Куркумин улучшает экспрессию SCF /C-набора через ослабляя окислительный стресс и активацию NF-кВ в желудочных тканях крыс с диабетом Гастропарез

Куркумин улучшает экспрессию SCF /C-набора через ослабляя окислительный стресс и активацию NF-кВ в желудочных тканях диабетических крыс Гастропарез
Аннотация
Справочная информация
Сахарный диабет связан со многими видами осложнений. Недавние исследования показали, что окислительный стресс и воспалительные реакции играют решающую роль в патогенезе диабетической гастропарезу. Куркумин, как известно, обладают антиоксидантными и противовоспалительными свойствами. В настоящем исследовании мы изучали влияние куркумина на диабетическую двигательной функции желудка в модели крыс Sprague Dawley 1 типа сахарного диабета.
Методы
Самцов крыс SD были разделены на контрольную группу, контрольная группа, получавшая куркумин, диабетической группы и диабетической группе, получавшей куркумин. Диабет индуцировали внутрибрюшинным введением стрептозоцина. Куркумин (150 мг /кг) вводили внутрижелудочно в течение 6 недель, и уровень глюкозы в крови и вес тела были измерены. Желудки были вырезаны для анализа желудочных ставок опорожнению, и уровни окислительного стресса. NF-kB, I-kB, и фактор стволовых клеток (SCF) /уровни белка C-комплектов были оценены с помощью Вестерн-блот-анализа, в то время как апоптоз интерстициальных клеток Кахалем (ККО) оценивали с помощью TUNEL окрашивания.
Результаты
диабетических крыс Куркумин обработанных показали значительно улучшенные опорожнение желудка ставки [(59,4 ± 7,5)%] по сравнению с диабетических крыс [(44,3 ± 5,7)%], а также к снижению уровня МДА [21,4 ± 1,8 (нмоль /мг) против
27,9 ± 2,1 (нмоль /мг)], и повышение активности СОД [126,2 ± 8,8 (ед /мг) против
107,9 ± 7,5 (ед /мг)]. С другой стороны, уровень желудка опорожнение в контрольной группе достоверно не отличалась от таковой в контрольной группе, получавшей лечение куркумин. Кроме того, у крыс с диабетом куркумин лечение показали значительно повышенные уровни SCF /с-набора белков в тканях желудка, ингибирует деградацию I-кВ и активацию NF-кВ, а также снижение индекса апоптоза ICC [(26,2 ± 4,1)% против
(47,5 ± 6,2)%], по сравнению с диабетической группы.
Заключение
лечение куркумин улучшилось опорожнение желудка, блокируя производство окислительного стресса, отменяя передачу сигнала NF-kB и усиления экспрессии SCF /C-набора в крыс с диабетической гастропарезу.
Ключевые слова
Куркумин Диабетическая парез окислительный стресс NF-kB фактор стволовых клеток /C-комплект интерстициальных клеток Cajal Введение
Диабетическая гастропарезу является заболеванием желудочно-кишечного тракта, определяется как задержка опорожнения твердая пища, и наблюдается у 30-50% больных с 1 типа или сахарный диабет 2 типа [1]. Пациенты часто присутствуют верхние желудочно-кишечные симптомы, такие как чувство быстрого насыщения, потеря веса, вздутие живота, дискомфорт в животе, тошнота, рвота часто происходят, и нарушение гликемического контроля, и болезнь серьезно влияет на качество жизни пациентов.
Гастропарез все больше и больше признана серьезной проблемой здравоохранения. Хотя парез затрагивает многих больных сахарным диабетом во всем мире, а не только варианты лечения весьма ограничены, но и методы лечения, которые доступны для диабетической гастропатии часто неэффективны. К ним относятся медицинскую терапию, электростимуляцию желудка, хирургическое лечение, а также питательную поддержку. Лекарства для гастропарезу включают метоклопрамид, домперидон, цизаприд и эритромицин. В то время как эти агенты используются для лечения парез желудка, они, как сообщается, только ограниченной эффективностью, и многие пациенты не могут переносить их из-за их побочных эффектов. В диабетических пациентах с огнеупорной гастропарезу, высокочастотное желудка электрической стимуляции с помощью постоянно имплантированной системы значительно улучшились симптомы верхних отделов пищеварительного тракта и представляет собой альтернативный хирургической терапии для пациентов. Хирургические процедуры, такие как гастрэктомии и antrectomy являются последним вариантом для лечения, будучи спорными и нуждаются в дополнительной работе [2]. У больных с тяжелой гастропарезу но нормальной небольшой моторики кишечника, эюностомия питательная трубка может быть применена. В то время как это обеспечивает питательную поддержку, он не лечит парез желудка [3]. Диабетическая парез, как правило, лучше всего рассматривать с медицинской точки зрения, и только у больных с тяжелой диабетической гастропарезу, которые не в состоянии ответить на медицинскую терапию, должны пройти другие виды терапии. Таким образом, поиск лекарств, которые показывают эффективность при лечении диабетической парез желудка необходимо.
