PLoS ONE: Glaudesnis M1 makrofagų poliarizacija Žmogaus Helicobacter pylori Associated atrofijos gastritas ir paskiepyti Mice

Anotacija

Fonas

infekcija, Helicobacter pylori
sukelia lėtinis skrandžio uždegimas, kuris gali progresuoti iki atrofija ir skrandžio adenokarcinoma. Poliarizacija makrofagų yra tiek vėžiu ir infekcijos charakteristika, ir gali skatinti progresavimą ar ligos raišką. Tačiau, makrofagų vaidmuo ir jų poliarizacija H metu. pylori
infekcija nebuvo gerai apibrėžti.

Metodologija /Pagrindinės išvados

naudojant pelės modelį infekcijos ir skrandžio biopsijos iš 29 asmenų, mes išanalizavome makrofagų įdarbinimą ir poliarizaciją per h. pylori
infekcija tėkmės citometrijos ir realaus laiko PGR. Mes radome eilės verbavimu neutrofilų, eozinofilų ir makrofagų į skrandžio gleivinę infekuotų pelių. Genų ekspresijos analizė skrandžio audinio ir surūšiuotų makrofagų parodė, kad skrandžio makrofagai buvo poliarizuota M1 po H. Helicobacter pylori infekcija
, ir šis procesas buvo gerokai paspartino iš anksto vakcinacijos. Žmogaus h. pylori
infekcija buvo būdinga mišri M1 /​​M2 poliarizacijos makrofagus. Tačiau, h. pylori
-associated atrofinė gastritas, kad indukuojamo azoto oksido sintezės raiška buvo ženkliai išaugo, lyginant su nekomplikuota gastritas, rodo sustiprinto M1 makrofagų poliarizacijos šioje anksto piktybinis pakitimas.

Išvados /Reikšmė

"Šie rezultatai rodo, kad vakcinacijos pelių prieš H. pylori
sustiprina M1 poliarizaciją skrandžio makrofagų ir kad panašus sustiprintos M1 poliarizacija patenka į motinos H. pylori
indukuotų atrofinė gastritas

nurodomoji dalis:. Quiding-Järbrink, M, Raghavan S Sundquist M "(2010) Glaudesnis M1 makrofagų poliarizacija žmogaus Helicobacter pylori
-Associated Atrophic Gastritas ir vakcinuoti pelėms. PLoS ONE 5 (11): e15018. Doi: 10,1371 /journal.pone.0015018

redaktorius: Niyaz Ahmedas universiteto Hyderabad, Indija

Įstojo rugpjūčio 26, 2010; Priėmė: Balandis 7 ", 2010; Paskelbta: Lapkričio 23, 2010

Visos teisės saugomos: © 2010 Quiding-Järbrink et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas parėmė kompetencijos MIVAC centras, finansuojamą iš Švedijos fondo Strateginių mokslinių tyrimų, kad Adlerbert Research Foundation, Wilhelm & Martina Lundgren įkūrimo Inga-Britt "& Arne Lundberg pamatai, ir Sahlgrenska universiteto ligoninė. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Helicobacter pylori
kolonizuoti skrandžio epitelį daugiau nei pusė pasaulio gyventojų [1]. Infekcija dažniausiai visą gyvenimą ir sukelia chronišką uždegimą skrandžio gleivinės, kuri apie 1-2% užsikrėtusių asmenų galiausiai išsivysto į skrandžio adenokarcinoma [1]. Plėtros skrandžio vėžio, ypač žarnyno tipo, yra kelių etapų procesas, kuris progresuoja dešimtmečiais per ikivėžinių pakitimų skrandžio gleivinę, pavyzdžiui, atrofinį gastritu, žarnyno metaplazijos ir [2] displazija. Nuo infekcijos pasekmės priklauso nuo to į užkrėsti H virulentiškumo. pylori
padermės, aplinkos veiksniai, pavyzdžiui, rūkymas ir dietos, ir priimančioji genetinius veiksnius, kurie daro įtaką tipą ir intensyvumą uždegiminio atsako [1].

stiprus PRO-uždegiminis atsakas yra susijęs su padidėjusiu reaktyviosios deguonies ir azoto rūšys skrandžio gleivinės [3], kuris gali skatinti vėžio vystymosi [4]. Pavyzdžiui, pelės užsikrėtę H. pylori
šešis mėnesius, dažniau skrandžio mutacijų, palyginti su sveikų pelių [5]. Be to, pelės, kad organizme yra nepakankamas fermentui indukuojamo azoto oksido sintazės (iAOS) turi mažesnį dažnį skrandžio vėžio po H. pylori
infekcija ir kancerogenas iššūkis, palyginti su įprastais pelių [6]. O iNOS prisideda prie vystymosi skrandžio vėžio, aukšto lygio chemokino CCL18 skrandžio navikų yra susijęs su ilgesniu išgyvenimu skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, [7]. Įdomu tai, kad iAOS gaminamas klasikinės aktyvintos /M1 makrofagų o CCL18 gamyba yra praba už alternatyviai aktyvuotų makrofagų /m2 [8]. Kartu paėmus, šie duomenys rodo, kad makrofagų poliarizacija gali turėti svarbų vaidmenį plėtojant H. pylori
-associated skrandžio vėžys.

