavidade abdominal) foram realizados em cada visita. A quimioterapia para doentes com metástases distantes ou após o retorno foi determinado pelo critério do médico.
Amostras de tecidos foram imediatamente congelados em azoto líquido e armazenado a -80 ° C. amostras tumorais sem áreas de necrose (aproximadamente 5 milímetros 2) foram extraídos por observação grosseira e apenas amostras confirmadas para representar mais de 80% de componentes tumorais por H & E coloração foram incluídos neste estudo. Correspondendo amostras de mucosa gástrica adjacentes normais > 5 ° cm da borda dos tumores foram obtidos a partir do mesmo paciente [21]
quantitativo em tempo real da transcrição reversa-reacção em cadeia da polimerase (qRT-PCR)
ARNs totais. (10 ^ g por amostra) foram isolados a partir de linhas de células de 11 GC, CCL-241, 238 e tecidos GC primária correspondente tecidos adjacentes normais foram utilizadas para gerar cDNAs, que foram amplificados utilizando iniciadores de PCR específicos ficheiro adicional (1: Tabela S1). Detecção em tempo real de SYBR® intensidade de fluorescência verde foi realizada utilizando um sistema de tempo real ABI StepOnePlus PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). A expressão de ARNm de GAPDH
foi quantificada em cada amostra para normalização. As reacções de qRT-PCR em cada uma das amostras foram realizadas em triplicado. O nível de cada amostra de expressão é apresentado como o valor do PDSS2
amplicão dividido pelo que de GAPDH
[22]. PDSS2
expressão de ARNm foi definida como a diminuição nos tecidos GC quando o nível foi inferior a metade da do tecido adjacente normal correspondente.
Análise da região do promotor de PDSS2
A sequência de nucleótidos do PDSS2
região promotora foi analisada para determinar a presença ou ausência de ilhas CpG definidos como se segue: pelo menos, uma região de 200 pb de ADN com um elevado teor de GC (> 50%) e uma proporção de CpG /esperado CpG observado ≥0.6 [23] . Usamos software CpG Ilha Searcher (http:.. //Cpgislands USC edu /) para determinar os locais de ilhas CpG [24]
PCR (MSP) específicos de metilação e sequência bisulfite análise
. PDSS2
possui uma ilha CpG perto da sua região promotora, e temos a hipótese de que a metilação aberrante é responsável pela regulação da transcrição de PDSS2
no GC. As amostras de ADN a partir de linhas de células de 11 GC tratados com bissulfito foram submetidos a MSP e análise da sequência de nucleótidos [25]. As sequências dos iniciadores utilizados para a sequenciação de MSP e bissulfito estão listados em arquivo adicional 1: Tabela S1
5-aza-2'-desoxicitidina tratamento (5-aza-dC)
Para avaliar a relação da hipermetilação do promotor de PDSS2.
transcrição, células GC (1,5 × 10 6) foram tratadas com 5-aza-dC (Sigma-Aldrich) para inibir a metilação do DNA e cultivadas durante 6 dias com mudanças de meio nos dias 1, 3 e 5. extraiu-se ARN e RT-PCR foi realizada como [7].
imuno-histoquímica (IHC)
IHC análise descrita da localização de PDSS2 foi realizada utilizando um anticorpo monoclonal de ratinho contra PDSS2 (ab119768, Abcam, Cambridge, Reino Unido ) diluído 1: 150 em diluente de anticorpo (Dako, Glostrup, Dinamarca) para sondar 30 secções fixadas com formalina e embebidas em parafina de tecido representativos de GC bem preservada anteriormente descrito [3]. padrões de coloração foram comparados entre os GCs e os tecidos adjacentes normais correspondentes. Para evitar a subjetividade, os espécimes foram randomizados e codificadas antes da análise por dois observadores independentes que desconheciam o status das amostras. Cada observador avaliou todas as amostras, pelo menos duas vezes para minimizar a variação intra-observador [7].