Диабетического гастропареза связано с потерей интерстициальных клеток Кахалем (ИКК) у человека и у модельных животных [4]. ИКК могут быть идентифицированы в ткани путем маркировки с антисывороткой к комплекту киназы рецептора тирозин, белок экспрессируется на КИС. Кит и его фактор-лиганд стволовых клеток (SCF) также являются важными факторами выживания для ККО [5]. Повышенный окислительный стресс, связанный с диабетом может привести к потере или повреждению ККО у мышей, в то время как окислительный стресс приводит к повреждению и потере сетей МТП и развитие замедленное опорожнение желудка [6]. Результаты Диабет в повышенной окислительного стресса и играет важную роль в патогенезе диабетических осложнений [7]. Перепроизводство активных форм кислорода (ROS) приводит к окислительному повреждению, в том числе перекисного окисления липидов, окисления белков и повреждения ДНК, что может привести к гибели клеток. Кроме того, ROS, как известно, действуют как вторичные мессенджеры для активации факторов транскрипции, таких как ядерный фактор каппа В (NF-kB). РОС генерируется во время стресса в желудочном ткани может вызвать активацию сигнальных NF-kB каскада; В самом деле, опорожнение желудка у крыс, страдающих диабетом связано с активацией NF-kB-опосредованного воспаления.
куркумин (1,7-бис- (4-гидрокси-3-метоксифенил) -1, 6-гептадиен-3,5- дион) является основным активным компонентом куркумы изолированы от растений куркума Лонга L. куркумин многофункциональная молекула с существенным регулирующим воздействием на рак [8], воспаление [9] и болезни, связанные с диабетом, такие как диабетическая ретинопатия [10], диабетическое нефропатии [11], и диабет когнитивной дисфункции [12]. Куркумин является мощным поглотитель химически активного кислорода и азота, такие как гидроксильные радикалы и радикалы диоксида азота [13]. Несколько исследований показали, что куркумин ингибирует активацию NF-кВ провоспалительных сигнальных путей [14]. В то же время, NF-kB транскрипционные факторы регулируют ряд важных физиологических процессов, в том числе воспаления и иммунных реакций, клеточного роста и выживаемости, поэтому ингибирование сигнального пути NF-kB представляет собой жизнеспособную стратегию терапии заболеваний [15]. Тем не менее, там было очень мало исследований о потенциале куркумина для лечения диабетического пареза желудка, или на его фармакологическом механизме.
Цель этого исследования состояла в том, чтобы определить, является ли, в Sprague Dawley (SD) крысиной модели диабета 1 типа диабет, средней дозы [16] куркумин может защитить ККО в диабетических крыс с замедленным опорожнением желудка за счет уменьшения окислительного стресса и ингибирования активации NF-кВ, увеличение SCF /выражение Kit, а также нормализации задержку опорожнения желудка.
материалы и методы
подопытных крыс и индукции сахарного диабета
крыс SD мужчины (возраст 8 недель) были выведены в центре экспериментальных животных, Чжэцзян китайского медицинского университета (Ханчжоу, Китай), где конкретного патогена (SPF) -level лаборатория санкционировано правительством провинции Чжэцзян. У всех крыс содержали в условиях контролируемой влажности (50-60%). Их содержали под регулируемым светом (12 ч день /ночь цикла) со свободным доступом к воде и грызунов. Все эксперименты на животных были проведены в последовательности с лицензией из провинции Чжэцзян науки и техники Управления (Ханчжоу, Китай) и с одобрения со стороны этики животных комитета Чжэцзян китайского медицинского университета. Все эксперименты соответствовали руководящим принципам этического поведения в уходе и использовании животных. Были приложены все усилия, чтобы свести к минимуму нагрузку на животных.
