Kurkumin izboljšuje izražanje SCF /c-kit skozi olajševalnih oksidativni stres in aktivacije NF-κB v želodčnih tkivih diabetične gastropareze rats

kurkumin izboljšuje izražanje SCF /c-kit skozi olajševalnih oksidativni stres in aktivacije NF-κB v želodčnih tkivih diabetične gastropareze podgan
Abstract
Ozadje
sladkorna bolezen je povezana z veliko različnih vrst zapletov. Nedavne študije so pokazale, da je oksidativni stres in vnetne reakcije imajo kritične vlogo v patogenezi diabetične gastropareze. Kurkumin je znano, da ima antioksidant in protivnetne lastnosti. V tej študiji smo raziskali vpliv kurkumin o diabetične želodčne gibljivosti v Sprague Dawley podganjih modela sladkorno boleznijo tipa 1.
Metode
bile samci podgan SD razdeljen v kontrolni skupini, kontrolno skupino, ki prejme kurkumin, diabetik skupino in diabetične skupina sprejemu kurkumin. Diabetes bila povzročena z intraperitonealno injekcijo streptomicinsko. Kurkumin (150 mg /kg) je bila dana intragastrically 6 tednov, in so bile izmerjene koncentracije glukoze v krvi in ​​telesne teže. Želodci so izrezali za analizo želodčnih stopenj izpraznitev in ravni oksidativnega stresa. NF-κB, I-κB, in s faktorjem matičnih celic (SCF) /vrednosti c-kit proteinske ocenil z Western blot analizo, medtem ko je bila apoptoza iz intersticijskih celic Cajal (ICC) ocenil TUNEL barvanjem.
Rezultati
diabetičnih podgan-kurkumin, se je pokazal znatno izboljšane stopnje praznjenja želodca [(59,4 ± 7,5)%] v primerjavi s sladkorno boleznijo podganah [(44,3 ± 5,7)%], kot tudi zmanjšanje ravni MDA [21,4 ± 1,8 (nmol /mg) vs
27,9 ± 2,1 (nmol /mg)], in povečana SOD dejavnost [126,2 ± 8,8 (enot /mg) vs
107,9 ± 7,5 (enot /mg)]. Po drugi strani pa želodca nivo praznjenje v kontrolni skupini, ki ni bila bistveno drugačna od tiste iz kontrolne skupine, ki prejme zdravljenje kurkumin. Poleg tega, diabetičnih podgan, kurkumin, se je pokazal znatno povišane ravni SCF /c-kit beljakovin v želodcu tkivih, zaviral I-κB degradacije in aktivacije NF-κB in zmanjšano indeks ICC apoptozo [(26,2 ± 4,1)% vs
(47,5 ± 6,2)%], v primerjavi z diabetično skupino.
Zaključek
zdravljenje Kurkumin izboljšalo praznjenje želodca tako, da zavira nastajanje oksidativnega stresa, odpravo NF-κB prenos signala in krepitev izražanje SCF /c-kit v podgane z diabetično gastroparezo.
Ključne besede
Kurkumin diabetične gastropareze oksidativni stres NF-κB faktor matičnih celic /c-kit vrinjeni celice Cajal Uvod
diabetično gastroparezo je bolezen prebavil, ki je opredeljena kot zapoznelo praznjenje trden obrok, in se vidimo v 30-50% bolnikov s sladkorno boleznijo tipa 1 ali tipa 2 [1]. Bolniki pogosto prisotne v zgornjem delu prebavil simptomi, kot so zgodnje sitosti, izguba teže, napihnjenost trebuha, nelagodje v trebuhu, slabost, bruhanje se pogosto pojavljajo, in oslabljeno urejenost sladkorne bolezni in bolezni močno vpliva na kakovost življenja bolnikov.
