Curcumin parantaa ilmentymistä SCF /c-kit kautta vaimentava oksidatiivista stressiä ja NF-KB: n aktivaation mahalaukun kudoksissa diabeettisten gastroparesis rottien

Curcumin parantaa ilmentymistä SCF /c-kit kautta vaimentava oksidatiivista stressiä ja NF-KB: n aktivaation mahalaukun kudoksissa diabeettisten gastropareesi rottien
tiivistelmä
tausta
diabetes liittyy monenlaisia ​​ongelmia. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että oksidatiivinen stressi ja tulehdusreaktioita kriittisiä rooleja diabetekseen gastropareesi. Kurkumiinia tiedetään olevan antioksidantin ja anti-inflammatorisia ominaisuuksia. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme tutkineet vaikutusta kurkumiinista diabeettisen mahan on Sprague Dawley rottamallissa tyypin 1 diabetes mellitus.
Menetelmät
Male SD-rottia jaettiin kontrolliryhmään, saaneeseen kontrolliryhmään kurkumiinin diabeetikko ryhmä, ja diabeetikko saaneessa ryhmässä curcumin. Diabetes indusoitiin injektoimalla intraperitoneaalisesti streptotsotosiinia. Curcumin (150 mg /kg) annettiin intragastrisesti 6 viikkoa, ja veren glukoosipitoisuus ja kehon painot mitattiin. Mahat leikattiin analysoimiseksi mahalaukun tyhjenemistä hinnat, ja tasot oksidatiivisen stressin. NF-KB: n, I-KB: n, ja kantasolutekijää (SCF) /c-kit-proteiinin tasot arvioitiin western blot -analyysillä, kun taas apoptoosi interstitiaalinen solujen Cajal (lisähintaa) määritettiin TUNEL värjäys.
Tulokset
Curcumin käsiteltyjen diabeettisten rottien osoitti merkittävästi parantunut mahalaukun tyhjenemistä hinnat [(59,4 ± 7,5)%] verrattuna diabeettisten rottien [(44,3 ± 5,7)%] sekä alentuneesta MDA [21,4 ± 1,8 (nmol /mg) vs
27,9 ± 2,1 (nmol /mg)], ja lisäsi SOD aktiivisuuden [126,2 ± 8,8 (yksikköä /mg) vs.
107,9 ± 7,5 (yksikköä /mg)]. Toisaalta, mahan tyhjenemistä tason kontrolliryhmässä ei ollut merkitsevästi erilainen kuin verrokkiryhmässä sai curcumin hoitoa. Lisäksi, kurkumiini-käsiteltyjen diabeettisten rottien osoitti merkittävästi kohonneeseen SCF /c-kit-proteiinin mahan kudoksissa, inhiboi I-KB: n hajoamista ja NF-KB: n aktivaation, ja vähentää ICC apoptoosin indeksi [(26,2 ± 4,1)% vs
(47,5 ± 6,2)%] verrattuna diabeettisen ryhmän.
Päätelmä
Curcumin hoito paransi mahalaukun tyhjenemistä estämällä tuotanto oksidatiivisen stressin, poistamalla NF-KB signaalitransduktion ja tehostaen SCF /c-kit in rotat diabeettiseen gastropareesi.
avainsanat
Curcumin diabeettisen gastropareesi Oksidatiivinen stressi NF-KB Kantasolujen tekijä /c-kit Interstitial solujen Cajal Johdanto
diabeettinen gastropareesi on sairaus ruoansulatuskanavan, määritellään viivästynyt tyhjeneminen kiinteä ateria, ja nähdään 30-50%: lla potilaista, joilla on tyypin 1 tai tyypin 2 diabetes [1]. Potilaat usein läsnä ruoansulatuskanavan yläosan oireita, kuten varhainen kylläisyyden, laihtuminen, vatsan turvotus, vatsavaivoja, pahoinvointia, oksentelua esiintyy usein, ja heikentynyt sokeritasapainoa, ja sairaus vaikuttaa vakavasti potilaan elämänlaatuun.