Крысы голодали в течение 12 ч, были подвергнуты одной внутрибрюшинной инъекции стрептозотоцина (STZ), 50 мг /кг, свеже, растворенного в 100 мМ натрий-цитратном буфере при рН 4,5. Подобранных по возрасту нормальные крысы получали только цитратный буфер. Развитие сахарного диабета был подтвержден натощак уровень глюкозы в крови (ВБР) с использованием набора реагентов (Roche, Шанхай, Китай). Крысы с уровнями ВБР выше 11,1 мМ (200 мг /дл) через 72 ч после инъекции STZ считались диабетических крыс. После того, как крысы стали диабетик, их уровни глюкозы были измерены ежедневно. Эксперименты началась 8 недель после развития сахарного диабета, чтобы позволить парез развиваться.
Экспериментальный дизайн
Через восемь недель после развития диабета, животные были разделены на четыре группы, то есть нормальный контроль самцов крыс (I группа), диабетический мужчина крыс (группа II), куркумин-добавляемой диабетических крыс-самцов (III группа) и куркумин-добавляемой контроль самцов крыс (группа IV). Крысы в ​​группах III и IV (n = 10 каждый) обрабатывали ежедневно куркумин (150 мг /кг; i.g.) в течение 6 недель. Куркумин (чистота > 95%) от Фусун Natural Biotechnology Company Ltd. (Цзилинь, Китай), суспендировали в 0,5% мас об натрия карбоксиметилцеллюлоза раствор /(CMC-Na). Крысы в ​​группах I и II (п = 10 каждый) получили только 0,5% раствор CMC-Na. После лечения в течение 6 недель, животных забивали под этиловым эфиром наркозом, кровь собирали путем бедренной вены кровотечение и отделяли сыворотку. Желудки были быстро удалены, и образцы ткани, полученные от животных, хранили при -80 ° С до обработки для биохимических анализов. Опорожнение желудка, окислительный стресс, активация NF-kB, ККО и экспрессия SCF /Kit в желудках были также изучены в конце шестой недели лечения (14 й недели диабета).
Опорожнение желудка исследования <бр> Стандартный способ получения фенола красного маркера пищи использовали, как описано ранее [17]. Опорожнение желудка определяли с использованием модификации ранее сообщаемого процедуры [18]. Крысы не имели свободный доступ к воде до 3 ч до зондового введения куркумина. Раствор 0,1% (вес /объем) фенол красный в водной натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (1,5% вес /об) использовали в качестве пробного приема пищи. Куркумин было дано 1 ч до перорального введения пробного приема пищи. Через двадцать минут после введения испытываемого еды, забивали крысы. Желудки были затем облучают с помощью лапаротомии и удалены. Крысы, получавшие носитель (физиологический раствор, 0,9% раствор хлорида натрия, 0,2 мл), умерщвленных немедленно после перорального приема пробного завтрака и фенолового красного содержания в желудке рассматривалось в качестве стандарта (100%). Демонтированные желудки были врезаны в 40 мл раствора NaOH (0,1 N), и содержимое не растворится. А 1-мл аликвоты из моющих растворов добавляют к 2 мл трихлоруксусной кислоты (7,5% вес /об) для осаждения белков. После центрифугирования (2500 × г
) в течение 20 мин, 1 мл супернатанта добавляли к 1 мл NaOH (1 N), чтобы развить максимальную интенсивность цвета. Оптическую плотность при 558 нм раствора затем измеряли с помощью спектрофотометра (U-1080, Hitachi Ltd., Токио, Япония). Опорожнение желудка рассчитывали в соответствии со следующей формулой: Опорожнение желудка <мили>%
<Мо> =
<тп> 1
<мо> -
X
/
Y
<мо> ×
<тп> 100
<Мо>,
где Х означает поглощение фенола красного, оставаясь в желудке 20 мин после введения фенола красного и Y представляет среднее значение оптической плотности фенола красного извлекают из желудков у контрольных мышей, сразу после того, как фенола красного введения.