Avaliação do significado clínico de expressão PDSS2
correlações entre o padrão de PDSS2
expressão de mRNA e os parâmetros clínico foram avaliados de acordo com a as diferenças entre os três subtipos de GC. análise de subgrupo de sobrevivência de acordo com o subtipo GC foi realizada para determinar a influência de expressão PDSS2
sobre os resultados dos pacientes.
análise estatística
níveis relativos de expressão de mRNA (PDSS2 /GAPDH
) entre GC e adjacente tecidos normais foram analisados ​​utilizando o teste
Mann-Whitney. A χ
2 teste foi utilizado para analisar a significância da associação entre o estatuto de PDSS2
e os parâmetros clínico expressão e metilação. as taxas de sobrevida livre de doença específica da doença e foram calculados pelo método de Kaplan-Meier, ea diferença nas curvas de sobrevida foi analisada pelo teste de log-rank. Foi realizada análise de regressão multivariada para detectar fatores prognósticos, utilizando o modelo de riscos proporcionais de Cox e variáveis ​​com P Art < 0,05 foram introduzidas no modelo final. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando JMP 10 software (SAS Institute Inc, Cary, NC, EUA). Um valor de P Art < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados da Identificação de uma ilha CpG no promotor PDSS2
Uma ilha CpG foi identificado no PDSS2 e região promotora usando o CpG Ilha Searcher. As propriedades da ilha CpG são como se segue: 1,655 pb, 55,9% GC, e 0,70 proporção observada de CpG /Esperado CpG (Figura 1A). Portanto, a hipótese de que a hipermetilação das ilhas CpG regula a expressão de PDSS2
no GC. A Figura 1 Metilação análises de PDSS2 em linhas celulares de GC. (A) A ilha CpG indicado pela linha azul está centrada no PDSS2
local de iniciação da transcrição que se estende a montante, na região do promotor. gráficos (B) de barras indicam PDSS2
níveis de expressão de mRNA em CCL-241 (controlo de células não-cancerosas) e linhas de células de GC antes ou depois de tratamento com 5-aza-dC. O estado de metilação do PDSS2
promotor foi avaliada utilizando MSP, e os resultados são colocados na caixa. H, metilado; pM, parcialmente metilado; L, não metilado. (C) Os resultados representativos de análise da sequência de bissulfito. Todos os locais de CpG em células KATOIII foram retidos como CG e os de MKN74 foram convertidos para TG.
Expressão de mRNA PDSS2 e estado de metilação em linhas celulares GC
reduções significativas na PDSS2
níveis de mRNA foram detectadas em sete (73 %) de 11 linhas de células de GC em comparação com o nível das células CCL-241 (dados para expressão tecidos GC são descritos abaixo). Não houve diferença aparente nos níveis de expressão entre as linhas celulares derivadas da GCs diferenciada e indiferenciado (Figura 1B). Hipermetilação do promotor PDSS2
foi detectada em MKN1, SC-2-nu, KATOIII, MKN45, e células NUGC3 (Figura 1B). Para determinar se a hipermetilação do promotor PDSS2
inibiu a transcrição, os níveis de expressão de mRNA foram comparados antes e após o tratamento de células com o inibidor de metilação de 5-aza-dC. PDSS2
níveis de mRNA foram restaurados em células com baixo-regulado PDSS2
expressão acompanha hipermetilação após o tratamento com 5-aza-dC (Figura 1B), o que indica que a hipermetilação do promotor inibida PDSS2
transcrição em GC. cromatogramas representativos da análise da sequência da região promotora PDSS2
em MKN28 (metilação completa) e NUGC4 (ausência de células) de metilação são mostrados na Figura 1C.