Gastroparezo se vse bolj pa priznana kot pomemben zdravstveni problem. Čeprav gastroparezo prizadene veliko diabetiki po vsem svetu, ne samo možnosti zdravljenja zelo omejene, ampak tudi zdravljenje, ki so na voljo za diabetične gastropatije so pogosto neučinkoviti. Ti vključujejo medicinsko terapijo, želodčne električna stimulacija, kirurško zdravljenje in prehransko podporo. Zdravila za gastroparezo vključujejo metoklopramid, domperidon, cisaprid, in eritromicin. Medtem ko so bile te učinkovine za zdravljenje gastropareze, ki so poročali, da je samo omejeno učinkovitost, in mnogi pacienti ne morejo tolerirati zaradi njihovih stranskih učinkov. Pri sladkornih bolnikih z neodzivno gastroparezo, visoke frekvence želodca električna stimulacija s trajno vsadi sistema bistveno izboljšala simptome zgornjega prebavnega trakta in predstavlja alternativno kirurško zdravljenje za bolnike. Kirurški posegi, kot želodca in antrectomy so zadnja možnost za zdravljenje, pri čemer je sporno in potrebujejo več študij [2]. Pri bolnikih s hudo gastroparezo pa normalno tankega črevesa gibljivost, se lahko uporabi jejunostomy za polnjenje. Medtem ko je ta zagotavlja prehransko podporo, da ne ozdravi gastroparezo [3]. Diabetično gastroparezo je na splošno najbolje zdraviti medicinsko in le pri bolnikih s hudo diabetično gastroparezo, ki so se niso odzvali na medikamentozne terapije je treba opraviti druga zdravila. Tako, iskanje zdravila, ki prikazujejo učinkovitost pri zdravljenju diabetične gastropareze je potrebno.
Diabetične gastropareze je povezan z izgubo intersticijskih celic Cajal (ICC) pri ljudeh in živalih modela [4]. ICC je mogoče prepoznati v tkivu, s pomočjo nalepk z antiserumi na kinaze kompleta receptorja tirozin, beljakovina, izraženo na ICC. Kit in njegov ligand matičnih celic faktor (SCF) so prav tako pomembni dejavniki preživetja pri ICC [5]. Povečan oksidativni stres povezan s sladkorno boleznijo lahko povzroči izgubo ali škodo na ICC v miših, medtem ko je oksidativni stres povzroča škodo in izgubo omrežij ICC in razvoj zakasnelo praznjenje želodca [6]. Rezultati Diabetes povečanim oksidativnim stresom in ima pomembno vlogo pri patogenezi diabetičnih zapletov [7]. Prevelike reaktivnih kisikovih zvrsti (ROS) rezultatov v oksidativnih poškodb, vključno s peroksidacijo lipidov, oksidacijo beljakovin in poškodbe DNK, kar lahko vodi v celično smrt. Poleg tega so ROS je znano, da deluje kot drugi sle aktivirati transkripcijske faktorje, kot kapa B jedrski faktor (NF-κB). ROS nastanejo med stresom v želodčni tkiva lahko sproži aktivacijo NF-κB signalne kaskade; dejansko je praznjenje želodca pri diabetičnih podgan, povezana z aktivacijo NF-κB-posredovane vnetja.
kurkumin (1,7-bis- (4-hidroksi-3-metoksifenil) -1, 6-heptadiene-3,5- dion) je glavna aktivna sestavina kurkuma izolirali iz rastlin kurkume longa L. Kurkumin je večnamenski molekula pomembne regulativne učinke na raka [8], vnetje [9] in v zvezi z diabetesom bolezni, kot so diabetične retinopatije [10], diabetična nefropatija [11], in diabetes kognitivna disfunkcija [12]. Kurkumin je močan lovilec reaktivnih kisikovih in dušikovih vrst, kot so hidroksilnimi radikali in dušikovega dioksida radikalov [13]. Številne študije so pokazale, da kurkumin zavira aktivacijo NF-κB vnetnih signalnih poti [14]. Medtem, NF-κB transkripcijski faktorji urediti vrsto pomembnih fizioloških procesov, vključno z vnetjem in imunski odziv, celično rast in preživetje, tako zaviranje NF-κB signalizacijo predstavlja uspešno strategijo za terapijo bolezni [15]. Vendar pa je bilo zelo malo raziskav o možnostih za kurkumina za zdravljenje diabetične gastropareze, ali na farmakološki mehanizem.
Cilj te raziskave je bil ugotoviti, ali so v Sprague Dawley (SD) modelu podgane s sladkorno boleznijo tipa 1 bolezen, srednjega odmerka [16] kurkumin bi zaščitili ICC pri diabetikih podganah z zapoznelim praznjenja želodca zmanjša oksidativni stres in inhibicijo aktivacije NF-κB, povečanje SCF /Kit izraz, in normalizira zamude pri praznjenju želodca.
materiali in metode
Eksperimentalni podgane in indukcija diabetesa
Male podganah SD (8 tednov starosti) so bile gojene v centru poskusnih živali, Zhejiang kitajski Medical University, (Hangzhou, Kitajska), kjer je poseben patogen brez (SPF) s tal laboratorij je odobrila deželna vlada Zhejiang. Vse podgane so bile nastanjene v pogojih kontrolirane vlažnosti (50-60%). Ti so se ohranili pod kontrolirano svetlobo (12 ur dan /noč cikel) s prostim dostopom do vode in glodalcev večerjo. Vsi poskusi na živalih so bili izvedeni v skladnosti z licenco iz province Zhejiang znanost in tehnologijo urada (Hangzhou, Kitajska) in z odobritvijo iz živalskih etičnega odbora Zhejiang kitajske Medical University. Vsi poskusi skladna s smernicami za etično ravnanje v oskrbo in uporabo živali. Uslug bila narejena, da se zmanjša stres živali.
