Plos ONE: Okrepljeno M1 makrofagne Polarizacija v Human Helicobacter pylori, pridruženi atrofični gastritis in cepljenimi miši

Povzetek

Ozadje

okužba s Helicobacter pylori
sproži kronične želodčne vnetje, ki lahko privedejo do atrofije in adenokarcinomom želodca. Polarizacija makrofagov je značilnost obeh raka in okužbe, ter lahko spodbujajo napredovanje ali resolucijo bolezni. Vendar pa je vloga makrofagov in njihove polarizacija med H. pylori
okužba še ni bila dobro opredeljena.

Metodologija /Glavne ugotovitve

Z uporabo modela miške okužbe in želodčnih biopsije iz 29 posameznikov, ki smo jih analizirali makrofagov zaposlovanje in polarizacijo med H. pylori
okužba s citometrija tok in PCR v realnem času. Našli smo zaporedno zaposlovanje nevtrofilcev, eozinofilcev in makrofagov do želodčne sluznice okuženih miši. Izražanje genov analiza želodca tkiva in razvrščenih makrofagov je pokazala, da so bile v želodcu makrofagov polarizirana, da M1 po H. pylori
okužbe, in ta proces je bistveno pospešil po predhodnem cepljenju. Human H. pylori
okužbo je značilna mešana M1 /​​M2 polarizacije makrofagov. Vendar pa je v H. pylori
-associated atrofični gastritis, izraz inducibilne sintaze dušikovega oksida je izrazito povečalo v primerjavi z nezapleteno gastritis, kaže na okrepljeno M1 makrofagov polarizacije v tem pre-maligne tvorbe.

Sklepi /Pomen

Ti rezultati kažejo, da je cepljenje miši proti H. pylori
ojača M1 polarizacijo želodčnih makrofagov, in ki je prisotna v človeškem H podoben gojene M1 polarizacijo. pylori
inducirano atrofični gastritis

Navedba. Quiding-Järbrink M, Raghavana S, Sundquist M (2010) Okrepljeno M1 makrofagne Polarizacija v humani Helicobacter pylori
-Associated atrofični gastritis in cepljene miši. PLoS ONE 5 (11): e15018. doi: 10,1371 /journal.pone.0015018

Urednik: Niyaz Ahmed, Univerza v Hyderabad, India

Prejeto: 26. avgust 2010; Sprejeto: 7. oktober 2010; Objavljeno: 23. november 2010

Copyright: © 2010 Quiding-Järbrink et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija je bil podprt s strani centra odličnosti MIVAC, švedske fundacije za strateške študije, v Adlerbert Research Foundation, Wilhelm &financira; Martina Lundgren je temelj, Inga-Britt & Arne Lundberg je temelj, in University Hospital Sahlgrenska. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Helicobacter pylori
kolonizirajo želodčne epitelij več kot polovico svetovnega prebivalstva [1]. Infekcija je pogosto doživljenjsko in sproži kronično vnetje želodčne sluznice, ki je v približno 1-2% okuženih posameznikov sčasoma razvije v adenokarcinom želodca [1]. Razvoj raka želodca, zlasti črevesno tipa, je večstopenjski postopek, ki napreduje desetletjih skozi predrakavih lezij v želodčni sluznici, kot atrofičnega gastritisa, intestinalno metaplazijo in displazija [2]. Izid okužbe odvisen od virulenca okužili H. pylori
sev, okoljski dejavniki, kot so kajenje in prehrane, ter gostitelja genetskih dejavnikov, ki vplivajo na vrsto in intenzivnost vnetnega odziva [1].

A močno pro-vnetni odziv je povezano s povečano stopnjo reaktivnih kisikovih in dušikovih vrste v sluznico želodca [3], ki lahko spodbujajo razvoj raka [4]. Na primer, miši, okuženih z H. pylori
za šest mesecev, imajo pogosteje želodčnih mutacij v primerjavi neokuženih miši [5]. Poleg tega miši, ki so pomanjkljiva za inducibilni sintaza dušikovega oksida encima (iNOS) imajo zmanjšano incidenco raka želodca po H. pylori
izziv okužba in kancerogen v primerjavi z običajnimi miši [6]. Medtem ko iNOS prispeva k razvoju raka želodca, je visoka raven kemokinski CCL18 v želodčnih tumorjev, povezan z dolgotrajnim preživetje bolnikov želodca z rakom [7]. Zanimivo je, da je iNOS proizvaja klasično aktiviranih /M1 makrofagov ker CCL18 proizvodnja je znak za alternativno aktiviranih /M2 makrofagov [8]. Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da imajo makrofagov polarizacija lahko pomembno vlogo pri razvoju H. pylori
-associated rak želodca.

