Kurkumin poboljšava izraz SCF /c-kit kroz prigušenje oksidativnim stresom i aktivacijom NF-kB u želučanom tkivu dijabetične gastropareze rats

kurkumin poboljšava izraz SCF /c-kit kroz prigušenje oksidativnim stresom i aktivacijom NF-kB u želučanom tkivu dijabetične gastropareze štakora pregled apstraktne pregled Pozadina pregled, Diabetes mellitus je povezan s mnogim vrstama komplikacija. Nedavne studije su pokazale da oksidativni stres i upalne reakcije imaju kritičnu ulogu u patogenezi dijabetičke gastropareza. Kurkumin je poznato da ima antioksidativni i protu-upalna svojstva. U ovom istraživanju, istražili smo učinak kurkumina na dijabetičke želučane pokretljivosti u modelu Sprague Dawley štakora tipa 1 šećerne bolesti.
Metode pregled Muški SD štakori su podijeljeni u kontrolnu skupinu, kontrolna skupina je primila kurkumin, dijabetičar skupina, a skupina koja je dobivala dijabetičke kurkumin. Dijabetes je inducirana intraperitonealnom injekcijom streptozotocina. Kurkumin (150 mg /kg) je davan intragastrično za 6 tjedana, a mjereni su razine glukoze u krvi i tjelesne mase. Želuci su izdvojeni za analizu želučanog pražnjenja stopa i razina oksidativnog stresa. NF-kB, I-kB i faktor matičnih stanica (SCF) /razina c-kit proteina je procijenjena je Western blot analiza, a apoptoze intersticijskih stanica Cajal (ICC) je procijenjena TUNEL bojanja. Pregled Rezultati
Kurkumin tretiranih dijabetičnih štakora pokazuju znatno poboljšane stope pražnjenja želuca [(59,4 ± 7,5)%] u usporedbi s dijabetičnih štakora [(44.3 ± 5.7)%], kao i smanjenje razine MDA [21,4 ± 1,8 (nmol /mg) vs pregled 27.9 ± 2.1 nmol /mg ()], te povećana aktivnost SOD [126,2 ± 8,8 (jedinica /mg), u odnosu na 107,9 ± 7,5
(jedinica /mg)]. S druge strane, želučani razina pražnjenje u kontrolnoj skupini nije bila značajno različita od one u kontrolnoj skupini koja je primala kurkumin tretman. Osim toga, kurkumin tretiranih dijabetičnih štakora pokazala značajno povišene razine SCF /c-kit proteina u želucu tkivima inhibira I-kB degradacije i aktivaciju NF-kB i manju indeks ICC apoptozu [(26,2 ± 4,1)% u odnosu na
(47,5 ± 6,2)%], u usporedbi s dijabetičkom skupinom. pregled Zaključak
Kurkumin liječenje poboljšana pražnjenje želuca blokira proizvodnju oksidacijskog stresa, ukine transdukcije NF-kB signala i povećanje ekspresije SCF /c-kit u štakori s dijabetičkom gastropareza. pregled Ključne riječi pregled Kurkumin dijabetička gastroparezu Oksidativni stres NF-kB faktor matičnih stanica /c-kit međuprostorne stanice Cajal Uvod pregled, dijabetes gastropareza je bolest probavnog trakta, definira se kao odgođeni pražnjenje solidan obrok, a očituje se u 30-50% bolesnika s tipom 1 ili šećerne bolesti tip 2 [1]. Pacijenti često prisutan gornji gastrointestinalni simptomi, kao što su rane sitosti, gubitak težine, nadutosti, nelagoda u trbuhu, mučnina, povraćanje javljaju često, i oslabljen kontrolu glikemije, a bolest ozbiljno utječe na kvalitetu života bolesnika.