As características dos pacientes
A população de pacientes incluídos 179 homens e 59 mulheres com idade de 20 a 84 anos (65,3 × 11,7 anos, com média × desvio padrão). Patologicamente, 139 e 99 pacientes foram diagnosticados com GC indiferenciada e diferenciado, respectivamente. Os pacientes foram classificados em três fenótipos GC da seguinte forma: nondiffuse, 54; difusa, 48; e nondiffuse distal, 136. De acordo com a 7ª edição da classificação UICC, 58, 40, 71 e 69 pacientes eram de estádio I, II, III e IV, respectivamente. Cento e sessenta e quatro pacientes em estágios I-III foram submetidos a ressecção R0. Sessenta dos 69 pacientes no UICC estágio IV foram diagnosticados como estágio IV devido à citologia positiva peritoneal lavagem, localizada metástase peritoneal ou distante metástases em linfonodos. Oito dos pacientes no estágio IV teve metástase hepática síncrono, um tinha metástase pulmonar, e eles foram submetidos a gastrectomia teve como objetivo controlar o sangramento ou obstrução à passagem de alimentos.
Os níveis de expressão de mRNA PDSS2 e proteína em tecidos ressecados cirurgicamente
A nível médio de PDSS2
mRNA expressão foi menor em tecidos GC comparado com o de tecidos adjacentes normais (P Art < 0,001); No entanto, não houve diferença significativa nos níveis de expressão PDSS2
ARNm entre pacientes com GC indiferenciada ou diferenciadas (Figura 2A). O padrão de PDSS2 expressão foi avaliada utilizando IHC. casos representativos com reduzida coloração de tecidos PDSS2 GC são apresentados na Figura 2B. Em geral, os padrões de coloração de PDSS2 foram consistentes com os dados de qRT-PCR. Figura 2 Expressão análises de PDSS2 em amostras clínicas. (A) O nível médio de PDSS2
mRNA em tecidos GC em comparação com os correspondentes tecidos normais adjacentes e em tecidos GC entre pacientes com GC indiferenciada e GC diferenciado. dados (B) Representante IHC comparando expressão PDSS2 no tumor e no tecido adjacente normal adjacente (ampliada de 100 × e 400 ×). N, tecido adjacente normal; T, tumor de tecido.
Implicações prognóstico dos níveis de expressão de mRNA PDSS2
A expressão de PDSS2
ARNm em tecidos de GC foi diminuída em 76 (32%) de 238 pacientes (menos de metade do nível de expressão em detectados o tecido adjacente normal correspondente). A taxa de sobrevida específica da doença de pacientes com diminuição dos níveis de PDSS2
mRNA em GCs foi significativamente menor em comparação com aqueles sem (taxas de 5 anos de sobrevivência, 36% e 64%, respectivamente, P Art < 0,001, Figura 3A). Diminuição dos níveis de PDSS2
mRNA em GCs foram significativamente associados com antígeno de carboidrato (CA) 19-9 > 37 UI /ml e metástase linfática (Tabela 1). A análise univariada de sobrevida específica da doença mostrou que o subtipo GC (nondiffuse proximal ou difusa), CA 19-9 > 37 UI /ml, tamanho do tumor (≥50 mm), pT4, tumor indiferenciado, envolvimento linfático, invasão de vasos, crescimento invasivo, metástases em linfonodos, citologia lavagem peritoneal positivo, e diminuição PDSS2
expressão de mRNA em tecidos GC foram significativas prognóstico fatores de resultados adversos. A análise multivariada identificou diminuiu PDSS2
expressão de mRNA como um fator independente de prognóstico (taxa de risco 1,95, 95% de intervalo de confiança 1,22-3,09, P = 0,005
, Tabela 2). A suposição de riscos proporcionais no modelo de Cox foi avaliada com modelos incluindo o tempo-a-covariáveis ​​interações e há violações significativas foram encontradas no modelo. A Figura 3 implicações prognóstico da expressão de ARNm PDSS2 em pacientes com GC. sobrevivência (A) Disease-specific de pacientes com diminuição PDSS2
mRNA no tecido GC. (B) (C) específica para a doença (B) e livre de recidiva (C) sobrevivência entre os 168 pacientes que se submeteram à ressecção R0.