M1 makrofagai paprastai dalyvauja pirminio imuninio atsako į užplūsta mikroorganizmus ir skatinti T pagalbininkas (TH) 1 imunitetą, o rezoliucijos etapo uždegimo metu M2 makrofagai yra sukeltas ir dalyvauja nuolaužų prapūtimo, audinių rekonstruoti ir skatinimą Th2 imuniteto [8], [9]. Poliarizacija makrofagų yra nukreiptas į mikroaplinka. M1 makrofagai sukeltas interferonu-gama ir mikrobų produktų, tokių kaip lipopolisacharido [9]. Kita vertus, M2 makrofagai sukeltas Th2- arba anti-uždegiminių citokinų ir augimo faktorių, įskaitant IL-4, IL-10 ir transformavimas augimo faktoriaus-beta [8], [9].

Per h. pylori
infekcija, makrofagai verbuojami į skrandžio gleivinę, kur jie prisideda prie pro-uždegiminių citokinų ir chemokinus [10] gamybos [11], [12], [13], [14], [15] , Be to, neseniai atliktas tyrimas parodė, kad liposomos tarpininkaujant išeikvojimas makrofagų sumažinti skrandžio patologija H. pylori
-infected pelių [16]. Nepaisant to, makrofagų funkcija in vivo H metu. pylori
infekcija išlieka santykinai prastai apibrėžti. Makrofagų funkcija yra glaudžiai sujungtas su jų poliarizacija, kuri taip pat atrodo, kad turi tam tikrą vaidmenį vystymosi skrandžio vėžio [6], [7]. Todėl mes išnagrinėjome makrofagų poliarizaciją skrandžio gleivinę, H. pylori
-infected peles ir žmones. Mes parodome, kad vakcinacija pelių prieš H. pylori
greičius ir sustiprina M1 poliarizaciją skrandžio makrofagus. Be to, iš anksto vėžiniai pakitimai atrofinė gastritas pasižymi sustiprinto makrofagų M1 poliarizacijos žmonėms.

Rezultatai

Didesnis dažnis makrofaguose, eozinofilų ir neutrofilų skrandžio gleivinės po H. pylori
infekcija

Įgimtos ląstelių įdarbinimas į infekcijos vietoje yra būtina sąlyga, siekiant nustatyti infekcinį kontrolę. Ne tik gali Įgimtas ląsteles, pavyzdžiui, makrofagų ir neutrofilų, dalyvauja bakterijų žudymo; jie taip pat gamina uždegimo mediatorių, kurie nustatyti etape pasekti imuninio atsako. Ištirti įgimtų ląstelių kaupimąsi skrandžio gleivinės H metu. pylori
infekcija, mes užsikrėtę C57BL /6 peles su pele pritaikytos H. pylori
Sydney įtampą 1 (SS1), o po keturių, aštuonių ir 26 savaites mes išanalizavo skrandžio uždegimo įsiskverbti individualios pelių įvairių spalvų tėkmės citometrijos. Iš viso lamina propria ląstelių, išskirtų iš skrandžio nepakeitė per pirmąsias keturias savaites infekcijos, bet bent aštuonias savaites po užsikrėtimo buvo dvigubai bendras ląstelių skaičius izoliuoti, ir 26 savaičių infekcijos buvo aštuonių kartų padidėjimas į bendrą ląstelių skaičių izoliuotų, palyginti su neinfekuotoje pelių (pav. 1A). Tarp ląstelės įdarbinti į skrandį buvo makrofagų, eozinofilų ir neutrofilų. Skrandžio makrofagai buvo identifikuoti kaip ląstelių išreiškė CD11b ir pagrindinis histosuderinamumo sudėtingą klasė II (MHC-II), tačiau trūksta išraišką GR1 (neutrofilų požymis), CD103 (išreikšta kaip dendritų ląstelių pogrupyje (DCS)) ir sialo rūgšties privalomas immunoglobulin- kaip lektinų (Siglec-F, eozinofilų požymis) (1B pav.). Šios ląstelės išreiškė makrofagų žymeklio F4 /80 (. 1E Fig), ir pagal ląstelių morfologijos buvo patvirtinta, makrofagų (1b pav.). Iš makrofagų skrandžio gleivinės dažnis nepakito po keturių ir aštuonių savaičių H. pylori
infekcija (1F pav.). Tačiau po 26 savaičių skrandžio makrofagų buvo padidintas, palyginti su neužteršto pelėmis (1F pav.) Dažniu.