Gastropareza sve više se utvrđen kao značajan zdravstveni problem. Iako gastroparezu utječe na mnoge dijabetičara širom svijeta, ne samo da su mogućnosti liječenja vrlo ograničena, ali i tretmane koji su dostupni za dijabetičke gastropatije često su neučinkoviti. To uključuje medicinsku terapiju, želučani električna stimulacija, kiruršku terapiju i prehrambene podršku. Lijekovi za gastropareze su metoklopramid, domperidon, cisaprida i eritromicin. A ta sredstva se koriste za liječenje gastropareze, su izvijestili da se od samo ograničenu učinkovitost, i mnogi pacijenti ne mogu ih tolerirati zbog njihove nuspojave. U dijabetičkih bolesnika s vatrostalne gastropareza, visoke frekvencije želuca električna stimulacija trajno usađena sustava znatno poboljšana gornje simptome probavnog trakta i predstavlja alternativni kirurške terapije za pacijente. Kirurški zahvati, kao što su gastrektomije i antrectomy su zadnja opcija za liječenje, što je kontroverzna i na potrebu dodatne studije [2]. U bolesnika s teškom gastropareze nego normalne male pokretljivosti crijeva može se primijeniti jejunostomy otvor za umetanje. Iako je ovo pruža prehrambene podršku, to ne liječe gastropareze [3]. Dijabetička gastroparezu je općenito najbolje tretirati medicinski, a samo bolesnici s teškim dijabetične gastropareze koji nisu odgovorili na medicinskoj terapiji treba proći druge terapije. Dakle, pronalaženje lijekove koji pokazuju učinkovitost u liječenju dijabetične gastropareze je potrebno. Pregled dijabetične gastropareze je povezan s gubitkom intersticijskih stanica Cajal (ICC) u ljudi i životinja modela [4]. ICC mogu se identificirati u tkivu obilježavanje antiseruma kinaze kit receptora tirozin, protein izražen na ICC. Kit i njezina faktor ligand matičnih stanica (SCF) također su važni čimbenici preživljavanja za ICC [5]. Povećana oksidativni stres povezan s dijabetesom može dovesti do gubitka ili oštećenja ICC-u miševa, dok je oksidativni stres dovodi do oštećenja i gubitka ICC mreže i razvoj usporeno pražnjenje želuca [6]. Dijabetes rezultira u povećanom oksidativni stres i ima važnu ulogu u patogenezi dijabetičke komplikacije [7]. Prekomjerno stvaranje reaktivnih kisikovih spojeva (ROS) dovodi do oksidacijskog oštećenja, uključujući i lipidne peroksidacije, oksidacije proteina i oštećenja DNA, što može dovesti do smrti stanice. Nadalje, ROS se zna da djeluju kao sekundarni glasnici za aktiviranje transkripcijskih faktora, kao što su nuklearni faktor kappa B (NF-kB). ROS generirane tijekom stresa u želučanom tkivu može potaknuti aktivaciju NF-kB signalne kaskade; štoviše, pražnjenje želuca kod štakora je povezana s aktivacijom NF-kB posredovanom upalom.
kurkumin (1,7-bis- (4-hidroksi-3-metoksifenil) -1, 6-heptadien-3,5- dion) je glavni aktivni sastojak kurkuma izoliran iz biljke kurkume Longa L. Kurkumin je višenamjenski molekula sa značajnim regulatornim učincima na rak [8], upale [9] i dijabetičke povezanih oboljenja kao što je dijabetička retinopatija [10], dijabetička nefropatija [11], dijabetes kognitivna disfunkcija [12]. Kurkumin je moćan smetlar reaktivnih kisikovih i dušikovih vrsta, kao što su hidroksilnih radikala i radikala dušikovog dioksida [13]. Nekoliko istraživanja je pokazalo da je kurkumin inhibira aktivaciju NF-kB proinflamatornog signalnim putovima [14]. U međuvremenu, NF-kB transkripcijski faktori reguliraju niz važnih fizioloških procesa, uključujući upalu i imunosne odgovore, stanični rast i preživljavanje, te inhibicija signalizaciju NF-kB predstavlja značajan strategiju za terapiju bolesti [15]. Međutim, tu je vrlo malo istraživanja o potencijalu za kurkumina u liječenju dijabetičke gastropareze, ili na farmakološkog mehanizma.
Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi je li, u Sprague Dawley (SD) modelu štakora dijabetesa tipa 1 melitus, srednja doza [16] kurkumin mogu zaštititi ICC kod štakora usporenog pražnjenja želuca do smanjenje oksidativnog stresa i inhibiciju NF-kB aktivaciju, čime se povećava SCF /Kit izražavanje i normalizaciju odgodu pražnjenja želuca.
Materijali i metode pregled pokusnih štakora i indukciju dijabetesom
Mužjaci SD štakora (8 tjedana starosti) su uzgojene u centru pokusnih životinja, Zhejiang kineski Medical University, (Hangzhou, Kina), gdje specifičnih patogena (SPF) razine tla laboratorij je ovlašten od strane Zhejiang pokrajinske vlade. Svi štakori su uzgajani u uvjetima kontrolirane vlage (50-60%). Oni su održavane pod kontroliranim svjetlom (12 h dan /noć ciklus) sa slobodnim pristupom vodi i glodavaca klopu. Svi su pokusi na životinjama su provedena u dosljednosti s licencom iz Zhejiang Province znanosti i tehnologije Ured (Hangzhou, Kina) i uz suglasnost životinja Etičko povjerenstvo Zhejiang kineski Medical University. Svi pokusi suobličeni smjernice etičkog ponašanja u skrbi životinja i njihovo korištenje. Svaki se nastojalo smanjivanje stresa u životinja.