Tabela 1 Associação entre o nível de expressão de mRNA PDSS2 e os parâmetros clínico de 238 pacientes
Variáveis
DecreasedPDSS2
mRNA em tecidos GC (n)
Outros (n)
P valor
idade
0,408
< 65 anos
29
71
≥ 65 anos
47
91
Sexo
0,551
Masculino
59
120
Feminino
17
42
subtipo
0,298
proximal nondiffuse
22
32
difusa
14
33
nondiffuse distal
40
96
antígeno carcinoembrionário (ng /ml)
0,490
≤ 5
59
132 Art > 5
17
30
Carboidratos antigénio 19-9 (UI /ml)
0,015 *
≤ 37
55
139 Art > 37
21
23
tamanho do tumor (mm)
0,104 Art < 50
29
80
≤ 50
47
82
profundidade do tumor (UICC)
0,419
pT1
14
32
pT2
6
24
pT3
19
33
pT4
37
73
Diferenciação
0,217
Diferenciada
36
63
indiferenciado
40
99
envolvimento linfático
0,201
Ausente
8
27
Apresente
68
135
Vessel invasão
0,535
Ausente
31
73
Apresente
45
89
tipo de crescimento infiltrativa
0,443
crescimento invasivo
24
59
crescimento expansivo
52
102
metástase linfonodal (UICC)
0,022 *
pN0
19
70
pN1
8
19
pN2
12
24
PN3
37
49
peritoneal citologia lavagem
0,306
negativo
57
131
positiva
19
31
metástase distante (UICC)
0,228
M0
50
119
M1
26
43
* estatisticamente significativo (P Art < 0,05). GC, câncer gástrico; UICC, União de Controle do Câncer International.
Tabela 2 fatores prognósticos de sobrevivência específica da doença de 238 pacientes
Variáveis ​​
n (%)
univariada

Hazard ratio multivariada
95% CI
P valor
relação Hazard
IC 95%

P
valor
Idade (≥65)
138 (58%)
1,04
0,67-1,61
0,843
sexo (feminino)
59 (25%)
1,29
0,79-2,05
0,301
subtipo (nondiffuse distal)
136 (57%)
0,43
0,28-0,67 Art < 0,001
0,64
0,40-1,01
0,056
carcinoembrionário antigénio (> 5 ng /ml)
47 (20%)
1,48
0,86-2,42
0,149
Carboidratos antigénio 19-9 (> 37 UI /ml)
44 (18%)
1,98
1,17-3,20
0,012
1,23
0,71-2,06
0,445
tamanho do tumor (≥50 mm)
129 (54%)
2,86
1,78-4,80 Art < 0,001
1,40
0,83-2,42
0,211
profundidade do tumor (pT4, UICC)
110 (46%)
4,17
2,61-6,88 Art < 0,001
1,38
0,78-2,50
0,273
diferenciação tumoral (indiferenciado)
139 (58%)
2,03
1,28-3,32
0,002
1,45
0,83-2,60
0,197
linfática envolvimento
203 (85%)
6,31
2,36-25,8 Art < 0,001
1,45
0,45-6,50
0,559
Vessel invasão
134 (56%)
2.65
1,66-4,37 Art < 0,001
1,75
1,07-2,97
0,026 *
invasiva crescimento
83 (35%)
3,03
1,97 - 4,70 Art < 0,001
1,19
0,70 - 2,05
0.520
metástases linfonodais
149 (63%)
7,02
3,70 - 15,1 Art < 0,001
1,38
0,56-3,81
0,503
peritoneal lavagem citologia (positivo)
50 (21%)
4,33
2,76-6,74 Art < 0,001
1,87
1,14-3,06
0,014 *
UICC fase (III-IV)
140 (59%)
9,68
4,97-21,8 Art < 0,001
2,63
0,94-7,83
0,065
Diminuição PDSS2
mRNA em GCs
76 (32%)
2,18
1,40-3,37 Art < 0,001
1,91
1,19-3,04
0,008 *
* estatisticamente significativa na análise multivariada. GC, câncer gástrico; CI, intervalo de confiança; UICC, União de Controle do Câncer International.