Podgane postimo bila 12 ur izpostavimo enemu intraperitonealno injekcijo streptomicinsko (STZ), 50 mg /kg, sveže raztopljene v 100 mM natrijevega citratnega pufra pri pH 4,5. Starost ujema običajne podgane prejela le citratnega pufra. Razvoj sladkorne bolezni je bil potrjen s postom ravni glukoze v krvi (FBG) z uporabo reagenta komplet (Roche, Šanghaj, Kitajska). Podgane s stopnjami FBG višji od 11,1 mm (200 mg /dl) v 72 urah po injiciranju STZ so menili, da se z diabetesom podgane. Ko podgane postal sladkorni bolnik, so bile njihove koncentracije glukoze v izmeri na dan. Poskusi začela 8 tednov po razvoju sladkorne bolezni se omogoči gastroparezo razvijati.
Eksperimentalni dizajn
Osem tednov po razvojem sladkorne bolezni, živali so bile razdeljene v štiri skupine, to je normalno nadzor podganje samce (skupina I), diabetična moški podgane (skupina II),-kurkumin dopolnjen z diabetesom samci podgan (skupina III) in-kurkumin dopolni nadzor samci podgan (skupina IV). Podgane v skupinah III in IV (n = 10 vsakega) smo obdelali dnevno kurkumin (150 mg /kg; i.g.) 6 tednov. Kurkumin (čistost > 95%), od Fusong County Natural biotehnologija Company Ltd (Jilin, Kitajska), ki je bila prekinjena pri 0,5% m /v raztopine natrijeve karboksimetil-celuloze (CMC-Na). Podgane v skupinah I in II (n = 10 vsak) je prejelo 0,5% le CMC-Na-rešitev. Po zdravljenju 6 tednov, smo živali žrtvovali pod etil etra anestezijo smo kri zbrali s femoralno veno krvavitve in seruma ločimo. Želodcev bili hitro odstranjeni in vzorce tkiva zbrani iz živali smo hranili pri -80 ° C, dokler se ne predela za biokemičnih testih. Želodca, oksidativni stres, aktivacije NF-κB, ICC in SCF /Kit izraz v želodcih so preučevali tudi ob koncu šestega tedna zdravljenja (14 th teden sladkorne bolezni).
Praznjenje želodca študij
standardni postopek za pripravo fenol rdečega označevalca moko bila uporabljena kot smo že prej [17] opisano. Želodca je bila določena z uporabo modifikacije prej poročali postopka [18]. Podgane pustimo prost dostop do vode do 3 ure pred gavaža dajanju kurkumin. Raztopino 0,1% (m /v) fenol rdeče vodnim natrijevim karboksimetil (1,5% m /v) smo uporabili kot testno obrokom. Kurkumin je dobil 1 h pred peroralno uporabo testnega obroka. Dvajset minut po dajanju testnim obrokom, so žrtvovali podgane. V želodci so nato izpostavili jih laparotomijo in odstraniti. Podgane se zdravijo z vozilom (fiziološko raztopino, 0,9% raztopina natrijevega klorida, 0,2 ml) smo po oralnem dajanju testne moke in fenol rdečega vsebine v želodcu smo upoštevali kot standard (100%) takoj žrtvovali. Odstranjene želodcev smo zareže v 40 ml raztopine NaOH (0,1 N) in vsebino smo raztopili. A 1-ml alikvot pralnih raztopin dodamo 2 ml triklorocetne kisline (7.5% w /v), da se obori beljakovine. Po centrifugiranju (2500 x g
) za 20 min smo 1 ml supernatanta dodamo 1 ml NaOH (1 N), da razvije največjo intenziteto barve. Absorbanca pri 558 nm raztopine smo nato izmerjena z uporabo spektrofotometra (U-1080, Hitachi Ltd., Tokio, Japonska). Želodca je bila izračunana v skladu z naslednjo formulo: želodca %
=
1
-
X
/
Y
×
100

kjer je X absorbanca fenola rdeče ostane v želodcu 20 min po fenol rdeče uprave in Y je pomenilo absorpcijo fenol rdeče pridobljena iz želodcev kontrolnih miši takoj po fenol rdeče uprave.
