PLoS ONE: Poboljšana M1 makrofaga polarizacije u ljudskim Helicobacter pylori Associated atrofični gastritis i kod cijepljenih Mice

Sažetak pregled

Pozadina pregled

Infekcija s Helicobacter pylori pregled izaziva kronične želuca upale koji može napredovati do atrofije i želučanog adenokarcinoma. Polarizacija makrofaga je značajno i za rak i infekcije, a može poticati napredovanje ili razlučivosti bolesti. Međutim, uloga makrofaga i njihova polarizacija u H. pylori pregled infekcija nije dobro definirana. pregled

Metodologija /glavne nalaze

Pomoću miša model infekcije i želučanih biopsija od 29 osoba, analizirali smo makrofaga zapošljavanje i polarizaciju vrijeme H. pylori pregled infekcija protočnom citometrijom i real-time PCR. našli smo sekvencijalni neutrofila, eozinofila i makrofage na želučanu sluznicu zaraženih miševa. Genska ekspresija analiza tkivu želuca i sortirane makrofaga otkrila je da su želučani makrofagi polarizirana na M1 nakon H. pylori
infekcije, a taj proces znatno je ubrzan prethodnog cijepljenja. Ljudski H. pylori pregled infekcija je karakterizirana mješovitoj M1 /​​M2 polarizacije makrofaga. Međutim, u H. pylori pregled -associated atrofični gastritis, izraz inducibilne sintaze dušičnog oksida značajno je porastao u odnosu na jednostavnu gastritis, indikativno poboljšanom M1 makrofaga polarizacija u ovom premalignih lezija. pregled

Zaključci /Značaj pregled

Ovi rezultati pokazuju da cijepljenje miševa protiv H. pylori pregled pojačava M1 polarizacija želučanog makrofaga, te da sličan poboljšane M1 polarizacija prisutna u ljudskom H. pylori pregled induciranu atrofični gastritis pregled

Izvor:. Quiding-Järbrink M, Raghavana S, Sundquist M (2010) Poboljšana M1 makrofaga polarizacija u ljudskoj Helicobacter pylori pregled -Associated atrofičnog gastritisa te u cijepljeni miševi. PLoS ONE 5 (11): e15018. doi: 10,1371 /journal.pone.0015018 pregled

Urednik: Niyaz Ahmed, Sveučilište u Hyderabad, Indija pregled

Primljeno: 26. kolovoz 2010; Prihvaćeno: 7. listopada 2010. godine; Objavljeno: 23. studenog 2010 pregled

Copyright: © 2010 Quiding-Järbrink et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je podržan od strane centra za izvrsnost MIVAC, financiran od strane švedske Zaklade za strateška istraživanja, Adlerbert Research Foundation, Wilhelm & Martina Lundgren je temelj, Inga-Britt & Arne Lundberg je temelj, a Sveučilišne bolnice Sahlgrenska. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Helicobacter pylori pregled kolonizirati želuca epitel više od polovice svjetske populacije [1]. Infekcije često doživotna i izaziva kroničnu upalu u sluznici želuca, što je u oko 1-2% inficiranih pojedinaca s vremenom razvije u želučanu adenokarcinoma [1]. Razvoj raka želuca, posebno u probavnom tipa, je postupak u više koraka koji napreduje desetljećima kroz premalignih lezija želučane sluznice, kao što je atrofični gastritis, intestinalna metaplazije i displazije [2]. Ishod infekcije ovisi o virulencije zaraze H. pylori pregled, soja, ekološki čimbenici kao što su pušenje i prehrane, a domaćin genetske čimbenike koji utječu na vrstu i intenzitet upalnog odgovora. [1] pregled