Dos 168 pacientes que se submeteram à ressecção R0, a taxa de sobrevivência específica da doença foi significativamente menor para aqueles com diminuição PDSS2
expressão de mRNA em GCs (n = 50) em comparação com aqueles sem (n = 118) (taxas de sobrevivência de 5 anos, 50% e 77%, respectivamente, P = 0,006
, Figura 3B). Pacientes com diminuição PDSS2
expressão de mRNA em GCs houve recorrências significativamente mais cedo após a cirurgia em comparação com aqueles sem (taxas de 2 anos livre de recidiva de sobrevivência, 64% e 84%, respectivamente, P = 0,022
, Figura 3C). locais de recorrência iniciais de 43 pacientes com recidiva diminuiu PDSS2
expressão de mRNA em GCs foram peritoneal em 21 (49%), fígado em 6 (14%), linfonodo em 13 (30%) e outros (por exemplo, pulmão e osso) em 3 pacientes. Por outro lado, os de 61 pacientes recidivantes sem diminuição PDSS2
foram peritoneal em 35 (57%), no fígado em 10 (16%), nódulo linfático em 8 (13%) e outros em 8 pacientes. Pacientes com diminuição PDSS2
expressão de mRNA em GCs eram susceptíveis de ter uma recaída nó, embora não alcançou significância estatística.
Análise de subgrupo de expressão PDSS2 de acordo com a GC subtipo
média PDSS2
expressão de mRNA níveis foram equivalentes em GC e tecidos adjacentes normais (Figura 4A). Do mesmo modo, o valor prognóstico da diminuição da expressão de ARNm de PDSS2
em GC foi comparável entre os três subtipos de GC (Figura 4B). Figura 4 A análise de subgrupo de subtipos GC. Os níveis de expressão (A) PDSS2
mRNA entre os três subtipos GC tanto no GC e os tecidos normais adjacentes. (B) Comparação da sobrevivência específica da doença de pacientes com e sem diminuição PDSS2
expressão de mRNA em GCs de cada subtipo GC.
Discussão
PDSSs são enzimas heterotetram�icas que compreendem subunidades codificadas por PDSS1
(10p12. 1) e PDSS2
[10], [12]. atividade PDSS requer ambas as subunidades [10], [14], [15]. A associação de PDSS2
com GC foi considerado devido à sua localização cromossômica (6q21), e por causa de sua inativação ou perda de certas doenças malignas [16], [26]. Aqui mostramos que PDSS2
ARNm foi expressa heterogeneamente em linhas celulares de GC, e a sua expressão foi inibida em 73% e 32% de linhas celulares de GC e tecidos de tumor, respectivamente. Detectamos hipermetilação do promotor PDSS2
em cinco (45%) de linhas celulares com 11 GC diminuíram significativamente os níveis de expressão PDSS2
. Além disso, PDSS2
transcrição foi reactivado depois as células foram tratadas com um inibidor da metilação do DNA. Estes resultados são o primeiro para o nosso conhecimento para mostrar que a hipermetilação do promotor regula PDSS2
transcrição. No entanto, PDSS2
expressão foi diminuída em algumas células GC sem hipermetilação. Porque cromossomo 6q é um local frequente de LOH no GC [17], [26], [27], LOH pode regular PDSS2
expressão também.
Houve um relatório demonstrando que PDSS2
foi expressa na expressão diminuída ou indetectável em um pequeno número de amostras GC biópsia [18]. No presente estudo, foram analisados ​​238 espécimes cirúrgicos de tumores eo tecido não envolvido correspondente a obter mais conhecimentos sobre o significado clínico de expressão PDSS2
no GC. Consistente com análises de melanoma maligno e câncer de pulmão [11], [12], a maioria dos pacientes com GC nutria uma diminuição do nível de PDSS2
mRNA em tecidos GC, ea média PDSS2
nível de expressão foi significativamente diminuída em comparação GC com os tecidos normais adjacentes. IHC foi conduzido para determinar se o nível de mRNA refletido PDSS2
expressão da proteína. Porque os resultados de IHC indicam que os dados de ARNm eram consistentes com o nível de proteína, análises subsequentes foram realizados de acordo com os dados de mRNA, que são mais passíveis de análise quantitativa [7], [23].
