Curcumine améliore l'expression de SCF /c-kit par le biais d'atténuation du stress oxydatif et l'activation de NF-kB dans les tissus gastriques des diabétiques gastroparésie rats

curcumine améliore l'expression de SCF /c-kit par le biais d'atténuation du stress oxydatif et l'activation de NF-kB dans les tissus gastriques de rats gastroparésie diabétique Contexte
Résumé
le diabète sucré est associé à de nombreux types de complications. Des études récentes ont montré que le stress oxydatif et les réactions inflammatoires ont un rôle critique dans la pathogenèse de la gastroparésie diabétique. La curcumine est connu pour avoir des propriétés antioxydantes et anti-inflammatoires. Dans la présente étude, nous avons étudié l'effet de la curcumine sur la motilité gastrique diabétique dans un modèle de rat Sprague Dawley de diabète de type 1.
Méthodes
rats SD mâles ont été divisés en un groupe témoin, un groupe de contrôle curcumine réception, un groupe diabétique, et un groupe diabétiques recevant curcumine. Le diabète a été induit par injection intraperitoneale de streptozotocine. Curcumine (150 mg /kg) a été administrée par voie intragastrique pendant 6 semaines et les niveaux de glucose dans le sang et les poids corporels ont été mesurés. Estomacs ont été excisées pour l'analyse des taux de vidange gastrique, et les niveaux de stress oxydatif. NF-kB, I-kB, et facteur des cellules souches (SCF) /niveaux de protéine c-kit ont été évalués par une analyse par transfert de Western, tandis que l'apoptose des cellules interstitielles de Cajal (ICC) a été évaluée par coloration TUNEL.: Résultats
rats diabétiques curcumine-traités ont montré significativement amélioré les taux de vidange gastrique [(59,4 ± 7,5)%] par rapport aux rats diabétiques [(44,3 ± 5,7) de%], ainsi que des taux réduits de MDA [21,4 ± 1,8 (nmol /mg) vs
27,9 ± 2,1 (nmol /mg)], et augmentation de l'activité de SOD [126,2 ± 8,8 (unités /mg) vs
107,9 ± 7,5 (unités /mg)]. D'autre part, le taux de vidange gastrique chez le groupe témoin n'a pas été significativement différente de celle du groupe témoin recevant un traitement curcumine. En outre, les rats diabétiques curcumine traités ont montré une augmentation significative des niveaux de protéines SCF /c-kit dans les tissus de l'estomac, inhibé la dégradation I-kB et l'activation de NF-kB, et réduction de l'indice ICC de l'apoptose [(26,2 ± 4,1)% vs
(47,5 ± 6,2)%], par rapport au groupe diabétique.
Conclusion
traitement curcumine amélioré la vidange gastrique en bloquant la production du stress oxydatif, l'abolition de NF-kB transduction du signal et l'amélioration de l'expression de SCF /c-kit rats atteints de gastroparésie diabétique.
Mots-clés
curcumine le stress diabétique gastroparésie oxydatifs NF-kB facteur de cellules souches /c-kit cellules interstitielles de Cajal introduction gastroparésie diabétique est une maladie de l'appareil digestif, définie comme la vidange retardée un repas solide, et est vu dans 30-50% des patients diabétiques de type 1 ou diabète de type 2 [1]. Les patients présentent souvent des symptômes gastro-intestinaux supérieurs, tels que la satiété précoce, la perte de poids, ballonnements abdominaux, des douleurs abdominales, des nausées, des vomissements se produisent fréquemment, et dépréciés le contrôle glycémique et la maladie affecte sérieusement la qualité de vie des patients.