eozinofilų buvo apibrėžiamas kaip CD11b ^{+ Siglec-F + ląstelių (pav. 1C, [17]). Šios ląstelės išreikštas tarpinius lygius F4 /80 ir turėjo aukštą šoninį iSsisklaidymo profilį, kai analizuojami tėkmės citometrijos (pav. 1E). Cresyl violetinė dažymo išrūšiuotų CD11b + Siglec-F + ląstelių patvirtino eozinofilų morfologija (. 1C pav). Eozinofilų dažnis skrandžio gleivinės dvigubai po aštuonių savaičių ir toliau po 26 savaičių infekcijos (1F pav.) Padidėjo.}

neutrofilų buvo apibrėžiamas kaip CD11b ^{+ Gr1 + ląstelių (pav 1D.). Kadangi Gr1 antikūnų pripažįsta tiek Ly6C ir Ly6G epitopą mes patvirtino, kad visi CD11b + Gr1 + ląstelių išreiškė konkretų neutrofilų žymeklį Ly6G (. 1d ir E pav). Neutrofilų dažnis išaugo 10 kartus aštuonių savaičių po užsikrėtimo ir buvo dar labiau padidėjo po 26 savaičių (pav. 1f). Taigi, per h. pylori
infekcija yra nuoseklus kaupimas neutrofilų ir eozinofilų, po makrofagų skrandžio plonų sluoksnių Propria.}

apibūdinimas skrandžio BŠ

Jei apibūdinti skrandžio DCS, mes pirmą kartą nustatė gyventojus iš CD11c ^{+ MHC II + ląstelių (2A pav.). Kai šios ląstelės buvo toliau analizuojami išraiška F4 /80 ir αE integrinų grandinės CD103, pusė CD11c + MHC II + ląstelių buvo identifikuoti kaip F4 /80 + makrofagai (pav. 2A ). Tačiau tarp CD11c + MHC II + ląstelių, kad trūko išraišką F4 /80, dvi populiacijos tariamų DCS su diferencinė ekspresija CD103 galima išskirti (2A pav.). Dėl daugelio liuminoforais reikalingų mes pasirinkome tik apibūdinti skrandžio CD103, +
BŠ toliau, nes šios ląstelės buvo susijęs, kaip svarbu antigeną pateikiančių ląstelių gleivinės audiniuose [18]. Skrandžio CD103 + BŠ buvo lengvai atpažįstami pagal dažymo už CD11c ir CD103 (2b pav.). Skrandžio CD103 + BŠ išreiškė aukštą MHC-II, ir sudarė CD11b Mažų ir CD11b aukštos pogrupyje (. 2C pav). Palyginimui, skrandžio CD103 - BŠ visi buvo CD11b aukštas (pav 2D.). Be to, CD103 + BŠ trūko išraišką CD8α ir F4 /80 (2C pav.). Tačiau CD103 dažnis + BŠ nepakeitė gerokai skrandžio gleivinės po infekcijos (2E pav.).}

Skrandžio makrofagų ir CD103 + BŠ nesugeba upregulate kostimuliacijos molekules po O. pylori
infekcija

Norint ištirti galimą poveikį H. pylori
infekcija nuo kostimuliacijos molekulių ir MHC-II išraiškos skrandžio makrofagų ir CD103 ^{+ DCS, šių žymenų ekspresija buvo analizuojami tėkmės citometrijos po keturių, aštuonių ir 26 savaičių infekcijos. Per nusistovėjęs, makrofagų ir CD103 + DCS skrandžio plonų sluoksnių Propria išreiškė panašius lygius kostimuliacijos molekulės CD86 taip pat MHC-II (. 3A pav). Keista, kad CD86 ir MHC-II išraiška tralo skrandžio makrofagų ar CD103 + DCS nebuvo padidėjo po užsikrėtimo H. pylori
, palyginti su atitinkamo amžiaus negydytiems pelių analizuotų lygiagrečiai (Pav. 3b). Taigi, makrofagų ir CD103 + BŠ skrandžio plonų sluoksnių Propria nesugeba upregulate CD86 ir MHC-II praėjus H. Helicobacter pylori infekcija
, nepaisant vykstančio uždegimine reakcija.}

