PLoS ONE: Enhanced M1 макрофагальной Поляризация в Human хеликобактерной-Associated атрофический гастрит и в вакцинированных мышей

Абстрактный

Фон
<р> Инфицирование хеликобактер пилори
вызывает хроническое воспаление желудка, что может прогрессировать к атрофии и аденокарциномы желудка. Поляризационная макрофагов является характеристикой как рак и инфекции, и может способствовать прогрессированию или разрешение болезни. Тем не менее, роль макрофагов и их поляризация во время H. Pylori
инфекция не была определена.

Методология /Основные выводы
<р> С помощью мышиной модели инфекции и желудочных биопсий из 29 особей, мы проанализировали набор макрофагов и поляризацию во время H. Pylori
инфекции с помощью проточной цитометрии и ПЦР в реальном времени. Мы обнаружили, последовательный набор нейтрофилы, эозинофилы и макрофаги к слизистой оболочке желудка зараженных мышей. Анализ экспрессии генов в ткани желудка и отсортированных макрофагов показало, что желудочные макрофаги были поляризованы M1 после H. пилори
инфекции, и этот процесс был значительно ускорен предварительной вакцинации. Человек H. пилори
инфекция характеризуется смешанным М1 /М2 поляризации макрофагов. Тем не менее, в H. пилори
-associated атрофический гастрит, экспрессия индуцибельной синтетазы оксида азота значительно увеличивалась по сравнению с неосложненной гастрита, что свидетельствует о повышенной макрофагальной поляризации M1 в этом предракового поражения.

Выводы /Значение
<р> Эти результаты показывают, что вакцинация мышей против H. пилори
усиливает M1 поляризацию желудочного макрофагов, и что подобная повышенная поляризация М1 присутствует в человеческом H. Pylori
индуцированная атрофический гастрит
<р> Образец цитирования:. Quiding-Järbrink M, Рагаван S, Сандквист M (2010) Enhanced M1 макрофагальной Поляризация в человеческой хеликобактерной
-Associated атрофический гастрит и в вакцинированных мышей. PLoS ONE 5 (11): e15018. DOI: 10.1371 /journal.pone.0015018
<р> Редактор: Нияз Ахмед, Университет Хайдарабад, Индия
<р> Поступило: 26 августа 2010 года; Принято: 7 октября 2010 года; Опубликовано: 23 ноября 2010 года
<р> Copyright: © 2010 Quiding-Järbrink и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Это исследование Работа выполнена при поддержке центра передового опыта MIVAC, финансируемого шведским фондом стратегических исследований, Adlerbert Research Foundation, Wilhelm &Amp; Фонд Мартины Лундгрен, в Inga-Britt &Amp; Фонд Арне Lundberg, и больницы Сальгренска университета. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение

хеликобактер пилори
колонизировать эпителий желудка более половины населения земного шара [1]. Инфекция часто пожизненный и вызывает хроническое воспаление в слизистой оболочке желудка, что в 1-2% инфицированных людей в конечном счете перерастает в аденокарциномы желудка [1]. Развитие рака желудка, в частности, от типа кишечника, представляет собой многостадийный процесс, который прогрессирует в течение десятилетий через предраковых поражений в слизистой оболочке желудка, таких как атрофический гастрит, кишечной метаплазией и дисплазией [2]. Исход инфекции зависит от вирулентности заражать H. Pylori
штамм, экологические факторы, такие как курение и диета, и генетические особенности, которые влияют на тип и интенсивность воспалительного ответа [1].
<р> Сильный про-воспалительный ответ связан с повышением уровня активных форм кислорода и азота видов в слизистой оболочке желудка [3], которые могут способствовать развитию рака [4]. Например, мышей, инфицированных H. пилори
в течение шести месяцев, имеют повышенную частоту мутаций желудка по сравнению с неинфицированных мышей [5]. Кроме того, у мышей, которые дефицитны для фермента индуцибельной синтазы оксида азота (ИНОС) имеют сниженную частоту рака желудка после H. пилори
инфекция и канцерогеном вызов по сравнению с нормальными мышами [6]. В то время как иОАС способствует развитию рака желудка, высокий уровень хемокинов CCL18 в опухолях желудка связана с длительным выживанием у больных раком желудка [7]. Интересно отметить, что иОАС производится классически активированными макрофагами /M1, тогда как производство CCL18 является отличительным признаком для альтернативно активированные /макрофаги M2 [8]. Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том, что макрофаг поляризация может играть важную роль в развитии H. Pylori
-associated рак желудка.
<р> M1 макрофаги, как правило, принимают участие в начальной иммунного ответа на вторжение микроорганизмов и способствовать Т-хелперов (Th) 1 иммунитет, в то время как макрофаги М2 индуцируется в фазе разрешения воспаления и участвуют в мусор вывоз мусора, ремоделирования ткани, а также поощрение Th2 иммунитета [8], [9]. Поляризация макрофагов направлено на микросреду. M1 макрофаги индуцируются интерферон гамма и микробных продуктов, таких как липополисахарид [9]. С другой стороны, макрофаги M2 индуцируются Th2- или противовоспалительных цитокинов и факторов роста, в том числе IL-4, IL-10 и трансформирующий фактор роста-бета [8], [9].
<Р> во время H. Pylori
инфекции, макрофаги рекрутируются в слизистой оболочке желудка, где они способствуют выработке провоспалительных цитокинов и хемокинов [10], [11], [12], [13], [14], [15] , Кроме того, недавнее исследование показало, что опосредованную липосомами истощение макрофагов снижается желудочной патологии в H. Pylori
-infected мышей [16]. Несмотря на это, функция макрофагов во время в естественных условиях H. Pylori
инфекция остается относительно плохо определена. Функция макрофагов тесно связан с их состоянием поляризации, который также, как представляется, играют определенную роль в развитии рака желудка [6], [7]. Поэтому мы исследовали поляризацию макрофагов в слизистой оболочки желудка H. пилори
-infected мышей и людей. Показано, что вакцинация мышей против H. пилори
скорости и усиливает поляризацию M1 желудочного макрофагов. Кроме того, предраковое поражение атрофический гастрит характеризуется повышенной макрофагами М1 поляризации в организме человека.

Результаты

Увеличение частоты макрофагов, эозинофилов и нейтрофилов в слизистой оболочке желудка после ЧАС. Pylori
инфекция
<р> набор врожденных клеток к месту инфекции является обязательным условием для инфекционного контроля. Мало того, что врожденная клетки, такие как макрофаги и нейтрофилы, участвуют в бактериальном убийства; они также производят медиаторы воспаления, которые заложили основу для последующего иммунного ответа. Для того, чтобы исследовать накопление врожденных клеток в слизистой оболочке желудка в течение H. Pylori
инфекции, мы заражены мышей C57BL /6 с помощью мыши адаптированный H. пилори
Сидней штамма 1 (SS1), и после того, как четыре, восемь и 26 недель, мы провели анализ желудка воспалительный инфильтрат индивидуальных мышей многоцветной проточной цитометрии. Общее количество Propria клеток листовых пластинок, выделенных из желудка не изменялись в течение первых четырех недель после инфицирования, но в восемь недель после заражения общее число клеток, выделенных удваивалась, и через 26 недель после инфицирования была в восемь раз больше в общем количестве клеток, выделенных по сравнению с неинфицированными мышей (фиг. 1А). Среди клетки вербуют в желудке были макрофаги, эозинофилы и нейтрофилы. Желудочный макрофаги были идентифицированы в качестве клеток, экспрессирующих CD11b и главный комплекс гистосовместимости класса II (ГКГ-II), но не имеющих экспрессию Gr1 (нейтрофильный маркер), CD103 (выраженное подмножестве дендритных клеток (ДК)) и кислотосвязывающего immunoglobulin- сиаловой как лектин (сиглек-F, эозинофилов маркер) (рис. 1В). Эти клетки экспрессируют макрофагов маркер F4 /80 (рис. 1E), и на основе морфологии клеток были подтверждены как макрофаги (рис. 1, б). Частота макрофагов в слизистой оболочке желудка осталась неизменной после того, как четыре и восемь недель H. Pylori
инфекции (рис. 1F). Тем не менее, после 26 недель частота желудочных макрофагов увеличилась по сравнению с неинфицированных мышей (рис. 1F).
<Р> Эозинофилы были определены как CD11b ^{+ сиглек-F + клеток (рис. 1С, [17]). Эти клетки экспрессируют промежуточные уровни F4 /80 и имел высокий боковой профиль рассеяния при анализе с помощью проточной цитометрии (рис. 1д). Cresyl фиолетовый окрашивание отсортированных CD11b + сиглек-F + клетки подтвердили эозинофилов морфологии (рис. 1в). Частота эозинофилов в слизистой оболочке желудка удвоилось после восьми недель и дополнительно увеличить через 26 недель после инфицирования (рис. 1F).}

