A kurkumin növeli kifejezése SCF /c-kit segítségével enyhítő oxidatív stressz és az NF-kB aktiváció gyomor szöveteiben diabéteszes gastroparesis patkányok

A kurkumin javítja expresszióját SCF /c-kit keresztül enyhítő oxidatív stressz és az NF-kB aktiválás a gyomor szöveteinek diabéteszes gastroparesis patkányok
Abstract
alapon
diabetes mellitus társul sokféle komplikáció. A legújabb vizsgálatok kimutatták, hogy az oxidatív stressz és a gyulladásos reakciókat kritikus szerepet patogenezisében diabéteszes gastroparesis. Kurkumint ismert, hogy antioxidáns és gyulladásgátló tulajdonságokkal rendelkezik. A jelen tanulmányban vizsgáltuk a hatását a kurkumin diabeteses gyomor motilitását egy Sprague-Dawley patkány modellben 1. típusú diabetes mellitus.
Módszerek
hím SD patkányokat osztva egy kontroll csoport, egy kapott kontrollcsoporttal kurkumin, cukorbeteg-csoport, és egy diabéteszes csoport fogadására kurkumin. Diabetes indukáltunk intraperitoneális injekció streptozotocin. A kurkumin (150 mg /kg) kapott, gyomron 6 hétig, és a vér glükóz szintjét és a testtömeget mértük. Gyomrot kimetsszük elemzésére gyomor kiürülését arányok, és szintek oxidatív stresszt. NF-kB, I-kB, és az őssejt faktor (SCF) /c-kit-protein szintje értékelték Western blot analízissel, míg a apoptózis a kötőszöveti sejtek Cajal (ICC) értékelték TUNEL-festéssel.
Eredmények
kurkuminnal kezelt diabéteszes patkányokban szignifikánsan javította a gyomor kiürülési sebessége [(59,4 ± 7,5)%] összehasonlítva diabéteszes patkányokban [(44,3 ± 5,7)%], valamint a csökkent szintje MDA [21,4 ± 1,8 (nmol /mg) vs katalógusa 27,9 ± 2,1 (nmol /mg)], és a megnövekedett SOD aktivitás [126,2 ± 8,8 (egység /mg) vs katalógusa 107,9 ± 7,5 (egység /mg)]. Másrészt, a gyomorürülés szint a kontroll csoportban nem volt szignifikánsan különbözik, hogy a kontroll csoport fogadására kurkumin kezelést. Ezen túlmenően, a kurkumin kezelt diabéteszes patkányok szignifikánsan megnövekedett SCF /c-kit fehérje gyomor szövetekben gátolja I-kB degradáció és az NF-kB aktiválását, és csökkent az ICC apoptózis index [(26,2 ± 4,1)% vs katalógusa (47,5 ± 6,2)%], míg a diabéteszes csoportban.
Következtetés
kurkumint kezelés javította gyomorürülés blokkolja a termelés az oxidatív stressz, megszüntetve az NF-kB jelátvitel és expressziójának fokozásával SCF /c-kit-ben patkányok diabéteszes gastroparesis. katalógusa Kulcsszavak katalógusa kurkumin diabéteszes gastroparesis oxidatív stressz NF-kB őssejt faktor /c-kit interstitialis sejtek Cajal Bevezetés katalógusa diabéteszes gastroparesis olyan betegség az emésztőrendszer, amelyek a késleltetett kiürülése egy szilárd étkezés, és látható a 30-50% -ánál 1. típusú vagy 2. típusú diabetes mellitus [1]. A betegek gyakran jelen felső gyomor-bélrendszeri tünetek, mint például a korai jóllakottság, fogyás, hasi puffadás, hasi diszkomfort, hányinger, hányás gyakran előfordul, és a károsodott glikémiás kontroll, és a betegség súlyos hatással van a betegek életminőségét.
Gastroparesis egyre inkább elismert jelentős egészségügyi probléma. Bár gastroparesis érint sok cukorbetegek világszerte, nem csak a kezelési lehetőségek nagyon korlátozottak, de a kezelések, amelyek elérhetők a diabéteszes gyomorbántalma gyakran hatástalan. Ezek közé tartozik az orvosi kezelés, gyomor elektromos stimuláció, sebészeti kezelés, valamint táplálkozási támogatást. Gyógyszereket gastroparesis metoklopramid, domperidon, ciszaprid, és eritromicin. Bár ezek a szerek már kezelésére használt gastroparesis, azok számoltak be, hogy csak korlátozott hatásosság, és sok beteg nem tolerálja őket, mert a mellékhatások. A diabéteszes betegeknek refrakter gastroparesis, nagyfrekvenciás gyomor elektromos stimulálása által tartósan beültetett rendszer jelentősen javult emésztőrendszer felső tünetek és alternatívát jelent sebészi kezelés a betegek számára. Műtéti eljárások, mint például a gastrectomia és antrectomy az utolsó lehetőség a kezelés, hogy ellentmondásos és szükségük van a több tanulmány [2]. Súlyos gastroparesis, de normális kis bélmotilitás, jejunostomia szondatáplálást lehet alkalmazni. Míg ez biztosítja táplálkozási támogatás, nem gyógyítja gastroparesis [3]. A diabéteszes gastroparesis általában legjobban kezelni gyógyszeresen, és csak súlyos diabéteszes gastroparesis, akik nem reagálnak a gyógyszeres kezelés alá kell vetni más terápiák. Így, megállapítva, gyógyszerek, amelyek azt mutatják, hatásosság a diabetikus gastroparesis szükséges.