M1 makrofagov običajno sodeluje pri začetnem imunskem odzivu na preplavljajo mikroorganizmov in spodbujanje T pomočnika (TH) 1 imuniteto, ker M2 makrofagov v fazi resolucije vnetja inducirane in so vključeni v razbitin prečiščevanjem, preoblikovanje tkiva in spodbujanje Th2 imunitete [8], [9]. Polarizacija makrofagov se usmerja mikrookolju. M1 makrofagov inducirane z interferon-y, in mikrobioloških proizvodov, kot so lipopolisaharidi [9]. Po drugi strani pa so M2 makrofagov inducirane z Th2- ali protivnetnih citokinov in rastnih faktorjev, vključno z IL-4, IL-10 in preoblikovanje rastnega faktorja-p [8], [9].

Med H. pylori
okužbe, so makrofagi zaposlujejo za želodčne sluznice, kjer prispevajo k proizvodnji pro-vnetnih citokinov in Kemokini [10] [11] [12] [13] [14] [15] . Poleg tega je nedavna študija je pokazala, da v liposome, posredovano izčrpavanje makrofagov zmanjša želodčne patologijo v H. pylori
okuženimi miši [16]. Kljub temu je funkcija makrofagov med vivo H. pylori
okužba še vedno razmeroma slabo definirana. Funkcija makrofagov je tesno povezan z njihovo polarizacije stanje, za katero se zdi tudi, da ima pomembno vlogo pri razvoju raka želodca [6], [7]. Zato smo pregledali makrofagov polarizacijo v želodčni sluznici H. pylori
okuženimi miši in ljudi. Pokazali smo, da je cepljenje miši proti H. pylori
hitrosti in ojača M1 polarizacijo želodčnih makrofagov. Poleg tega se predhodno rakavi lezija atrofičnega gastritisa označen s povečanjem makrofagov M1 polarizacije pri ljudeh.

Rezultati

Povečana pogostost makrofagih, eozinofilcev in nevtrofilcev v želodčni sluznici po H. pylori
okužba

Zaposlovanje prirojenih celic na mesto okužbe je predpogoj za nalezljive nadzor. Ne samo, da lahko prirojena celice, kot so makrofagi in nevtrofilcev, sodelujejo pri bakterijskih ubijanja; jih proizvajajo tudi vnetne mediatorje, ki določajo stopnjo za naslednje imunskega odziva. Da bi raziskali kopičenje prirojenih celic želodčne sluznice med H. pylori
okužba, smo okuženi C57BL /6 miši z mišjim prilagojeno H. pylori
Sydney seva 1 (SS1), in po štirih, osmih in 26 tednov smo analizirali želodcu vnetno infiltrirati posamezne miši z multi-color citometrija. Skupno število proprie celic listne izoliranih iz želodca ni spremenila v prvih štirih tednih okužbe, vendar pri osmih tednov po okužbi smo podvojili skupno število celic izoliranih, in pri 26 tednih okužbe prišlo do osem-kratno povečanje skupnega števila celic izoliranih primerjavi z neokuženih miši (sl. 1A). Med da celice zaposli v želodcu so makrofagi, eozinofilci in nevtrofilcev. Želodčne makrofagi so bili opredeljeni kot celice, ki izražajo CD11b in poglavitnega histokompatibilnega kompleksa razreda II (MHC-II), vendar nimajo izražanje gr1 (nevtrofilcev marker), CD103 (izražena z podskupini dendritične celice (DCS)) in sialne kislino vezavo immunoglobulin- kot lektin (Siglec-F, eozinofilci označevalca) (sl. 1B). Te celice so izrazili makrofagov označevalca F4 /80 (sl. 1E), in ki temelji na celično morfologijo bilo potrjeno, makrofagov (sl. 1B). Pogostost makrofagov v želodčni sluznici po štirih do osmih tednih H ostala nespremenjena. pylori
okužba (sl. 1F). Vendar pa je po 26 tednih frekvenčnih želodčnih makrofagov je povečalo v primerjavi z neokuženih miši (sl. 1F).