Gastroparésie est de plus en reconnu comme un problème de santé important. Bien que la gastroparésie affecte de nombreux diabétiques dans le monde entier, non seulement sont les options de traitement très limitées, mais aussi les traitements qui sont disponibles pour la gastropathie diabétique sont souvent inefficaces. Ceux-ci incluent la thérapie médicale, la stimulation électrique gastrique, le traitement chirurgical, et un soutien nutritionnel. Les médicaments pour la gastroparésie incluent métoclopramide, dompéridone, cisapride, et l'érythromycine. Bien que ces agents ont été utilisés pour le traitement de la gastroparésie, ils ont été décrits comme étant seulement une efficacité limitée et de nombreux patients ne peuvent pas tolérer les cause de leurs effets secondaires. Chez les patients diabétiques atteints de gastroparésie réfractaire à haute fréquence de stimulation électrique par un système gastrique implanté de façon permanente améliorée de façon significative les symptômes du tractus digestif supérieur et représente une thérapie chirurgicale de remplacement pour les patients. Les interventions chirurgicales, telles que la gastrectomie et antrectomie sont la dernière option pour le traitement, étant controversée et a besoin d'une étude plus approfondie [2]. Chez les patients atteints de gastroparésie sévère, mais la motilité intestinale normale, jéjunostomie alimentation par sonde peut être appliquée. Bien que cela apporte un soutien nutritionnel, il ne guérit pas la gastroparésie [3]. gastroparésie diabétique est généralement mieux traitée médicalement, et seuls les patients souffrant de graves gastroparésie diabétique qui n'ont pas répondu à un traitement médical doit être soumis à d'autres thérapies. Ainsi, la recherche de médicaments qui présentent une efficacité dans le traitement de la gastroparésie diabétique est nécessaire.
Gastroparésie diabétique est associée à une perte des cellules interstitielles de Cajal (ICC) chez les humains et les animaux du modèle [4]. CCI peuvent être identifiés dans les tissus par marquage avec des antiserums au kit de tyrosine kinase du récepteur, une protéine exprimée sur CCI. Kit et son facteur de cellules souches de ligand (SCF) sont également des facteurs de survie importants pour ICCs [5]. L'augmentation du stress oxydatif associé au diabète peut entraîner la perte ou l'endommagement de ICCs chez les souris, alors que le stress oxydatif entraîne des dommages et des pertes de réseaux de la CPI et le développement de la vidange gastrique retardée [6]. Le diabète entraîne une augmentation du stress oxydatif et a un rôle important dans la pathogenèse des complications diabétiques [7]. La surproduction d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) conduit à des dommages oxydatifs, notamment une peroxydation lipidique, l'oxydation des protéines et des lésions de l'ADN, ce qui peut conduire à la mort cellulaire. En outre, ERO sont connus pour agir en tant que seconds messagers pour activer des facteurs de transcription tels que le facteur nucléaire kappa B (NF-kB). ERO générée lors d'un stress dans le tissu gastrique peut déclencher l'activation de la cascade de signalisation de NF-kB; En effet, la vidange gastrique chez des rats diabétiques est associée à l'activation de l'inflammation de NF-kB à médiation. Le plus curcumine (1,7-bis (4-hydroxy-3-méthoxyphényl) -1, 6-heptadiène-3,5- dione) est le principal composant actif du curcuma isolé du curcuma plante longa L. curcumine est une molécule multifonctionnelle avec des effets réglementaires importantes sur le cancer [8], l'inflammation [9] et les maladies diabétiques liées comme la rétinopathie diabétique [10], diabétique néphropathie [11] et le diabète dysfonctionnement cognitif [12]. La curcumine est un puissant accepteur d'espèces réactives de l'oxygène et de l'azote tels que les radicaux hydroxyle et les radicaux de dioxyde d'azote [13]. Plusieurs études ont démontré que la curcumine inhibe l'activation de NF-kB voies de signalisation pro-inflammatoires [14]. Pendant ce temps, les facteurs de transcription NF-kB régulent de nombreux processus physiologiques importants, y compris l'inflammation et les réponses immunitaires, la croissance et la survie cellulaire, de sorte que l'inhibition de la signalisation du NF-kB représente une stratégie viable pour le traitement de la maladie [15]. Cependant, il y a eu très peu de recherches sur le potentiel de la curcumine pour traiter la gastroparésie diabétique, ou sur son mécanisme pharmacologique.
Le but de cette étude était de déterminer si, dans un Sprague Dawley (SD) modèle de rat du diabète de type 1 sucré, la dose moyenne [16] curcumine pourrait protéger CCIA chez des rats diabétiques présentant une vidange gastrique en réduisant le stress oxydatif et d'inhiber l'activation de NF-kB, ce qui augmente SCF /expression du kit, et normaliser le retard de la vidange gastrique. Matériaux et méthodes
rats expérimentaux et l'induction de l'Homme des rats SD de diabète (8 semaines) ont été élevés dans le Centre des animaux d'expérimentation, Université médicale chinoise Zhejiang (Hangzhou, Chine), où un particulier exempt d'agents pathogènes (SPF) laboratoire -level a été autorisé par le gouvernement provincial du Zhejiang. Tous les rats étaient logés dans des conditions d'humidité contrôlée (50-60%). Ils ont été maintenus sous une lumière contrôlée (cycle de 12 h de jour /nuit) avec un accès libre à l'eau et rongeur. Toutes les expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec la licence de l'Office de la science et de la technologie la province du Zhejiang (Hangzhou, Chine) et avec l'approbation du comité d'éthique des animaux de l'Université médicale chinoise Zhejiang. Toutes les expériences étaient conformes aux lignes directrices pour la conduite éthique dans les soins et l'utilisation des animaux. Chaque effort a été fait pour réduire au minimum le stress aux animaux.