Diabéteszes gastroparesis társul veszteséggel intersticiális sejtek Cajal (ICC) mind az emberek és a modell állatok [4]. Az ICC-k lehet azonosítani szöveti címkézéssel antiszérummal a receptor tirozin-kináz-készlet, egy kifejezett fehérje a ICC. Kit és ligandu őssejt faktor (SCF) is fontosak túlélési tényezőinek ICC [5]. A fokozott oxidatív stressz, cukorbetegséggel összefüggő elvesztéséhez vezethet vagy sérülése ICC egerekben, míg az oxidatív stressz károkat okoz és a veszteség az ICC hálózatok és a fejlesztés a késleltetett gyomorürülés [6]. Diabetes eredményez fokozott oxidatív stressz, és fontos szerepe van a diabetikus komplikációk [7]. Túltermelése a reaktív oxigéngyökök (ROS) eredménye az oxidatív károsodás, beleértve a lipid peroxidáció, fehérje oxidáció, és DNS-károsodást, ami oda vezethet, hogy a sejthalált. Továbbá, ROS ismert, hogy működnek a második hírvivők, hogy aktiválja a transzkripciós faktorok, mint a nukleáris faktor kappa B (NF-kB). ROS során keletkező stressz gyomor szöveti kiválthatják az aktiválás az NF-kB jelátviteli kaszkád; Valóban, gyomorürülés diabéteszes patkányokban aktiválódásával van összefüggésben az NF-kB-mediált gyulladás.
kurkumint (1,7-bisz (4-hidroxi-3-metoxi-fenil) -1, 6-heptadién-3,5- dion) a fő aktív komponense kurkuma izolált növényi curcuma longa L. kurkumin egy többfunkciós molekula jelentős szabályozó hatást gyakorol a rák [8], a gyulladás [9] és a diabétesszel kapcsolatos betegségek, például diabéteszes retinopátia [10], diabetikus nephropathia [11], és a cukorbetegség a kognitív diszfunkció [12]. A kurkumin egy erős scavenger a reaktív oxigén és nitrogén gyökök, mint a hidroxil-gyökök és a nitrogén-dioxid-gyökök [13]. Számos tanulmány igazolta, hogy a kurkumin gátolja NF-kB pro-gyulladásos jelátviteli útvonalak [14]. Eközben az NF-kB transzkripciós faktorok szabályozzák számos fontos fiziológiai folyamatok, beleértve a gyulladás és immunreakciók, a sejtek növekedését és túlélését, így gátolja a NF-kB jelátvitel jelent életképes stratégiát betegség terápia [15]. Vannak azonban már nagyon kis kutatást a potenciális kurkumin a diabetikus gastroparesis, vagy annak farmakológiai mechanizmus.
A tanulmány célja az volt, hogy megvizsgáljuk, a Sprague Dawley (SD) patkány modellben 1. típusú diabétesz mellitus, középső dózisú [16] kurkumin megvédheti ICC diabéteszes patkányokban a késleltetett gyomorürülés az oxidatív stressz csökkentésével és gátolja az NF-kB aktiválás, a növekvő SCF /kit-expresszió, és normalizálja a késleltetés a gyomor kiürülését.
anyagok és módszerek
Kísérleti patkányok és indukciós cukorbetegség katalógusa hím SD patkányokat (8 hetes kortól) tenyésztettek a központ kísérleti állatok, Zhejiang kínai Orvosi Egyetem (Hangzhou, Kína), ahol egy speciális kórokozóktól mentes (SPF) szintű laboratórium által engedélyezett a Zhejiang tartományi kormány. Minden patkányokat körülmények között szabályozott nedvességtartalmú (50-60%). Voltak tartva szabályozott fény (12 óra nappal /éjszaka ciklus) szabad hozzáféréssel a vízhez és rágcsálótáphoz. A kísérleteket végeztünk összhang engedélyt a Zhejiang tartomány Tudományos és Technológiai Hivatal (Hangzhou, Kína) és jóváhagyásával az állati etikai bizottság a Zhejiang Kínai Orvosi Egyetem. Minden kísérletet megfelelt a vonatkozó iránymutatások etikus magatartás a gondozás és az állatok felhasználását. Minden erőfeszítést tettek, hogy minimalizálja a stressz az állatoknak.