Нейтрофилы были определены как CD11b ^{+ Gr1 + клеток (рис . 1D). Так как антитело Gr1 признает как Ly6C и Ly6G эпитоп мы подтвердили, что все CD11b + Gr1 + клетки экспрессируют специфический маркер нейтрофилов Ly6G (рис. 1D и Е). Частота нейтрофилов увеличилась в 10 раз через восемь недель после заражения и была увеличена после 26 недель (рис. 1F). Таким образом, при H. Pylori
инфекция есть последовательное накопление нейтрофилов и эозинофилов, а затем макрофагами в желудочном собственной пластинке слизистой оболочки.}

Характеристика желудка контроллеры домена
<р> Чтобы охарактеризовать желудочные контроллеры домена, мы впервые идентифицировали популяцию из CD11c ^{+ MHC-II + клеток (рис. 2А). Когда эти клетки были дополнительно проанализированы на экспрессию F4 /80 и аЕ интегрина цепи CD103, половина CD11c + MHC-II + клетки были идентифицированы как F4 /80 + макрофаги (рис. 2А ). Тем не менее, среди CD11c + MHC-II + клетки, которые испытывали недостаток экспрессии F4 /80, две популяции предполагаемых ОДК дифференциальной экспрессии CD103 можно выделить (рис. 2А). Из-за многих флюорохромами необходимых мы решили только характеризовать желудка CD103 +
контроллеры домена в дальнейшем, так как эти клетки были вовлечены как важный антиген представляющих клеток в тканях слизистой оболочки [18]. Желудочный CD103 + ДК легко идентифицированы с помощью окрашивания для CD11c и CD103 (рис. 2В). Желудочный CD103 + контроллеры домена выражены высокие уровни MHC-II, и состоял из CD11b низкой и CD11b высокое подмножество (рис. 2в). Для сравнения, желудка CD103 - контроллеры домена были CD11b высокий (рис 2D.). Кроме того, CD103 + контроллеры домена не хватало экспрессии CD8α и F4 /80 (рис. 2в). Тем не менее, частота CD103 + контроллеры домена существенно не изменилась в слизистой оболочке желудка после заражения (рис. 2Е).}

Желудочный макрофаги и CD103 + контроллеры домена не апрегулируются костимулирующие молекулы после H. Pylori
инфекция
<р> Для изучения возможных последствий H. Pylori
инфекции на экспрессию молекул костимуляторных и МНС-II желудочной макрофагами и CD103 + ГЦ, экспрессия этих маркеров анализировали с помощью проточной цитометрии после того, как четыре, восемь и 26 недель инфекции. В стационарном состоянии, макрофаги и CD103 + контроллеры домена в желудочном собственной пластинке слизистой оболочки выражены сходные уровни молекулы CD86 костимулирующего, а также MHC-II (рис. 3А). Удивительно, но экспрессия CD86 и MHC-II либо путем желудочной макрофагами или CD103 + ГЦ не была увеличена после заражения H. пилори
по сравнению с подобранными по возрасту наивных мышей анализировали параллельно (рис. 3б). Таким образом, макрофаги и CD103 + контроллеры домена в желудочном собственной пластинке слизистой оболочки не апрегулируются CD86 и MHC-II после H. пилори
инфекции, несмотря на продолжающийся воспалительный ответ.