Rats à jeun pendant 12 h ont été soumis à une seule injection intrapéritonéale de streptozotocine (STZ), 50 mg /kg, fraîchement dissous dans un tampon de citrate de sodium 100 mM à pH 4,5. rats normaux appariés selon l'âge ont reçu un tampon citrate seulement. Développement du diabète a été confirmée par la glycémie à jeun (FBG) niveaux en utilisant un kit de réactifs (Roche, Shanghai, Chine). Les rats ayant des niveaux FBG supérieurs à 11,1 mM (200 mg /dl) à 72 h après l'injection de STZ ont été considérés comme des rats diabétiques. Une fois que les rats sont devenus diabétiques, leur taux de glucose ont été mesurés quotidiennement. Les expériences ont commencé 8 semaines après l'apparition du diabète pour permettre la gastroparésie de se développer.
Conception expérimentale
Huit semaines après l'apparition du diabète, les animaux ont été divisés en quatre groupes, à savoir les rats de contrôle de mâles normaux (groupe I), diabétique masculin rats (groupe II), les rats curcumine supplémenté diabétiques de sexe masculin (Groupe III), et les rats mâles contrôle curcumine supplémenté (groupe IV). Les rats des groupes III et IV (n = 10 chacun) ont été traités quotidiennement avec la curcumine (150 mg /kg, I.G.) pendant 6 semaines. Curcumine (pureté > 95%) à partir de Fusong County Natural Biotechnology Company Ltd. (Jilin, Chine), a été mis en suspension dans 0,5% /v carboxyméthylcellulose sodique (CMC-Na) solution w. Les rats des groupes I et II (n = 10 chacun) ont reçu une solution à 0,5% de CMC-Na seul. Après un traitement pendant 6 semaines, les animaux ont été sacrifiés sous anesthésié à l'éther éthylique, on recueille le sang par saignée de la veine fémorale et le sérum a été séparé. Estomacs ont été rapidement prélevés et des échantillons de tissus prélevés sur des animaux ont été conservés à -80 ° C jusqu'au traitement pour des analyses biochimiques. la vidange gastrique, le stress oxydatif, l'activation de NF-kB, CIEC et SCF /Kit expression dans l'estomac ont également été étudiés à la fin de la sixième semaine de traitement (14 e semaine du diabète).
études vidange gastrique
La méthode standard de préparation d'un repas marqueur rouge de phénol a été utilisé comme décrit précédemment [17]. La vidange gastrique a été déterminée en utilisant une modification d'une procédure précédemment décrite [18]. Les rats ont été libre accès à l'eau jusqu'à 3 h avant l'administration de gavage de la curcumine. Une solution de 0,1% (p /v) de rouge de phénol dans la carboxyméthylcellulose de sodium aqueux (1,5% p /v) a été utilisé comme un repas d'essai. Curcumin a reçu 1 h avant l'administration orale du repas de test. Vingt minutes après l'administration du repas d'essai, les rats ont été sacrifiés. Les estomacs ont ensuite été exposés par laparotomie et enlevés. Les rats traités avec le véhicule (solution saline, une solution de chlorure de sodium à 0,9%, 0,2 ml) ont été sacrifiés immédiatement après l'administration orale du repas d'essai et la teneur en rouge de phénol dans l'estomac a été considéré comme la norme (100%). Les estomacs ont été enlevés incisés dans 40 ml d'une solution de NaOH (0,1 N) et le contenu a été dissous. Une aliquote de 1 ml des solutions de lavage a été ajouté à 2 ml d'acide trichloroacétique (7,5% p /v) pour précipiter les protéines. Après centrifugation (2500 x g
) pendant 20 min, 1 ml du surnageant ont été ajoutés à 1 ml de NaOH (1 N) pour développer l'intensité maximale de la couleur. L'absorbance à 558 nm de la solution a ensuite été mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre (U-1080, Hitachi Ltd., Tokyo, Japon). La vidange gastrique a été calculé selon la formule suivante: La vidange gastrique %
=
1
-
X
/Y
×
100
,
où X est l'absorbance du rouge de phénol restant dans l'estomac 20 minutes après l'administration de phénol rouge et Y est l'absorbance moyenne du rouge de phénol récupéré à partir de l'estomac des souris témoins immédiatement après le phénol administration rouge.