A jaka pro-upalni odgovor je povezana s povećanim razinama reaktivni kisikovi i dušikovi vrsta u sluznici želuca [3], koji mogu promicati razvoj raka [4]. Na primjer, miševi zaraženi s H. pylori pregled za šest mjeseci imaju povećanu učestalost želuca mutacija u odnosu na nezaraženih miševa [5]. Osim toga, miševi koji su deficijentni u enzima inducibilne sintaze dušičnog oksida (iNOS), imaju smanjenu učestalost raka želuca nakon H. pylori pregled infekcije i kancerogen izazov u usporedbi s normalnim miševima [6]. A iNOS doprinosi razvoju karcinoma želuca, visoka razina kemokina CCL18 u gastričnih tumora povezana s produljenim preživljavanja pacijenata oboljelih od raka želuca [7]. Zanimljivo iNOS proizvodi klasično aktiviranih /M1 makrofagi dok CCL18 proizvodnja je znak za alternativno aktiviranih makrofaga /m2 [8]. Uzeti zajedno, ovi rezultati ukazuju na to da makrofaga polarizacija može imati važnu ulogu u razvoju H. pylori pregled -associated rak želuca. pregled

M1 makrofagi obično sudjeluje u početno imuni odgovor na invaziju mikroorganizama i promovirati T pomagača (TH) 1 imunitet, dok su M2 makrofagi inducirana u fazi rješavanja upale i su uključeni u krhotine čišćenjem, obnove tkiva, te promicanje Th2 imuniteta [8], [9]. Polarizacija makrofage uputama okoline. M1 makrofagi su izazvana interferon-y i mikrobioloških proizvoda kao što su lipopolisaharidom [9]. S druge strane, M2 makrofagi su inducirani Th2- ili anti-upalnih citokina i faktora rasta, uključujući IL-4, IL-10 i transformacijom faktora rasta P [8], [9]. Pregled

Tijekom H. pylori infekcija pregled, makrofagi su regrutirani na želučanu sluznicu, gdje pridonose na proizvodnju proupalnih citokina i kemokina [10], [11], [12], [13], [14], [15] , Osim toga, nedavna studija pokazala je da liposomDNA posredovana osiromašeni makrofaga smanjuje želučane patologije u H. pylori pregled -infected miševa [16]. Unatoč tome, funkcija makrofaga u in vivo H. pylori pregled infekcija ostaje relativno slabo definirana. Funkcija makrofaga usko je povezana s njihovom polarizacije stanje, koje se čini da imaju ulogu u razvoju raka želuca [6], [7]. Stoga smo ispitali makrofaga polarizaciju u želučanoj sluznici H. pylori
-infected miševa i ljudi. Pokazali smo da je cijepljenje miševa protiv H. pylori
brzine i pojačava M1 polarizacija želučanih makrofaga. Osim toga, predkanceroznih lezija atrofični gastritis karakteriziran poboljšane makrofaga M1 polarizacije u ljudi. Pregled

Rezultati

Povećana frekvencija makrofagima, eozinofila i neutrofila u sluznicu želuca nakon H. pylori pregled infekcije pregled

Zapošljavanje urođenih stanica na mjestu infekcije je preduvjet za zarazne kontrole. Ne samo da može urođeni stanice, kao što su makrofagi i neutrofila, sudjeluju u bakterijskom ubijanja; oni također proizvode upalne medijatore, koji postavljaju pozornicu za sljedeću imunološkog odgovora. Da bi istražili nakupljanje urođenih stanica u sluznici želuca tijekom H. pylori pregled infekcija, zaraženi smo C57BL /6 miševa s mišem prilagođen H. pylori
Sydney naprezanje 1 (SS1), a nakon četiri, osam i 26 tjedana smo analizirali želučane upalni infiltrat pojedinih miševa multi-boji protočne citometrije. Ukupan broj lamina propria stanica izoliranih iz želuca nisu se mijenjale tijekom prva četiri tjedna od infekcije, ali u osam tjedana nakon infekcije bio je udvostručen ukupan broj stanica izoliranih, a na 26 tjedana infekcije došlo je do osam puta više u ukupnom broju stanica izoliranih u odnosu na neinficirane miševa (sl. 1). Među stanice regrutiranju na želucu su makrofagi, eozinofila i neutrofila. Želučani makrofagi su identificirani kao stanice koje eksprimiraju CD 11 i glavnog sustava tkivne kompatibilnosti klasu II (MHC-II), a koji nemaju ekspresiju Gr1 (marker neutrofila), CD103 (izražen podskup dendritičke stanice (DCS)) i immunoglobulin- sialične kiseline se veže kao lektina (Siglec-F, marker eozinofila) (Sl. 1b). Te stanice su izrazili makrofaga marker F4 /80 (sl. 1 E), a temelji se na morfologiju stanica koje su potvrđeni kao makrofagi (Sl. 1b). Učestalost makrofaga u sluznici želuca ostala nepromijenjena nakon četiri do osam tjedana H. pylori pregled infekcije (Sl. 1F). Međutim, nakon 26 tjedana učestalosti želučanih makrofaga povećan u odnosu na uninfected miševa (Sl. 1F). Pregled