Štakori izgladnjivani 12 sati su podvrgnuti jednom intraperitonealnom injekcijom streptozotocina (STZ), 50 mg /kg, svježe otopljenog u 100 mM puferu natrijevog citrata pri pH 4,5. Dob podudarnih normalnih štakora dobio samo citratni pufer. Razvoj dijabetesa je potvrđena razina glukoze u krvi (FBG) koristeći seta (Roche, Shanghai, Kina). Štakori s FBG razinama višim od 11,1 mm (200 mg /dl) 72 sata nakon STZ injekcije se smatralo da su kod štakora. Nakon što su štakori postali dijabetes, njihova razina glukoze mjerene su dnevno. Eksperimenti započeo 8 tjedana nakon razvoja dijabetesa kako bi se omogućilo gastropareze razvijati.
Eksperimentalni dizajn pregled Osam tjedana nakon razvoja dijabetesa, životinje su podijeljene u četiri skupine, dakle normalna kontrola mužjaka štakora (skupina I), dijabetičku muškarac štakori (skupina II), kurkumin nadomještanjem dijabetičke štakora (Grupa III), te kurkumin nadomještanjem kontrola mužjaka štakora (Grupa IV). Štakori iz skupina III i IV (n = 10 svaka) tretirane su svaki dan sa Kurkumin (150 mg /kg, i.g.) kroz 6 tjedana. Kurkumin (čistoća 95%) iz Fusong County Natural Biotechnology Company Ltd (Jilin, Kina), suspendirana je u 0,5% w /v natrijeva karboksimetil-celuloza (CMC-Na) rješenje. Štakori skupine I i II (n = 10 svaka) primio je samo 0,5% -tna otopina CMC-Na. Nakon liječenja tijekom 6 tjedana, životinje su žrtvovane uz etil eterskom anestezijom, krv je skupljena femoralne vene krvarenja i serum se odvoji. Želuci su brzo uklonjena i uzorka tkiva prikupljenog od životinja su bile pohranjene na -80 ° C do obrade za biokemijskim analizama. Pražnjenja želuca, oksidativni stres, NF-kB aktivacije, ICC-a SCF /Kit izraz u želucima su također studirao na kraju šestog tjedna liječenja (14 og tjedna dijabetesa).
Pražnjenje želuca studije
standardna metoda za proizvodnju fenola crveno marker obrok je korišten kao što je ranije opisano [17]. Želučanog pražnjenja je određena korištenjem modifikacije prethodno opisanim postupkom [18]. Štakorima omogućen slobodan pristup vodi do 3 sata prije primjene kljukanje kurkumina. Otopina 0.1% (w /v), fenol crveno u vodenoj otopini natrijeva karboksimetilceluloza (1,5% w /v) je korišten kao testnog obroka. Kurkumin je dana 1 sat prije oralnog davanja testnog obroka. Dvadeset minuta nakon davanja ispitnog obroka, štakori su žrtvovani. U želuci su zatim izloženi od laparotomije i uklonjen. Štakori tretirani sa nosačem (otopina soli, 0,9% otopine natrij klorida, 0,2 ml) se žrtvuju odmah nakon oralnog davanja testnog obroka i crveni fenolni u želucu se smatra kao standard (100%). Uklonjeni želuci su urezani u 40 ml otopine NaOH (0,1 N), a sadržaj se ne otopi. 1-ml alikvot otopine ispiranja doda se 2 mL trikloroctenom kiselinom (7,5% w /v), kako bi se istaložilo proteine. Nakon centrifugiranja (2500 × g
) tijekom 20 minuta, 1 ml supernatanta doda se 1 ml NaOH (1N) da se razvije maksimalnog intenziteta boje. Apsorbancija pri 558 nm otopine izmjerena je pomoću spektrofotometra (U-1080, Hitachi Ltd., Tokyo, Japan). Pražnjenje želuca izračunat je prema sljedećoj formuli: pražnjenje želuca % pregled = pregled 1 pregled - pregled X pregled /pregled Y