M1 poliarizacija skrandžio makrofagų H metu. pylori
infekcija

Kadangi mūsų rezultatai rodo, kad skrandžio makrofagai gali būti nevisiškai įjungta H metu. pylori
infekcija, mes būdingas šias ląsteles toliau tiriant jų M1 /​​M2 poliarizaciją. Norėdami nustatyti, makrofagų poliarizaciją H metu. pylori
infekcija, mes naudojamas realaus laiko PGR matuoti genų, susijusių su M1 arba M2 poliarizacijos makrofagų skrandžio audinio išraiška [8], [9]. Mes taip pat buvo matuojamas IL-10 raišką, kuris gali būti gaminamos reguliavimo makrofagų [9]. Nė vienas iš žymenų analizuotų buvo skirtingai išreiškiamas keturių savaičių po H. pylori
infekcijos, palyginti su naivaus pelių (4A pav.). Tuo aštuonias savaites po užsikrėtimo į M1 išraiška žymenyse iAOS ir CXCL11 buvo žymiai padidėjęs, o šie žymenys buvo toliau aktyvinama ne 26 savaites infekcijos (Pav. 4a). Be to, IL-10 išraiška buvo aktyvinama aštuonių ir 26 savaičių infekcijos, palyginti su naivaus pelių (pav. 4A). Priešingai, M2 žymekliai rasti uždegiminės zonoje 1 (FIZZ1) ir arginase-1 buvo ne atskirtinai išreikštas skrandžio keturių, aštuonių arba 26 savaičių infekcijos, palyginti su naivaus pelių (4A pav.).

Norėdami nustatyti iAOS ir CXCL11 šaltinis skrandžio gleivinę, makrofagai (CD11b ^{+ Gr1 -Siglec-F -MHC II +), eozinofilų (CD11b + Gr1 -Siglec-F + MHC II -), o likusios ląstelės po strobavimo iš makrofagų ir eozinofilų (CD11b - ir CD11b + Gr1 +), buvo rūšiuojami nuo sukaupiami skrandžio lamina propria ląstelės užsikrėtusių H pelėmis. pylori
26 savaites (pav. 4b). MRNR ekspresijos IAOS ir CXCL11 į rūšiuotų ląstelių populiacijų iš užkrėstų pelių, taip pat iš viso skrandžio Lamina propria ląstelių iš tiek naivus ir užkrėstų pelių tada nulėmė realaus laiko PGR. Pakankamas skaičius Išrūšiuotų makrofagų nebuvo galima gauti, iš naivaus pelių patikimai tirti mRNR išraiška. Skrandžio makrofagai išreiškė aukščiausio lygio iAOS ir CXCL11, palyginti su kitomis Rūšiuota ląstelių populiacijų ir visų skrandžio Lamina propria ląstelių prieš rūšiavimą (4c pav.). Kartu paėmus, šie rezultatai rodo, kad skrandžio makrofagai yra poliarizuota M1 H metu.}

Skiepai nuo H.pylori
infekcija.. pylori
išplečia makrofagų M1 poliarizacija

Apsauginiai imunizuoti nuo H. pylori
paprastai susijęs su sparti skrandžio Th1 atsakas [19]. Kadangi Th1 citokinų interferono-γ skatina makrofagų M1 poliarizaciją [9], mes nagrinėjo, ar skiepai gali turėti įtakos makrofagų poliarizaciją H metu. pylori
infekcija. Siekiant šio tikslo, pelėms buvo paskiepyti liežuviu su H. pylori
lizate ir choleros toksino adjuvantu, o vėliau ginčijo su H. pylori
SS1. Tai imunizacija režimas buvo gerokai sumažinti bakterijų kiekio skrandyje keturias savaites po iššūkis (pav. 5a). Tuo pačiu metu, jei tai yra M1 ir M2 žymenų skrandžio išraiška buvo analizuojami realaus laiko PGR. Be unimmunized pelėmis, tik CXCL11 išraiška buvo žymiai aktyvinama keturias savaites po užsikrėtimo, palyginti su naivaus pelėmis (5b pav.). Priešingai, imunizuoti pelėmis parodė puikus ląstelę tiek M1 žymekliai iAOS ir CXCL11 kadangi M2 išraiška žymekliai FIZZ1 ir arginase-1 buvo nepasikeitė, praėjus keturioms savaitėms po iššūkis (5b pav.). Padidėjęs išraiška iAOS ir CXCL11 į imunizuotos /ginčijo pelių buvo ne dėl vien imunizacijos, nes paskiepyti, bet ne ginčijo pelių nebuvo pakeisti bet kurį iš analizuojamų M1 arba M2 žymenų raišką palyginti su visiškai neapdorotas pelėmis (duomenys nerodomi ).