eozinofili su definirani kao CD 11 ^{+ Siglec-F + stanice (Sl. 1C, [17]). Te stanice izraženi srednji nivo F4 /80 i imali visoku bočnom raspršenju profil kad se analiziraju pomoću protočne citometrije (Sl. 1E). Krezil ljubičasta bojenje sortirani CD 11 + Siglec-F + stanice potvrdio eozinofila morfologija (sl. 1 C). Učestalost eozinofila u sluznicu želuca duplicira nakon osam tjedana, a daljnje povećanje nakon 26 tjedana infekcije (Sl. 1F), pregled}

Neutrofili su definirani kao CD 11 ^{+ Gr1 + stanica (Slika . 1D). Budući da je Gr1 antitijela prepoznaje oba Ly6C i Ly6G epitop mi je potvrdio da su svi CD 11 + Gr1 + stanica izrazio određenu neutrofila marker Ly6G (sl. 1d i E). Učestalost neutrofila povećana 10 puta osam tjedana nakon infekcije, a dodatno je porasla nakon 26 tjedna (Sl. 1 f). Dakle, tijekom H. pylori pregled infekcija postoji sekvencijalni akumulacija neutrofila i eozinofila, nakon čega slijedi makrofaga u želučanom lamina propria. pregled}

Karakterizacija želuca DC pregled

Kako bi okarakterizirali želučane DB, prvo smo identificirali populaciju od CD11c ^{+ MHC-II + stanice (Sl. 2). Kada su te stanice su dalje analizirani na ekspresiju F4 /80 i αE integrina lanca CD103, polovice CD11c + MHC-II + stanice su identificirani kao F4 /80 + makrofaga (Sl. 2A ). Međutim, među CD11c + MHC-II + stanica kojima su nedostajali izražavanje F4 /80, dvije skupine navodnih DC s diferencijalne ekspresije CD103 može se razlikovati (Sl. 2). Zbog brojnih fluorokromima potrebnih smo izabrali da samo karakterizaciju želučane CD103 +
DC i dalje, budući da ove stanice su uključeni kao važan stanice za predočavanje antigena u sluznice [18]. Želučani CD103 + DC lako su identificirani bojanjem za CD11c i CD103 (sl. 2b). Želučana CD103 + DC izrazio visoke razine MHC-II, a sastojao se od CD 11 niska i CD 11 visoka podskup (Sl. 2C). Za usporedbu, želučani CD103 - DC su svi CD 11 visoka (Slika 2D).. Osim toga, CD103 + DC nedostajao ekspresiju CD8α i F4 /80 (Sl. 2C). Međutim, učestalost CD103 + DC nisu značajno promijenili u sluznici želuca nakon infekcije (Sl. 2E). Pregled}

Želučani makrofagi i CD103 ^{+ DC uspjeti u povećanju kostimulacijske molekule nakon H. pylori pregled infekcije pregled}