Détermination des niveaux de SOD MDA et dans le muscle lisse de antre gastrique
les estomacs ont été excisés, pesés et immédiatement congelé à -70 ° C. Le tissu congelé de chaque rat a été homogénéisé dans un tampon phosphate glacé (KCl 140 mM, du phosphate 20 mM, pH 7,4) et on centrifuge à 3000 x g pendant 10 min
. Le contenu de malonaldéhyde (MDA), un index pour la peroxydation lipidique, a été déterminée en utilisant la méthode à l'acide thiobarbiturique (TBA) avec de légères modifications [19]. En bref, 100 pi d'homogénat de tissu a été mélangé avec 200 pi de solution de travail contenant 0,37% TBA. Le mélange a été mis à incuber à 100 ° C pendant 15 min et ensuite refroidi. Pour extraire le MDA, 375 ul de n-butanol ont été ajoutés, suivis par tourbillonnement énergiquement pendant 10 s. Après centrifugation, la couche de n-butanol supérieure a été transférée dans un tube de verre. L'absorbance de la phase butanolique a été mesurée à 532 nm. contenu MDA est exprimée sous forme de protéine nmol /mg. Pour la mesure de l'activité SOD, 20 ul d'homogénat de tissu ont été mélangés avec 200 ul de solution de réaction contenant du chlorure de nitrobleu de tétrazolium (NBT, 750 pM) et mises en incubation pendant 20 min à 37 ° C. L'absorbance à 560 nm a été mesurée. L'activité enzymatique est exprimée en unités /g de protéines et 1 unité d'enzyme a été définie comme la quantité d'enzyme requise pour inhiber la réduction du NBT de 50% mesure semi-quantitative de RT-PCR de. SCF et de c-kit The estomac proximal (40-50 mg) a été récoltée et la muqueuse a été enlevée par dissection. Le tissu a été homogénéisée mécaniquement dans des conditions sans RNase et dissociée avec Tripure réactif d'isolement (Roche, Suisse) sur de la glace pendant 5 minutes, et l'ARN total a été extrait selon les instructions du fabricant. L'ARN total a été quantifié par spectrophotométrie à 260 et 280 nm, le rapport A260 /A280 allant de 1,8 à 2,0. l'intégrité de l'ARN a été vérifiée par électrophorèse sur gel d'agarose, suivie par au bromure d'éthidium et l'ARN a été utilisé pour la transcription inverse immédiatement ou stockés à -80 ° C dans de l'eau sans RNase. Deux étapes de réaction en chaîne de la transcriptase inverse-polymérase (RT-PCR) a été réalisée en utilisant le kit Revertra as-α- synthèse du premier brin d'ADNc (Tiangen Biotech, Beijing, Chine) et 2 × Taq PCR Master Mix (Tiangen Biotech), selon les instructions du fabricant. Un montant fixe de l'ARN (0,5 pg) était une transcription inverse. Glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) a été choisi comme étalon interne. Toutes les amorces de PCR ont été conçus et synthétisés par Biosune (Shanghai, Chine). Les séquences d'amorces et les longueurs des produits de PCR sont les suivantes: GAPDH, en avant: 5 '- GACAACTITG-GCATCGTGGA-3 ', inverse: 5 '- ATGCAGGGATGATGT-TCTGG-3 ' , 150 pb; SCF, avant: 5 '- GGA CTT CAT GGT GGC ATC TG-3 ', inverse: 5 '- GCC CTT GTA AGA CTT GAC TG-3 ', 285 pb; et c-kit, avant: 5 '- GTG GTT AAA GGA AAC GCT CG-3 ', inverse: 5 '- CAT ACA TTT CAG CAG GTG CG-3 ', 400 pb. Les conditions de réaction ont été optimisées pour chacun des gènes en faisant varier la température de recuit (58 ° C pour GAPDH, 58 ° C pendant EFC et 62 ° C pour c-kit) et un nombre différent de cycles de PCR [20]. Les produits de PCR ont été séparés sur des gels à 2% d'agarose à 100 V pendant 30 minutes. images de gel ont été affichés sur le liquide moniteur d'un système PhotoDoc-Ite ultraviolet transillumination équipé d'une caméra CCD affichage à cristaux (Bio-Rad Gel Doc 2000, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) et conservé pour l'analyse de l'intensité. Les niveaux d'ARNm relatifs des gènes sélectionnés ont été calculés comme le rapport à l'expression de GAPDH.