Be to, mes išanalizavo makrofagų dažnį skrandžio gleivinę, paskiepytų ir ginčijami pelių tėkmės citometrijos. Palyginti su užsikrėtusių tik pelių, imunizuoti pelės turėjo žymiai dažniau skrandžio makrofagų tris savaites po užkrėtimo (5c pav.). Tačiau, nepaisant to, kad makrofagai buvo įdarbinti į skrandžio gleivinę, paskiepytų ir ginčijami pelių, makrofagų nebuvo upregulate apie CD86 arba MHC-II, palyginti išraišką į užkrėstą-tik pelėmis (pav. 5d). Šie rezultatai rodo, kad po sėkmingo vakcinacijos H. pylori
lizatas ir choleros toksinas, makrofagai kaupiasi skrandžio gleivinės ir sparčiai poliarizuota M1 po užsikrėtimo.

gausinimą makrofagų M1 poliarizacija žmogaus atrofinė gastritas

Kitas tyrė vaidmenį iš H. Helicobacter pylori infekcija ir
atrofijos gastritas ir makrofagų poliarizacijos į žmogaus skrandžio gleivinę. Siekiant šio tikslo, žmogaus M1 (iAOS, CXCL11) ir M2 žymekliai (CCL17, CCL18, CD206) išraiška buvo matuojamas biopsijų antralinėje dalyje realaus laiko PGR. h. pylori
-infected asmenys su nekomplikuota gastritas parodė reikšmingai padidėjusi išraiška mRNR tiek M1 (iAOS, 8 kartus; CXCL11, 20 kartų) ir M2 žymekliai (CCL17, 30 kartų; CCL18, 70 kartų, CD206 , 2 kartus), palyginti su sveikų savanorių, (pav. 6a). Tačiau asmenys, atrofinį gastritas (4/6 turėjo žarnyno Metaplasia, be atrofijos) išreiškė net aukštesnį lygį IAOS mRNR, palyginti su tais su nekomplikuota gastritas (20 kartų), o CXCL11 ir žymekliai M2 poliarizacijos buvo panašiai išreiškiamas (pav. 6A). Iš tiesų, IAOS išraiška buvo 180 kartų didesnis asmenims su atrofinį gastritas, palyginti su sveikų kontrolę (. 6A pav), nurodant sustiprintą M1 poliarizaciją skrandžio makrofagų pacientams, sergantiems atrofinį gastritas.

Jei ištirti, ar padidėjo iRNR raiška M1 ir M2 žymekliai taip pat lemia padidėjo baltymų koncentracijos, bendras baltymų buvo paimti iš antralinių biopsijos ir iAOS koncentracija ir CCL18 nulėmė ELISA. Skrandžio gleivinės iš asmenų, turinčių atrofinį gastritas buvo prieinama tik baltymų gavybos iš vieno savanorio, kuris diferencijuotai nurodytu 6B pav. Pusė H. pylori
-infected asmenys turėjo aptinkamas kiekis IAOS baltymų antralinėje dalyje kadangi iNOS koncentracija buvo mažesnė už radimo ribą, visose sveikų asmenų (6B pav.). IAOS mRNR ir iAOS baltymo ekspresija reikšmingai koreliavo (r ^{2 = 0,88 P
< 0,01) rodo, kad iRNR analizė atspindi baltymų raišką, net tada, kai baltymo koncentracija yra maža. Iš M2 žymeklio CCL18 koncentracija buvo padidinta skrandžio audinio iš H. pylori
-infected asmenys, palyginti su sveikų kontrolės (6B pav.). Be to, CCL18 baltymų koncentracija reikšmingai koreliavo su CCL18 mRNR ekspresijos (R 2 = 0,754 P
< 0,01).}

Kartu paėmus, šie duomenys nurodyti buvimas abiejų M1 ir M2 makrofagų skrandžio gleivinę, H. pylori
-infected asmenis. Be to, atrofinio gastritas yra susijęs su stipria amplifikacijos IAOS išraiškos skrandžio gleivinės, nurodant sustiprintą M1 poliarizaciją makrofagų.

Aptarimas

Šiame tyrime, mes tyrė skrandžio poliarizaciją makrofagai lėtinio H metu. pylori
infekcija. Mes parodome, kad H. pylori
-infected asmenys išreikšti iRNR į skrandžio gleivinę, parodantis mišrios M1 /​​M2 poliarizacijos makrofagų, o tai dar labiau patvirtino baltymų lygį. Tačiau, h. pylori
indukuotų atrofinė gastritas ten buvo žymiai padidėjęs IAOS išraiška, palyginti su nekomplikuota gastritas. Atrofinė gastritas suteikia didesnę riziką skrandžio vėžio palyginti su nekomplikuota H vystosi. pylori
-associated gastritas [20]. Padidėjęs išraiška iAOS atrofinį gastritas gali prisidėti prie skrandžio vėžio išsivystymo per gamybos reaktyviųjų azoto rūšių, kurios gali skatinti kancerogenezės taikant indukcijos DNR žalą, sutrikęs DNR remonto, po transliacijos modifikacijos baltymų ir p53 mutacijos [4]. Iš tiesų, iAOS trūkumas pelių turi mažesnį sergamumą skrandžio adenokarcinoma po H. Helicobacter pylori infekcija
ir iššūkis su chemijos kancerogenas, palyginti su įprastais pelių [6]. Be to, polimorfizmas į promotoriaus regione iAOS, dėl to aukštojo transkripcijos veiklos, koreliuoja su didesniu žarnyno tipo skrandžio vėžio Japonijos moterų [21].