Določitev MDA in ravni SOD v gladke mišice želodca antruma
so izrezan v želodci, stehtati, in takoj zamrznemo pri -70 ° C. Zamrznjenega tkiva iz vsake podgane homogeniziramo v ledeno-hladni fosfatnega pufra (KCI 140 mM fosfat 20 mM, pH 7,4) in centrifugirali pri 3000 x g
10 minut. Vsebnost malonaldehidnega (MDA), indeks za peroksidacijo lipidov, je bila določena z metodo thiobarbituric kislino (TBA) z majhno spremembo [19]. Na kratko smo 100 ul celičnih homogenatov zmešamo s 200 ul delovne raztopine, ki vsebuje 0,37% TBA. Zmes inkubiramo pri 100 ° C 15 minut in nato ohladimo. Za izločanje MDA, dodamo 375 ul N-butanol, sledilo močno vrtinčimo za 10 sekund. Po centrifugiranju je bila zgornja N-butanol plasti prenesemo v stekleno cevko. Absorbanco faze butanol smo izmerili pri 532 nm. Vsebnost MDA je izražena kot nmol /mg proteina. Za merjenje SOD aktivnosti je bil 20 ul celičnih homogenatov zmešamo s 200 ul iz reakcijske raztopine, ki vsebujejo nitroblue tetrazolom klorid (NBT, 750 um) in inkubiramo 20 minut pri 37 ° C. Absorbanca pri 560 nm je bila izmerjena. Encimska aktivnost je izražena kot enote /g proteina in 1 enoto encima je definirana kot količina encima, ki je potreben za zaviranje zmanjšanje NBT 50% meritev.
Semikvanititativnimi RT-PCR SCF in c-kit
proksimalni želodec (40-50 mg) je pridelano in sluznica je bil odstranjen s seciranje. Tkiva smo mehansko homogenizirali v skladu RNaze prostih pogoji in ločiti z Tripure izolacijskega reagenta (Roche, Švica) na ledu za 5 minut in skupno RNA smo ekstrahirali v skladu z navodili proizvajalca. Celotno RNA smo kvantificirali spektrofotometrično pri 260 in 280 nm, s razmerja A260 /A280, ki sega od 1,8 do 2,0. integriteta RNA smo preverili z agarozno gelsko elektroforezo, čemur sledi etidijev bromid barvanja in RNA je bila uporabljena za takojšnje reverzno transkripcijo in shranimo pri -80 ° C RNaze proste vode. Dvostopenjski reverzne transkriptaze-verižna reakcija s polimerazo (RT-PCR) smo izvedli s pomočjo Revertra ace-α- prvo zbirno področje cDNA komplet (Tiangen Biotech, Peking, Kitajska) in 2 × Taq PCR master mix (Tiangen Biotech), v skladu s navodila proizvajalca. Fiksni znesek RNA (0,5 fig) je bila reverzno prepisana. Gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) je bila izbrana kot interni standard. Vse PCR so bili oblikovani in sintetizirali Biosune (Shanghai, Kitajska). V začetnih oligonukleotidov zaporedja in Dolžine produktov PCR, so naslednji: GAPDH, naprej: 5 '- GACAACTITG-GCATCGTGGA-3 ", obratno: 5 ' - ATGCAGGGATGATGT-TCTGG-3 ' , 150 bp; SCF, naprej: 5 '- GGA CTT CAT GGT GGC ATC TG-3 ", obratno: 5 ' - GCC CTT GTA AGA CTT GAC TG-3 ', 285 bp; in c-kit, naprej: 5 '- GTG GTT AAA GGA AAC GCT CG-3 ", obratno: 5 ' - CAT ACA TTT CAG CAG GTG CG-3 ', 400 vrel. Reakcijski pogoji so bili optimizirani za vsakega izmed genov s spreminjanjem temperature žarjenje (58 ° C za GAPDH, 58 ° C za SCF in 62 ° C, c-kit) in različno število ciklov PCR [20]. PCR produkt smo ločili na 2% agaroznem gelu pri 100 V. 30 minut. Gel slike so bile na tekoče kristale monitorjem z ultravijolično transiluminacijo PhotoDoc-ITE sistema, opremljenega s CCD kamero prikaže (Bio-Rad Gel Doc 2000, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) in ohraniti za analizo intenzivnosti. Relativne ravni mRNA izbranih genov smo izračunali kot razmerje do GAPDH izražanja.