Определение МДА и уровни SOD в гладких мышцах желудка антрального
вырезают желудки, взвешивали и немедленно замораживали при -70 ° с. Замороженную ткань от каждой крысы гомогенизируют в охлажденном льдом фосфатного буфера (140 мМ KCl, 20 мМ фосфат, рН 7,4) и центрифугировали при 3000 • g
в течение 10 мин. Содержание малоновый альдегид (МДА), индекс для перекисного окисления липидов, определяли с помощью метода с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) с незначительной модификацией [19]. Вкратце, 100 мкл гомогената ткани смешивали с 200 мкл рабочего раствора, содержащего 0,37% TBA. Смесь инкубировали при температуре 100 ° С в течение 15 мин и затем охлаждают. Для извлечения MDA, добавляли 375 мкл N-бутанола, с последующим встряхиванием энергично в течение 10 сек. После центрифугирования верхний слой н-бутанол переносили в стеклянную трубку. Оптическую фазы бутанола измеряли при 532 нм. Содержание МДА выражается в виде нмоль /мг белка. Для измерения активности СОД, 20 мкл гомогената ткани смешивали с 200 мкл реакционного раствора, содержащего хлорид тетразола (НСТ, 750 мкМ) и инкубировали в течение 20 мин при 37 ° С. измеряли оптическую плотность при 560 нм. Ферментативная активность выражается в единицах /г белка и 1 единица фермента определяли как количество фермента, необходимое для ингибирования снижение NBT на 50%.
Полуколичественный RT-PCR измерение SCF и С-комплект
проксимальной части желудка (40-50 мг) собирали, и слизистая оболочка была удалена путем рассечения. Ткань механически гомогенизируют под РНКазы условиях и диссоциирует с Tripure изоляции реагента (Roche, Швейцария) на льду в течение 5 минут, а общая РНК экстрагировали в соответствии с инструкциями изготовителя. Суммарную РНК количественно спектрофотометрически при 260 и 280 нм, причем отношение А260 /А280 в диапазоне от 1,8 до 2,0. Целостность РНК проверяли с помощью электрофореза в агарозном геле с последующим окрашиванием бромидом этидия, и РНК использовали для немедленной обратной транскрипции или хранили при -80 ° С в не содержащей РНКазы воды. Двухступенчатая обратной транскриптазы-полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) проводили с использованием Revertra ас-α- синтеза первой цепи кДНК комплект (Tiangen Biotech, Пекин, Китай) и 2 × Taq ПЦР основной смеси (Tiangen Biotech), в соответствии с инструкции изготовителя. Фиксированная сумма РНК (0,5 мкг) подвергали обратной транскрипции. Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH), был выбран в качестве внутреннего стандарта. Все ПЦР-праймеры были разработаны и синтезированы Biosune (Шанхай, Китай). Последовательности праймеров и длины продуктов ПЦР следующим образом: GAPDH, вперед: 5 '- GACAACTITG-GCATCGTGGA-3 ', обратный: 5 '- ATGCAGGGATGATGT-TCTGG-3 ' , 150 пар оснований; SCF, вперед: 5 '- GGA CTT CAT GGT GGC ATC TG-3 ', обратный: 5 '- НКУ СТТ GTA AGA СТТ GAC TG-3 ', 285 пар оснований; и с-комплект, вперед: 5 '- GTG GTT AAA GGA AAC GCT CG-3 ', обратный: 5 '- CAT ACA ТТТ CAG CAG GTG CG-3 ', 400 пар оснований. Условия проведения реакции были оптимизированы для каждого из генов путем изменения температуры отжига (58 ° C для GAPDH, 58 ° C для SCF, и 62 ° С для с-Kit) и различным числом циклов ПЦР [20]. Продукты ПЦР разделяли на 2% агарозном геле при 100 В в течение 30 минут. Гелевые изображения были показаны на жидкокристаллическом дисплее монитора ультрафиолетового просвечивания PhotoDoc-Ite система, оснащенная ПЗС-камерой (Bio-Rad Gel Doc 2000, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) и сохраняется для анализа интенсивности. Относительные уровни мРНК выбранных генов были рассчитаны как отношение к экспрессии GAPDH.