Gastroparesis on yhä useammin tunnustettu merkittävä terveysongelma. Vaikka gastropareesi vaikuttaa moniin diabeetikoille maailmanlaajuisesti, ei vain ovat hoitovaihtoehdot hyvin rajallinen, mutta myös hoitoja, jotka ovat käytettävissä diabeetikko gastropathy ovat usein tehottomia. Näitä ovat lääkehoidolla, mahalaukun sähköstimulaation, kirurginen hoito, ja ravitsemuksellisen tuen. Lääkitys gastropareesi sisältävät metoklopramidi, domperidoni, sisapridi, ja erytromysiini. Vaikka nämä aineet on käytetty hoitoon gastropareesi, niitä on raportoitu olevan vain rajoitettu tehoa, ja monet potilaat eivät voi sietää niitä, koska niiden sivuvaikutuksia. Diabeetikoilla Refraktorista gastropareesi, korkean taajuuden mahalaukun sähköstimulaation jonka pysyvästi istutettu järjestelmä merkittävästi parantaa ylemmässä ruoansulatuskanavassa oireita ja edustaa vaihtoehtoista kirurginen hoito potilaille. Kirurgiset toimenpiteet, kuten gastrectomy ja antrectomy ovat viimeinen vaihtoehto hoitoon, on kiistanalainen ja tarvitsevat enemmän tutkimus [2]. Jos potilaalla on vaikea gastropareesi, mutta normaali ohutsuolen motiliteettia, jejunostomy putkiruokinta voidaan soveltaa. Vaikka tämä antaa ravitsemuksellista tukea, se ei paranna gastropareesi [3]. Diabeettinen gastropareesi yleensä parhaiten hoidettu lääketieteellisesti, ja vain jos potilaalla on vaikea diabeettinen gastropareesi, jotka eivät ole vastaamaan lääkehoitoon tulisi tehdä muita hoitoja. Niinpä lääkkeiden löytämiseen, jotka osoittavat hoidon tehoa diabeettisen gastropareesin on tarpeen.
Diabeettinen gastroparesis liittyy menetys interstitiaalinen solujen Cajal (lisähintaa) sekä ihmisillä että malli eläinten [4]. Lisähintaa voidaan tunnistaa kudoksen merkinnöin antiseerumeilla on reseptorityrosiinikinaasi kit, proteiini ilmentyy lisähintaa. Kit ja sen ligandin kantasolujen (SCF) ovat myös tärkeitä selviytymisen tekijöitä lisähintaa [5]. Lisääntynyt oksidatiivisen stressin liittyy diabetes voi johtaa menetykseen tai vahingoittumisen lisähintaa hiirillä, kun taas oksidatiivisen stressin johtaa vahingoittaa ja menetys ICC verkkojen ja kehittäminen hidastunut mahalaukun tyhjeneminen [6]. Diabetes johtaa lisääntyneeseen oksidatiivista stressiä ja on tärkeä rooli patogeneesissä diabeteksen komplikaatioiden [7]. Ylituotanto reaktiivisten hapen lajien (ROS) tulokset oksidatiivisia vaurioita, mukaan lukien lipidiperoksidaation, proteiinin hapetus, ja DNA-vaurioita, jotka voivat johtaa solukuolemaan. Lisäksi ROS tiedetään toimivan toisiolähetteinä transkription aktivoimiseksi tekijöistä, kuten tumatekijä kappa B (NF-KB). ROS syntyvä stressi mahalaukun solukko voi laukaisemaan NF-KB signalointiryöpyn; todellakin, mahalaukun tyhjenemistä diabeettisissa rotissa liittyy NF-KB: n tulehduksen.
Curcumin (1,7-bis- (4-hydroksi-3-metoksifenyyli) -1, 6-heptadieeni-3,5- dioni) on tärkein aktiivinen komponentti kurkuma eristetty laitoksesta kurkumaa longa L. Kurkumiinia on monitoiminen molekyyli on merkittäviä sääteleviä vaikutuksia syövän [8], tulehdus [9] ja diabetekseen liittyvien sairauksien, kuten diabeettisen retinopatian [10], diabeettisen nefropatia [11], ja diabetes kognitiiviset häiriöt [12]. Curcumin on voimakas siepata reaktiivisia hapen ja typen lajit, kuten hydroksyyliradikaaleja ja typpidioksidin radikaalit [13]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että kurkuma estää NF-KB: n proinflammatoristen signalointireittien [14]. Samaan aikaan NF-KB: n transkription säätelevät useita tärkeitä fysiologisia prosesseja, mukaan lukien tulehdus- ja immuunivasteita, solujen kasvua ja selviytymistä, niin NF-KB: n signaloinnin edustaa toimivaa strategiaa taudin hoidossa [15]. Kuitenkin on ollut hyvin vähän tutkimusta mahdollisuuksia curcumin diabeettisen gastroparesis, tai sen farmakologisen.
Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää, joka Sprague Dawley (SD) rotan tyypin 1 diabetes mellitus, keski-annos [16] curcumin voisi suojata lisähintaa diabeettisissa rotissa viivästynyttä mahalaukun tyhjenemistä vähentämällä oksidatiivisen stressin ja estämällä NF-KB: n aktivoitumista, lisääminen SCF /Kit ilmaisun, ja normalisoimalla mahan tyhjenemisen hidastuminen.