Ravni SCF, c-Kit, IκB in NF-κB jih zahodni analizo blot ocenjena
O 50 mg tkiva so vzeti iz blizu proksimalnega želodec. Tkiva smo narezali na majhne koščke približno 0,25 cm 3, homogenizirano, in ločiti v radio-imuno test liznega pufra (Hushang biotehnologijo, Šanghaj, Kitajska), ki vsebuje 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 1%, NP-40, 0,5% natrijev deoksiholat, 1% natrijevega dodecil sulfata, 1 mM PMSF, natrijevega ortovanadata, natrijev fluorid, etilendiamintetraocetna kislina in leupeptin pri 4 ° C 30 minut. Homogenate centrifugiramo pri 12 000 x g
5 minut pri 4 ° C in supernatante zberemo in uporabimo kot celokupnega proteina. Enake količine beljakovin so elektroforezo z SDS-PAGE na 10% ali 15% poliakrilamidnih gelih. Proteine ​​smo prenesli na nitrocelulozne membrane (Hushang biotehnologija), ki ga semidry blot. Membrane smo blokirali s Tris pufrom 0,1% Tween 20 (TBST), ki vsebuje 5% mleka 60 minut pri sobni temperaturi, nato pa imuno-osušili z ustrezno razredčene primarnimi protitelesi pri 4 ° C preko noči. Po trikratnem spiranju s TBST, so blots inkubirali s HRP-konjugiranim sekundarnega protitelesa za 60 minut pri sobni temperaturi. Nato so kompleksi vizualiziramo z uporabo slikanja sistema iChemi XR (WD9431A, Bomeike biotehnologija, Kitajska) z Kemiluminescenca reagentov (Tigsun Biological Science Technology, Tianjin, Kitajska). Semi-količinsko je bila opravljena s pomočjo količina ena programske opreme, različica 4.6.2 (Bio-Rad). Uporabljene so bile naslednje protitelesa: anti-SCF, 1: 200, c-kit, 1: 200, anti-IκB in anti-NF-κB p65 in GAPDH, 1:. 500 (Hushang Biotechnology, Šanghaj, Kitajska)
količinska NF-κB -DNA vezavo, ki jih elektroforetsko izmensko mobilnost testu
jedrskega ekstrakte smo pripravili iz želodca lizatov kot prej [21] opisano. aktivacije NF-κB je bila določena z elektroforetsko shift mobilnost testom (EMSA), in jedrski prenosom NF-κB je bila ocenjena kot je opisano prej (GS009, Beyotime Inštitut za biotehnologijo, Šanghaj, Kitajska) [22]. Za NF-κB vezavo reakcije, 5 ug ekstrakta jedrske proteinov je bila inkubirana pri sobni temperaturi za 20 minut z reakcijskega pufra, ki vsebuje 20 mM HEPES, pH 7,9, 50 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 5% glicerola, 200 ig /ml BSA in 2 mikrogramov poli (di-DC). Nato 32P-označeno dvojno vijačni oligonukleotid (1 ng ≥1 x 105 cpm) vsebuje NF-κB vezavo konsenzno sekvenco (5 '- GGCAACCTGGGGACTCTCCCTTT-3 ), dodamo k reakcijski zmesi še dodatnih 10 min pri sobni temperaturi. Reakcijske produkte smo frakcionirali na ne-denaturirnih 6% poliakrilamidnem gelu za 60 minut pri 350 V, ki je bil nato posušimo in podvržemo avtoradiografijo pri -70 ° C preko noči. Za tekmovalne testih, je bil presežek oligonukleotid (100-krat molski prebitek) konkurent predhodno inkubirana z jedrskimi ekstraktov za 20 minut pri sobni temperaturi. Mutantni NF-κB oligonukleotid (5 '- GGCAACTGCTCACTCTCCCTTT-3 ) je bila uporabljena za test za konkurenco. Signali so denzitometrično analizo.
Dvojno immunofluorohistochemistry z terminal deoxynucleotidyl-transferaza dUTP-biotin nick konec označevanja testom (TUNEL) in c-kit barvanjem
fluorescenčni imunohistokemiji za c-kit (z uporabo protitelesa iz Santa Cruz) in tunel obarvanje smo izvedli na 10-mikrometrskimi odsekov z modifikacijo postopka, ki jo določi proizvajalec kompleta TUNEL (TAC sTdT, Trevigen Inc, Gaithersburg, MD), objavljenem. TUNEL-pozitivnih celic so bili označeni z fluoresceina (Ex 488, Em 505-550), so c-kit-pozitivne celice označene s Cy3 (Ex 543, Em 560-615), in jedra so označena z DAPI (Ex 364, Em 385 -470). Vzorci tkiva, so bili vgrajeni v fluorescenčno zaščitnim sredstvom in preiskuje konfokalna laserskega skeniranja mikroskopom [23]. Približno 200 celic so bili prešteti na področju, pet polj so bile pregledane na stekelce in pet diapozitivi so bili pregledani na skupino. Odstotki TUNEL- in apoptotske celice c-kit-pozitivni so bili označeni kot apoptoze indeks (AI) (%).