Patkányokat éheztettünk 12 órán vetettük alá egy egyetlen intraperitoneális injekcióban, streptozotocin (STZ), 50 mg /kg-os, frissen oldottunk 100 mM nátrium-citrát puffer, pH = 4,5. Korban illesztett normál patkányok citrát puffer csak. Diabétesz kialakulását igazoltuk éhomi vércukorszint (FBG) szintek segítségével reagenskészlet (Roche, Shanghai, Kína). A patkányokat az FBG-szinteket magasabb, mint 11,1 mM (200 mg /dl) után 72 órával az STZ injekció tekintettük diabéteszes patkányokban. Miután a patkányok vált a diabetikus, a glükóz szinteket naponta mértük. Kísérletek megkezdett után 8 héttel a diabétesz kialakulását, hogy lehetővé tegye gastroparesis, hogy dolgozzon.
Kísérleti elrendezés
követően nyolc héttel a diabétesz kialakulását, az állatokat négy csoportra osztottuk, azaz normál kontroll hím patkányokat (I. csoport), a diabetikus hím patkányokat (II csoport), a kurkumin kiegészített diabetikus hím patkányokat (Group III), és a kurkumin kiegészített kontroll hím patkányokat (Group IV). Patkányok csoportokban a III és IV (n = 10 mindegyik) naponta kezeltünk a kurkumin (150 mg /kg; I. G.) 6 héten át. A kurkumin (tisztaság 95%) ebből Fusong County Natural Biotechnology Company Ltd. (Jilin, Kína), szuszpendálunk 0,5 tömeg /térfogat% nátrium-karboxi-metil-cellulóz (CMC-Na) oldatban. Patkányok csoportokban az I. és II (n = 10 mindegyik) kapott 0,5% -os CMC-Na a megoldás csak. A kezelés után 6 hétig, az állatokat leöltük alatt etil-éter érzéstelenítés vért összegyűjtjük femorális vénába vérzés és a szérumot elválasztjuk. Gyomrokat gyorsan eltávolítjuk, és a szöveti mintákban állatokat tároltuk -80 ° C hőmérsékleten, amíg feldolgoztuk biokémiai vizsgálatok. Gyomorürülés, oxidatív stressz, NF-kB aktiválás, ICC-k és az SCF /Kit expresszió gyomrukat is vizsgáltuk a végén a hatodik hét kezelés (14 hetes diabetes).
Gyomorürülés tanulmányok
A standard módszer előállítására fenol vörös marker étkezés alkalmaztunk a korábban leírtak szerint [17]. Gyomorürülés alkalmazásával határoztuk meg módosításával egy korábban ismertetett eljárással [18]. A patkányokat hagyjuk szabadon hozzáfértek vízhez, amíg 3 óra előtt gyomorszondán át beadása kurkumin. Ezután 0,1% -os (w /v) fenolvörös vizes nátrium-karboxi-(1,5 w /v%) használtunk, mint egy teszt étkezés. A kurkumin kapott 1 óra előtt orális beadása a vizsgálati étkezés. Húsz perccel a beadás után a vizsgálati étkezés, a patkányokat leöltük. A gyomrot majd kitéve hasfelmetszéssel és eltávolítjuk. Patkányokat kezeltünk a vivőanyaggal (fiziológiás sóoldat, 0,9% -os nátrium-klorid-oldattal, 0,2 ml) leöltünk azonnal orális beadása után a kísérleti táplálék és a fenolvörös-tartalmát a gyomorban tekintették, mint a standard (100%). Az eltávolított gyomrokat metszeni 40 ml nátrium-hidroxid-oldatot (0,1 N), és a tartalmát feloldottuk. 1 ml-es aliquot részt a mosó oldatokat adunk 2 ml triklór-ecetsav (7,5% tömeg /térfogat), hogy kicsapjuk a fehérjék. Centrifugálás után (2500 × g
) 20 perc, 1 ml felülúszót adunk 1 ml nátrium-hidroxid (1 n), hogy a maximális intenzitás a színe. Az abszorbanciát 558 nm-nél az oldatot ezután mérjük spektrofotométer (U-1080; Hitachi Ltd., Tokió, Japán). A gyomor ürülését számoltuk az alábbi képlet: a gyomor ürülését % katalógusa = katalógusa 1 katalógusa - www.Booked.hu X katalógusa /katalógusa Y
×
100
,
ahol X a abszorbancia fenolvörös maradék a gyomorban 20 perc után fenolvörös beadás, és Y jelentése az átlagos abszorbancia fenolvörös felépült a gyomor kontroll egerek után azonnal fenolvörös beadásra.