× pregled 100 pregled , pregled, gdje je X apsorbancija fenola crveno ostaje u želucu 20 minuta nakon što je fenol crvenog uprave i Y je značilo apsorbancija fenol crvenog dobiven iz želuca u kontrolnih miševa neposredno nakon fenol crvenog davanja. pregled Određivanje MDA i razina SOD u glatkoj muskulaturi želučanog antruma želuca pregled su izrezani, izvagani i odmah zamrznuti na -70 ° C. Smrznuto tkivo iz svakog štakora je homogeniziran u ledeno hladnog fosfatnog pufera (140 mM KCl, 20 mM fosfata, pH 7,4) i centrifugirane pri 3000 × g
10 min. Sadržaj malonaldehidu (MDA), indeks za peroksidacije lipida, bio je određen pomoću thiobarbituric kiselina (TBA), postupak s malom modifikacijom [19]. Ukratko, 100 ul homogenata tkiva se pomiješa s 200 ul radne otopine koja sadrži 0.37% TBA. Smjesa se inkubira na 100 ° C tijekom 15 minuta i zatim se ohladi. Ekstrakt MDA, doda se 375 ul N-butanol, zatim vrtloženjem snažno 10 s. Nakon centrifugiranja, gornja N-butanol sloj se prenese u staklenu cijev. Apsorbancija faze butanola je mjerena na 532 nm. MDA sadržaj izražen kao nmol /mg proteina. Za mjerenje aktivnosti SOD, 20 ul homogenata tkiva se pomiješa s 200 ul reakcijske otopine sadrže tetrazolija (NBT klorid, 750 um) i inkubiraju kroz 20 min na 37 ° C. Apsorbancija na 560 nm. Aktivnost enzima je izražen kao jedinice /g proteina i 1 jedinica enzima je definiran kao količina enzima potrebna za inhibiciju redukciju NBT 50%. Pregled Semikvantitativna RT-PCR mjerenje SCF i c-kit
proksimalni želucu (40-50 mg) se skupi i sluznica je uklonjen seciranje. Tkivo je mehanički homogeniziraju pod Rnase uvjetima bez i disocirane sa Tripure izolacijskog reagensa (Roche, Švicarska) na ledu tijekom 5 minuta, a ukupna RNA je ekstrahirana u skladu s uputama proizvođača. Ukupna RNA se kvantificira spektrofotometrijski na 260 i 280 nm, s omjerom A260 /A280 u rasponu od 1.8 do 2.0. Integritet RNA bio je potvrđen elektroforezom na agaroznom gelu, a zatim bojenjem etidijevim bromidom i RNA korišten je za neposrednu reverznu transkripciju ili pohranjeni na -80 ° C u RNaza-slobodne vode. Dva koraka reverzne transkriptaze-lančane reakcije polimeraze (RT-PCR) korištenjem ReverTra Ace-α- sintezu prve trake cDNA kit (Tiangen Biotech, Beijing, Kina) i 2 × Taq PCR master mix (Tiangen Biotech), u skladu s upute proizvođača. Fiksni iznos od RNA (0.5 ug) je obratnoj transkripciji. Gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) je odabrana kao interni standard. Sve PCR primeri su dizajnirani i sintetizirani Biosune (Shanghai, Kina). Sekvencijama i duljine PCR proizvoda su kako slijedi: GAPDH, naprijed: 5 '- GACAACTITG-GCATCGTGGA 3 ', obrnuti: 5 '- ATGCAGGGATGATGT-TCTGG 3 ' 150 bp; SCF, naprijed: 5 '- GGA CTT MAČKA GGT GGC ATC TG-3 ', obrnuti: 5 '- GCC CTT GTA AGA CTT GAC TG-3 ', 285 bp; i c-kit, naprijed: 5 '- GTG GTT AAA GGA AAC GCT CG-3 ', obrnuti: 5 '- Mačka ACA TTT CAG CAG GTG CG-3 ', 400 bp. Reakcijski uvjeti su optimizirani za svaki od gena promjenom temperature žarenja (58 ° C za GAPDH, 58 ° C za SCF i 62 ° C za c-kit) i različitim brojem PCR krugova [20]. PCR produkti su razdvojeni na 2% agaroznim gelovima pri 100 V tijekom 30 minuta. Gel slike su prikazane na zaslonu kristalima monitor tekućeg nekog ultraljubičasto transiluminatoru PhotoDoc-ITE sustav opremljen s CCD kamerom (Bio-Rad Gel Doc 2000, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) i sačuvana za analizu intenziteta. Relativna razina mRNA odabranih gena su izračunati kao odnos prema GAPDH izražavanja.