Niveaux de SCF, c-Kit, IKB et NF-kB évalués par une analyse Western blot
Environ 50 mg de tissu a été prise à partir de la estomac près proximale. Les tissus ont été coupés en petits morceaux d'environ 0,25 cm 3, homogénéisé, et dissociées de la radio-immunoprécipitation dosage tampon de lyse (Hushang biotechnologie, Shanghai, Chine), contenant tris 50 mM, NaCl 150 mM, 1% de NP-40, 0,5% de désoxycholate de sodium, 1% de dodécylsulfate de sodium, 1 mM de PMSF, orthovanadate de sodium, le fluorure de sodium, l'acide éthylènediaminetétraacétique, et leupeptine à 4 ° C pendant 30 minutes. Les homogénats ont été centrifugés à 12 000 x g
pendant 5 minutes à 4 ° C et les surnageants ont été recueillis et utilisés en tant que protéine totale. Des quantités égales de protéines ont été soumis à une électrophorèse par SDS-PAGE à 10% ou 15% de gels de polyacrylamide. Les protéines ont été transférées sur des membranes de nitrocellulose (Hushang Biotechnologie) par semidry blot. Les membranes ont été bloquées avec une solution saline tamponnée au Tris 0,1% de Tween 20 (TBST) contenant 5% de lait pendant 60 minutes à la température ambiante, puis immuno- buvardés avec des anticorps primaires dilués de manière appropriée à 4 ° C pendant une nuit. Après lavage trois fois avec du TBST, les transferts ont été mises en incubation avec un anticorps secondaire conjugué à HRP pendant 60 minutes à température ambiante. Ensuite, les complexes ont été visualisées en utilisant un système d'imagerie iChemi XR (WD9431A, Bomeike Biotechnology, Chine) avec des réactifs de chimioluminescence (Tigsun sciences biologiques Technologie, Tianjin, Chine). Semi-quantification a été réalisée en utilisant le logiciel Quantity One, Version 4.6.2 (Bio-Rad). Les anticorps suivants ont été utilisés: anti-SCF, 1: 200, c-kit, 1: 200, anti-IKB et anti-NF-kB p65 et GAPDH, 1:. 500 (Hushang biotechnologie, Shanghai, Chine)
la quantification de NF-kB par un dosage de liaison -ADN de décalage de mobilité électrophorétique
des extraits nucléaires ont été préparés à partir de lysats de l'estomac comme décrit précédemment [21]. l'activation de NF-kB a été déterminée par un essai de décalage de mobilité électrophorétique (EMSA), et la translocation nucléaire de NF-kB a été évaluée comme décrit précédemment (GS009, Beyotime Institut de Biotechnologie, Shanghai, Chine) [22]. Pour le NF-kB réactions de liaison, 5 pg d'extrait de protéine nucléaire a été incubée à température ambiante pendant 20 min avec un tampon de réaction contenant 20 mM de HEPES, pH 7,9, KCl 50 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, glycerol à 5%, à 200 pg /ml de BSA et 2 pg de poly (dl-dC). oligonucléotide double brin puis, marqué au 32P (1 ng ≥1 x 105 cpm) contenant la séquence consensus de liaison du NF-kB (5 '- GGCAACCTGGGGACTCTCCCTTT-3 ') a été ajouté au mélange réactionnel pendant 10 min supplémentaires à température ambiante. Les produits réactionnels ont été fractionnés sur un gel de Polyacrylamide à 6% non dénaturant pendant 60 minutes à 350 V, qui est ensuite séché et soumis à une autoradiographie à -70 ° C pendant une nuit. Pour les essais de compétition, l'oligonucléotide en excès (excès molaire de 100 fois) compétiteur est pré-incubées avec des extraits nucléaires pendant 20 min à température ambiante. Un mutant oligonucléotide NF-kB (5 '- GGCAACTGCTCACTCTCCCTTT-3 ') a été utilisé pour l'essai de compétition. Les signaux ont été densitométrie analysés.