Statistična analiza
so vsi podatki predstavljeni kot sredstvo ± SD. Primerjati podatke med skupinami živali, enosmerne analize variance (enosmerna ANOVA) in Duncan primerjave so bili zaposleni. Vsi statistični testi so bili izvedeni s pomočjo SPSS za Windows, verzija 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Razlike so bile upoštevane statistično značilne pri P
< 0.05.
Rezultati
Učinek kurkumina na telesno težo in glukoze diabetičnih podgan
plazemskih koncentracij glukoze v krvi so bili zelo povišano diabetikih podganah (skupina II) [(322 ± 41) mg /dl] v primerjavi s tistimi, ki pri normalnih kontrolnih podganah (skupina I) [(98 ± 12) mg /dl]. Je opazen upad telesnih tež skupine II podgane [(298 ± 16) g] v primerjavi s podganami skupine I starostno primerljivimi [(449 ± 21) g]. Kroničnih diabetičnih podgan-kurkumin obdelan (skupina III) ni pokazala pomembne izboljšave v telesni masi in ne upadanje ravni glukoze v plazmi v primerjavi s podganami Skupina II [skupine III, telesne teže (324 ± 19) g in glukoze (302 ± 38) mg /dl] (tabela 1) .table raven glukoze 1 krvi in ​​telesne mase v štiri skupine
Skupine
Skupina I
skupini II
skupina III

Skupina IV
glukoze v krvi (mg /dl)
98 ± 12
322 ± 41 *
302 ± 38 * #
100 ± 11
Telesna masa ( g)
449 ± 21
298 ± 16 *
324 ± 19 *
476 ± 27 ABB Group I = normalnih kontrolnih podganah; Skupina II = diabetesom kontrolne podgane; Skupina III = diabetična + kurkumin zdravljenih podgan (150 mg /kg); Skupina IV = normalni + kurkumin obdelamo podgane (150 mg /kg). Rezultati so prikazani kot povprečje ± SD. * P
< 0,05 (v primerjavi s skupino), #P
> 0,05 (v primerjavi s skupino II)
Vpliv kurkumina na praznjenje želodca
praznjenje želodca prišlo do velikih zamud v SD podganah, ki so imeli sladkorno bolezen 8 tednov. . Višina praznjenja želodca v skupini II je bila 44,3 ± 5,7%, kar je bistveno nižje kot v skupini I [(76,2 ± 4,3)%, P
< 0.01], in sladkorno boleznijo podgane v procesu zdravljenja kurkumin [(skupina III) ,; (59,4 ± 7,5)%, P
< 0,05]. Vendar pa niso opazili pomembne razlike med skupine I in skupine IV podganah [(73,3 ± 5,2%), P
> 0,05] (Slika 1). Slika 1 Vpliv kurkumina na praznjenje želodca pri sladkornih podganah. Skupina I = normalnih kontrolnih podganah (n = 10); : Skupina II = diabetičnih kontrolne podgane (n = 10); : Skupina III = diabetična + kurkumin obdelamo podgane (n = 10); : Skupina IV = normalna + kurkumin obdelamo podgane (n = 10). Vse vrednosti so izražene kot povprečje ± SD. * P
< 0,01 (v primerjavi s skupino I), # p
< 0,05 (v primerjavi s skupino II), Dp
>. 0,05 (v primerjavi s skupino)
zdravljenje Kurkumin zmanjšala MDA oblikovanje, poveča SOD aktivnost
smo raziskovali oksidativnega stresa z uporabo več metod, ker je bil glukoze povzroča oksidativni stres domnevajo, da je ključni mehanizem pri kroničnih diabetičnih zapletov. Sladkorno boleznijo podgane Razstavljal zvišane vrednosti MDA [skupino I 15,7 ± 1,7 (nmol /mg) vs
skupine II 27,9 ± 2,1 (nmol /mg), P
= 0,006] in znižane ravni SOD [Skupina I 146,2 ± 9,3 ( u /mg) vs
skupine II 107,9 ± 7,5 (u /mg), P
= 0,008], molekularni označevalec oksidativnega stresa (Figure2). Šest tednov zdravljenja kurkumin zmanjša stopnjo MDA uravnavanjem [skupine III, 21,4 ± 1,8 (nmol /mg), P
= 0,033 v primerjavi s skupino I in P
= 0,004 v primerjavi s skupino II], in izboljšala SOD navzdol -regulation [skupina III 126,2 ± 8,8 (enot /mg), P
= 0,036 v primerjavi s skupino I in P
= 0,001 v primerjavi s skupino II]. Kurkumin znatno povečala SOD dejavnost in zmanjšati raven MDA v želodcu homogenatih. (0,05; Figure2 P