M1 поляризация желудка макрофагов во время H. Pylori
инфекция
<р> Так как наши результаты свидетельствуют о том, что желудочные макрофаги не может быть полностью активирована во время H. Pylori
инфекции, мы характеризовали эти клетки далее, исследуя их поляризацию M1 /​​M2. Для определения макрофагами поляризации при H. пилори
инфекции, мы использовали ПЦР в реальном времени для измерения экспрессии генов, ассоциированных с M1 или M2 поляризации макрофагов в желудочной ткани [8], [9]. Мы также измеряли экспрессию IL-10, который может быть получен с помощью регулирующих макрофагах [9]. Ни один из маркеров проанализированы не были выражены по-разному через четыре недели после H. пилори
инфекции по сравнению с наивным мышей (рис. 4А). В восемь недель после инфицирования экспрессия маркеров M1 иОАС и CXCL11 была значительно увеличена, и эти маркеры были дополнительно повышающей регуляции через 26 недель после инфицирования (рис. 4, а). Кроме того, экспрессия IL-10 повышающей регуляции на восемь и 26 недель после инфицирования по отношению к наивным мышей (рис. 4, а). В отличие от этого, маркеры М2 найдены в воспалительной зоне 1 (FIZZ1) и аргиназы-1 не были дифференцированно выражены в желудке на четыре, восемь или 26 недель после инфицирования по сравнению с простых мышей (рис. 4, а).
<Р> Для того, чтобы определить источник иСОА и CXCL11 в слизистой оболочке желудка, макрофаги (CD11b ^{+ Gr1 -Siglec-F -MHC-II +), эозинофилов (CD11b + Gr1 -Siglec-F + MHC-II -), а остальные клетки после стробирования из макрофаги и эозинофилы (CD11b - и CD11b + Gr1 +) были отсортированы из объединенных желудочные клетки собственной пластинки мышей, инфицированных H. пилори
в течение 26 недель (рис. 4б). Экспрессии мРНК иСОА и CXCL11 в популяциях отсортированных клеток от инфицированных мышей, а также в общем объеме желудка собственной пластинке слизистой оболочки клетки из обоих наивным и инфицированных мышей затем определяли с помощью ПЦР в реальном времени. Достаточное количество отсортированных макрофагов не могут быть получены из простых мышей для достоверного анализа экспрессии мРНК. Желудочный макрофаги выразил высокий уровень иСОА и CXCL11 по сравнению с другими группами населения отсортированных клеток и общего количества желудочных клеток собственной пластинки перед сортировкой (рис. 4в). Взятые вместе, эти результаты показывают, что желудочные макрофаги поляризованы М1 во время H. Pylori
инфекции.}

Вакцинация против H. пилори
усиливает макрофаг M1 поляризации
<р> Защитные иммунизация против H. пилори
обычно ассоциируется с быстрым развитием желудочного Th1 ответа [19]. Так как Th1 цитокин интерферон-γ индуцирует макрофагами M1 поляризации [9], мы исследовали, может ли вакцинация влиять на поляризацию макрофагов во время H. пилори
инфекции. С этой целью, мыши были иммунизированы сублингвально с H. пилори
лизата и холерного токсина адъювант, а затем заражали H. пилори
SS1. Такой режим иммунизации привело к значительному снижению бактериальной нагрузки в желудке четыре недели после заражения (рис. 5А). В то же время, выражение М1 и М2 маркеров в желудке анализировали с помощью ПЦР в реальном времени. В иммунизированных мышей, только экспрессия CXCL11 была значительно повышающей регуляции через четыре недели после инфицирования по сравнению с простых мышей (рис. 5, б). В отличие от этого, иммунизированных мышей показали отличный повышающей регуляции как M1 маркеров ИНОС и CXCL11, тогда как экспрессия маркеров M2 FIZZ1 и аргиназы-1 не была изменена, через четыре недели после заражения (рис. 5, б). Повышенная экспрессия иСОА и CXCL11 иммунизированных /зараженных мышей не было вызвано только иммунизации, так как иммунизированных, но не зараженных мышей не изменили экспрессию любого из анализируемых категорий М1 или М2 маркеров по сравнению с полностью необработанной мышей (данные не показаны ).
<р> Кроме того, мы проанализировали частоту макрофагов в слизистой оболочке желудка иммунизированных и зараженных мышей с помощью проточной цитометрии. По отношению к инфицированным поддерживающих только у мышей, иммунизированных мышей имели значительно повышенную частоту желудочных макрофагами через три недели после заражения (рис. 5в). Тем не менее, несмотря на то что макрофаги были набраны на слизистую оболочку желудка от иммунизированных и зараженных мышей, макрофаги не апрегулируются экспрессию CD86 или МНС-II по отношению к зараженным-только мышей (рис. 5D). Эти результаты показывают, что после успешной вакцинации H. пилори
лизат и холерный токсин, макрофаги накапливаются в слизистой оболочке желудка и быстро поляризован М1 после заражения.