eozinofilci so bili opredeljeni kot CD11b ^{+ Siglec-F + celic (sl. 1C, [17]). Te celice izražena vmesne stopnje F4 /80 in je imela visoko stransko profil razpršeni pri analizi s citometrije pretoka (Sl. 1E). Kresil vijolično obarvanje razvrščeni CD11b + Siglec-F + celic potrdili eozinofilcev morfologija (sl. 1C). Pogostost eozinofilcev v želodčni sluznici se je po osmih tednih podvojila in po 26 tednih okužbe (sl. 1F) še povečal.}

Nevtrofilci so bili opredeljeni kot CD11b ^{+ gr1 + celic (Slika . 1D). Ker protitelo gr1 priznava tako Ly6C in Ly6G epitop smo potrdili, da vsi CD11b + gr1 + celice izrazil posebno nevtrofilcev oznako Ly6G (sl. 1D in E). Pogostost nevtrofilcev povečal 10-krat osem tednov po okužbi je še povečala po 26 tednih (sl. 1F). Tako je med H. pylori
okužba je zaporedno kopičenje nevtrofilcev in eozinofilcev, sledi makrofagov v želodcu lamine proprie.}

Karakterizacija želodca DC

Za označevanje želodčne DC, smo najprej opredelili populacijo od CD11C ^{+ MHC-II + celic (sl. 2A). Ko so te celice še dodatno analizirali za izražanje F4 /80 in αE integrin verige CD103, polovica CD11C + MHC-II + celice so bile opredeljene kot F4 /80 + makrofagov (sl. 2A ). Vendar pa je med CD11C + MHC-II + celice, ki niso poznale izražanje F4 /80, je mogoče razlikovati dva populacije domnevno so DC z diferencialno izražanje CD103 (sl. 2A). Zaradi številnih fluorokromi potrebnih smo se odločili za samo opredelitev želodčne CD103 +
DC še naprej, saj so te celice vpleten kot pomemben antigen predstavitev celic v tkivu sluznice [18]. Želodca CD103 + DC so lahko označene z obarvanjem za CD11C in CD103 (sl. 2B). Želodca CD103 + DC izrazil visoko raven MHC-II, in je bil sestavljen iz CD11b nizko in CD11b visoka podmnožica (sl. 2C). V primerjavi želodca CD103 - so bile DC vsi CD11b visoka (slika 2D.). Poleg tega CD103 + DC manjkalo izražanje CD8α in F4 /80 (sl. 2C). Vendar pogostost CD103 + DC ni bistveno v želodčni sluznici spremeniti po okužbi (sl. 2E).}

želodcu makrofagov in CD103 + DC ne upregulate kostimulatorne molekule po H. pylori
okužba

Da bi raziskali možne učinke H. pylori
okužbe na ekspresijo kostimulatornih molekul in MHC-II s želodca makrofagov in CD103 ^{+ DCS je izražanje teh označevalcev analiziramo s pretočno citometrijo po štiri, osem in 26 tednih okužbe. V stanju dinamičnega ravnovesja, makrofagov in CD103 + DCS želodčni lamine proprie izrazil podobno raven v kostimulatorne molekule CD86, kot tudi MHC-II (sl. 3A). Presenetljivo je, da izraz CD86 in MHC-II bodisi na želodcu makrofagov ali CD103 + so DC ni bila povečana po okužbi s H. pylori
glede na starostno primerljivimi ki še niso bili miši, analiziranih v vzporedni (sl. 3B). Tako, makrofagov in CD103 + DC v želodčni lamine proprie ne upregulate CD86 in MHC-II po H. pylori
okužbo, kljub stalnem vnetni odziv.}