Materiaalit ja menetelmät
Kokeellinen rotat ja induktio diabeteksen
Mies SD-rottia (8 viikon ikäiset) oli kasvatettu Center of Experimental Animals, Zhejiangin Kiinan Medical University, (Hangzhou, Kiina), jossa tietty taudinaiheuttajista vapaiden (SPF) -tason laboratorio on antanut luvan Zhejiang lääninhallitukselle. Kaikki Rottia olosuhteissa hallitun kosteuden (50-60%). Ne pidettiin valvotuissa valoa (12 h päivä /yö sykli) on vapaa pääsy veteen ja jyrsijämuonaa. Kaikki eläinkokeet suoritettiin yhdenmukaisuus lisenssin Zhejiang Science and Technology Office (Hangzhou, Kiina) sekä hyväksynnän eläimen eettisen komitean Zhejiangin Kiinan Medical University. Kaikissa kokeissa noudatettiin ohjeita eettistä toimintaa hoitoon ja käyttöön. Jokainen pyritty minimoimaan stressiä eläimille.
Rotat paastosivat 12 tuntia tehtiin yhden vatsaonteloon streptotsotosiinia (STZ) 50 mg /kg, joka on juuri liuotettu 100 mM natriumsitraattia, pH 4,5. Samanikäisiin normaali rotat saivat sitraattipuskuria vain. Diabetes varmistettiin paastoverensokerissa (FBG) tasot käyttäen reagenssipakkauksen (Roche, Shanghai, Kiina). Rottien FBG ovat korkeampia kuin 11,1 mM (200 mg /dl), 72 tunnin kuluttua STZ injektion pidettiin diabeettisten rottien. Kun rotat tuli diabeetikko, verensokerin mitattiin päivittäin. Kokeet aloitettiin 8 viikkoa sen jälkeen, kun on diabetes, jotta gastropareesin kehittämiseksi.
Koejärjestely
Kahdeksan viikon kuluttua diabeteksen, eläimet jaettiin neljään ryhmään eli normaali valvonta urosrottia (ryhmä I), diabeettisen uros rotat (ryhmä II), curcumin-täydennetty diabeetikko urosrottien (ryhmä III), ja curcumin-täydennetty ohjaus urosrottien (ryhmä IV). Rotat ryhmien III ja IV (n = 10 kussakin) hoidettiin päivittäin kurkumiini (150 mg /kg; ig) ja 6 viikkoa. Curcumin (puhtaus > 95%) peräisin Fusong County Natural Biotechnology Company Ltd (Jilin, Kiina), suspendoitiin 0,5% w /v natriumkarboksimetyyliselluloosaa (CMC-Na) ratkaisu. Rotat ryhmissä I ja II (n = 10 kussakin) sai 0,5% CMC-Na ratkaisu vain. Hoidon jälkeen 6 viikkoa, eläimet lopetettiin alle etyylieetteriä anestesiassa, veri kerättiin reisilaskimosta verenvuotoa ja seerumi erotettiin. Mahat poistettiin nopeasti, ja kudos eläimistä otetuista näytteistä säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes prosessoidaan biokemiallisia määrityksiä. Mahalaukun tyhjenemistä, oksidatiivisen stressin, NF-KB: n aktivaation, lisähintaa ja SCF /Kit ilmentymisen mahat tutkittiin myös lopussa kuudennen hoitoviikon (14 th viikolla diabetes).
Mahalaukun tyhjenemistä tutkimukset
standardi menetelmän valmistaa fenolia punainen merkki aterian käytettiin kuten aiemmin on kuvattu [17]. Mahalaukun tyhjenemistä määritettiin käyttäen modifikaatiota aikaisemmin raportoitu menettely [18]. Rottien annettiin vapaasti vettä, kunnes 3 tuntia ennen letkulla antoa curcumin. Liuos, jossa oli 0,1% (w /v) fenolipunaista vesipitoisessa natriumkarboksimetyyliselluloosaa (1,5% w /v) käytettiin testissä aterian. Curcumin annettiin 1 tunti ennen suun kautta kokeen aterian. Kaksikymmentä minuuttia antamisen jälkeen testin aterian, rotat tapettiin. Mahat Sitten paljastanut laparotomian ja poistetaan. Rotilla, joita hoidettiin ajoneuvon (suolaliuos, 0,9% natriumkloridiliuosta, 0,2 ml), tapettiin välittömästi suun kautta antamisen jälkeen testi aterian ja fenolin punaista sisältöä mahassa pidettiin standardi (100%). Poistettu mahat viilletty 40 ml NaOH-liuosta (0,1 N) ja sisältö liuotettiin. 1 ml: n alikvootti pesuliuokset lisättiin 2 ml: aan trikloorietikkahappoa (7,5% w /v) ja proteiinien saostamiseksi. Sentrifugoinnin jälkeen (2500 x g
) 20 min, 1 ml supernatanttia lisättiin 1 ml NaOH: a (1 N) kehittää enimmäisintensiteetti väri. Absorbanssi 558 nm: ssä liuoksen mitattiin sitten käyttämällä spektrofotometriä (U-1080, Hitachi Ltd., Tokio, Japani). Mahalaukun tyhjenemistä laskettiin seuraavalla kaavalla: mahalaukun tyhjenemistä %
=
1
-
X
/
Y
x
100
,
jossa X on absorbanssi fenolipunaista jäljellä mahassa 20 minuutin kuluttua fenolipunaista annon ja Y on keskimääräinen absorbanssi fenolipunaista talteen vatsat verrokkihiirten heti fenolipunaista annon.