Da bi se istražila moguće učinke H. pylori pregled infekcije na ekspresiju kostimulacijskih molekula i MHC-II želuca makrofaga i CD103 ^{+ DB, ekspresija tih markera analizirana je protočnom citometrijom nakon četiri, osam i 26 tjedana od infekcije. U stacionarnim, makrofage i CD103 + DC u želučanom lamina propria izrazio slične razine kostimulatornog molekule CD86, kao i MHC-II (sl. 3a). Začudo, izraz CD86 i MHC-II, bilo zbog želučanih makrofagima ili CD103 + DC nije bila povećana nakon infekcije s H. pylori pregled u odnosu na iste dobi naivni miševi paralelnu analizu (Sl. 3b). Dakle, makrofagi i CD103 + DC u želučanom lamina propria uspjeti u povećanju CD86 i MHC-II nakon H. pylori
infekcije, unatoč tijeku upalnog odgovora. pregled}

M1 polarizacija želučanih makrofaga u H. pylori pregled infekcije pregled

Budući da naši rezultati sugeriraju da su želučani makrofagi ne može biti u potpunosti aktivirati tijekom H. pylori pregled infekcija, naznačena smo ove stanice dalje istražuje svoje M1 /​​M2 polarizaciju. Da bi se odredilo makrofaga polarizaciju vrijeme H. pylori pregled infekcija, koriste se u realnom vremenu PCR za mjerenje ekspresije gena koji su povezani s M1 ili M2 polarizacije makrofaga u želučanom tkivu [8], [9]. Također smo mjerili ekspresiju IL-10, koji se može proizvesti od strane regulatornih makrofaga [9]. Niti jedan od markera analizirani su različito izražena četiri tjedna nakon H. pylori
infekcije u odnosu na naivne miševa (Sl. 4a). Na osam tjedana nakon infekcije ekspresija biljega M1 iNOS i CXCL11 bila značajno povećana, a ti su markeri dalje doreguliran na 26 tjedana infekcije (Sl. 4A). Osim toga, ekspresija IL-10 je doreguliran na osam i 26 tjedana infekcije je povezana sa naivnim miševima (Sl. 4A). Nasuprot tome, M2 markeri naći u upalnom zoni 1 (FIZZ1) i arginaze-1 nisu različitiom ekspresijom u želucu četiri, osam ili 26 tjedana infekcije u odnosu na naivni miševi (Sl. 4A). Pregled

Kako identificirati izvor iNOS i CXCL11 u želučanoj sluznici, makrofagi (CD 11 ^{+ Gr1 -Siglec-F -MHC-II +), eozinofila (CD 11 + Gr1 -Siglec-F + MHC-II -), a preostale stanice nakon vratarenje iz makrofaga i eozinofila (CD 11 - i CD 11 + Gr1 +) su razvrstani iz spoje želučani lamina propria stanice miševa zaraženih s h. pylori
za 26 tjedana (Sl. 4b). Ekspresija mRNA iNOS i CXCL11 u staničnim populacijama razvrstani iz inficiranih miševa, kao i ukupno želučani lamina propria stanicama i naivne i zaraženih miševa bio je određen pomoću real-time PCR. Dovoljan broj sortiranog makrofaga nije mogao dobiti od naivne miševa za pouzdanu analizu ekspresije mRNA. Želučani makrofagi izrazio najvišu razinu iNOS i CXCL11 u usporedbi s drugim sortirati stanične populacije i ukupnih želuca lamina propria stanica prije sortiranja (Sl. 4c). Uzeti zajedno, ovi rezultati pokazuju da su želučani makrofagi polarizirana na M1 u H. pylori pregled infekcija. pregled}