M1 polarizacija želodca makrofagov v H. pylori
okužba

Ker naši rezultati kažejo, da je v želodcu makrofagov morda ne bo v celoti vključi pri H. pylori
okužba, smo nadalje značilen te celice, ki jih preiskuje svoje M1 /​​M2 polarizacijo. Za določitev makrofagov polarizacijo med H. pylori
okužbo, smo uporabili PCR v realnem času za merjenje ekspresije genov, povezanih z M1 ali M2 polarizacije makrofagov v želodčni tkivu [8], [9]. Smo tudi izmerili ekspresijo IL-10, ki ga lahko proizvedena z regulatornimi makrofagov [9]. Nobena od označevalcev analiziranih je bilo različno izražena štiri tedne po H. pylori
okužb glede na naivne miših (sl. 4A). V osmih tednih po okužbi izraz M1 označevalcev je iNOS in CXCL11 znatno povečal, in ti markerji so bili nadalje molekul po 26 tednih okužbe (sl. 4a). Poleg tega je bila ekspresija IL-10 molekul na osem do 26 tednov okužbe glede na naivne miših (sl. 4A). V nasprotju s tem, ugotovila, M2 markerji pri vnetnih coni 1 (FIZZ1) in arginaze-1 niso bile različno izražena v želodcu na štiri, osem ali 26 tednov, okužbe, v primerjavi z naivnim miših (sl. 4A).

za prepoznanje vira iNOS in CXCL11 v želodčni sluznici, makrofagov (CD11b ^{+ gr1 -Siglec-F -MHC-II +), eozinofilci (CD11b + gr1 -Siglec-F + MHC-II -), preostale celice po prehod iz makrofagov in eozinofilcev (CD11b - in CD11b + gr1 +) so bile razporejene od združili želodčne lamina Propria celice miši, okuženih z H. pylori
za 26 tednov (sl. 4b). MRNA Izražanje iNOS in CXCL11 v populacijah sortiranih celic okuženih miših, kot tudi v celotnih želodca plast proprie celic tako naivne in okuženih miših je bila nato določena z PCR v realnem času. Zadostno število urejenih makrofagov ni bilo mogoče pridobiti iz naivnega miši za zanesljivo analizo mRNA izražanja. Želodčne makrofagov izražena najvišjo raven iNOS in CXCL11 v primerjavi z drugimi populacijami sortirani celic in celotnega želodca lamine proprie celic pred (si. 4c) razvrščanje. Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da je v želodcu makrofagov polarizirana, da M1 v H. pylori
okužba.}

Cepljenje proti H. pylori
širi makrofagov M1 polarizacija

Zaščitna imunizacija proti H. pylori
je navadno povezana s hitrim razvojem želodca odziva Th1 [19]. Ker Th1 citokinov interferon-γ inducira makrofagov M1 polarizacijo [9], smo pregledali, ali bi bilo cepljenje vplivati ​​makrofagov polarizacijo med H. pylori
okužbe. V ta namen so bile miši podjezično cepili s H. pylori
lizat in toksin kolere adjuvans in nato izzovemo s H. pylori
SS1. To imunizacija režim povzročili znatno zmanjšanje bakterijske obremenitve v želodcu štirih tednih po izzivu (sl. 5A). Hkrati je izraz M1 in M2 markerjev v želodcu analizirali s PCR v realnem času. V Neimunizirane miših, je le izraz CXCL11 močno navzgor regulirana štiri tedne po infekciji primerjavi naivne miših (sl. 5B). V nasprotju s tem, imunizirane miši pokazala veliko Povecanje tako M1 markerji INOS in CXCL11 ker izraz M2 markerji FIZZ1 in arginaze-1 ni bila spremenjena, štiri tedne po izzivu (sl. 5B). Povečana ekspresija iNOS in CXCL11 v imunizirane /izpodbijal miših ni posledica same imunizacije, saj imuniziramo vendar miši nenamenski Izpodbijani ni spremenila izražanje kateregakoli izmed analiziranih M1 in M2 markerjev v primerjavi s popolnoma nezdravljeno miših (podatki niso prikazani ).