määrittäminen MDA ja SOD tasoilla sileän lihaksen mahalaukkua
mahat leikattiin, punnittiin ja pakastettiin välittömästi -70 ° C: ssa. Jäädytetyt kudoksen kustakin rotasta homogenoitiin jääkylmässä fosfaattipuskuria (KCI 140 mM, fosfaatti 20 mM, pH 7,4) ja sentrifugoitiin 3000 x g
10 min. Sisältö malonialde- (MDA), indeksin lipidiperoksidaation, määritettiin käyttäen tiobarbi- (TBA) menetelmää pienellä muutoksella [19]. Lyhyesti, 100 ui kudoshomogenaattia sekoitettiin 200 ui työn, joka sisälsi 0,37% TBA. Seosta inkuboitiin 100 ° C: ssa 15 minuutin ajan ja sen jälkeen jäähdytettiin. Poimia MDA, 375 ui N-butanolia lisättiin, mitä seurasi sekoitus vortex-voimakkaasti 10 s. Sentrifugoinnin jälkeen ylempi N-butanoli kerros siirrettiin lasiputkeen. Absorbanssi butanolifaasista mitattiin 532 nm: ssä. MDA sisältö ilmaistaan ​​nmol /mg proteiinia. Mittaamiseksi SOD aktiivisuuden, 20 ui kudoshomogenaattia sekoitettiin 200 ul: aan reaktioliuosta, joka sisälsi nitroblue tetratsoliumkloridi (NBT, 750 uM), ja inkuboitiin 20 min 37 ° C: ssa. Absorbanssi 560 nm: ssä mitattiin. Entsyymin aktiivisuus ilmaistaan ​​yksiköinä /g proteiinia ja 1 yksikkö entsyymiä määritellään siksi määräksi entsyymiä, joka tarvitaan estämään vähentämisen NBT 50%.
Semikvantitatiivinen RT-PCR-mittaus SCF ja c-kit
proksimaalinen vatsa (40-50 mg) kerättiin talteen, ja limakalvo poistettiin leikkely. Kudos mekaanisesti homogenoitiin RNaasi-vapaa olosuhteissa ja liukenevat Tripure eristäminen reagenssia (Roche, Sveitsi) jäillä 5 minuuttia, ja kokonais-RNA uutettiin mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kokonais-RNA kvantitoitiin spektrofotometrisesti 260 ja 280 nm, jossa A260 /A280-suhde vaihtelee 1,8-2,0. RNA: n eheys varmistettiin agaroosigeelielektroforeesilla, mitä seurasi värjäys etidiumbromidilla, ja RNA: ta käytettiin välittömästi käänteisen transkription tai säilytettiin -80 ° C: ssa RNaasi-vapaaseen veteen. Kaksivaiheinen käänteistranskriptaasi-polymeraasiketjureaktio (RT-PCR) suoritettiin käyttäen Revertra ässä-α- ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi Kit (Tiangen Biotech, Peking, Kiina) ja 2 x Taq PCR Master Mix (Tiangen Biotech), mukaan valmistajan ohjeita. Kiinteä määrä RNA: n (0,5 ug) käänteiskopioitiin. Glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) valittiin sisäisenä standardina. Kaikki PCR-alukkeet suunniteltiin ja syntetisoitiin Biosune (Shanghai, Kiina). Alukesekvenssejä ja pituudet PCR tuotteet ovat seuraavat: GAPDH, eteenpäin: 5 '- GACAACTITG-GCATCGTGGA-3 ', käänteinen: 5 '- ATGCAGGGATGATGT-TCTGG-3 " , 150 emäsparia; SCF, eteenpäin: 5 '- GGA CTT CAT GGT GGC ATC TG-3 ', käänteinen: 5 '- GCC CTT GTA AGA CTT GAC TG-3 ', 285 bp; ja c-kit, eteenpäin: 5 '- GTG GTT AAA GGA AAC GCT CG-3 ', käänteinen: 5 '- CAT ACA TTT CAG CAG GTG CG-3 ', 400 kp. Reaktio-olosuhteet optimoitiin kullekin geenien vaihtelemalla hehkutus lämpötilassa (58 ° C: ssa GAPDH, 58 ° C: ssa SCF, ja 62 ° C: ssa c-kit) ja eri määrä PCR-syklien [20]. PCR-tuotteet erotettiin 2% agaroosigeeleissä 100 V: ssa 30 minuutin ajan. Gel kuvia jotka näytetään nestekidemonitorin olevan ultravioletti läpivalaisussa PhotoDoc-Ite järjestelmä on varustettu CCD-kamera (Bio-Rad Gel Doc 2000, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) ja säilytettävä intensiteetin analyysia. Suhteellinen mRNA-tasot valitun geenien laskettiin suhteena GAPDH ilmentymisen.