>) Poleg tega so bili med skupine I in skupine IV živali ugotovil, ni bistvene razlike. Slika 2 Vpliv kurkumina na MDA in SOD v diabetičnih podganah. Ravni MDA se je zmanjšala po obdelan z kurkumin, je raven SOD po povečala zdraviti z kurkumin. : Skupina I = normalnih kontrolnih podganah (n = 10); : Skupina II = diabetesom kontrolne podgane (n = 10); skupina III = diabetična + kurkumin obdelamo podgane (n = 10); : Skupina IV = normalna + kurkumin obdelamo podgane (n = 10). Vse vrednosti so izražene kot povprečje ± SD * p
. ≪ 0,01 (v primerjavi s skupino I), # p
< 0,01 (v primerjavi s skupino II), Dp
> 0,05 (v primerjavi s skupina I). ​​
Kurkumin povečuje SCF in vrednosti c-kit beljakovin
Predstavništva slike analizo RT-PCR SCF v želodcu tkivih podgan v vsaki skupini so prikazane v Figure3A. V primerjavi s skupino I, je SCF skupine II bistveno nižji [(0,44 ± 0,02) vs
(0,69 ± 0,03), P
= 0 0,002], in primerjava vrednosti iz skupine III je pokazala, da raven SCF pri podganah, kurkumin obdelan je bil večji kot v skupini II [(0,58 ± 0,04) vs
(0,44 ± 0,03) P
= 0 .003]. Vendar pa niso opazili nobene razlike med skupin I in IV [(0,69 ± 0,03) vs
(0,66 ± 0,03) P
= 0.56] (Figure3B). Western blot analiza (Figure4A, B), je pokazala, da je bila stopnja SCF v želodcu tkiv podganah skupine II, znatno nižji od tistih v skupini I in III podganah [razmerja (0,33 ± 0,02) vs
(0,47 ± 0,03) in (0,41 ± 0,02), v tem zaporedju, P
< 0 0,05)]. Vendar pa ni bilo bistvene razlike našel med Skupini IV in skupine I podganah [(0,45 ± 0,03) v primerjavi s
(0,47 ± 0,03), P
> 0,05)], kar kaže, da je posredovanje kurkumin lahko učinkovito obnoviti lokalni ravni SCF beljakovin v želodcu tkivih diabetičnih podgan. Slika 3 Gibanje SCF /GAPDH in C-kit /GAPDH z analizo RT-PCR. (A) Reprezentativni slike gelsko elektroforezo z GAPDH, SCF, in c-kit pri podganah vsake skupine. stopnje (B) Skupina relativne mRNA izražanja SCF in c-kit, z izdelki z razmerjem količinsko za GAPDH. : Skupina I = normalnih kontrolnih podganah (n = 10); : Skupina II = diabetičnih kontrolne podgane (n = 10); : Skupina III = diabetična + kurkumin obdelamo podgane (n = 10); : Skupina IV = normalna + kurkumin obdelamo podgane (n = 10). Vse vrednosti so izražene kot povprečje ± SD. * P
< 0,01 (v primerjavi skupine I), # p
< 0,05 (v primerjavi s skupino II), Dp
>. 0,05 (v primerjavi s skupino I)
Slika 4 spremembe v SCF /GAPDH in C-kit /GAPDH ga Western blot analizo. (A) predstavnik protein tračne podobe SCF, c-kit, in glyceraldehydes-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH). stopnje relativne SCF in c-kit proteina z razmerjem izraženega na GAPDH, oziroma (b) skupina. : Skupina I = normalnih kontrolnih podganah (n = 10); : Skupina II = diabetičnih kontrolne podgane (n = 10); : Skupina III = diabetična + kurkumin obdelamo podgane (n = 10); : Skupina IV = normalna + kurkumin obdelamo podgane (n = 10). Vse vrednosti so izražene kot povprečje ± SD. * P
< 0,01 (v primerjavi s skupino I), # p
< 0,01 (v primerjavi s skupino II), Dp
>. 0,05 (v primerjavi s skupino)
RT-PCR analiza je pokazala, da so bile ravni izraz za c-kit v želodcu tkivih 0,78 ± 0,04, 0,37 ± 0,02 in 0,59 ± 0,03 za skupine I, II in III, v tem zaporedju. Ravni c-kit izraz v skupini II in podgane III bila nižja od tiste pri podganah skupine I. Vendar pa primerjava skupine II in III je pokazala, da je bila stopnja c-kit pri podganah, kurkumin obravnavajo večja kot pri podganah, ki niso obdelani s sladkorno boleznijo (P
< 0,05, Figure3B). Podobni rezultati so pokazali z Western blot analizo (Figure4B). Ravni c-kit beljakovin (razmerje med 0,45 ± 0,03, 0,21 ± 0,02 in 0,34 ± 0,02, oziroma za skupine I, II in III), je bilo v Skupini III veliko večja kot v skupini II (P
< 0 0,05, je bil Figure4B) in raven v skupini III nižje od tistih v skupini I in IV. Obe analizi pokazale, da lahko 6 tednov za posredovanje kurkumin pomembno obnoviti zmanjšanje ravni c-kit pri diabetičnih podganah.