Poleg tega smo analizirali pogostost makrofagov v želodčni sluznici imuniziranih miši in preskusili s pretočno citometrijo. Glede na okuženih-le miši, imela imunizirane miši bistveno pogostejše želodčnih makrofagov tri tedne po izzivu (sl. 5C). Vendar pa kljub temu, da so makrofagi zaposleno na želodčni sluznici imuniziranih in preskusili miših so makrofagi niso upregulate ekspresije CD86 ali MHC-II glede na okuženem-samo miših (sl. 5d). Ti rezultati kažejo, da je po uspešnem cepljenju s H. pylori
lizat in kolera toksin, makrofagov kopičijo v želodčni sluznici in se hitro polarizirana, da M1 po okužbi.

nadgrajevanje makrofagov M1 polarizacije v človeški atrofični gastritis

Naslednja raziskovala vlogo za H. pylori
okužbo in atrofični gastritis za makrofagov polarizacije v želodčni sluznici ljudi. V ta namen je bila ekspresija človeških M1 (iNOS, CXCL11) in M2 označevalcev (CCL17, CCL18, CD206), merjena v biopsijah iz antruma s PCR v realnem času. H. pylori
okuženimi posamezniki z nezapleteno gastritis pokazale bistveno povišan izražanje mRNA za tako M1 (iNOS, 8-krat; CXCL11, 20-krat) in M2 označevalcev (CCL17, 30-krat, CCL18, 70-krat, CD206 , 2-krat) v primerjavi z neokuženih prostovoljcih (sl. 6a). Vendar pa posamezniki z atrofični gastritis (4/6 imela intestinalno metaplazijo poleg atrofije) je izrazil še višje nivoje iNOS mRNA v primerjavi s tistimi z nezapleteno gastritis (20-krat), medtem ko so CXCL11 in označevalcev M2 polarizacije podobno izrazil (sl. 6A). Dejansko je bil izraz iNOS 180-krat pri posameznikih povečala z atrofični gastritis primerjavi neokuženih kontrol (sl. 6a), kar kaže na okrepljeno M1 polarizacijo želodčnih makrofagov pri bolnikih s atrofični gastritis.

Če želite ugotoviti, ali je povečana mRNA izraz M1 in M2 markerjev pomeni tudi povečane koncentracije proteina, so skupni proteini pridobljeni iz antralnih biopsijo in koncentracija iNOS in CCL18 je bila določena z ELISA. Želodčne biopsije iz posameznikov z atrofični gastritis je na voljo le za ekstrakcijo proteinov iz enega prostovoljca, ki je različno je prikazano na sliki 6B. Polovica H. pylori
okuženimi posamezniki so imeli ugotovljive nivoje iNOS beljakovin v antruma medtem ko je bila koncentracija iNOS pod mejo detekcije pri vseh neokuženih posameznikih (sl. 6B). Izražanje iNOS mRNA in iNOS beljakovin je značilno povezana (R ^{2 = 0,88, P
< 0,01), kar kaže, da je analiza mRNA odraža izražanja proteinov, tudi če so vsebnosti beljakovin nizka. Koncentracija marker CCL18 M2 je v želodčnem tkivu iz H povečala. pylori
okuženimi posamezniki glede na neinficirane kontrole (sl. 6B). Poleg tega je bila koncentracija CCL18 beljakovin bistveno povezana z izražanjem CCL18 mRNA (R 2 = 0,754, P
< 0,01).}

V celoti gledano, te ugotovitve navesti prisotnost obeh M1 in M2 makrofagov v želodčni sluznici H. pylori
okuženimi posameznikov. Poleg tega je atrofičnega gastritisa povezano z močnim pomnoževanje iNOS izražanja v želodčni sluznici, kar kaže na povečano M1 polarizacije makrofagov.

Diskusija

V tej študiji smo raziskovali polarizacija želodca makrofagov med kronično H. pylori
okužbe. Pokazali smo, da je H. pylori
okuženimi posamezniki izražajo mRNA v želodčni sluznici okvirno mešanega M1 /​​M2 polarizacije makrofagov, kar je dodatno potrdilo na ravni proteina. Vendar pa je v H. pylori
inducirano atrofičnega gastritisa je opazen izboklina v izražanju iNOS primerjavi nezapletene gastritisa. Atrofični gastritis daje povečano tveganje za nastanek želodčne raka glede na nezapleten H. pylori
-associated gastritis [20]. Povečana ekspresija iNOS v atrofičnega gastritisa lahko prispeva k razvoju raka želodca prek proizvodnje reaktivnih dušika, ki lahko spodbujajo karcinogenezo z indukcijo poškodbe DNA, motnje popravila DNA, post-translacijsko modifikacijo proteinov in P53 mutacij [4]. Res, miši iNOS-deficientne imajo zmanjšano pojavnost adenokarcinomom želodca po H. pylori
okužbe in izziv s kemičnim rakotvorne snovi v primerjavi z običajnimi miši [6]. Tudi polimorfizmi v promotorja regiji iNOS, ki vodijo k večji transkripcijske aktivnosti, v korelaciji z višjo incidenco črevesne vrste raka želodca v japonskih žensk [21].