Увеличение макрофагальной M1 поляризации в человеческом атрофический гастрит
<р> Далее мы исследовали роль из H. пилори
инфекции и атрофический гастрит для макрофагов поляризации в слизистой оболочке желудка человека. С этой целью выражение человека М1 (иОАС, CXCL11) и М2 маркеров (CCL17, CCL18, CD206) измеряли в биоптатах из антрального отдела по ПЦР в реальном времени. H. пилори
-infected индивидуумы с неосложненной гастрит показали значительно повышенную экспрессию мРНК дл обоих М1 (иСОА, в 8 раз; CXCL11, 20-кратный) и маркеры M2 (CCL17, 30-кратный, CCL18, 70-кратный, CD206 , в 2 раза) по сравнению с неинфицированными добровольцах (фиг. 6А). Тем не менее, люди с атрофический гастрит (4/6 были кишечной метаплазии в дополнение к атрофии) выражается еще более высокие уровни мРНК INOS по сравнению с теми, с неосложненной гастрита (20-кратное), в то время как CXCL11 и маркеры M2 поляризации были также выражены (рис. 6А). Действительно, выражение иСОА было 180-кратное увеличение у пациентов с атрофическим гастритом по сравнению с неинфицированными (рис. 6А), что указывает на повышенную M1 поляризацию желудочного макрофагов у больных атрофическим гастритом.
<Р> Исследовать ли увеличение экспрессии мРНК М1 и М2, маркеры также приводит к увеличению уровней белка, общий белок извлекали из антрального биопсии и концентрация иСОА и CCL18 определяли с помощью ELISA. Желудочные биопсии от пациентов с атрофическим гастритом была доступна только для извлечения белка из одного добровольца, который дифференцированно, указанной на рисунке 6B. Половина H. пилори
-infected особи имели детектируемые уровни белка ИНОС в антральном отделе, тогда как концентрация иСОА была ниже предела обнаружения во всех неинфицированных лиц (рис. 6, б). Экспрессия мРНК и белка ИНОС ИНОС значимо коррелировали (Р ^{2 = 0,88, P
≪ 0,01), что указывает, что анализ мРНК отражает экспрессию белка, даже когда уровни белка являются низкими. Концентрация маркера CCL18 М2 увеличилась в желудочной ткани от H. Pylori
-infected лиц по сравнению с неинфицированными (рис. 6б). Кроме того, концентрация белка CCL18 была достоверно коррелирует с экспрессией мРНК CCL18 (R 2 = 0,754, P
&л; 0,01).
<Р> Взятые вместе, эти данные указывают на то наличие обоих М1 и М2 макрофагов в слизистой оболочки желудка Н. пилори
-infected лиц. Кроме того, атрофический гастрит связан с сильным усилением экспрессии INOS в слизистой оболочке желудка, что указывает на повышенную M1 поляризацию макрофагов.}