Tasot SCF, c-Kit, IKB: n ja NF-KB: n arvioitiin western blot -analyysillä
noin 50 mg kudosta otettiin lähellä proksimaalista vatsaan. Kudokset leikattiin pieniksi palasiksi noin 0,25 cm 3, homogenisoitiin, ja dissosioituneeksi radioimmunologisissa määritys lyysipuskuria (Hushang Biotechnology, Shanghai, Kiina), joka sisälsi 50 mM Tris, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0,5% natriumdeoksikolaatti, 1% natriumdodekyylisulfaattia, 1 mM PMSF, natriumortovanadaattia, natriumfluoridi, etyleenidiamiinitetraetikkahappo, ja leupeptiiniä 4 ° C: ssa 30 minuutin ajan. Homogenaatteja sentrifugoitiin 12 000 x g
5 minuutin ajan 4 ° C: ssa, ja supernatantit kerättiin talteen ja käytettiin proteiinin kokonaismäärän. Yhtä suuret määrät proteiinia suoritettiin elektroforeesi SDS-PAGE 10% tai 15% polyakryyliamidigeeleillä. Proteiinit siirrettiin nitroselluloosakalvoille (Hushang Biotechnology) puolikuivan blottauksella. Membraanit blokattiin Tris-puskuroidulla suolaliuoksella 0,1% Tween 20: tä (TBST), joka sisälsi 5% maitoa 60 minuuttia huoneenlämpötilassa, ja sitten immuno-blotattiin sopivasti laimennettua primaaristen vasta-aineiden 4 ° C: ssa yön yli. Kun oli pesty kolme kertaa TBST-liuoksella, blotteja inkuboitiin HRP-konjugoidun sekundaarisen vasta-aineen kanssa 60 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sitten kompleksit tehtiin näkyviksi käyttäen iChemi XR kuvantamisjärjestelmä (WD9431A, Bomeike Biotechnology, Kiina) kanssa kemiluminesenssin reagenssit (Tigsun Biological Science Technology, Tianjin, Kiina). Semi-kvantitointi suoritettiin käyttäen Määrä One -ohjelmiston versio 4.6.2 (Bio-Rad). Seuraavia vasta-aineita käytettiin: anti-SCF, 1: 200, c-kit, 1: 200, anti-IKB ja anti-NF-KB p65 ja GAPDH, 1: 500 (Hushang Biotechnology, Shanghai, Kiina).
kvantitointi NF-KB: n DNA, sitoutumisen elektroforeettisen liikkuvuuden siirtymän määrityksellä
Tumauutteet valmistettiin mahan lysaateista kuten aiemmin on kuvattu [21]. NF-KB: n aktivaatio määritettiin elektroforeettisen liikkuvuuden siirtymän määrityksellä (EMSA), ja tumaansiirtymiseen NF-KB: n arvioitiin kuten aiemmin on kuvattu (GS009, Beyotime Biotekniikan instituutti, Shanghai, Kiina) [22]. NF-KB: n sitoutumisen reaktioita, 5 ug tumaproteiiniuutetta inkuboitiin huoneen lämpötilassa 20 min ajan reaktiota, joka sisälsi 20 mM HEPES, pH 7,9, 50 mM KCI, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 5% glyseroli, 200 ug /ml BSA: ta, ja 2 ug poly (dl-dC). Sitten, 32P-leimattua kaksijuosteista oligonukleotidiä (1 ng ≥1 x 105 cpm), joka sisältää NF-KB: n sitoutumisen konsensussekvenssi (5 '- GGCAACCTGGGGACTCTCCCTTT-3 ) lisättiin reaktioseokseen vielä 10 minuuttia huoneenlämpötilassa. Reaktio fraktioitiin ei-denaturoivalla 6% polyakryyliamidigeelillä 60 min 350 V, jota sitten kuivattiin ja altistettiin autoradiografialle -70 ° C: ssa yön yli. Kilpailun määrityksiä, ylimääräinen oligonukleotidi (100-kertainen molaarinen ylimäärä) kilpailija oli esi-inkuboitiin tumauutteiden 20 min huoneen lämpötilassa. Mutantti NF-KB: n oligonukleotidi (5 '- GGCAACTGCTCACTCTCCCTTT-3 ') käytettiin kompetitiomäärityksessä. Signaalit densitometrisesti analysoitiin.