V nasprotju s človeško H . pylori
okužba, SS1 okuženi C57BL /6 miši pokazala profil izražanja genov v želodčni sluznici, ki kažejo na makrofagov M1 polarizacije. Izražanje genov analiza sortiranih makrofagov izoliranih iz želodčne sluznice okuženih miši in potrdila, da izraz M1 markerji iNOS in CXCL11 je obogaten urejenem makrofagov populaciji. Poleg tega je bil M1 polarizacija želodčnih makrofagov znatno pospešila po predhodnem cepljenju. Že štiri tedne po izzivu, imunizirane miši molekul izražanje iNOS in CXCL11 na podobni ravni, kot jih vidimo po 26 tednih v okuženih-le miši. Študije miši iNOS-pomanjkanjem so pokazale, da iNOS spodbuja razvoj atrofije in raka na želodčne sluznice v Helicobacter
infekcija [6], [22]. Poleg tega, očistek H. pylori
, potem ko se cepljenje neodvisno iNOS [23]. Zato se zdi, iNOS prispevati k gostil patologijo, ne pa zaščita med okužbo s H. pylori
. Zato, če je izboljšana produkcija iNOS v želodčni sluznici vzdržuje po cepljenju, je lahko nezaželen stranski učinek, ki lahko poveča resnost H. pylori
inducirano vnetja in raka, če je dosežena sterilna imuniteta. Vendar pa je relativni prispevek iNOS gostiti patologije v primerjavi z zaščito v različnih fazah H. pylori
okužba jamči nadaljnjo preiskavo.

smo opazili zaporedno zaposlovanje prirojenih celic na želodčni sluznici SS1 okuženih miših, pri čemer so makrofagi nabira precej pozno med potekom okužbe (26 tednov). V nasprotju s tem, pogostnost želodčnih nevtrofilcev in eozinofilcev v želodčni sluznici povečala osem tednov po okužbi in ostala visoka pri 26 tednih. Kopičenje makrofagov je prišlo veliko hitreje pri cepljenih miših, pri čemer je bila pogostnost želodčnih makrofagov že povečanih tri tedne po izzivu. Prej so nevtrofilci pokazale, da se zaposli v želodčni sluznici SS1 okuženih miši v dveh fazah, od zgodnje faze z vrhom 1-2 dni po okužbi in en pozni fazi se začne na 2-3 tedne po okužbi [24]. Izbira vzorec, podoben tistemu iz nevtrofilcev, je opisana tudi v želodčnih makrofagov [24]. Vendar pa so makrofagi opredeljeni kot CD11b ^{+ gr1 - celice [24], celica prebivalstva, ki v naših rokah predvsem sestavljen iz eozinofilcev (glej sliko 1 in 2.). Asim sod. opredeljene makrofagov kot CD11b + F4 /80 + celice, in 1-2 dni po okužbi z H opazili zgodnji vrhunec makrofagov številko v želodčni sluznici. pylori
[15]. Poleg tega je bilo število makrofagov spet povečala na 60 in 120 dni po okužbi glede na naivnih miši [15]. Te rezultate smo razširiti z dokazovanjem, da je zaposlovanje teh prirojenih populacij celic ohranila vse do 26 tednov po okužbi. Poleg tega smo opisali kopičenje eozinofilcev v želodčni sluznici, populacijo celic, ki daleč prekaša želodca makrofagov in nevtrofilcev (Sl. 1). Dejansko je vloga eozinofilcev v H. pylori
inducirano gastritis bi bilo treba dodatno raziskati. Eozinofilci in makrofagov delež izražanje več označevalci, vključno CD11b in F4 /80 (sl. 1, [25]). Zato je treba analizirati hkrati za razlikovanje teh prirojenih celične populacije več označevalcev.}

smo lahko identificirali dve populaciji DCS v želodčni sluznici miši. Oba podmnožice izrazil visoko raven CD11C in MHC-II, manjkalo izraz makrofagne marker F4 /80, vendar se razlikuje v zvezi z izražanjem CD103. Pogostost želodčnega CD103 ^{+ DC niso spremenile po štirih, osmih ali 26 tednih H. pylori
okužbe. V nasprotju z našo raziskavo, nedavni študiji Kao et al. ni bilo mogoče zaznati CD103 + DC, v želodčni sluznici neokuženih miši [26]. Namesto, CD103 + DC pojavila 24 ur po H. pylori
okužbe. Ker so časi analize razlikujejo študije in naših poskusov, je težko neposredno primerjati rezultate.}