meghatározása MDA és SOD szintje simaizom gyomor- antrum katalógusa a gyomrukat kivágtuk, lemértük, és azonnal lefagyasztottuk -70 ° C-on. Fagyasztott szöveti mindegyik patkányból homogenizáltunk jéghideg foszfát-puffer (KCl 140 mM, foszfát, 20 mM, pH 7,4), és centrifugáltuk 3000 x g katalógusa 10 percig. A tartalom malonaldehidkeletkezést (MDA), egy indexet lipid peroxidációt, meghatároztuk a tiobarbitursav (TBA) módszer enyhe módosításával [19]. Röviden, 100 ul szövet homogenizátumot összekevertük 200 pl munka oldatot, amely 0,37% -os TBA-. A keveréket inkubáljuk 100 ° C-on 15 percig, és ezt követően lehűtjük. A kivonat MDA, 375 ul N-butanolt adunk hozzá, majd vortexeléssel erőteljesen 10 s. Centrifugálás után a felső n-butanol fázist átvittük egy üvegcsőbe. Abszorpciós butanolos fázist mérve 532 nm-en. MDA-tartalma fejezzük nmol /mg fehérje. Mérésére SOD aktivitás 20 ul szöveti homogenizátumot összekevertük 200 pl reakció-oldatot, amely nitrokék-tetrazolium-klorid (NBT, 750 uM), és inkubáltuk 20 percen át 37 ° C-on. Az abszorbanciát 560 nm-en mértük. Az enzimaktivitást fejezzük egység /g fehérje és 1 egység enzimet úgy definiáltuk, mint az az enzimmennyiség, gátlásához szükséges csökkentésének NBT 50% -kal.
Szemikvantitatív RT-PCR-mérés az SCF és a c-kit
proximális gyomor (40-50 mg) összegyűjtöttük, és a nyálkahártya eltávolítjuk boncolás. A szövetet mechanikusan homogenizáltuk alatt RNáz-mentes körülmények között és disszociáltunk Tripure izolációs reagenssel (Roche, Svájc) jégen 5 percig, és a teljes RNS-t extraháltunk a gyártó utasításai szerint. Teljes RNS-t mennyiségileg spektrofotometriával 260 és 280 nm-en, az A260 /A280 arány kezdve 1,8-2,0. RNS sértetlenségét igazoltuk agaróz gél elektroforézissel, majd etídium-bromid-festéssel, és az RNS-t használjuk az azonnali reverz transzkripciót vagy -80 ° C-RNáz-mentes vízben. Kétlépcsős reverz transzkriptáz-polimeráz láncreakció (RT-PCR) alkalmazásával hajtottuk végre a Revertra ACE-α- első szál cDNS-szintetizáló készlet (Tiangen Biotech, Beijing, China) és 2 × Taq PCR Master Mix (Tiangen Biotech) szerint a a gyártó utasításai szerint. A fix összegű RNS (0,5 ng) szerint reverz transzkripció. Gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH) választották belső standardként. Minden PCR-primereket terveztünk és szintetizáltunk Biosune (Shanghai, Kína). A primer szekvenciák és hosszúságú PCR-termékek a következők: GAPDH, előre: 5 '- GACAACTITG-GCATCGTGGA-3 "fordított: 5 ' - ATGCAGGGATGATGT-TCTGG-3 ' , 150 bp; SCF, előre: 5 '- GGA CTT CAT GGT GGC ATC TG-3 "fordított: 5 ' - GCC CTT GTA AGA CTT GAC TG-3 ', 285 bp; és c-kit, előre: 5 '- GTG GTT AAA GGA AAC GCT CG-3 "fordított: 5 ' - CAT ACA TTT CAG CAG GTG CG-3 ', 400 bp. Reakciókörülményeket optimalizálva egyes gének változtatásával a lágyítási hőmérséklet (58 ° C-GAPDH, 58 ° C-on SCF, és 62 ° C-on c-kit), és különböző számú PCR ciklusok [20]. A PCR-termékeket elkülönítettük 2% -os agaróz gélen, 100 V-on 30 percig. Gel kép jelenik meg a folyadékkristályos kijelző monitor egy ultraibolya átvilágítás PhotoDoc-Ite rendszerrel ellátott CCD kamerával (Bio-Rad Gel Doc 2000. Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), és őrizni intenzitás elemzést. A relatív mRNS-szintje a kiválasztott gének hányadosaként számítottuk ki, hogy a GAPDH kifejezést.