Обсуждение
<р> В этом исследовании мы исследовали поляризацию желудка макрофаги при хроническом H. пилори
инфекции. Покажем, что H. Pylori
-infected особи выражают мРНК в слизистой оболочке желудка, указывающего смешанного M1 /​​M2 поляризации макрофагов, и это было дополнительно подтверждено на уровне белка. Тем не менее, в H. Pylori
индуцированная атрофический гастрит наблюдалось заметное возвышение в выражении иСОА по сравнению с неосложненной гастрита. Атрофический гастрит дает повышенный риск развития рака желудка по сравнению с неосложненной H. Pylori
-associated гастрит [20]. Повышенная экспрессия иСОА в атрофический гастрит может способствовать развитию рака желудка путем образования активных форм азота, которые могут стимулировать канцерогенез путем индукции повреждения ДНК, нарушение репарации ДНК, посттрансляционной модификации белков и мутации p53 [4]. Действительно, иОАС-дефицитных мышей имеют пониженную частоту аденокарциномы желудка после H. пилори
инфекции и вызов с химическим канцерогеном по сравнению с нормальными мышами [6]. Кроме того, полиморфизм в промоторной области иСОА, что приводит к более высокой транскрипционной активности, коррелируют с более высокой частотой кишечного типа рака желудка у японских женщин [21].
<Р> В отличие от человеческого H , Pylori
инфекция, SS1-инфицированных мышей C57BL /6 показал профиль экспрессии генов в слизистой оболочке желудка, указывающего макрофагов M1 поляризации. экспрессии генов анализ отсортированных макрофагов, выделенных из слизистой оболочки желудка инфицированных мышей подтвердили, что экспрессия маркеров M1 иОАС и CXCL11 была обогащена в отсортированном макрофагальной населения. Кроме того, М1 поляризация желудочного макрофагов существенно ускорен предварительной вакцинации. Уже через четыре недели после заражения, иммунизированных мышей повышающей регуляции экспрессии иСОА и CXCL11 на том же уровне, что видно после 26 недель у инфицированных мышей-только. Исследования иОАС-дефицитных мышей показали, что иОАС способствует развитию атрофии и рака в слизистой оболочке желудка во время HELICOBACTER
инфекции [6], [22]. Кроме того, зазор H. пилори
после вакцинации происходит независимо от иСОА [23]. Таким образом, иОАС, как представляется, способствуют хозяйничать патологии, а не защиту во время инфекции H. пилори
. Таким образом, если повышенное производство иСОА в слизистой оболочке желудка сохраняется после вакцинации, может быть нежелательным побочным эффектом, что может усилить тяжесть H. пилори
-индуцированное воспаление и злокачественность, если стерильная иммунитет не будет достигнута. Тем не менее, относительный вклад иСОА для размещения патологии по сравнению защиты на разных стадиях H. Pylori
инфекции требует дальнейшего расследования.