Double immunofluorohistochemistry avec désoxynucléotidyl transférase terminale médiée dUTP-biotine nick étiquetage fin dosage (TUNEL) et c-kit coloration
Fluorescence immunohistochimie pour c-kit (en utilisant l'anticorps de Santa Cruz) et TUNEL la coloration a été effectuée sur des coupes de 10 pm en utilisant une modification de la procédure publiée par le fabricant du kit TUNEL (TACS STDT, Trevigen Inc., Gaithersburg, MD). cellules TUNEL-positives ont été marqués avec de la fluorescéine (Ex 488, Em 505-550), les cellules c-kit-positives ont été marquées avec Cy3 (Ex 543, Em 560-615), et les noyaux ont été marqués avec DAPI (Ex 364, Em 385 -470). Les échantillons de tissus sont noyés dans un milieu de montage de fluorescence et examinées par microscopie confocale à balayage laser [23]. Environ 200 cellules ont été comptées par champ, cinq domaines ont été examinés par diapositive et cinq lames ont été examinées par groupe. Les pourcentages de TUNEL- et des cellules apoptotiques c-kit-positif ont été notés comme l'indice apoptotique (AI) (en%). Analyse statistique

Toutes les données sont présentées sous forme de moyenne ± SD. Pour comparer les données entre les groupes d'animaux, analyse unilatérale de la variance (ANOVA à une voie) et des comparaisons Duncan ont été employés. Tous les tests statistiques ont été effectuées en utilisant SPSS pour Windows, version 13.0 (SPSS Inc, Chicago, IL). Les différences ont été considérées comme statistiquement significatives au P
< Résultats Effet de
0,05. De la curcumine sur le poids corporel et la glycémie du plasma des taux de glucose des rats diabétiques ont été très élevée chez les rats diabétiques (groupe II) [(322 ± 41) mg /dl] par rapport à celles chez les rats normaux de contrôle (groupe I) [(98 ± 12) mg /dl]. Il y avait une baisse marquée du poids corporel du groupe rats II [(298 ± 16) g] par rapport aux rats appariés selon l'âge du groupe I [(449 ± 21) g]. Chroniques rats diabétiques curcumine traités (Groupe III) ont montré aucune amélioration significative du poids corporel et aucune baisse des niveaux de glucose dans le plasma par rapport au groupe II rats [Groupe III, le poids corporel (324 ± 19) g et de glucose (302 ± 38) mg /groupes
Groupe dl] (tableau 1) .Table niveau de glucose sanguin 1 et le poids corporel en quatre groupes I

Groupe II
Groupe III

Groupe IV
glycémie (mg /dl)
98 ± 12
322 ± 41 *
302 ± 38 * #
100 ± 11
poids corporel ( g)
449 ± 21
298 ± 16 *
324 ± 19 *
476 ± 27
Groupe I = rats témoins normaux; Groupe II = rats témoins diabétiques; Groupe III = + diabétique chez les rats traités curcumine (150 mg /kg); Groupe IV = rats traités par curcumine normaux + (150 mg /kg). Les résultats sont présentés sous forme de moyenne ± écart-type. * P
< 0,05 (par rapport au groupe I), #P
> 0,05 (par rapport au groupe II) Effet de la curcumine sur la vidange gastrique
vidange gastrique a été significativement retardé chez les rats SD ayant un diabète pendant 8 semaines. . La quantité de la vidange gastrique du groupe II était de 44,3 ± 5,7%, ce qui était significativement inférieur à celui du groupe I [(76,2 ± 4,3)%, P
< 0,01], et les rats diabétiques soumis à un traitement de curcumine [(groupe III) ,; (59,4 ± 7,5)%, P
< 0,05]. Cependant, aucune différence significative n'a été observée entre le groupe I et les rats du groupe IV [(73,3 ± 5,2%), P
> 0,05] (figure 1). Figure 1 Effets de la curcumine sur la vidange gastrique chez des rats diabétiques. I = groupe de rats témoins normaux (n = 10); : Groupe II = rats témoins diabétiques (n = 10); : Groupe III = diabétique + curcumine chez les rats traités (n = 10); : Groupe IV = + curcumine normale chez les rats traités (n = 10). Toutes les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type. * P
< 0,01 (par rapport au groupe I), # p
< 0,05 (par rapport au groupe II), Dp
>.