Szintek SCF, c-Kit, IκB és az NF-kB értékelt Western blot analízis
körülbelül 50 mg szövetet vették a közel proximális gyomor. A szöveteket vágjuk apró darabokra mintegy 0,25 cm 3, homogenizálunk, és disszociál radioimmunprecipitációs assay lízispufferben (Hushang Biotechnology, Shanghai, Kína), amely 50 mM Tris, 150 mM NaCI, 1% NP-40, 0,5% nátrium-dezoxikolát, 1% nátrium-dodecil-szulfát, 1 mM PMSF, nátrium-ortovanadátot, nátrium-fluorid, etiléndiamin-tetraecetsav, és leupeptin, 4 ° C-on 30 percig. Homogenizátumot centrifugáltuk 12 000 x g
5 percen át 4 ° C-on, és a felülúszót összegyűjtöttük, és ezt használjuk a teljes fehérje. Egyenlő mennyiségű fehérjét elektroforézisnek SDS-PAGE 10% -os vagy 15% -os poliakrilamid gélen. A fehérjéket át nitrocellulóz membránra (Hushang Biotechnology) által félszáraz blot. A membránokat blokkoltuk Tris-pufferolt sóoldat 0,1% Tween 20 (TBST), amely 5% tejet 60 percen át szobahőmérsékleten keverjük, majd immun-blotoltuk megfelelően hígított primer antitestekkel át 4 ° C-on egy éjszakán át. Mosás után háromszor TBST, a blotokat inkubáltuk HRP-konjugált másodlagos antitesttel 60 percig, szobahőmérsékleten. Ezután a komplexek tettük láthatóvá egy iChemi XR képalkotó rendszer (WD9431A, Bomeike Biotechnology, Kína) a kemilumineszcenciás reagens (Tigsun Biological Science Technology, Tianjin, Kína). Félig számszerűsítése végeztük Mennyiség One szoftver verzió 4.6.2 (Bio-Rad). A következő ellenanyagokat alkalmaztuk: anti-SCF, 1: 200, a c-kit, 1: 200, anti-IκB és anti-NF-kB p65 és a GAPDH, 1: 500 (Hushang Biotechnology, Shanghai, Kína).
számszerűsítése az NF-kB -DNS-kötő által elektroforetikus mobilitás eltolódás assay
nukleáris extraktumokat készítünk gyomor lizátumokat a korábban leírtak szerint [21]. Az NF-kB aktiválás határoztuk meg egy elektroforetikus mobilitás eltolódási vizsgálat (EMSA), valamint a nukleáris transzlokáció az NF-kB értékelték a korábban leírtak szerint (GS009, Beyotime Institute of Biotechnology, Shanghai, Kína) [22]. Az NF-kB a kötési reakciókat, 5 ug nukleáris fehérje extraktumot inkubáltuk szobahőmérsékleten 20 percig reakció puffert, amely 20 mM HEPES, pH = 7,9, 50 mM KCI, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 5% glicerin, 200 jig /ml BSA-t és 2 ug poli (di-dC). Ezután 32P-jelzett kettős szálú oligonukleotid (1 ng ≥1 × 105 cpm), amely a NF-kB kötő konszenzus szekvenciát (5 '- GGCAACCTGGGGACTCTCCCTTT-3 ') adtunk a reakcióelegyhez további 10 percen át szobahőmérsékleten. A reakciótermékeket frakcionáljuk nem denaturáló 6% -os poliakrilamid gélen 60 percig 350 V, amelyet azután szárítjuk és autoradiográfiás vizsgálatnak vetettük alá -70 ​​° C hőmérsékleten egy éjszakán át. A kompetíciós vizsgálatokkal, a felesleges oligonukleotid (100-szeres moláris feleslegben) versenyző volt előinkubáljuk nukleáris extraktumokat 20 percig, szobahőmérsékleten. Egy mutáns NF-kB oligonukleotid (5 '- GGCAACTGCTCACTCTCCCTTT-3 ') használtunk a kompetíciós esszé. Szignálok denzitometriásan elemeztük.
Double immunofluorohistochemistry a terminális dezoxinukleotidil-transzferáz által közvetített dUTP-biotin nick end labeling assay (TUNEL) és a c-kit-festéssel
Fluoreszcencia immunhisztokémiával a c-kit (a antitest a Santa Cruz), és TUNEL festés végeztünk 10 nm szekcióba történő eljárás módosítását közzé a gyártó által a TUNEL kit (TAC STDT, Trevigen Inc, Gaithersburg, MD). TUNEL-pozitív sejteket fluoreszcein (Ex 488, Em 505-550), a c-kit-pozitív sejteket jelöltük Cy3 (Ex 543, Em 560-615), és a sejtmagokat jelölt DAPI-val (Ex 364, Em 385 -470). Szövetmintából ágyaztuk fluoreszcencia fedőoldattal és vizsgáltuk konfokális mikroszkóppal [23]. Körülbelül 200 sejteket megszámoltuk parcellánként, öt területen vizsgáltuk diánkénti és öt metszetet csoportonként. A százalékokat a TUNEL- és a c-kit-pozitív apoptotikus sejteket jelöljük az apoptotikus index (AI) (%).