Мы наблюдали последовательный набор врожденных клеток слизистой оболочки желудка SS1-инфицированных мышей с макрофаги накапливаются довольно поздно во время инфекции (26 недель). В отличие от этого, частоты желудочных нейтрофилов и эозинофилов в слизистой оболочке желудка увеличилась через восемь недель после инфицирования и оставались повышенными на 26 недель. Накопление макрофагов происходит гораздо быстрее, у вакцинированных мышей, причем в этом случае частота желудочных макрофагов увеличилось уже через три недели после контрольного заражения. Ранее нейтрофилы было показано, что быть набраны в слизистой оболочки желудка SS1-инфицированных мышей на две фазы, одна фаза раннего пика через 1-2 дней после заражения и одной поздней стадии, начиная с 2-3 недели после заражения [24]. Шаблон набора, похож на нейтрофилы, был также описан для желудочных макрофагов [24]. Тем не менее, макрофаги были определены как CD11b ^{+ Gr1 - клетки [24], популяция клеток, что в наших руках в основном состоит из эозинофилов (см рис 1 и 2.). Асим и др. определенные макрофаги как CD11b + F4 /80 + клеток, и наблюдается ранний пик макрофагальной числа в слизистой оболочке желудка через 1-2 дней после заражения H. пилори
[15]. Кроме того, количество макрофагов снова повышали со скоростью 60 и 120 дней после заражения по отношению к наивным мышей [15]. Продолжим эти результаты, показав, что набор этих популяций клеток врожденной не сохраняется вплоть до 26 недель после заражения. Кроме того, мы опишем накопление эозинофилов в слизистой оболочке желудка, клеточную популяцию, что значительно превышает количество желудочных макрофагов и нейтрофилов (рис. 1). Действительно, роль эозинофилов в H. Pylori
индуцированная гастрит должны быть исследованы дополнительно. Эозинофилы и макрофаги доля экспрессии нескольких маркеров, включая CD11b и F4 /80 (рис. 1, [25]). Таким образом, несколько маркеров необходимо анализировать одновременно для того, чтобы отличить эти популяции клеток врожденными.
<Р> Мы были в состоянии идентифицировать две популяции РС в слизистой оболочке желудка мышей. Оба подмножества экспрессируют высокие уровни CD11c и MHC-II, не хватало экспрессии макрофагами маркера F4 /80, но отличались по отношению к экспрессии CD103. Частота желудка CD103 + контроллеры домена не изменилась после того, как четыре, восемь или 26 недель H. пилори
инфекции. В отличие от нашего исследования, в недавнем исследовании Kao и соавт. не удалось обнаружить CD103 + контроллеры домена в слизистой оболочке желудка неинфицированных мышей [26]. Скорее всего, CD103 + контроллеры домена появились через 24 часа после H. пилори
инфекции. Со времен анализа различаются между тем исследования и наших экспериментов, трудно непосредственно сравнивать результаты.
<Р> Несмотря на то что M1 макрофаги обычно апрегулируются MHC-II и костимулирующие молекулы, мы не смогли обнаружить повышенную экспрессию MHC -II или CD86 на желудочных макрофагами или CD103 + контроллеры домена от иммунизированных либо или иммунизированных мышей после заражения. В противоположность этому, инкубирование в пробирке H. пилори с услугой человеческих моноцитов [27], человека моноцитарных РС [28], [29], [30], [31], мышиный из костного мозга РС [32], [33], или человек первичного желудка ГЦ [34], индуцирует повышающую регуляцию молекул костимуляторных и MHC-II. Поэтому неспособность апрегулируются MHC-II и CD86 на желудочных макрофагами и CD103 + ГЦ при хроническом H. пилори
инфекция может быть вызвана воспалительным средой и не бактериями самих по себе. Действительно, взаимодействие между контроллерами домена и H. пилори
в пробирке не обязательно отражает то, что происходит в естественных условиях, где местный микросреды на месте приобретения антигена и антигена, а также подмножества DC, участвующих в антигенной презентации H. пилори
, будет влиять на реакцию. Например, регуляторные Т-клетки, которые широко распространены в H. Pylori
-infected слизистой оболочки желудка [35], [36], может предотвратить активацию молекул костимуляторных и MHC-II на РС [37]. Кроме того, IL-10 может предотвращать активацию молекул костимуляторных и MHC-II на макрофагах и ГЦ [38].
<Р> Во время острых воспалительных реакций, макрофаги, как правило, поляризованы M1 и оказывают мощное антимикробное действие. Например, инфекция с сальмонеллы Typhimurium
или листерий
индуцирует M1 поляризацию макрофагов, который необходим для контроля инфекции [39]. Разрешение воспаления характеризуется сдвигом в макрофагальной поляризации М2, что способствует заживлению тканей. Больные туберкулезом проявляют повышенную выработку цитокинов Th2, как инфекция прогрессирует [40], [41], что может вызвать М2 поляризацию макрофагов. У мышей, М1 поляризация макрофагов образует ранний ответ на микобактерии туберкулеза
, тогда как альвеолярные макрофаги поляризованы М2 во время поздней стадии инфекции [42]. Однако сдвиг в макрофагами поляризации вызванной хроническими инфекциями часто приводит к снижению способности макрофагов убить вторгшиеся бактерии [39], [43]. С другой стороны, хроническое воспаление со стойкими M1 макрофагов поляризации связано с повышенным риском развития рака [4].
<Р> Do макрофаги способствуют провести защиту против H. пилори
? В отличие от нейтрофилов, макрофаги не часто видели в просвете желудка после транслокации через эпителий [44]. Так как H. пилори
преимущественно находятся в желудочном слизистого слоя или прикрепляются к эпителиальных клеток желудка, макрофаги не могут прийти в непосредственный контакт с целыми бактериями. Действительно, истощение макрофагов липосом наркотиков загруженным не имели никакого влияния на H. Pylori
колонизация [16], предполагая, что макрофаги не может непосредственно способствовать принимающей защиту от H. пилори
. В противоположность этому, макрофаги могут способствовать желудочной патологии. Например, опосредованную липосомами истощение макрофагов смягчены гастрит, индуцированное H. Pylori
инфекции [16]. Кроме того, селективное удаление I-kB-киназы бета в миелоидных клетках, что предотвращает активацию NF-kB в этих клетках, ингибирует развитие атрофии желудка после H. Felis
инфекции [45]. Таким образом, макрофаги не по всей видимости, способствуют HELICOBACTER
клиренса, но может скорее способствовать желудочной патологии
. <Р> В заключение, данное исследование показывает, что вакцинация мышей против H. пилори
усиливает поляризацию M1 желудочного макрофагов. Аналогичное явление наблюдается в человеческом атрофический гастрит, где смешанный M1 /​​M2 поляризация присутствует в неосложненной гастрита заменяется M1-доминировала поляризации. Это может вызвать опухоль способствующего воспаление, и смещение макрофагов поляризации от М1 до М2, следовательно, может представлять собой терапевтическую мишень при хроническом H. Pylori
инфекции.}