Razine SCF, c-kit, IκB i NF-kB ocijenjeni s western blot analizom pregled oko 50 mg tkiva je preuzet iz blizu proksimalnog želuca. Tkiva su izrezati na komadiće od oko 0,25 cm 3, homogenizirani i disocirane u radio-imunoprecipitacije test pufera za lizu (Hushang biotehnologiju, Šangaj, Kina), koji sadrži 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0,5% natrijevog deoksikolata, 1% natrijev dodecil sulfat, 1 mM PMSF, natrijevog ortovanadata, natrij fluorid, etilendiamintetraoctena kiselina i leupeptin na 4 ° C tijekom 30 minuta. Homogenati su centrifugirani na 12 000 × g
5 minuta pri 4 ° C i supernatanti se sakupe i koristiti kao ukupnog proteina. Jednake količine proteina je elektroforeza na SDS-PAGE na 10% ili 15% poliakrilamidnom gelu. Proteini su bili preneseni na nitroceluloznu membranu (Hushang Biotechnology) prema polusuhi blottinga. Membrane su blokirane s Tris-puferiranom fiziološkom 0,1% Tween 20 (TBST) koji sadrži 5% mlijeka za 60 minuta na sobnoj temperaturi, zatim se imuno-blotted s odgovarajuće razrijeđenih primarnim antitijelima na 4 ° C preko noći. Nakon ispiranja tri puta s TBST, a blotovi su inkubirani sa HRP konjugiranih sekundarnih antitijela tijekom 60 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim, kompleksi su vizualizirani pomoću iChemi XR imaging sustav (WD9431A, Bomeike Biotechnology, Kina) s chemiluminescence reagensa (Tigsun Biological Science Technology, Tianjin, Kina). Polu-kvantifikacija provedena je pomoću Količina One softvera, verzija 4.6.2 (Bio-Rad). Korišteni su sljedeći antitijela: anti-SCF, 1: 200, c-kit, 1: 200, anti-IκB i anti-NF-kB p65 i GAPDH, 1:. 500 (Hushang Biotechnology, Shanghai, Kina) pregled kvantifikacija NF-kB -DNA vezivanje elektroforezom testa pokretljivosti smjene
Nuklearni ekstrakti dobiveni su od želuca lizati kao što je ranije [21] što je opisano. NF-kB aktivacije određena je elektroforezom testa pokretljivosti smjene (EMSA), te nuklearne izgon NF-kB je ocijenjen kao što je ranije opisano (GS009, Beyotime Institut za biotehnologiju, Šangaj, Kina) [22]. Za NF-kB vezanje reakcije, 5 ug ekstrakta nuklearnog proteina se inkubira na sobnoj temperaturi tijekom 20 minuta uz reakcijskom puferu koji sadrži 20 mM HEPES, pH 7,9, 50 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 5% glicerola, 200 ug /ml BSA i 2 ug poli (dI-dC). Zatim 32P-obilježene dvostruko uvijene oligonukleotid (1 ng ≥1 x 105 cpm) koja sadrži NF-kB vezanja konsenzus sekvence (5 '- GGCAACCTGGGGACTCTCCCTTT 3 ') se doda u reakcijsku smjesu dodatnih 10 minuta na sobnoj temperaturi. Produkti reakcije su frakcionirani na nedenaturacijskim 6% poliakrilamidnom gelu 60 minuta na 350 V, koji se zatim osuši i podvrgnuta je autoradiografiji na -70 ° C preko noći. Za kompeticijskom pokusu, suvišak oligonukleotid (100-puta molarnog suviška) natjecatelj bio predinkubirani ekstrakti jezgre od 20 min na sobnoj temperaturi. Mutant NF-kB oligonukleotid (5 '- GGCAACTGCTCACTCTCCCTTT 3 ") se koristi za analizu natjecanja. Signali su densitometrically analizirani.