Statisztikai analízis
Minden adatot átlagérték ± SD. Adatok összehasonlítása csoportok között az állatok, egyirányú varianciaanalízissel (one-way ANOVA) és Duncan összehasonlításokat alkalmaztunk. Minden statisztikai tesztet végeztünk az SPSS for Windows, 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). A különbségeket akkor tekintettük statisztikailag szignifikáns P katalógusa < 0.05.
Eredménye
hatása kurkumin a testtömeg és a vér glükóz-diabéteszes patkányok katalógusa plazma glükóz szintek erősen megemelkedett diabéteszes patkányokban (Group II) [(322 ± 41) mg /dl] azokkal szemben, normál kontroll patkányok (I. csoport) [(98 ± 12) mg /dl]. Volt egy jelentős csökkenés a testtömegét csoport II patkányok [(298 ± 16) g] összehasonlítva korban illesztett I. csoport patkányok [(449 ± 21) g]. Krónikus kurkumin kezelt diabéteszes patkányokban (Group III) nem mutattak szignifikáns javulást a testsúly, és nem csökken a plazma glükóz-szintjének összehasonlítva csoport II patkányok [csoport III, testsúly (324 ± 19) g és glükóz (302 ± 38) mg /dl] (1. táblázat) .table 1 vércukor és testsúly négy csoportba katalógusa csoportok Matton I. csoport
csoport II Matton csoport III katalógusa
Group IV Matton Vércukor (mg /dl) hotelben 98 ± 12 katalógusa 322 ± 41 * katalógusa 302 ± 38 * # katalógusa 100 ± 11 katalógusa Testtömeg ( g) hotelben 449 ± 21 és 298 ± katalógusa 16 * katalógusa 324 ± 19 * katalógusa 476 ± 27 katalógusa Group I = normál kontroll patkányok; Csoport II = diabeteses kontroll patkányokban; Csoport III = diabéteszes + kurkumin kezelt patkányok (150 mg /kg); Csoport IV = normális + kurkumin kezelt patkányok (150 mg /kg). Az eredményeket átlag ± SD. * P katalógusa < 0,05 (szemben az I. csoport), #P katalógusa > 0,05 (szemben a csoport). Katalógusa hatása kurkumin gyomorürülésre katalógusa gyomorkiürüiési szignifikánsan késleltette SD patkányok volt cukorbeteg 8 hét . Az összeg a gyomor kiürülésének csoport II volt 44,3 ± 5,7% volt, ami lényegesen alacsonyabb, mint az I. csoport [(76,2 ± 4,3)%, P katalógusa < 0.01], valamint a diabéteszes patkányok alatt kurkumin kezelés [(Group III) ,; (59,4 ± 7,5)%, P katalógusa < 0,05]. Azonban nem volt szignifikáns különbség figyelhető meg a csoport az I. és IV csoportba patkányok [(73,3 ± 5,2%), P katalógusa > 0.05] (1. ábra). 1. ábra hatásai kurkumin gyomorürülésre diabéteszes patkányokban. I. csoport = normál kontroll patkányok (n = 10); : Csoport II = diabetikus kontroll patkányok (n = 10); : Csoport III = diabéteszes + kurkumin kezelt patkányok (n = 10); : Group IV = normális + kurkumin kezelt patkányok (n = 10). Minden érték kifejezve az átlag ± SD. * P
< 0,01 (szemben a I. csoport), # p
< 0,05 (összehasonlítva a II csoport), Ap
&0,05 (szemben a I. csoport).