Traitement curcumine 0,05 (par rapport au groupe I) a diminué la formation de MDA, augmente l'activité de la SOD
Nous avons étudié le stress oxydatif en utilisant plusieurs méthodes parce que le stress oxydatif induite par le glucose a été postulé comme un mécanisme clé dans les complications diabétiques chroniques. Les rats diabétiques présentaient une augmentation des taux de MDA [Groupe I 15,7 ± 1,7 (nmol /mg) vs
Groupe II 27,9 ± 2,1 (nmol /mg), P = 0,006
] et une diminution des niveaux de SOD [Groupe I 146,2 ± 9,3 ( u /mg) vs
Groupe II 107,9 ± 7,5 (u /mg), P
= 0,008], un marqueur moléculaire du stress oxydatif (Figure2). Six semaines de traitement par la curcumine ont réduit le degré de MDA upregulation [Groupe III 21,4 ± 1,8 (nmol /mg), P = 0,033
par rapport au groupe I et P
= 0,004 par rapport au groupe II], et l'amélioration de la SOD vers le bas -Règlement [Groupe III 126,2 ± 8,8 (unités /mg), P = 0,036
par rapport au groupe I et P
= 0,001 par rapport au groupe II]. La curcumine a considérablement amélioré l'activité SOD et réduit les niveaux de MDA dans des homogénats d'estomac. En outre, aucune différence significative n'a été observée entre le groupe I et les animaux du groupe IV (P
> 0,05; Figure2). Figure 2 Effets de la curcumine sur MDA et SOD chez les rats diabétiques. Les niveaux de MDA a diminué après traitement avec la curcumine, le niveau de la SOD a été augmentée après traitement avec la curcumine. : Groupe I = rats témoins normaux (n = 10); : Groupe II = rats témoins diabétiques (n = 10) Groupe III = diabétique + curcumine chez les rats traités (n = 10); : Groupe IV = + curcumine normale chez les rats traités (n = 10). Toutes les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type * p
. ≪ 0,01 (par rapport au groupe I), # p
< 0,01 (par rapport au groupe II), Dp
> 0,05 (par rapport à groupe I).
curcumine augmente SCF et niveaux de protéine c-kit
images représentatifs de l'analyse par RT-PCR de SCF dans les tissus de l'estomac de rats dans chaque groupe sont présentés dans Figure3A. En comparaison avec le groupe I, l'EFC était significativement plus faible dans le groupe II [(0,44 ± 0,02) vs
(0.69 ± 0.03), P = 0
.002], et une comparaison des valeurs du groupe III ont révélé que niveau SCF chez les rats traités par la curcumine est supérieure à celle du groupe II [(0,58 ± 0,04) par rapport
(0,44 ± 0,03) P = 0
0,003]. Cependant, aucune différence n'a été notée entre les groupes I et IV [(0.69 ± 0.03) vs
(0,66 ± 0,03) P
= 0,56] (Figure3B). Western blot analyse (Figure4A, B) a révélé que le niveau de l'EFC dans les tissus de l'estomac des rats du groupe II était significativement plus faible que ceux des rats du groupe I et III [ratios de (0,33 ± 0,02) vs
(0,47 ± 0,03) et (0,41 ± 0,02), respectivement, P
< 0 .05)]. Cependant, aucune différence significative n'a été observée entre le groupe IV et les rats du groupe I [(0,45 ± 0,03) vs
(0,47 ± 0,03), P
> 0,05)], ce qui suggère que l'intervention de la curcumine pourrait effectivement rétablir les niveaux locaux de protéine SCF dans les tissus de l'estomac de rats diabétiques. Figure 3 Changement SCF /GAPDH et C-kit /GAPDH par analyse RT-PCR. (A) Des images représentatives de l'électrophorèse sur gel de GAPDH, du SCF, et c-kit chez les rats de chaque groupe. niveaux (B) Groupe d'expression de l'ARNm relative de l'EFC et de c-kit, avec des produits quantifiés par rapport à GAPDH. : Groupe I = rats témoins normaux (n = 10); : Groupe II = rats témoins diabétiques (n = 10); : Groupe III = diabétique + curcumine chez les rats traités (n = 10); : Groupe IV = + curcumine normale chez les rats traités (n = 10). Toutes les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type. * P
< 0,01 (par rapport au groupe I.), # p
< 0,05 (par rapport au groupe II), Dp
>. 0,05 (par rapport au groupe I)
Figure 4 Les changements dans l'EFC /GAPDH et C-kit /GAPDH par analyse par Western blot. (A) images de la bande de protéines représentant du SCF, c-kit, et glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH). niveaux (B) Groupe de SCF relative et la protéine c-kit exprimé par rapport à GAPDH, respectivement. : Groupe I = rats témoins normaux (n = 10); : Groupe II = rats témoins diabétiques (n = 10); : Groupe III = diabétique + curcumine chez les rats traités (n = 10); : Groupe IV = + curcumine normale chez les rats traités (n = 10). Toutes les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type. * P