Kurkumin zavira I-κB degradacije in aktivacije NF-κB
Poročila kažejo, da se lahko poveča in kronični oksidativni stres aktivira ali motijo ​​NF-κB dejavnost [24]. Ugotavljali smo, ali bi kurkumin povzroči aktivacijo signalne poti NF-κB. Da bi to naredili, smo merili raven NF-κB v prisotnosti ali odsotnosti kurkumin, da ugotovi, ali je bil NF-κB aktivirana. Najprej smo ocenili raven beljakovin za I-κB, na katerega inaktiviran NF-κB veže. Ugotovili smo, da je bila stopnja I-κB pri podganah skupine I višji kot pri podganah skupina II, medtem ko je bila stopnja pri podganah skupine III manjša kot v skupini II podganah (p < 0,01), vendar višja od ravni v skupine I in IV podgane (p < 0,05). Nato smo pregledali, ali bi kurkumin blokira NF-κB. Ugotovili smo, da diabetes (skupina II) je privedlo do povečanja ravni NF-κB [skupine I 75,5 ± 7,7 (pg /ml) vs
skupine II 102,8 ± 12,4 (pg /ml), P
= 0,001] , medtem ko je zdravljenje z kurkumin [Skupina III 91,3 ± 8,9 (pg /ml)] preprečiti ta učinek. Na podlagi te ugotovitve smo predlagali, da kurkumin zavira aktivacijo NF-κB [skupine IV 70,9 ± 8,1 (pg /ml), P
= 0,026] (Figure5). preučila smo, ali bi kurkumin blokirati NF-κB translokacijo v jedro, ker je jedrska premeščanje priznana kot odziv celic na stimulacijo ROS in se zdi, da v korelaciji z NF-κB posredovano transkripcijske aktivacije. Za to oceno, smo izmerili raven NF-κB v jedru EMSA. Razvoj sladkorne bolezni povzroča povečanje ravni NF-κB v jedru, medtem ko je zdravljenje z kurkumin preprečiti ta učinek (Figure6). Zato smo predlagali, da kurkumin, ne samo posredno zavira aktivacijo zavezujoče NF-κB-DNA, ampak da tudi zavira aktivacijo gorvodno od I-κB. Slika 5 Vpliv kurkumina na I-κB in NF-κB. (A) graf je bil jasen odraz ravni I-κB in NF-κB med štiri skupine. (B) raven I-κB /GAPDH se je zmanjšala v skupine II, vendar je povečala za kurkumina. I: Skupina I = normalnih kontrolnih podganah (n = 10); II: skupina II = diabetesom kontrolne podgane (n = 10); III: Skupina III = diabetična + kurkumin obdelamo podgane (n = 10); IV: Skupina IV = normalna + kurkumin obdelamo podgane (n = 10). Vse vrednosti so izražene kot povprečje ± SD * p
. ≪ 0,01 (v primerjavi s skupino I), # p
< 0,01 (v primerjavi s skupino II), Dp
> 0,05 (v primerjavi s Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Pancreaticogastrostomy v čisti laparoskopsko pancreaticoduodenectomy-A nove trebušne slinavke, želodca anastomozo tehniko -
• Izražanje genov analiza Helicobacter pylori okuženih in visoko soli s prehrano obdelan miške želodca modelu tumorja: identifikacija CD177 kot nova prognostični dejavnik pri bolnikih z rakom želo…