Priešingai nei žmogaus H , pylori
infekcija, SS1 užsikrėtę C57BL /6 pelių parodė genų ekspresijos profilio skrandžio gleivinės parodantis makrofagų M1 poliarizacija. Genų ekspresijos analizė rūšiuotų makrofagų, išskirtų iš skrandžio gleivinės užkrėstų pelių patvirtino, kad išraiška M1 žymekliai iAOS ir CXCL11 buvo prisodrintas rūšiuotų makrofagų gyventojų. Be to, M1 poliarizacija skrandžio makrofagų buvo gerokai paspartino iš anksto vakcinacijos. Jau keturias savaites po užkrėtimo, paskiepyti pelės aktyvinama IAOS ir CXCL11 išraišką panašaus lygio, kaip matyti po 26 savaičių užkrėstų tik pelėms. Tyrimai IAOS-stokojančių pelėmis parodė, kad iAOS skatina vystymąsi atrofija ir vėžys skrandžio gleivinės metu, Helicobacter
infekcija [6], [22]. Be to, klirensas H. pylori
po skiepijimo atsiranda nepriklausomai IAOS [23]. Taigi, iAOS atrodo prisidėti prie priimančiosios patologija, o ne apsaugos infekcijos H metu. pylori
. Todėl, jei sustiprintas gamyba iNOS į skrandžio gleivinės, išlaikyti ir po skiepijimo, ji gali būti pašalinis šalutinis poveikis, kuris gali padidinti, kad H sunkumą. pylori
indukuotų uždegimą ir piktybinių navikų, jeigu sterili imunitetas pasiekti. Tačiau santykinis indėlis IAOS surengti patologija, palyginti su apsauga skirtingais etapais H. pylori
infekcija garantuoja tolesniam tyrimui.

Mes nustatėme eilės įdarbinimą įgimtų ląstelių skrandžio gleivinę, SS1 infekuotų pelių, su makrofagai kaupti gana vėlai metu infekcijos laukas (26 savaičių). Priešingai, skrandžio neutrofilų ir eozinofilų skrandžio gleivinės dažnumas padidėjo aštuonias savaites po infekcijos ir liko padidėjęs ne 26 savaičių. Makrofagų kaupimasis įvyko daug greičiau vakcinuotų pelėms, tokiu atveju skrandžio makrofagų dažnis buvo jau padidėjo tris savaites po užkrėtimo. Anksčiau buvo parodyta neutrofilų būti įdarbinti į skrandžio gleivinę, SS1 infekuotų pelių dviem etapais, vienas anksti etapas šoktels 1-2 dienoms po užsikrėtimo ir vieną vėlyvą etapą, prasidėsiantį ne 2-3 savaites po užsikrėtimo [24]. Įdarbinimo modelis, panašus į tą, neutrofilų, taip pat buvo aprašyta skrandžio makrofagų [24]. Tačiau makrofagai buvo apibrėžtos kaip CD11b ^{+ GR1 - ląstelės [24], ląstelių populiacijos, kad mūsų rankose pirmiausia sudaro eozinofilų (žr 1 pav ir 2).. Asim ir kt. apibrėžtos makrofagai kaip CD11b + F4 /80 + ląstelių, ir todėl anksti viršūnę makrofagų skaičius į skrandžio gleivinę 1-2 dienoms po užsikrėtimo H. pylori
[15]. Be to, makrofagų skaičius buvo vėl padidėjo 60 ir 120 dienų po to, kai infekcija, palyginti su negydytiems pelių [15]. Mes išplėsti šiuos rezultatus rodo, kad šių įgimtų ląstelių populiacijų įdarbinimas išlieka iki 26 savaičių po užsikrėtimo. Be to, mes apibūdinti eozinofilų sankaupa skrandžio gleivinės, ląstelių populiacijos, kad iki šiol skaičius daug didesnis nei skrandžio makrofagų ir neutrofilų (1 pav.). Iš tiesų, eozinofilų vaidmuo H. pylori
indukuotų gastritas turėtų būti toliau tiriamas. Eozinofilų ir makrofagai dalis išraiška kelių žymenų, įskaitant CD11b ir F4 /80 (1 pav., [25]). Todėl daug žymekliai reikia išanalizuoti vienu metu tam, kad būtų galima atskirti šias prigimtines ląstelių populiacijas.}