Cijepljenje protiv H. pylori pregled pojačava makrofaga M1 polarizacija pregled

Zaštitna cijepljenja protiv H. pylori pregled općenito povezana s brzim razvojem želučani Th1 odgovora [19]. Budući da je Th1 citokina interferon-γ izaziva makrofaga M1 polarizacija [9], ispitali smo je li cjepivo moglo utjecati makrofaga polarizaciju u H. pylori
infekcije. U tu svrhu, miševi su imunizirani sublingvalno s H. pylori
Lizat i toksin kolere pomoćno sredstvo, a nakon toga je izazvan s H. pylori
SS1. To imunizacija režim doveo je do značajnog smanjenja bakterijskog opterećenja u želucu četiri tjedna nakon izlaganja (Sl. 5A). Istovremeno, izraz M1 i M2 markera u želucu analizirana je u realnom vremenu PCR. U neimuniziranih miševa, samo izraz CXCL11 znatno regulira prema gore četiri tjedna nakon infekcije u odnosu na naivni miševi (sl. 5b). Nasuprot tome, imunizirani miševi pokazuju veliki Doreguliranje oba M1 markera iNOS i CXCL11 a ekspresija biljega M2 FIZZ1 i arginaze-1 nije promijenjena, četiri tjedna nakon izlaganja (Sl. 5B). Povećana ekspresija iNOS i CXCL11 u imuniziranih /pobija miševa nije posljedica samo imunizacije, budući imunizirane ali ne-miševi potaknuti nije promijenio izraz bilo kojeg od analiziranih M1 ili M2 markera u odnosu na potpuno neobrađenih miševa (podaci nisu prikazani ). pregled

Nadalje, analizirali smo frekvenciju makrofaga u želučanoj sluznici imuniziranih i izazvan miševa protočnom citometrijom. U odnosu na zaraženim samo za miševe, imunizirane miševi imali značajno povećana učestalost želuca makrofaga tri tjedna nakon izlaganja (sl. 5c). No, unatoč tome što su makrofagi regrutirani na želučanu sluznicu imuniziranih i izazvanih miševa, makrofagi nisu povećanju ekspresije CD86 ili MHC-II u odnosu na inficiranih samo za miševe (Sl. 5D). Ovi rezultati pokazuju da je nakon uspješnog cijepljenja s H. pylori pregled lizat i toksin kolere, makrofagi akumuliraju u sluznici želuca i brzo polarizirana na M1 nakon infekcije. pregled

Povećanje makrofaga M1 polarizacija u ljudskom atrofični gastritis Netlogu

Sljedeći ispitati ulogu H. pylori
infekcije i atrofičnog gastritisa za makrofaga polarizacija u ljudskom želučane sluznice. U tu svrhu, ekspresija ljudskog M1 (iNOS, CXCL11) i M2 markera (CCL17, CCL18, CD206) se mjeri u biopsijama iz antruma u realnom vremenu PCR. H. pylori pregled -infected pojedinci s nekomplicirane gastritis pokazala je značajno povišenu ekspresiju mRNA za oba M1 (iNOS, 8 puta, CXCL11, 20-struki) i M2 markera (CCL17, 30 puta, CCL18, 70 puta, CD206 , 2-struki) u odnosu na neinficirane dragovoljaca (Sl. 6A). Međutim, osobe s atrofični gastritis (4/6 imao intestinalne metaplazije pored atrofija) izrazila je čak i više razine iNOS mRNA u odnosu na one s jednostavnim gastritis (20 puta), dok CXCL11 i biljezi M2 polarizacije slično su izraženi (Sl. 6A). Doista, izraz iNOS je 180 puta povišen kod osoba s atrofični gastritis odnosu na nezaražene kontrole (Sl. 6a), što ukazuje na povećanu M1 polarizacija želučanog makrofaga u bolesnika s atrofični gastritis. Pregled