Double immunofluorohistochemistry s terminalnom deoksinukleotidil transferazom posredovanog dUTP-biotin nick Označavanje analizom (TUNEL) i c-kit bojanjem
Fluorescence imunohistokemijski za c-kit (pomoću protutijela iz Santa Cruz) i TUNEL bojenje su provedena na 10-p.m sekcija koristeći modifikaciju postupka je objavio proizvođač TUNEL kit (TACS sTdT, Trevigen Inc, Gaithersburg, MD). TUNEL-pozitivne stanice su označene s fluoresceinom (Ex 488, Em 505-550), c-kit-pozitivne stanice su označene s Cy3 (Ex 543, Em 560-615), a jezgre su označeni sa DAPI (Ex 364, Em 385 -470). Tkiva primjerci su ugrađene u mediju za montažu fluorescentne i istražuju laser scanning mikroskopijom [23]. Oko 200 stanice su računaju se po terenu, pet polja su pregledani po slajdu i pet Rezovi su ispitani po skupini. Postoci TUNEL- i c-kit-pozitivne apoptotične stanice su označene kao apoptoze indeks (AI) (%). Pregled, Statistička analiza pregled Svi podaci prikazani su kao prosjek ± SD. Za usporedbu podataka među skupinama životinja, jednosmjernom analizom varijance (one-way ANOVA) i Duncan usporedbe su zaposleni. Svi statistički testovi su provedena pomoću SPSS for Windows, verzija 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Razlike su smatrane za statistički značajne na P Netlogu < 0.05. | Rezultati
Učinak kurkumina na tjelesnu težinu i glukoze u krvi dijabetičnih štakora
Plazma razine glukoze su visoko povišen kod štakora (Skupina II), [(322 ± 41) mg /dl] u usporedbi s onima u normalnim kontrolnih štakora (skupina I) [(98 ± 12) mg /dl]. Postoji značajan pad tjelesne težine grupe II štakora [(298 ± 16) G] u usporedbi s dobi-odgovarajuće skupine I štakora [(449 ± 21) g]. Kronične Kurkumin tretiranih dijabetičnih štakora (Grupa III) ne pokazuje značajan napredak u tjelesnoj težini i bez opadanje razine glukoze u plazmi u usporedbi s Grupe II štakora [skupine III, tjelesne težine (324 ± 19) g i glukoze (302 ± 38) mg /DL] (Tablica 1) .table 1 u krvi razina glukoze i tjelesne težine u četiri skupine
Grupe
skupina i
skupina II
Grupa III pregled
IV grupa
glukoze u krvi (mg /dl)
98 ± 12 pregled, 322 ± 41 * pregled 302 ± 38 * # pregled 100 ± 11
Tjelesna težina ( g) pregled, 449 ± 21 pregled, 298 ± 16 * pregled 324 ± 19 * pregled 476 ± 27 pregled, skupina I = normalne kontrolne štakore; Skupina II = Diabetic Control štakora; Skupina III = dijabetička + kurkumin tretiranih štakora (150 mg /kg); Skupina IV = normalni + kurkumin tretiranih štakora (150 mg /kg). Rezultati su prikazani kao srednja vrijednost ± SD. * P izvoznici < 0,05 (u odnosu na grupe I) #P pregled > 0,05 (u odnosu na grupu II) pregled Utjecaj kurkumina na pražnjenja želuca pregled pražnjenja želuca značajno odgođeno SD štakora koji su imali dijabetes 8 tjedana. , Količina pražnjenja želuca u skupini II bio je 44,3 ± 5,7%, što je znatno niža od one u skupini I. [(76,2 ± 4,3)%, P izvoznici < 0,01], te dijabetičnih štakora prolazi kurkumin tretman [(grupa III) ,; (59,4 ± 7,5)%, P izvoznici < 0.05]. Međutim, nije uočena značajna razlika između skupina I i IV grupa štakora [(73,3 ± 5,2%), P Netlogu > 0.05] (Slika 1). Slika 1 prikazuje djelovanje kurkumina na pražnjenje želuca kod dijabetičnih štakora. Skupina I = normalne kontrolne štakori (n = 10); : Grupa II = Diabetic Control štakora (n = 10); : Skupina III = dijabetička + kurkumin tretiranih štakora (n = 10); : Skupina IV = normalno + kurkumin pomiješa štakori (n = 10). Sve vrijednosti su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. * P pregled < 0.01 (u odnosu na grupe I), # p
0,05 (u odnosu na grupu II) Δp