Уровни SCF, C-Kit, IκB и NF-kB оценивали с помощью Вестерн-блот-анализа
примерно 50 мг ткани была взята из вблизи проксимального отдела желудка. Ткани были разрезаны на маленькие кусочки примерно 0,25 см 3, гомогенизируют и диссоциируют в радио-иммунопреципитации анализ буфера для лизиса (Hushang биотехнологии, Шанхай, Китай), содержащий 50 мМ Трис, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолат натрия, 1% додецилсульфата натрия, 1 мМ ФМСФ, ортованадата натрия, фторид натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту, и лейпептина при температуре 4 ° С в течение 30 минут. Гомогенаты центрифугировали при 12 000 • g
в течение 5 минут при 4 ° С, и надосадочную жидкость собирали и использовали в качестве общего белка. Равные количества белка, подвергали электрофорезу в ДСН-ПААГ в 10% или 15% полиакриламидном геле. Белки переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Hushang биотехнологии) с помощью полусухого блоттинга. Мембраны были заблокированы Трис-солевом буферном 0,1% Tween 20 (TBST), содержащего 5% молока в течение 60 минут при комнатной температуре, а затем иммуно-смыл с соответствующим образом разбавленным первичными антителами при 4 ° С в течение ночи. После трехкратной промывки TBST, блоты инкубировали с конъюгированным с пероксидазой хрена вторичного антитела в течение 60 минут при комнатной температуре. Затем комплексы были визуализированы с использованием системы визуализации iChemi XR (WD9431A, Bomeike биотехнологии, Китай) с ХЛ реагентами (Tigsun Биологические науки, технологии, Тяньцзинь, Китай). Semi-количественную оценку проводили с помощью программного обеспечения Количество От One, версия 4.6.2 (Bio-Rad). Были использованы следующие антитела: анти-SCF, 1: 200, C-комплект, 1: 200, анти-IκB и анти-NF-кВ p65 и GAPDH., 1: 500 (Hushang биотехнологии, Шанхай, Китай)
Количественное NF-kB -DNA связывания методом сдвига электрофоретической подвижности
Ядерные экстракты получали из лизатов желудка, как описано ранее [21]. активации NF-kB определяли с помощью методом сдвига электрофоретической подвижности (EMSA) и ядерной транслокации NF-kB оценивали, как описано ранее (GS009, Beyotime Институт биотехнологии, Шанхай, Китай) [22]. Для NF-kB реакций связывания, 5 мкг экстракта ядерного белка инкубировали при комнатной температуре в течение 20 мин с реакционным буфером, содержащим 20 мМ HEPES, рН 7,9, 50 мМ KCl, 0,1 мМ EDTA, 1 мМ DTT, 5% глицерина, 200 мкг /мл БСА, и 2 мкг поли (ди-ПСТ). Тогда, 32P-меченого двухцепочечную олигонуклеотида (1 нг ≥1 × 105 импульсов в минуту), содержащий NF-kB связывания консенсусной последовательности (5 '- GGCAACCTGGGGACTCTCCCTTT-3 ') добавляли к реакционной смеси в течение еще 10 мин при комнатной температуре. Продукты реакции фракционировали на неденатурирующем 6% полиакриламидном геле в течение 60 мин при 350 В, который затем высушили и подвергали авторадиографии при -70 ° С в течение ночи. Для получения конкурентных анализов, избыток олигонуклеотид (100-кратный молярный избыток) конкурент предварительно инкубировали с ядерными экстрактами в течение 20 мин при комнатной температуре. Мутант NF-kB олигонуклеотид (5 '- GGCAACTGCTCACTCTCCCTTT-3 ') использовали для анализа конкуренции. Сигналы были проанализированы с помощью денситометрии.
Двойной immunofluorohistochemistry с терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы-опосредованной дУТФ-биотин нику конец мечения анализа (TUNEL) и с-набор окрашивания
флуоресцентной иммуногистохимии для С-комплект (с использованием антитела из Santa Cruz) и TUNEL окрашивание проводили на 10 мкм секций с использованием модификации процедуры, опубликованной изготовителем комплекта TUNEL (TACS STDT, Trevigen Inc, Gaithersburg, MD). TUNEL-позитивные клетки были помечены флуоресцеина (Ex 488, Em 505-550), с-кит-позитивные клетки были помечены Cy3 (Ex 543, Em 560-615), и ядра были помечены DAPI (Ex 364, Em 385 -470). Тканевые образцы были встроены в флуоресцентной монтажной среде и исследованы с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии [23]. Приблизительно 200 клеток подсчитывали на поле, пять полей были рассмотрены на слайд и пять слайдов были рассмотрены в каждой группе. Проценты TUNEL- и с-Kit-положительными апоптотических клеток были обозначены как апоптического индекс (AI) (%).