Da bi istražili da li je povećana ekspresija mRNA od M1 i M2 markera također prevodi u povećanoj razini proteina, ukupni proteini su iz antralnim uzoraka biopsije i koncentracija iNOS i CCL18 određena je ELISA testom. Želučani biopsije od pojedinaca s atrofični gastritis je dostupan samo za ekstrakciju proteina iz jednog volontera, koji se različito označeno na slici 6B. Polovica H. pylori pregled -infected pojedinci imali mjerljive razine iNOS proteina u antrumu, dok koncentracija iNOS bila je ispod granica detekcije u svim neinficiranih pojedinaca (Sl. 6B). Ekspresija iNOS mRNA i iNOS proteina značajno korelirana (R ^{2 = 0,88, P izvoznici < 0,01), što ukazuje da je analiza mRNA pokazuje ekspresiju proteina, čak i kada je razina proteina su niske. Koncentracija M2 markera CCL18 povećan je u želučanoj tkiva iz H. pylori pregled -infected pojedinaca u odnosu na nezaražene kontrole (Sl. 6b). Osim toga, koncentracija CCL18 proteina značajno korelirana s izrazom CCL18 mRNA (R 2 = 0,754, P izvoznici < 0,01). Pregled}

Uzeti zajedno, ovi rezultati ukazuju na prisutnost oba M1 i M2 makrofagima u želučanoj sluznici H. pylori
-infected pojedinaca. Nadalje, atrofični gastritis povezana s jakim amplifikacije iNOS ekspresije u sluznicu želuca, što pokazuje poboljšane M1 polarizacije makrofaga. Pregled

Rasprava pregled

U ovoj studiji istraživali smo polaritetu želučane makrofagi tijekom kronične h. pylori
infekcije. Pokazali smo da H. pylori pregled -infected jedinke izražavaju mRNA u sluznici želuca indikativno miješanog M1 /​​M2 polarizacije makrofaga, a to je dalje potvrđeno na razini proteina. Međutim, u H. pylori pregled induciranu atrofični gastritis bilo je značajno povećanje u ekspresiji iNOS u odnosu na jednostavnu gastritis. Atrofični gastritis prenosi povećani rizik za razvoj karcinoma želuca u odnosu na jednostavnu H. pylori pregled -associated gastritis [20]. Povećana ekspresija iNOS u atrofičnog gastritisa može doprinijeti razvoju raka želuca preko proizvodnje reaktivnih dušika, koji mogu promicati karcinogeneze indukcijom oštećenja DNA, poremećaj popravka DNA, post-translacijske modifikacije proteina i p53 mutacijama [4]. Doista, iNOS miševi s nedostatkom imaju smanjenu incidenciju želučanog adenokarcinoma nakon H. pylori
infekcije i izazov s kemijskim kancerogen u usporedbi s normalnim miševima [6]. Također, polimorfizmi u promotorske regije iNOS, što dovodi do veće transkripcije aktivnosti, u korelaciji s većom učestalošću u probavnom vrste raka želuca u japanske žene [21]. Pregled

Za razliku ljudskom H , pylori pregled infekcija, SS1 inficirane C57BL /6 miševi pokazuju profil ekspresije gena u sluznici želuca indikativne makrofaga M1 polarizacije. Ekspresije gena analizom sortiranih makrofaga izoliran iz sluznice želuca zaraženih miševa potvrđeno je da je ekspresija iNOS M1 markera i CXCL11 obogaćcn Sortirani makrofaga populacije. Nadalje, M1 polarizacija želučanih makrofaga znatno je ubrzan prethodnog cijepljenja. Već četiri tjedna nakon izlaganja, imunizirani miševi regulira prema gore ekspresiju iNOS i CXCL11 na sličnoj razini kao da je vidio nakon 26 tjedana u zaraženim samo za miševe. Studije iNOS-deficijentnim miševima su pokazale da iNOS potiče razvoj atrofije i raka u sluznici želuca u Helicobacter pregled infekcija [6], [22]. Štoviše, klirens H. pylori
nakon cijepljenja javlja neovisno iNOS [23]. Dakle, iNOS čini se da pridonijeti domaćin patologije, a ne zaštitu tijekom infekcije s H. pylori
. Dakle, ako je pojačana proizvodnja iNOS u sluznici želuca se održava nakon cijepljenja, to može biti neželjena nuspojava koje mogu povećati težinu H. pylori
izazvanu upalu i malignosti, osim ako je postignut sterilna imunitet. Ipak, relativni doprinos iNOS domaćin patologiju u odnosu na zaštitu u različitim fazama H. pylori pregled infekcija jamči daljnje istrage. pregled