Double immunofluorohistochemistry liittimen deoksinukleotidyylitransferaasilla välittämää dUTP-biotiini nick end merkintöjä määritys (TUNEL) ja c-kit värjäys
Fluoresenssi immunohistokemiallisesti c-kit (käyttäen vasta-ainetta Santa Cruz) ja TUNEL värjäys suoritettiin 10 um: n leikkeiksi käyttämällä muunnelmaa menettelystä julkaissut valmistaja TUNEL-kitillä (TACS STDT, Trevigen Inc, Gaithersburg, MD). TUNEL-positiivisia soluja leimattiin fluoreseiinilla (Ex 488, Em 505-550), c-kit-positiiviset solut leimattiin Cy3: lla (Ex 543, Em 560-615), ja tumat leimattiin DAPI (Ex 364, Em 385 -470). Kudosnäytteet upotettiin fluoresenssi kiinnitysväliaine ja tutkittiin CLSM [23]. Noin 200 solua laskettiin per kenttä, viisi kenttää tutkittiin per dia ja viisi dioja tutkittiin ryhmää kohti. Prosenttiosuudet TUNEL- ja c-kit-positiiviset apoptoottisia soluja merkitään apoptoottista indeksiä (AI) (%).
Tilastollinen analyysi
Kaikki tiedot esitetään keskiarvoina ± SD. Tietojen vertailua joukossa eläinryhmät, yksisuuntainen varianssianalyysi (yksisuuntainen ANOVA) ja Duncan vertailuja käytettiin. Kaikki tilastolliset testit suoritettiin SPSS for Windows, versio 13,0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Erot katsottiin tilastollisesti merkitsevä P
< 0.05.
Tulokset
vaikutus curcumin painon ja verensokerin diabeettisten rottien
Plasmaglukoositasot erittäin koholla diabeettisissa rotissa (ryhmä II) [(322 ± 41) mg /dl] verrattuna normaaleissa verrokkirotissa (ryhmä I) [(98 ± 12) mg /dl]. Oli selvä lasku ruumiinpainoja ryhmän II rotilla [(298 ± 16) g] verrattuna samanikäisiin ryhmä I rottia [(449 ± 21) g]. Krooninen curcumin käsiteltyjen diabeettisten rottien (ryhmä III) ei osoittanut mitään merkittäviä parannuksia painon ja ei laskenut plasman glukoositasojen verrattuna ryhmän II rotilla [ryhmä III, paino (324 ± 19) g ja glukoosia (302 ± 38) mg /dl] (taulukko 1) .table 1 Verensokerin taso ja painoa neljään ryhmään
Ryhmät
ryhmä I
ryhmä II
ryhmä III

ryhmä IV
Verensokerin (mg /dl)
98 ± 12
322 ± 41 *
302 ± 38 * #
100 ± 11
paino ( g) B 449 ± 21
298 ± 16 *
324 ± 19 *
476 ± 27
ryhmä I = normaali verrokkirotissa; Ryhmä II = diabeettisen verrokkirotissa; Ryhmä III = diabeettisen + curcumin hoidettujen rottien (150 mg /kg); Ryhmä IV = normaali + kurkumiini hoidettujen rottien (150 mg /kg). Tulokset esitetään keskiarvona ± SD. * P
< 0,05 (verrattuna ryhmä I), #P
> 0,05 (verrattuna ryhmä II).
Vaikutus curcumin mahalaukun tyhjenemistä
mahalaukun tyhjenemistä viivästyi huomattavasti vuonna SD-rottia, jotka oli ollut diabetes 8 viikon ajan . Määrä mahalaukun tyhjenemistä ryhmän II oli 44,3 ± 5,7%, mikä oli merkittävästi pienempi kuin I ryhmän [(76,2 ± 4,3)%, P
< 0,01], ja diabeettisten rottien meneillään curcumin hoidossa [(ryhmä III) ,; (59,4 ± 7,5)%, P
< 0.05]. Kuitenkaan mitään merkittävää eroa todettiin ryhmän I ja ryhmän IV rotilla [(73,3 ± 5,2%), P
> 0,05] (Kuva1). Kuvio 1 Vaikutukset curcumin mahalaukun tyhjenemiseen diabeettisissa rotissa. Ryhmä I = normaali kontrollirotilla (n = 10); : Ryhmä II = diabeteksen hallinnassa rottien (n = 10); : Ryhmä III = diabeettisen + curcumin hoidettujen rottien (n = 10); : Ryhmä IV = normaali + kurkumiini hoidettujen rottien (n = 10). Kaikki arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. * P
< 0,01 (verrattuna ryhmä I), # p
< 0,05 (verrattuna ryhmä II), Ap
> 0,05 (verrattuna ryhmä I).