< 0,01 (par rapport au groupe I), # p
< 0,01 (par rapport au groupe II), Dp
>. 0,05 (par rapport au groupe I)
RT-PCR analyse a montré que les niveaux d'expression de c-kit dans les tissus de l'estomac ont été de 0,78 ± 0,04, 0,37 ± 0,02 et 0,59 ± 0,03 pour les groupes I, II et III, respectivement. Les niveaux c-kit expression des groupes II et III des rats ont été plus faibles que chez les rats du groupe I. Toutefois, une comparaison des groupes II et III ont révélé que le niveau de c-kit chez les rats traités par la curcumine est supérieure à celle chez les rats diabétiques non traités (P
< 0,05, Figure3B). Des résultats similaires ont été mises en évidence par l'analyse western blot (Figure4B). Les niveaux de la protéine c-kit (ratios de 0,45 ± 0,03, 0,21 ± 0,02 et 0,34 ± 0,02, respectivement, pour les groupes I, II et III) étaient beaucoup plus dans le groupe III que dans le groupe II (P
< 0 .05, Figure4B), et le niveau dans le groupe III était inférieur à celui des groupes I et IV. Les deux analyses ont montré que 6 semaines d'intervention de la curcumine pourrait rétablir de manière significative la diminution des niveaux de c-kit chez les rats diabétiques.
Curcumine inhibe la dégradation I-kB et l'activation de NF-kB
Les rapports indiquent que l'augmentation chronique et le stress oxydatif peut activer ou perturber l'activité de NF-kB [24]. Nous avons étudié si la curcumine pourrait entraîner une activation de la voie de signalisation NF-kB. Pour ce faire, nous avons mesuré les niveaux de NF-kB, en présence ou en l'absence de la curcumine pour déterminer si le NF-kB était activé. Tout d'abord, nous avons évalué les niveaux de I-kB protéine, à laquelle inactivé NF-kB se lie. Nous avons constaté que le niveau de l'I-kB chez les rats du groupe I était plus élevé que chez les rats du groupe II, tandis que le taux chez les rats du groupe III est plus faible que chez les rats du groupe II (p < 0,01), mais plus élevés que les niveaux de Groupes I et IV rats (p < 0,05). Ensuite, nous avons examiné si la curcumine pourrait bloquer le NF-kB. Nous avons constaté que le diabète (groupe II) a conduit à une augmentation des niveaux de NF-kB [Groupe I 75,5 ± 7,7 (pg /ml) contre
Groupe II 102,8 ± 12,4 (pg /ml), P = 0,001
] , tandis que le traitement avec la curcumine [Groupe III 91,3 ± 8,9 (pg /ml)] a empêché cet effet. Sur la base de cette constatation, nous avons suggéré que la curcumine supprime l'activation de NF-kB [Groupe IV 70,9 ± 8,1 (pg /ml), P = 0,026
] (Figure5). Nous avons examiné si la curcumine pourrait bloquer la translocation de NF-kB dans le noyau, car la translocation nucléaire est reconnue comme étant une réaction de la cellule à ERO stimulation et semble être en corrélation avec l'activation transcriptionnelle de NF-kB à médiation. Afin d'évaluer cela, nous avons mesuré le taux de NF-kB dans le noyau par EMSA. Le développement du diabète induit une augmentation des taux de NF-kB dans le noyau, tandis que le traitement avec la curcumine empêche cet effet (Figure 6). Ainsi, nous avons suggéré que la curcumine supprime non seulement indirectement l'activation de la liaison de NF-kB-ADN, mais qu'elle supprime aussi l'activation en amont de la I-kB. Figure 5: Effet de la curcumine sur la I-kB et NF-kB. (A) le graphique à barres était clair reflet du niveau de I-kB et NF-kB parmi les quatre groupes. (B) au niveau de l'I-kB /GAPDH a été diminuée dans le Groupe II, mais a augmenté de curcumine. I: I = groupe de rats témoins normaux (n = 10); II: Groupe II = rats témoins diabétiques (n = 10); III: Groupe III = diabétique + curcumine rats traités (n = 10); IV: Groupe IV = + curcumine normale chez les rats traités (n = 10). Toutes les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type * p
. ≪ 0,01 (par rapport au groupe I), # p
< 0,01 (par rapport au groupe II), Dp
> 0,05 (par rapport à Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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