Статистический анализ
Все данные представлены в виде среднего ± SD. Для сравнения данных между группами животных, один-дисперсионного анализа (односторонний ANOVA) и сравнений Дункан были заняты. Все статистические тесты были проведены с использованием программы SPSS для Windows, версия 13.0 (SPSS Inc, Чикаго, Иллинойс). Различия считались статистически значимыми при P &
ЛТ; 0.05.

Результаты Влияние куркумина на массу тела и глюкозы в крови крыс с диабетом
уровней глюкозы в плазме были значительно выше у крыс с диабетом (II группа) [(322 ± 41) мг /дл] по сравнению с теми, у нормальных контрольных крыс (группа I) [(98 ± 12) мг /дл]. Был заметное снижение веса тела крыс группы II [(298 ± 16) г] по сравнению с подобранными по возрасту крыс I группы [(449 ± 21) г]. Хронические диабетических крыс куркумин лечение (III группа) не показали значительного улучшения массы тела и никакого снижения уровня глюкозы в плазме по сравнению с крысами группы II [III группы, масса тела (324 ± 19) г и глюкозы (302 ± 38) мг /DL] (таблица 1) .table уровень глюкозы в крови 1 и веса тела в четырех группах
Группы

Группа I

Группа II

Группа III

Группа IV

глюкозы в крови (мг /дл)
98 ± 12
322 ± 41 *
302 ± 38 * #
100 ± 11
вес тела ( г)
449 ± 21 298 ±
16 *
324 ± 19 * 476 ±
27
Группа I = нормальные контрольные крысы; Группа II = диабетических контрольных крыс; Группа III = диабетическая + куркумин крыс, получавших (150 мг /кг); Группа IV = нормальные + куркумин крыс, получавших (150 мг /кг). Результаты представлены в виде среднего значения ± SD. * P &
л; 0,05 (по сравнению с группой I), #P
> 0,05 (по сравнению с группой II)
Влияние куркумина на опорожнение желудка
опорожнения желудка значительно задерживается в SD крыс, количество больных диабетом в течение 8 недель. , Количество опорожнение желудка в группе II был 44,3 ± 5,7%, что было значительно ниже, чем в группе I [(76,2 ± 4,3)%, P
&ЛТ; 0,01], и диабетических крыс, проходящих лечение куркумин [(III группа) ,; (59,4 ± 7,5)%, P &
л; 0,05]. Тем не менее, никаких существенных различий не было отмечено между группой I и IV группы крыс [(73,3 ± 5,2%), P
> 0,05] (Figure1). Рисунок 1 Воздействие куркумина на опорожнение желудка у крыс, страдающих диабетом. Группа I = нормальные контрольные крысы (п = 10); : Группа II крыс = диабетические управления (п = 10); : Группа III = диабетическая + куркумин обработанных крыс (N = 10); : Группа IV = нормальный + куркумин крыс, получавших (п = 10). Все величины выражены как среднее ± стандартное отклонение. * Р
&л; 0,01 (по сравнению с группой I), # р
&ЛТ; 0,05 (по сравнению с группой II), P &
GТ;. 0,05 (по сравнению с группой I)
лечение куркумин снизились образование МДА, повышает активность СОД
Мы исследовали оксидативный стресс, используя несколько методов, поскольку глюкоза-индуцированного окислительного стресса было высказано предположение, что основным механизмом при хронических осложнений сахарного диабета. Диабетических крыс выставлены повышенные уровни МДА [Группа I 15,7 ± 1,7 (нмоль /мг) против
II группы 27,9 ± 2,1 (нмоль /мг), P = 0,006
] и снижение уровней SOD [I группы 146,2 ± 9,3 ( U /мг) против
II группе 107,9 ± 7,5 (ед /мг), Р = 0,008
], молекулярный маркер окислительного стресса (Figure2). Шесть недель лечения куркумин снижало степень MDA повышающей регуляцией [III группы, 21,4 ± 1,8 (нмоль /мг), P = 0,033
по сравнению с I группа и P
= 0,004 по сравнению с группой II], а также улучшено SOD вниз -regulation [III группы 126,2 ± 8,8 (единиц /мг), P = 0,036
по сравнению с группой I и P
= 0,001 по сравнению с группой II]. Куркумин значительно повышается активность СОД и снижение уровня МДА в гомогенатах желудка. Кроме того, никаких существенных различий не было отмечено между группой I и IV группы животных (P &