Kurkumint kezelés csökkentette MDA képződés, növeli SOD aktivitás katalógusa Megvizsgáltuk az oxidatív stressz számos módszer, mert a glükóz indukálta oxidatív stressz feltételezik, hogy egy kulcsfontosságú mechanizmus a krónikus diabetikus szövődmények. Diabéteszes patkányokban megnövekedett a MDA-szint [I. csoport 15,7 ± 1,7 (nmol /mg) vs katalógusa II csoport 27,9 ± 2,1 (nmol /mg), P = 0,006 katalógusa] és a csökkent SOD szintje [I. csoport 146,2 ± 9,3 ( u /mg) vs katalógusa II csoport 107,9 ± 7,5 (u /mg), P = 0,008 katalógusa], a molekuláris markere az oxidatív stressz (Figure2). Hat héttel a kurkumin kezelés csökkentette a mértékét MDA upreguláció [Group III, 21,4 ± 1,8 (nmol /mg), P = 0,033 katalógusa versus Group I és P katalógusa = 0,004 vs. Group II], és javította a SOD le -regulation [Group III 126,2 ± 8,8 (egység /mg), P = 0,036 katalógusa versus Group I és P katalógusa = 0,001 csoport II]. A kurkumin jelentősen továbbfejlesztett SOD aktivitást és csökkentett MDA szint gyomor homogenizátumokban. Továbbá, nincs szignifikáns különbség volt megfigyelhető között I. csoport és csoport IV állatok (P katalógusa > 0,05; Figure2). 2. ábra hatásai kurkumin MDA és a SOD diabéteszes patkányokban. A szintek MDA csökkent után kezeltük a kurkumin, a szintek SOD után növekedett kezeljük kurkumin. : I. csoport = normál kontroll patkányok (n = 10); : Csoport II = diabetikus kontroll patkányok (n = 10); csoport III = diabéteszes + kurkumin kezelt patkányok (n = 10); : Group IV = normális + kurkumin kezelt patkányok (n = 10). Minden érték kifejezve az átlag ± SD. * P
< 0,01 (szemben a I. csoport), # p
< 0,01 (összehasonlítva a II csoport), Ap
&0,05 (szemben a I. csoport).
kurkumin növeli SCF és a c-kit fehérje szintje
reprezentatív képei az RT-PCR analízise SCF a gyomorban szövetekben patkányok minden csoportban láthatók Figure3A. Összehasonlítva I. csoport az SCF szignifikánsan alacsonyabb volt a II csoport [(0,44 ± 0,02) vs katalógusa (0,69 ± 0,03), P katalógusa = 0 0,002] és a értékeinek összehasonlítása a csoport III kiderült, hogy az SCF szinten kurkumin-kezelt patkányokban volt nagyobb, mint a II csoport [(0,58 ± 0,04) vs katalógusa (0,44 ± 0,03), p
= 0 .003]. Azonban nem figyeltek meg különbséget a csoportok között az I. és IV [(0,69 ± 0,03) vs katalógusa (0,66 ± 0,03) P katalógusa = 0,56] (Figure3B). Western blot analízis (Figure4A, B) kiderült, hogy az SCF a gyomor szöveteiben csoport II szignifikánsan alacsonyabb volt, mint az I. csoport és III patkányok [arányai (0,33 ± 0,02) vs katalógusa (0,47 ± 0,03) és (0,41 ± 0,02), P katalógusa < 0 0,05)]. Azonban nincs szignifikáns különbség nem volt tapasztalható Group IV I. csoport patkányok [(0,45 ± 0,03) vs katalógusa (0,47 ± 0,03), P katalógusa > 0,05)], ami arra utal, hogy a kurkumin beavatkozás hatékonyan helyreállítani a helyi SCF-fehérje szintet a gyomor szöveteiben diabéteszes patkányokban. 3. ábra változása SCF /GAPDH és a c-kit /GAPDH RT-PCR-analízissel. (A) reprezentatív képei gélelektroforézissel GAPDH, SCF, és a c-kit patkányokban az egyes csoportok. (B) csoport szintek relatív mRNS expresszióját SCF és a c-kit, a termékek, mennyiségileg arány GAPDH. : I. csoport = normál kontroll patkányok (n = 10); : Csoport II = diabetikus kontroll patkányok (n = 10); : Csoport III = diabéteszes + kurkumin kezelt patkányok (n = 10); : Group IV = normális + kurkumin kezelt patkányok (n = 10). Minden érték kifejezve az átlag ± SD. * P
< 0,01 (szemben a I. csoport), # p
< 0,05 (összehasonlítva a II csoport), Ap
&0,05 (szemben a I. csoport).
4. ábra Változások a SCF /GAPDH és a c-kit /GAPDH Western blot analízissel. (A) Reprezentatív fehérje csíkot Képek a SCF, c-Kit, és gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH). (B) csoport szintek relatív SCF és a c-kit fehérje által kifejezett arányát GAPDH, ill. : I. csoport = normál kontroll patkányok (n = 10); : Csoport II = diabetikus kontroll patkányok (n = 10); : Csoport III = diabéteszes + kurkumin kezelt patkányok (n = 10); : Group IV = normális + kurkumin kezelt patkányok (n = 10). Minden érték kifejezve az átlag ± SD. * P
< 0,01 (szemben a I. csoport), # p
< 0,01 (összehasonlítva a II csoport), Ap
&0,05 (szemben a I. csoport).