Curcumin käsittely väheni MDA muodostumista, lisää SOD aktiivisuuden
Tutkimme oksidatiivista stressiä käyttämällä useita menetelmiä, koska glukoosin aiheuttaman oksidatiivisen stressin on oletettu olevan keskeinen mekanismi kroonisen diabeteksen komplikaatioiden. Diabeettisten rottien ilmeni kohonneita MDA tasoilla [I ryhmän 15,7 ± 1,7 (nmol /mg) vs
ryhmä II 27,9 ± 2,1 (nmol /mg), P
= 0,006] ja laski SOD tasoa [ryhmä I 146,2 ± 9,3 ( u /mg) vs
ryhmä II 107,9 ± 7,5 (u /mg), P
= 0,008], molekyyli- oksidatiivisen stressin merkkeihin (Figure2). Kuuden viikon curcumin vähensi aste MDA säätelyä [ryhmä III, 21,4 ± 1,8 (nmol /mg), P
= 0,033 vs. ryhmä I ja P
= 0,004 vs. ryhmä II], ja paransi SOD alas -regulation [ryhmä III 126,2 ± 8,8 (yksikköä /mg), P
= 0,036 vs. ryhmä I ja P
= 0,001 verrattuna ryhmään II]. Curcumin merkittävästi parannettu SOD aktiivisuuden ja vähensi MDA tasoa vatsaan homogenaateissa. Lisäksi mitään merkitsevää eroa ei havaittu ryhmän I ja ryhmän IV eläimiä (P
> 0,05, Figure2). Kuvio 2 Vaikutukset kurkumiinista MDA ja SOD diabeettisissa rotissa. Tasot MDA laski jälkeen käsitelty curcumin tasot SOD nostettiin jälkeen käsiteltiin curcumin. : Ryhmä I = normaali kontrollirotilla (n = 10); : Ryhmä II = diabeteksen hallinnassa rottien (n = 10); Ryhmä III = diabeettinen + kurkumiini hoidettujen rottien (n = 10); : Ryhmä IV = normaali + kurkumiini hoidettujen rottien (n = 10). Kaikki arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. * P
< 0,01 (verrattuna ryhmä I), # p
< 0,01 (verrattuna ryhmä II), Ap
> 0,05 (verrattuna ryhmä I).
Curcumin lisää SCF ja c-kit-proteiinin tasot
kuvat ovat RT-PCR-analyysi SCF vatsassa kudoksissa rottien kunkin ryhmän on esitetty Figure3A. Verrattuna ryhmä I, SCF oli merkitsevästi pienempi ryhmä II [(0,44 ± 0,02) vs.
(0,69 ± 0,03), P
= 0 0,002], ja vertailun arvojen III ryhmän paljasti, että SCF tasolla curcumin saaneilla rotilla oli suurempi kuin ryhmässä II [(0,58 ± 0,04) vs.
(0,44 ± 0,03) P
= 0 0,003]. Kuitenkin ei havaittu eroja ryhmien välillä I ja IV [(0,69 ± 0,03) vs.
(0,66 ± 0,03) P
= 0,56] (Figure3B). Western blot-analyysi (Figure4A, B) paljasti, että taso SCF vatsassa kudoksissa II ryhmän rotista oli huomattavasti pienempi kuin ryhmän I ja III rottia [suhteet (0,33 ± 0,02) vs.
(0,47 ± 0,03) ja (0,41 ± 0,02), vastaavasti, P
< 0 0,05)]. Ei kuitenkaan havaittu merkittävää eroa välillä ryhmä IV ja ryhmän I rotilla [(0,45 ± 0,03) vs.
(0,47 ± 0,03), P
> 0,05)], mikä viittaa siihen, että curcumin tuesta voi tehokkaasti palauttaa paikallisella SCF-proteiinin tasot vatsassa kudoksissa diabeettisten rottien. Kuvio 3 muutokset SCF /GAPDH ja C-kit /GAPDH RT-PCR-analyysillä. (A) edustaja kuvia geelielektroforeesin GAPDH, SCF, ja c-kit rotilla kunkin ryhmän. (B) ryhmä tasojen suhteellista mRNA ilmentymisen SCF ja c-kit, jossa tuotteiden määrä mitataan suhde GAPDH. : Ryhmä I = normaali kontrollirotilla (n = 10); : Ryhmä II = diabeteksen hallinnassa rottien (n = 10); : Ryhmä III = diabeettisen + curcumin hoidettujen rottien (n = 10); : Ryhmä IV = normaali + kurkumiini hoidettujen rottien (n = 10). Kaikki arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. * P
< 0,01 (verrattuna Group I), # p
< 0,05 (verrattuna ryhmä II), Ap
> 0,05 (verrattuna ryhmä I).
Kuva 4 muutokset SCF /GAPDH ja C-sarja /GAPDH Western blot-analyysi. (A) edustaja proteiinin kaista kuvia SCF, c-kit, ja glyceraldehydes-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH). (B) ryhmä tasot suhteellisen SCF ja c-kit-proteiinin ilmaisema suhde GAPDH, vastaavasti. : Ryhmä I = normaali kontrollirotilla (n = 10); : Ryhmä II = diabeteksen hallinnassa rottien (n = 10); : Ryhmä III = diabeettisen + curcumin hoidettujen rottien (n = 10); : Ryhmä IV = normaali + kurkumiini hoidettujen rottien (n = 10). Kaikki arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. * P
< 0,01 (verrattuna ryhmä I), # p
< 0,01 (verrattuna ryhmä II), Ap
> 0,05 (verrattuna ryhmä I).