Uočili smo sekvencijalni zapošljavanje urođeni stanica u želučanoj sluznici SS1-inficiranih miševa, a makrofagi gomilaju prilično kasno u toku infekcije (26 tjedana). Nasuprot tome, frekvencije želučane neutrofila i eozinofila u sluznicu želuca povećana osam tjedana nakon infekcije i ostao povišen na 26 tjedana. Akumulacija makrofaga dogodio mnogo brže kod cijepljenih miševa, u kojem slučaju se povećao učestalost želučanih makrofaga već tri tjedna nakon izlaganja. Prije toga, neutrofili su pokazala da se regrutiraju u želučanoj sluznici SS1 inficiranih miševa u dvije faze, jedna rana faza maksimumom 1-2 dana nakon infekcije i jednim krajem faza koja počinje na 2-3 tjedna nakon infekcije [24]. Regrutiranje uzorak sličan onom neutrofila, također je opisan za želučane makrofage [24]. Međutim, makrofagi su definirani kao CD 11 ^{+ Gr1 - stanice [24], stanica populacija koja je u našim rukama prvenstveno sastoji od eozinofila (vidi sliku 1 i 2).. Asim et al. definirane makrofagi su CD 11 + F4 /80 + stanica, a uočeno rano vrhunac u makrofaga broj u sluznici želuca 1-2 dana nakon infekcije s H. pylori pregled [15]. Osim toga, broj makrofaga ponovno povećana na 60 i 120 dana nakon infekcije u odnosu na naivnim miševima [15]. Mi smo proširiti ove rezultate pokazujući da je zapošljavanje tih urođenih staničnih populacija održava se do 26 tjedana nakon infekcije. Osim toga, mi opisati nakupljanje eozinofila u sluznici želuca, stanica populaciju koja je daleko brojno nadmašiti želučanih makrofaga i neutrofila (Sl. 1). Doista, uloga eozinofila u H. pylori pregled induciranu gastritisa treba istražiti i dalje. Eozinofili i makrofagi udio izraz nekoliko markera, uključujući i CD 11 i F4 /80 (Sl. 1, [25]). Dakle, više markeri moraju biti analizirani istodobno kako bi se razlikovali ove urođene populaciju stanica. Pregled}

Mi smo bili u mogućnosti identificirati dvije populacije DC u želučanoj sluznici miševa. Oba podskupovi izrazio visoke razine CD11c i MHC-II, nedostajalo izražavanje makrofaga marker F4 /80, ali se razlikuju s obzirom na ekspresiju CD103. Učestalost želučane CD103 ^{+ DC nije promijenio nakon četiri, osam ili 26 tjedana H. pylori
infekcije. Za razliku od našeg istraživanja, nedavnom istraživanju Kao i sur. nije mogao otkriti CD103 + DC-u želučanoj sluznici nezaražene miševa [26]. Umjesto toga, CD103 + DC pojavila 24 h nakon H. pylori
infekcije. Od vremena analize razlikuju te studije i naših eksperimenata, to je teško izravno usporediti rezultate. Pregled}

Unatoč tome M1 makrofagi obično pojačanog MHC-II i kostimulacijske molekule, nismo mogli otkriti povećanu ekspresiju MHC -II ili CD86 na želučane makrofagima ili CD103 ^{+ DC iz bilo neimuniziranih ili imuniziranih miševa nakon infekcije. Za razliku od toga, in vitro inkubacija H. pylori
ljudskim monocitima [27], ljudskih DC monocitnog porijekla [28], [29], [30], [31], DC mišjeg dobiveni iz koštane srži [32], [33], ili humani primarni želučane DC [34], izaziva reguliranje prema kostimulacijskih molekula i MHC-II. Stoga je neuspjeh u povećanju MHC-II i CD86 na želučane makrofaga i CD103 + DC u kroničnoj H. pylori pregled, infekcija može biti uzrokovana upalnim miljeu, a ne bakterija po sebi. Doista, interakcija između DC i H. pylori pregled in vitro ne odražavaju nužno ono što se događa in vivo, gdje lokalna mikrookoliša na mjestu stjecanja antigena i prezentacije antigena, kao i DC podskup koji su uključeni u prezentaciji antigena u H. pylori pregled, utjecati će na odgovor. Na primjer, regulatorne T stanice, koje prevladavaju u H. pylori pregled -infected želučane sluznice [35], [36], može spriječiti reguliranje prema kostimulacijskih molekula i MHC-II na DC [37]. Osim toga, IL-10 mogu spriječiti doreguliranje kostimulacijske molekule i MHC-II na makrofagima i s [38]. Pregled}