Kljub temu, da so makrofagi M1 običajno upregulate MHC-II in kostimulatorne molekule, nismo mogli zaznati povečano izražanje MHC -II ali CD86 na želodcu makrofagov ali CD103 ^{+ so DC iz bodisi Neimunizirane ali imuniziranih miših po okužbi. Nasprotno, v in vitro inkubacija H. pylori
s človeškimi monocitov [27], človek iz monocitov so DC [28] [29] [30] [31], DC mišjega kostnega mozga izhaja [32], [33], ali človek primarno želodčnih DC [34], inducira uravnavanjem kostimulatornih molekul in MHC-II. Zato je neuspešno upregulate MHC-II in CD86 na želodcu makrofagov in CD103 + DCS kronični H. pylori
okužba lahko povzroča vnetne okolju in ne bakterij na sebi. Dejansko je interakcija med DCS H. pylori
in vitro ne odraža nujno, kaj se dogaja in vivo, kjer lokalna mikrookolje na mestu nakupa antigena in predstavitev antigenov, kot tudi DC podskupini, ki sodeluje pri predstavitvi antigena v H. pylori
, bo vplivala na odziv. Na primer, regulatorne T celice, ki prevladujejo v H. pylori
okuženimi želodčne sluznice [35], [36], lahko prepreči uravnavanjem kostimulatornih molekul in MHC-II, DCS [37]. Poleg tega, IL-10 lahko prepreči uravnavanjem kostimulatornih molekul in MHC-II na makrofagov in DCS [38].}

V akutnih vnetnih odzivov, makrofagi so običajno polarizirani, da M1 in izvajati močan anti-mikrobne učinke. Na primer, okužba s Salmonella typhimurium
ali Listeria monocytogenes
inducirajo M1 polarizacije makrofagov, ki je potrebna za nadzor okužbe [39]. Resolucija vnetja je značilen premik makrofagov polarizacije z M2, ki promovira tkiva celjenje. bolniki Tuberkuloza prikaže povečano produkcijo Th2 citokinov, kot je okužba napreduje [40], [41], ki lahko povzročijo M2 polarizacije makrofagov. Pri miših, M1 polarizacija makrofagov predstavlja zgodnji odziv na Mycobacterium tuberculosis
, medtem ko se alveolarni makrofagi polarizirana M2 med okužbo poznem stadiju [42]. Vendar pa je premik v makrofagov polarizaciji s kroničnimi okužbami povzroča pogosto za posledico zmanjšano zmogljivostjo makrofagov ubiti preplavljajo bakterije [39], [43]. Po drugi strani pa je kronično vnetje z vztrajno M1 makrofagov polarizacije povezana s povečanim tveganjem za razvoj raka [4].

Ali makrofagov prispeva k gostil obrambo proti H. pylori
? Za razliko od nevtrofilcev, makrofagov niso pogosto videti v želodcu svetlino po premestitve preko epitela [44]. Ker H. pylori
prednostno prebivajo v želodčni sluz plasti ali pa so pritrjeni na epitelijskih celic želodca, makrofagi ne sme priti v neposredni stik s cele bakterije. Pravzaprav je bilo izčrpavanje makrofagov s liposomov drog naložen ne vpliva na H. pylori
kolonizacija [16], kar kaže, da makrofagi ne sme neposredno prispevajo k gostil obrambo proti H. pylori
. V nasprotju s tem pa lahko makrofagi spodbuja želodca patologijo. Na primer, v liposome, posredovano izčrpavanje makrofagov ublažili z gastritis s H inducirano. pylori
okužba [16]. Poleg tega je selektivno brisanje I-κB-kinaze ß v mieloidnih celic, ki preprečuje aktivacijo NF-κB v teh celicah, ovira razvoj želodčnega atrofije po H. felis
okužba [45]. Tako, makrofagi ne zdi, da prispevajo k Helicobacter
potrditve, lahko pa ne spodbuja želodčne patologije.