Материалы и методы

Этика заявление
<р> Исследование было одобрено правительственной этике животных комитета (Göteborgs djurförsöksetiska nämnd, 328/2008 и 254 /2009). Региональный комитет по этике человека Вестра Йёталанд в Швеции (706/03 и 85/06) одобрил исследование, и письменное информированное согласие было получено от всех участников. Это единственный орган дает разрешение на этическую исследования на людях в Швеции, и он не связан непосредственно в больницы или университеты.

Мыши
<р> Женский C57BL /6 мышей были приобретены у Charles River Laboratories (Sulzfeld, Германия), или в случае экспериментов по вакцинации от Taconic (Ejby, Дания). Мыши были инфицированы в возрасте 8-12 недель.

бактерии и инфекции мышей

H. пилори
SS1 выращивали на чашках с агаром Columbia ISO в течение 2-х дней при 37 ° С, после чего их переносили в Brucella в бульоне с добавлением 5% телячьей эмбриональной сыворотки (FCS) и антибиотики (ванкомицин, 10 мкг /мл; Полимиксин , 20 ед /мл, триметоприм, 5 мкг /мл) и инкубировали в течение ночи, встряхивая при 37 ° С в условиях микроаэрофилии. Перед тем как инфекции, моторику бактерий была подтверждена с помощью микроскопии. Концентрация бактерий оценивали спектрофотометрически. Мыши получали 3 × 10 ^{8 колониеобразующих единиц SS1 внутрижелудочно.}

Подъязычного иммунизация
<р> Мыши получили четыре 10 мкл дозы 500 мкг H. Pylori
лизата (полученного из штамма Hel305, как описано ранее [46]) в сочетании с 10 мкг холерного токсина (Список биологических Laboratories Inc., Madison, NJ) сублингвально на 1-недельными интервалами [47], [48]. Через две недели после последней иммунизации мышей заражали внутрижелудочно с 3 × 10 8 колониеобразующих единиц H. пилори
SS1.

Оценка бактериальную колонизацию
<р> Для количественной оценки бактериальной колонизации в экспериментах по иммунизации, одна половина желудка осторожно промывали ПБС, а затем гомогенизируют с использованием гомогенизатора Ultra Turrax ( IKA лабораторная техника, Staufen, Германия). Серийные разведения гомогената высевали на чашки с агаром Скирроу. Когда Propria клетки желудка Lamina были изолированы от всего желудка количественная оценка желудочном бактериальной нагрузки не может быть выполнена. В этом случае, желудок, который разрезают вдоль большой кривизны и промывали в PBS, осторожно штрихом на чашки с агаром Скирроу. Присутствие H. Pylori
колонии было подтверждено тестом на мочевину. Таким образом, мы могли бы подтвердить H. Pylori
колонизация и до сих пор используют весь желудок для выделения клеток.

Выделение клеток слизистой желудка листовых пластинок
<р> железистый желудок разрезали на 5 мм кусочки и инкубировали в общей сложности три раза с H.

• PLoS ONE: Точность и Cut-Off Значения Pepsinogens I, II и гастрин 17 для диагностики желудочных фундальный атрофии: Влияние Gas…
• PLoS ONE: Бактериальный Микробиота профилирование в Гастрит без инфекции Helicobacter пилори или нестероидные противо…