GТ; 0,05; Figure2). Рисунок 2 Воздействие куркумина на МДА и СОД у больных сахарным диабетом крыс. Уровни МДА уменьшились после того, как обрабатывали куркумин, уровни SOD был увеличен после того, как обрабатывали куркумин. : Группа I = нормальный контрольных крыс (N = 10); : Группа II = диабетических контрольных крыс (n = 10); III группа = диабетическая + куркумин крыс, получавших (п = 10); : Группа IV = нормальный + куркумин крыс, получавших (п = 10). Все величины выражены как среднее ± SD * р
≪. 0,01 (по сравнению с группой I), # р
&ЛТ; 0,01 (по сравнению с группой II), P &
GТ; 0,05 (по сравнению с Группа I).
куркумин увеличивает SCF и уровни C-набор белка
Представитель изображения анализа RT-PCR СКФ в тканях желудка крыс в каждой группе показаны в Figure3A. По сравнению с группой I, ФУО была значительно ниже в группе II [(0,44 ± 0,02) против
(0,69 ± 0,03), P
= 0 0,002], и сравнение значений в группе III показало, что уровень СКФ в куркумин у крыс был выше, чем в группе II [(0,58 ± 0,04), по сравнению
(0,44 ± 0,03) P
= 0 .003]. Тем не менее, не было отмечено никаких различий между группами I и IV [(0,69 ± 0,03) против
(0,66 ± 0,03) P
= 0,56] (Figure3B). Вестерн-блот-анализ (Figure4A, Б) показал, что уровень SCF в тканях желудка у крыс II группы была достоверно ниже, чем у крыс группы I и III [соотношения (0,33 ± 0,02) по сравнению
(0,47 ± 0,03) и (0,41 ± 0,02), соответственно, Р
≪ 0 .05)]. Тем не менее, никаких существенных различий не было найдено между группой IV и крыс I группы [(0,45 ± 0,03) против
(0,47 ± 0,03), P
> 0,05)], предполагая, что вмешательство куркумин может эффективно восстановить локальные уровни белка SCF в тканях желудка диабетических крыс. Рисунок 3 Изменения в SCF /GAPDH и C-Kit /GAPDH с помощью анализа RT-PCR. (А) Типичные изображения гель-электрофореза из GAPDH, SCF и с-кит у крыс каждой группы. Уровни (B) группа относительных экспрессии мРНК SCF и С-комплект, с продуктами количественно отношением к GAPDH. : Группа I = нормальный контрольных крыс (N = 10); : Группа II крыс = диабетические управления (п = 10); : Группа III = диабетическая + куркумин обработанных крыс (N = 10); : Группа IV = нормальный + куркумин крыс, получавших (п = 10). Все величины выражены как среднее ± стандартное отклонение. * Р
&л; 0,01 (по сравнению с группой I), # р
&ЛТ; 0,05 (по сравнению с группой II), P &
GТ;. 0,05 (по сравнению с группой I) Рисунок 4
Изменения в SCF /GAPDH и C-KIT /GAPDH с помощью Вестерн-блот-анализа. (А) представитель полосы белка образы SCF, с-Kit, и glyceraldehydes-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH). Уровни (B) группа относительных SCF и C-набора белка, экспрессированного отношением к GAPDH, соответственно. : Группа I = нормальный контрольных крыс (N = 10); : Группа II крыс = диабетические управления (п = 10); : Группа III = диабетическая + куркумин обработанных крыс (N = 10); : Группа IV = нормальный + куркумин крыс, получавших (п = 10). Все величины выражены как среднее ± стандартное отклонение. * Р
&л; 0,01 (по сравнению с группой I), # р
< 0,01 (по сравнению с группой II), P &
GТ;. 0,05 (по сравнению с группой I)
RT-PCR анализ показал, что уровни экспрессии для С-комплекта в тканях желудка были 0,78 ± 0,04, 0,37 ± 0,02 и 0,59 ± 0,03 для групп I, II и III, соответственно. Уровни экспрессии с-набор в группы II и III крысы были ниже, чем у крыс I группы. Тем не менее, при сравнении групп II и III показали, что уровень C-набор в куркумин у крыс был больше, чем у крыс с необработанными диабетических (Р
≪ 0,05, Figure3B). Аналогичные результаты были продемонстрированы с помощью Вестерн-блот-анализа (Figure4B). Уровни C-набора белка (соотношение 0,45 ± 0,03, 0,21 ± 0,02 и 0,34 ± 0,02, соответственно, для групп I, II и III) были в группе III значительно больше, чем в группе II (Р
&л; 0 .05, Figure4B), а уровень в III группе была ниже, чем в группах I и IV. Оба анализа показали, что 6 недель вмешательства куркумин может значительно восстановить снижение уровня C-набора в диабетических крыс.