Skratka, ta študija je pokazala, da cepljenje miši proti H. pylori
ojača M1 polarizacijo želodčnih makrofagov. Podoben pojav je viden v človeški atrofični gastritis, kjer je mešana M1 /​​M2 polarizacija prisotna v nezapletene gastritis nadomesti z M1-prevladujejo polarizacijo. To lahko povzroči tumor, spodbujanje vnetja, in premik makrofagov polarizacijo iz M1, M2 bi torej predstavlja terapevtski cilj pri kroničnem H. pylori
okužba.

Materiali in metode

Etika izjava

Raziskavo je odobrila živali etičnega odbora državnega (Göteborgs djurförsöksetiska nämnd, 328/2008 in 254 /2009). Regionalni človekovih etiko Västra Götaland County na Švedskem (706/03 in 85/06) odobrila študijo, in pisno privolitev je bila pridobljena iz vseh udeležencev. To je edini organ daje etične dovoljenje za raziskave na ljudeh na Švedskem, in ni neposredno povezana z bolnišnic in univerz.

Miške

Ženski C57BL /6 miši so bile kupljene od Charles River Laboratories (Sulzfeld, Nemčija), ali v primeru poskusih cepljenja iz Taconic (Ejby, Danska). Miši so bile okužene pri starosti 8-12 tednov.

Bakterije in okužbo miši

H. pylori
SS1 smo gojili na Columbia ISO agarske plošče, za 2 dni pri 37 ° C, nakar so bili preneseni na Brucella brozge dopolnjen s serumom 5% fetalnega telečjega (FCS) in antibiotiki (vankomicin, 10 mg /ml; polimiksin B 20 U /ml, trimetoprim, 5 ug /ml) in inkubirali stresanju preko noči pri 37 ° C pod mikroaerofilnih pogojih. Pred okužbo, je gibljivost bakterij potrjeno z mikroskopijo. Koncentracija bakterij bila ocenjena spektrofotometrično. Miši prejel 3 x 10 ^{8 enot, ki tvorijo kolonije na SS1 intragastrically.}

podjezična imunizacija

Miši so dobile štiri 10 ml odmerkov 500 ig H. pylori
lizat (pripravljene iz seva Hel305 kot je opisano predhodno [46]), v kombinaciji z 10 mikrogramov kolera toksina (cenika biološki Laboratories Inc., Madison, NJ) podjezično na 1-tedenskih presledkih [47], [48]. Dva tedna po zadnjem cepljenju, so miši intragastrically izpodbija s 3 x 10 ^{8 kolonij, ki tvorijo enote H. pylori
SS1.}

Ocenjevanje bakterijske kolonizacije

Za kvantitativno oceno bakterijske kolonizacije v imunizacije poskusih, polovica želodca je previdno speremo s PBS in homogenizirali s pomočjo Ultra Turrax homogenizatorjem ( IKA Laboratorij Technology, Staufen, Nemčija). Serijske razredčitve homogenata smo nanesli na Skirrow agar ploščah. Ko so želodčni LAMINA Propria celice izolirali iz celotnega želodca ni mogoče izvesti kvantitativno oceno želodčne bakterijske obremenitve. V tem primeru je bil želodec, ki je bila reši vzdolž večje ukrivljenosti in sprali v PBS, nežno progasta na Skirrow agar ploščah. Prisotnost H. pylori
kolonije je bila potrjena s testom ureaze. Na ta način smo lahko potrdili, H. pylori
kolonizacija in še vedno uporabljajo celoten želodec za izolacijo celic.

Izolacija želodca lamine proprie celic

žleznega želodca je narežemo na 5 mm koščke in inkubirali skupaj trikrat z H.

• Plos ONE: Natančnost in mejne vrednosti za Pepsinogens I, II in gastrin 17 za diagnozo želodca Fundic atrofije: Vpliv Gastritis
• Plos ONE: Bakterijski Mikrobiota profiliranje v gastritis brez Helicobacter pylori okužbe ali nesteroidna protivnetna zdravila Use