RT-PCR analyysi osoitti, että ekspressiotasot c-kit vatsassa kudoksissa olivat 0,78 ± 0,04, 0,37 ± 0,02, ja 0,59 ± 0,03 ryhmille I, II ja III, tässä järjestyksessä. C-kit ekspressiotasot ryhmien II ja III rotat olivat alhaisempia kuin ryhmän I rotilla. Kuitenkin vertailu ryhmien II ja III osoittivat, että c-kit-tasolla curcumin saaneilla rotilla oli suurempi kuin ei-käsiteltyjen diabeettisten rottien (P
< 0,05, Figure3B). Samanlaisia ​​tuloksia osoitettiin Western blot-analyysi (Figure4B). Tasot c-kit-proteiinin (suhteet 0,45 ± 0,03, 0,21 ± 0,02 ja 0,34 ± 0,02, vastaavasti, sillä ryhmien I, II ja III) olivat paljon suuremmat III ryhmän kuin ryhmään II (P
< 0 0,05, Figure4B), ja taso III ryhmän oli pienempi kuin ryhmien I ja IV. Molemmat analyysit osoittivat, että 6 viikkoa kurkumiinin intervention voisi merkittävästi palauttaa lasku c-kit-tasot diabeettisissa rotissa.
Curcumin estää I-KB: n hajoamista ja NF-KB: n aktivaation
Raportit osoittavat, että lisääntynyt ja krooninen oksidatiivinen stressi voi aktivoida tai häiritä NF-KB-aktiivisuus [24]. Olemme tutkineet, onko kurkuma voi johtaa aktivointi NF-KB: n signalointireitin. Tehdä tämän, mittasimme tasot NF-KB: n läsnä ollessa tai poissa ollessa curcumin sen selvittämiseksi, onko NF-KB: n on aktivoitu. Ensin arvioitiin proteiinin tasot I-KB: n, johon inaktivoitu NF-KB: n sitoutuu. Huomasimme, että taso I-KB I ryhmän rotilla oli korkeampi kuin ryhmä II rotilla, kun taas taso III ryhmän rotilla oli alhaisempi kuin II ryhmän rotilla (p < 0,01), mutta korkeampi kuin tasot Ryhmät I ja IV rotilla (p < 0,05). Sitten me tutki curcumin voisi estää NF-KB. Huomasimme, että diabetes (ryhmä II) lisännyt NF-KB tasot [I ryhmän 75,5 ± 7,7 (pg /ml) vs
ryhmä II 102,8 ± 12,4 (pg /ml), P
= 0,001] , kun taas käsittely curcumin [ryhmä III 91,3 ± 8,9 (pg /ml)] esti tätä vaikutusta. Perustuen tähän havaintoon, ehdotimme, että curcumin tukahduttaa NF-KB: n [ryhmä IV 70,9 ± 8,1 (pg /ml), P
= 0,026] (Figure5). Tutkimme, onko curcumin voisi estää NF-KB translokaation tumaan, koska tumaansiirtymiseen tunnustetaan solun reaktio ROS stimulaatiota ja näyttää korreloivan NF-KB-välitteisen transkription aktivoitumisen. Tämän arvioimiseksi mittasimme taso NF-KB tumassa EMSA. Diabeteksen aiheuttama lisääntyminen NF-KB tasot tumassa, kun taas käsittely curcumin esti tämän vaikutuksen (Figure6). Niinpä ehdotettiin, että kurkuma ei ainoastaan ​​välillisesti estää NF-KB: n DNA: ta sitovan, mutta että se myös estää aktivoinnin ylävirtaan I-KB: n. Kuva 5 vaikutus kurkumiinista I-KB ja NF-KB. (A) palkkigrafiikka oli selvä osoitus tason I-KB ja NF-KB: n joukossa neljä ryhmää. (B) taso I-KB /GAPDH aleni ryhmä II, mutta kasvoi curcumin. I: Ryhmä I = normaali kontrollirotilla (n = 10); II: Ryhmä II = diabeteksen hallinnassa rottien (n = 10); III: III ryhmä = diabeettisen + curcumin hoidettujen rottien (n = 10); IV: Ryhmä IV = normaali + kurkumiini hoidettujen rottien (n = 10). Kaikki arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. * P
< 0,01 (verrattuna ryhmä I), # p
< 0,01 (verrattuna ryhmä II), Ap
> 0,05 (verrattuna Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Pancreaticogastrostomy puhdas laparoskooppisia pankreatikoduodenektomia-A novel haimaan mahalaukun anastomosis tekniikka -
• Geeniekspressioanalyysiä helikobakteeri-infektio ja korkea-suolaa ruokavalio-käsitellyn hiiren mahakasvaimen malli: tunnistaminen CD177 uutena ennustetekijä potilailla mahalaukun cancer