Mes galėjome nustatyti dvi populiacijas DCS į skrandžio gleivinę pelių. Abu sutrumpinti išreiškė aukštą CD11c ir MHC-II, trūko išraiška makrofagų žymeklio F4 /80, tačiau skyrėsi atsižvelgiant į išraiškos CD103. Skrandžio CD103 dažnis ^{+ BŠ nepakeitė po keturių, aštuonių arba 26 savaičių H. pylori
infekcija. Skirtingai mūsų tyrime, neseniai atlikto tyrimo Kao et al. nepavyko aptikti CD103 + DCS į skrandžio gleivinę sveikų pelių [26]. Atvirkščiai, CD103 + BŠ atsirado praėjus 24 valandoms po H. pylori
infekcija. Kadangi analizės kartų skiriasi tuo tyrimu ir mūsų eksperimentų, sunku tiesiogiai palyginti rezultatus.}

Nepaisant to, kad M1 makrofagai paprastai upregulate MHC-II ir kostimuliacijos molekules, mes negalėjome nustatyti padidėjusį išraiška MHC -II arba CD86 skrandžio makrofagų ar CD103 ^{+ DCS arba iš unimmunized arba imunitetą įgijusių pelių po užsikrėtimo. Priešingai, in vitro, inkubavimas H. pylori
žmogaus monocitų [27], žmogaus monocitų kilmės DCS [28], [29], [30], [31], pelių kaulų čiulpų gautas BŠ [32], [33], arba žmogaus pirminės skrandžio BŠ [34], skatina ląstelę kostimuliacijos molekulių ir MHC-II. Todėl nesugebėjimas upregulate MHC-II ir CD86 skrandžio makrofagų ir CD103 + DCS lėtinės H. pylori
infekcija gali būti sukeltas uždegiminio aplinkoje, o ne iš bakterijų per se. Iš tiesų, tarp DCS ir H sąveika. pylori
in vitro nebūtinai atspindi tai, kas vyksta in vivo, kur vietinis mikroaplinka tuo antigenų įsigijimo ir antigeno pateikimo vietoje, taip pat nuolatinės srovės pogrupyje dalyvauja antigeno pateikimo H. pylori
, turės įtakos atsakymą. Pavyzdžiui, reguliavimo T ląstelių, kurios yra paplitusios H. pylori
-infected skrandžio gleivinė [35], [36], gali užkirsti kelią kostimuliacijos molekulių ir MHC-II ląstelę nuo DCS [37]. Be to, IL-10 gali užkirsti kelią kostimuliacijos molekulių ir MHC-II ląstelę apie makrofagų ir DCS [38].}

Per ūmių uždegiminių reakcijų, makrofagai paprastai poliarizuota M1 ir daryti stiprus antimikrobinių poveikį. Pavyzdžiui, infekcija, Salmonella typhimurium
arba Listeria monocytogenes
skatinantys M1 poliarizaciją makrofagų, kurie yra reikalingi kontroliuoti infekcijos [39]. Nutarimas uždegimas pasižymi A makrofagų poliarizacijos pereiti prie M2, kuris skatina audinių gijimą. Pacientams, ligonių tuberkuliozės rodyti gaminti daugiau Th2 citokinų, infekcija progresuoja [40], [41], kuris gali sukelti M2 poliarizaciją makrofagų. Pelėms M1 poliarizacija makrofagų yra ankstyvą atsaką į , Mycobacterium tuberculosis
, o alveolių makrofaguose yra poliarizuota M2 per vėlai infekcijos [42]. Tačiau iš makrofagų poliarizacijos perėjimas sukelia lėtinių infekcijų dažnai sukelia sumažinto pajėgumo makrofagų nužudyti užplūsta bakterijas [39], [43]. Kita vertus, lėtinis uždegimas su nuolat M1 makrofagų poliarizacijos yra susijęs su padidėjusia rizika susirgti vėžiu plėtros [4].

Ar makrofagai prisidėti prie priimančiosios gynybos nuo H. pylori
? Skirtingai nei neutrofilų, makrofagų nėra dažnai vertinama atsižvelgiant į skrandžio spindį po perkėlimo visoje epitelio [44]. Nuo h. pylori
pirmenybė gyventi skrandžio gleivių sluoksniu ar pridedami prie skrandžio epitelinių ląstelių, makrofagų negali tiesiogiai liestis su sveikais bakterijų. Iš tiesų, išeikvojimas makrofagų narkotikų pakrauti liposomų neturėjo H poveikį. pylori
kolonizacija [16], o tai rodo, kad makrofagai negali tiesiogiai prisidėti prie priimančiosios gynybos nuo H. pylori
. Priešingai, makrofagai gali skatinti skrandžio patologijos. Pavyzdžiui, liposomos tarpininkaujant išeikvojimas makrofagų pagerės į gastritą sukeltas H. pylori
infekcija [16]. Be to, selektyvus išbraukta I-κB-kinazės beta mieloidinėse ląstelių, kuri neleidžia aktyvinti NF-κB šių ląstelių, slopina skrandžio atrofijos vystymąsi po H. felis
infekcija [45]. Taigi, makrofagai neatrodo prisidėti prie Helicobacter
klirensas, bet gali labiau skatinti skrandžio patologija.