RT-PCR elemzés azt mutatta, hogy az expressziós szintek a c-kit a gyomorban szöveteket 0,78 ± 0,04, 0,37 ± 0,02, és 0,59 ± 0,03 az I., II, illetve III. A c-kit expressziós szintek II és III csoport patkányokat kisebb, mint az I. csoportba patkányokban. Azonban összehasonlítása II és III csoport kimutatta, hogy a c-kit-szint a kurkumin-kezelt patkányokban volt nagyobb, mint a nem kezelt diabéteszes patkányokban (P
< 0,05, Figure3B). Hasonló eredményeket mutattak Western blot analízis (Figure4B). A szinteket a c-kit fehérje (arányai 0,45 ± 0,03, 0,21 ± 0,02 és 0,34 ± 0,02, illetve az I., II és III) sokkal nagyobbak voltak csoport III, mint a II csoport (p
< 0 .05, Figure4B), és a szint a csoport III alacsonyabb volt, mint az I. és a IV. Mindkét elemzés azt mutatta, hogy 6 hetes kurkumin beavatkozás jelentősen helyreállítani a csökkenés a c-kit szint diabéteszes patkányokban. Katalógusa kurkumin gátolja I-kB degradáció és az NF-kB aktiválás katalógusa jelentések azt mutatják, hogy a megnövekedett és a krónikus oxidatív stressz aktiválhatja vagy megzavarják NF-kB aktivitását [24]. Megvizsgáltuk, hogy a kurkumin vezethet aktiválása a NF-kB jelátviteli. Ehhez, mértük a szintek az NF-kB jelenlétében vagy távollétében kurkumin annak azonosítására, hogy az NF-kB aktiválódott. Először is értékeltük a fehérje szint az I-kB, amelyhez inaktivált NF-kB kötődik. Azt találtuk, hogy a szint a I-kB I. csoportba patkányokban magasabb volt, mint az I. csoportba tartozó patkányok, míg a szint csoport III patkányokban alacsonyabb volt, mint az I. csoportba tartozó patkányok (p < 0,01), de magasabb, mint a szintek Csoportok, és a IV-patkányokat (p < 0,05). Ezután megvizsgáltuk, hogy a kurkumin képes blokkolni NF-kB. Azt találtuk, hogy a cukorbetegség (Group II) növekedéséhez vezetett az NF-kB szinten [I. csoport 75,5 ± 7,7 (pg /ml) vs katalógusa II csoport 102,8 ± 12,4 (pg /ml), P = 0,001 katalógusa] , míg kezelés kurkumin [csoport III 91,3 ± 8,9 (pg /ml)] megakadályozta ezt a hatást. E megfigyelés alapján azt javasoltuk, hogy a kurkumin gátolja a NF-kB [Group IV 70,9 ± 8,1 (pg /ml), P = 0,026 katalógusa] (Figure5). Megvizsgáltuk, hogy a kurkumin képes blokkolni NF-kB transzlokáció a sejtmagba, mert sejtmagba elismerten a sejt reakcióba ROS stimuláció, és úgy tűnik, hogy korrelál NF-kB-közvetített transzkripciós aktivitást. Annak megállapítására, ezt mértük szintje az NF-kB a sejtmagba EMSA. Diabétesz kialakulását indukálta növekedése NF-kB szintek a sejtmagban, míg a kezelés kurkumin megakadályozta ezt a hatást (Figure6). Így azt javasolta, hogy a kurkumin nem csak közvetetten gátolja a NF-kB-DNS-t kötő, de ez is elnyomja aktiválás upstream I-kB. 5. ábra hatása kurkumin I-kB és az NF-kB. (A) Az oszlopdiagram volt világosan tükrözi a szint I-kB és az NF-kB között négy csoportban. (B) szint I-kB /GAPDH csökkent az I. csoportba tartozó, de nőtt a kurkumin. I: I. csoport = normál kontroll patkányok (n = 10); II: csoport II = diabetikus kontroll patkányok (n = 10); III: csoport III = diabéteszes + kurkumin kezelt patkányok (n = 10); IV: Csoport IV = normális + kurkumin kezelt patkányok (n = 10). Minden érték kifejezve az átlag ± SD. * P
< 0,01 (szemben a I. csoport), # p
< 0,01 (összehasonlítva a II csoport), Ap
&0,05 (szemben a Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• Pancreaticogastrostomy tiszta laparoszkópos pancreaticoduodenectomy-A regény hasnyálmirigy-gyomor anastomosis technika -
• Génexpressziós analízise Helicobacter pylori-fertőzött és a magas sótartalmú diéta kezelt egér gyomor tumor modell: azonosítása CD177 mint új prognosztikai faktor gyomorrákos betegeknél