Куркумин ингибирует деградацию I-kB и активации NF-kB
Отчеты показывают, что увеличение и хронический окислительный стресс может активировать или возмущают активность NF-kB [24]. Мы исследовали, может ли куркумин привести к активации сигнального пути NF-kB. Чтобы сделать это, мы измерили уровни NF-kB в присутствии или в отсутствии куркумин, чтобы определить, была ли активирована NF-kB. Во-первых, мы оценивали уровни протеина I-kB, к которому инактивированная NF-kB связывается. Мы обнаружили, что уровень I-kB у крыс I группы была выше, чем у крыс группы II, в то время как уровень у крыс III группы была ниже, чем у крыс группы II (р ≪ 0,01), но выше, чем уровни в Группы I и крыс IV (р &л; 0,05). Затем мы исследовали, может ли куркумин блок NF-kB. Мы обнаружили, что сахарный диабет (II группа) привело к увеличению уровня NF-kB [I группе 75,5 ± 7,7 (пг /мл) против
II группы 102,8 ± 12,4 (пг /мл), P = 0,001
] , в то время как лечение с помощью куркумина [Группа III 91,3 ± 8,9 (пг /мл)] предотвращено этот эффект. На основании этого факта, мы предположили, что куркумин подавляет активацию NF-kB [IV группы 70,9 ± 8,1 (пг /мл), P = 0,026
] (Figure5). Мы исследовали, может ли куркумин блок NF-кВ транслокации в ядро, так как ядерная транслокация признается в качестве реакции клеток на ROS стимуляции и, кажется, коррелируют с NF-kB-опосредованной активации транскрипции. Для оценки этого, мы измерили уровень NF-kB в ядре с помощью EMSA. Развитие сахарного диабета вызвало увеличение уровня NF-kB в ядре, в то время как лечение с куркумин предотвратить этот эффект (Figure6). Таким образом, мы предположили, что куркумин не только косвенно подавляет активацию NF-kB-ДНК связывания, но что он также подавляет активацию перед I-kB. Рисунок 5. Влияние куркумина на I-kB и NF-kB. (А) гистограмма было четким отражением уровня I-kB и NF-kB среди четырех групп. (B) уровень I-kB /GAPDH была снижена в группе II, но увеличился на куркумина. Я: группа I = нормальный контрольных крыс (N = 10); II: Группа II = диабетических контрольных крыс (п = 10); III: Группа III = диабетическая + куркумин обработанных крыс (N = 10); IV: Группа IV = нормальный + куркумин крыс, получавших (п = 10). Все величины выражены как среднее ± SD * р
≪. 0,01 (по сравнению с группой I), # р
&ЛТ; 0,01 (по сравнению с группой II), P &
GТ; 0,05 (по сравнению с Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Pancreaticogastrostomy в чистом лапароскопической pancreaticoduodenectomy-романа панкреатического-желудочного анастомоза методо…
• Экспрессия генов анализ Helicobacter Pylori-инфицированных и модель опухоли высокой соли диета лечение мыши желудка: …