Taigi, šis tyrimas rodo, kad vakcinacijos pelių prieš H. pylori
sustiprina M1 poliarizaciją skrandžio makrofagus. Panašus reiškinys pastebimas žmogaus atrofinį gastritas, kur mišrus M1 /​​M2 poliarizacija esančių nekomplikuota gastritas yra pakeičiamas M1 dominuoja poliarizacija. Tai gali sukelti auglys skatinimo uždegimą, ir perkeliant makrofagų poliarizaciją nuo M1 iki M2 todėl gali atstovauti gydomąjį tikslą lėtinis H. pylori
infekcija.

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

Tyrimas buvo patvirtinta Vyriausybės gyvūnų etikos komiteto (Göteborgs djurförsöksetiska nämnd, 328/2008 ir 254 /2009 m.) Regioninė žmogaus etikos komitetas Västra Götaland County Švedijoje (706/03 ir 85/06) patvirtino tyrimą, ir raštu informuoti sutikimas buvo gautas iš visų dalyvių. Tai yra vienintelė institucija, suteikiant etikos leidimą tyrimams žmonėms Švedijoje, ir jis nėra tiesiogiai susijęs su ligoninių ar universitetuose.

Pelės

Moteris C57BL /6 pelėms buvo įsigytas iš Charles River Laboratories (Sulzfeld, Vokietija), ar į vakcinavimo eksperimentų atveju nuo Taconic (Ejby, Danija). Pelės buvo užsikrėtę bent iš 8-12 savaičių amžiaus.

Bakterijos ir infekcijos pelių

H. pylori
SS1 buvo auginami Kolumbijos ISO agaro lėkštelių 2 dienas 37 ° C temperatūroje, po kurio jie buvo perkelti į Brucella sultinio papildyta 5% serumas iš veršiuko embriono (FCS) ir antibiotikus (vankomicino, 10 g /ml; Polimiksinas B , 20 U /ml; trimetoprimo, 5 g /ml) ir inkubuojami purtant per naktį esant 37 ° C temperatūroje, esant microaerophilic sąlygomis. Prieš infekcijos, bakterijų judrumas buvo patvirtinta mikroskopu. Bakterijų koncentracija buvo apskaičiuota spektrofotometru. Pelės gavo 3 × 10 ^{8 kolonijas sudarančių vienetų iš SS1 intragastrically.}

liežuviu imunizacija

Pelės buvo suteikta keturių 10 iL dozes 500 mikrogramų H. pylori
lizato (parengta iš padermės Hel305 kaip aprašyta anksčiau [46]) kartu su 10 mikrogramų choleros toksiną (sąrašas Biologinės Laboratories Inc., Madison, NJ) po liežuviu bent 1 savaites [47], [48]. Praėjus dviem savaitėms po paskutinio imunizacijos, pelėms buvo užginčytos intragastrically su 3 × 10 ^{8 kolonijas sudarančių vienetų H. pylori
SS1.}

vertinimas bakterinės kolonizacijos

kiekybinio įvertinimo bakterinės kolonizacijos imunizacijos eksperimentų, pusė skrandžio švelniai nuplauti PBS ir homogenizuoti naudojant Ultra Thurex homogenizatorių ( IKA laboratorija technologijos, Staufen, Vokietija). Serijiniu būdu atskiedus su homogenate buvo padengtas ant Skirrow agaro lėkštelių. Kai skrandžio LAMINA própria ląstelės buvo izoliuota nuo viso skrandžio negali būti atliktas kiekybinis įvertinimas skrandžio bakterijų kiekio. Šiuo atveju, skrandžio, kuris buvo supjaustyti išilgai didesnio kreivumo ir išplautos PBS, buvo švelniai užsėjamas Skirrow agaro lėkštelėse. Iš H buvimas. pylori
kolonijos buvo patvirtinta ureazės testą. Tokiu būdu mes galime patvirtinti, H. pylori
kolonizacija ir vis dar naudoja visą pilvą ląstelių atskirai.

išskyrimas skrandžio lamina propria ląstelių

liaukų skrandis buvo supjaustyti 5 mm gabaliukais ir inkubuojama tris kartus iš viso kartu su h.

• PLoS ONE: Tikslumas ir atjungimo vertės Pepsinogens I, II ir gastrinas 17 diagnozuoti Skrandžio Fundic atrofija: įtaka gastritas
• PLoS ONE: Bakterinė mikrofloros profiliavimo gastritas be Helicobacter pylori infekcijos ar nesteroidiniams priešuždegiminis vaistas Naudojimosi