>, 0.05 (u odnosu na grupu I) pregled Kurkumin tretman smanjio formiranje MDA, povećava SOD aktivnost pregled istražili smo oksidativni stres pomoću nekoliko metoda, jer glukoza-induced oksidativni stres je pretpostavio da će biti ključni mehanizam u kroničnih komplikacija šećerne bolesti. Dijabetičnih štakora izloženih porasla MDA razinama [Skupina I 15,7 ± 1,7 (nmol /mg) vs
Grupe II 27,9 ± 2,1 (nmol /mg), P pregled = 0,006], te smanjenje razine SOD [I. skupine 146,2 ± 9,3 ( u /mg) vs
Grupe II 107,9 ± 7,5 (u /mg), P pregled = 0,008], molekularni marker oksidativnog stresa (Slika 2). Šest tjedana Kurkumin tretman smanjuje stupanj MDA ranijim koracima [Grupi III, 21,4 ± 1,8 (nmol /mg), P pregled = 0,033 u odnosu na skupine I i P pregled = 0,004 u odnosu na skupine II], a poboljšan je SOD dolje -Regulacija [Grupa III 126,2 ± 8,8 (jedinica /mg), P pregled = 0,036 u odnosu na grupe i i P pregled = 0.001 naspram skupina II]. Kurkumin je značajno poboljšana SOD aktivnosti i smanjene razine MDA u želucu homogenatima. Nadalje, nema značajne razlike zabilježene su između skupina I i IV grupa životinja (P izvoznici > 0,05; Slika 2). Slika 2 prikazuje djelovanje kurkumina na MDA i aktivnosti SOD u dijabetičkih štakora. Razine MDA smanjena nakon pomiješa s kurkumina, razine SOD je povećano nakon pomiješa s kurkuminom. : Skupina I = normalne kontrolnih štakora (n = 10); : Skupina II = Diabetic Control štakori (n = 10); Grupa III = dijabetička + kurkumin tretiranih štakora (n = 10); : Skupina IV = normalno + kurkumin pomiješa štakori (n = 10). Sve vrijednosti su izraženi kao srednja vrijednost ± SD * p pregled. ≪ 0.01 (u odnosu na grupe I), # p
< 0.01 (u odnosu na grupu II) Δp
> 0,05 (u odnosu na skupina i). pregled Kurkumin povećava SCF i razina c-kit protein
Reprezentativne slike na RT-PCR analize SCF u želucu tkivima štakora u svakoj grupi su prikazane u Figure3A. U usporedbi s I. grupi, SCF bila je značajno niža u skupini II [(0,44 ± 0,02) u odnosu na Netlogu (0,69 ± 0,03), P pregled = 0 0,002] i usporedba vrijednosti u skupini III pokazala je da razina SCF u štakora tretiranih kurkumin bila veća od one u skupini II [(0,58 ± 0,04 vs)
(0,44 ± 0,03) P = 0
.003]. Međutim, bez razlika zabilježena je između skupina I i IV [(0,69 ± 0,03) u odnosu na Netlogu (0,66 ± 0,03) P pregled = 0,56] (Figure3B). Western blot analiza (Figure4A, B) pokazala je da je razina SCF u želucu tkiva iz Grupe II štakora bila je znatno niže od onih u skupine I i III štakora [omjeri (0,33 ± 0,02) u odnosu na Netlogu (0,47 ± 0,03) i (0,41 ± 0,02), p pregled < 0 .05)]. Međutim, nema značajne razlike između IV grupe i skupine I štakora [(0,45 ± 0,03) u odnosu na Netlogu (0,47 ± 0,03), p Netlogu > 0,05)], sugerirajući da kurkumin intervencija mogla učinkovito vraćanje lokalne razine SCF proteina u želucu tkivima kod štakora. Slika 3 Promjene u SCF /GAPDH i C-kit /GAPDH pomoću RT-PCR analize. (A) Reprezentativne slike gel elektroforeze GAPDH, SCF i c-kit u štakora iz svake grupe. razine (B) Grupa relativne ekspresije mRNA za SCF i c-kit, s proizvodima kvantificirati po omjeru za GAPDH. : Skupina I = normalne kontrolnih štakora (n = 10); : Grupa II = Diabetic Control štakora (n = 10); : Skupina III = dijabetička + kurkumin tretiranih štakora (n = 10); : Skupina IV = normalno + kurkumin pomiješa štakori (n = 10). Sve vrijednosti su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. * P pregled < 0.01 (u odnosu na grupu I.), # p
0,05 (u odnosu na grupu II) Δp
>, 0.05 (u odnosu na grupu I)
Slika 4 promjene u SCF /GAPDH i C-kit /GAPDH pomoću Western blot analize. (A) Reprezentativnu proteinska traka slike SCF, c-kit i glyceraldehydes-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH). razine (B) Grupa relativne SCF i c-kit ekspresije proteina sa omjerom za GAPDH, respektivno. : Skupina I = normalne kontrolnih štakora (n = 10); : Grupa II = Diabetic Control štakora (n = 10); : Skupina III = dijabetička + kurkumin tretiranih štakora (n = 10); : Skupina IV = normalno + kurkumin pomiješa štakori (n = 10). Sve vrijednosti su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. * P izvoznici < 0,01 (u odnosu na grupe I), # p Netlogu < 0,01 (u odnosu na skupinu II), Δp Netlogu >. 0.05 (u odnosu na skupina I)