Diminuição PDSS2
expressão de mRNA em GCs foi significativamente associada com níveis CA19-9 pré-operatórios elevados e metástases em linfonodos e foi identificada como um fator prognóstico independente. Além disso, os pacientes com diminuição PDSS2
expressão de mRNA no tecido GC experiente significativamente mais cedo recorrência após ressecção R0. Recentemente, Chen et al. investigaram a actividade supressora de tumor de PDSS2
no cancro do pulmão [28]. Eles relataram que a sobre-expressão forçada de PDSS2
causou a morte celular em massa por meio de vias apoptóticas e a formação de colónias significativamente inibida e houve uma correlação inversa entre PDSS2
expressão e expressão de gelsolina, que é conhecido por inibir a apoptose e a invasão de células e melhorar metástase [29], embora PDSS2 não influenciar a sensibilidade das células de cancro a drogas quimioterapêuticas [28]. Este mecanismo supressor tumoral de PDSS2
pode ser aplicado a GC também.
O padrão de expressão de PDSS2
mRNA e seu impacto prognóstico foram semelhantes entre os três subtipos de GC (nondiffuse proximal, difuso e nondiffuse distal) , indicando que PDSS2
expressão influencia a patogênese de todos os tipos de GC. Shah et ai. relatou que um terço dos genes amplificados, possivelmente incluindo PDSS2
, mostrou padrão de expressão equivalente entre os três subtipos GC [9].
GC é um dos tumores com uma elevada frequência de metilação aberrante, e frequentemente exibe ilha CpG methylator fenótipo [30], [31]. A expressão de um grande número de genes é suprimida por CpG island hipermetilação em células de GC, incluindo os supressores de codificação tumorais, reguladores do ciclo celular, os indutores e executores da apoptose, proteínas que promovem o fenótipo invasivo, e enzimas de reparação de emparelhamentos incorrectos do ADN [32]. Estas alterações epigenética podem servir como biomarcadores que iluminam um aumento do fenótipo metastático potencial agressivo do tumor e [33], bem como alvos terapêuticos [34]. Portanto, a identificação de outros genes que são regulados por metilação em células GC provavelmente vai melhorar a gestão dos GC
A função supressora de tumor de PDSS2
são suportados pelos presentes achados da seguinte forma:. (1) diminuição da expressão de PDSS2
foi frequentemente detectada em tecidos de GC, (2) o nível médio de PDSS2
expressão foi significativamente menor em tecidos de GC, e (3) a diminuição da expressão de PDSS2
foi associada com recidiva precoce e subsequente mau prognóstico. PDSS2
níveis de expressão no tecido biópsia obtida utilizando amostras de vigilância endoscópica ou em espécimes cirúrgicos pode ser útil para prever a recorrência precoce e prognóstico sombrio, que, provavelmente, os esforços de ajuda para desenhar estratégias terapêuticas mais eficazes.
Este estudo foi limitado pelo seu falta de análise funcional suficiente de PDSS2
, que tempera a conclusão de que ele atua como um supressor de tumor no GC. espera-se que mais estudos, incluindo análise de caminho na carcinogênese gástrica e análise funcional para esclarecer os mecanismos moleculares subjacentes às atividades biológicas de PDSS2
em GC.
Conclusão
Em conclusão, nossos resultados suportam a conclusão de que a expressão da putativo supressor de tumor PDSS2 gene
é regulada por hipermetilação do promotor em células GC e indicar. Nossos resultados indicam ainda que a diminuição da expressão de mRNA PDSS2
pode representar um biomarcador da novela para progressão e recorrência de todos os tipos de GC. Contribuições
dos autores
MK, HO, FS, DS, HT, RH e KM experiências e dados realizada análise. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF e YK recolhidos casos e dados clínicos. MK e SN concebido e desenhado o estudo e preparou o manuscrito inicial. YK supervisionou o projeto. Todos os autores contribuíram para o manuscrito final.

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