RT-PCR analiza je pokazala da je razina ekspresije za c-kit u želucu tkiva su bili 0,78 ± 0,04, 0,37 ± 0,02 i 0,59 ± 0,03 za grupe i, II i III, respektivno. Razine c-kit izraz u grupama II i III štakori su bili niži nego u skupini i štakora. Međutim, usporedba grupe II i III je pokazala da je razina c-kit u štakora tretiranih kurkumin bila veća od one kod neliječenih dijabetičnih štakora (P pregled < 0,05 Figure3B). Slični rezultati su pokazali Western blot analizom (Figure4B). Razine proteina c-kit (omjeri od 0,45 ± 0,03, 0.21 ± 0.02 i 0.34 ± 0.02, odnosno, za skupine I, II i III) bile su znatno veće u skupini III nego u skupini II (P pregled < 0 0,05, Figure4B), a razina u skupini III bio je niži od onih u grupe i i IV. Obje analize pokazuju da 6 tjedana Kurkumin intervencije može značajno vratiti na smanjenje razine c-kit kod štakora. Pregled Kurkumin inhibira I-kB degradacija i aktivaciju NF-kB pregled izvješća ukazuju da je povećan i kronični oksidativni stres može aktivirati ili narušiti NF-kB aktivnosti [24]. Istraživali smo da li kurkumin može dovesti do aktivacije NF-kB signalnog puta. Za to, mjerili smo razine NF-kB u prisutnosti ili odsutnosti kurkumina utvrditi da li je NF-kB aktiviran. Prvo, procijenjena je razina proteina u I-kB, kojoj inaktivirani NF-kB veže. otkrili smo da stupanj I-kB u skupine I štakora bila je viša od one u skupini II štakora, dok se razina u Skupina III štakora bila je manja od one u skupini II štakora (p < 0,01), ali je veća od razine u skupine i i IV štakora (p < 0.05). Zatim, ispitali smo je li kurkumin može blokirati NF-kB. otkrili smo da dijabetes (Skupina II), dovodi do povećanja razine NF-kB [grupe I 75,5 ± 7,7 (pg /ml) vs
grupe II 102,8 ± 12,4 (pg /ml), P = 0,001 pregled] , a tretman s kurkuminom [skupina III 91,3 ± 8,9 (pg /ml)] spriječio taj učinak. Na temelju tog nalaza, predložili smo da kurkumin potiskuje aktivaciju NF-kB [grupe IV 70,9 ± 8,1 (pg /ml), P
= 0,026] (Figure5). Ispitali smo je li kurkumin može blokirati NF-kB translokacije u jezgru, jer nuklearne translokacije prepoznat kao reakcija stanice na ROS stimulacije i čini se da korelira s NF-kB posredovanog transkripcije aktivacije. Procijeniti toga, mjerili smo razine NF-kB u jezgri s EMSA. Razvoj dijabetesa inducirano povećanje razine NF-kB u jezgri, a tretman s kurkuminom spriječio taj učinak (Slika 6). Stoga smo predložili da kurkumin ne samo posredno smanjuje aktivaciju NF-kB DNA binding, ali i da potiskuje aktivaciju uzvodno od I-kB. Slika 5 Utjecaj kurkumina na I-kB i NF-kB. (A) graf bio jasan odraz razine I-kB i NF-kB među četiri skupine. (B) razina I-kB /GAPDH je smanjen u skupini II, a porasla je Kurkumin. I: Skupina I = normalne kontrolnih štakora (n = 10); II: Skupina II = Diabetic Control štakori (n = 10); III: Grupa III = dijabetička + kurkumin tretiranih štakora (n = 10); IV: Skupina IV = normalno + kurkumin pomiješa štakori (n = 10). Sve vrijednosti su izraženi kao srednja vrijednost ± SD * p pregled. ≪ 0.01 (u odnosu na grupe I), # p
< 0.01 (u odnosu na grupu II) Δp
> 0,05 (u odnosu na Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Pancreaticogastrostomy u čistom laparoskopske pancreaticoduodenectomy-roman anastomoze tehnike gušterače želudac -
• Ekspresija gena analiza Helicobacter pylori zaražen i high-sol dijeta miševa tretiranih želuca modelu tumora: identifikaciju CD177 kao novog prognostički faktor u bolesnika s želuca cancer