U akutnim upalnim odgovorima, makrofagi obično polarizirane na M1 i vrše potentne antimikrobna učinke. Na primjer, infekcija s Salmonella typhimurium pregled ili Listeria monocytogenes pregled potiče M1 polarizacija makrofaga, koji je potreban za kontrolu infekcije [39]. Rezolucija upale karakterizira pomak u makrofaga polarizacije u M2, koji potiče zacjeljivanje tkiva. Tuberculosis bolesnici pokazuju povećanu produkciju Th2 citokina infekcija napreduje [40], [41], koji se može inducirati M2 polarizacije makrofaga. Kod miševa, M1 polarizacija makrofaga predstavlja rani odgovor na Mycobacterium tuberculosis pregled, dok su alveolarne makrofage polarizirana M2 u kasnoj fazi infekcije [42]. Međutim, pomak u makrofaga polarizacije izazvana kronične infekcije često rezultira smanjenim kapacitetom od makrofaga ubiti invaziju bakterija [39], [43]. S druge strane, kronična upala s trajnim M1 makrofaga polarizacije je povezana s povećanim rizikom od razvoja karcinoma. [4] pregled

Da li makrofagi doprinose za obranu domaćina protiv H. pylori pregled? Za razliku od neutrofila, makrofaga nisu često vidi u lumenu želuca nakon izgon kroz epitel [44]. Budući da H. pylori
pretežno žive u želučanoj sluzi sloju ili su priključeni na želučane epitelne stanice, makrofagi ne smiju doći u izravan dodir s cijelim bakterija. Doista, osiromašeni makrofagima liposoma drug-loaded nije imao učinka na H. pylori pregled kolonizacija [16], što ukazuje da su makrofagi ne može izravno doprinijeti obranu domaćina protiv H. pylori
. Za razliku od toga, makrofagi mogu promovirati želučane patologiju. Na primjer, liposomi posredovane osiromašeni makrofaga suzbija gastritis izazvanu H. pylori pregled infekcija [16]. Osim toga, selektivni delecija I-kB kinaze P u mijeloidnim stanicama, što sprječava aktivaciju NF-kB u tim stanicama inhibira razvoj želučanog atrofije nakon H. felis pregled infekcija [45]. Dakle, makrofagi ne pojavljuju pridonijeti Helicobacter pregled, vrijeme, ali se može prilično promovirati želučane patologije. Pregled

U zaključku, ova studija pokazuje da je cijepljenje miševa protiv H. pylori pregled pojačava M1 polarizacija želučanih makrofaga. Sličan je fenomen se vidi u ljudskom atrofičnog gastritisa, gdje miješani M1 /​​M2 polarizacije prisutan u jednostavnoj gastritisa zamijenjen s M1 pretežno polarizacije. To može izazvati tumor potiču upalu, a pomak makrofaga polarizaciju od M1 M2, dakle, mogao bi predstavljati terapeutski cilj u kroničnoj H. pylori pregled infekcija. pregled

Materijali i metode pregled

Etika izjava pregled

Istraživanje je odobreno od strane životinja etičkog povjerenstva vlade (Göteborgs djurförsöksetiska nämnd, 328/2008 i 254 /2009. godine). Regionalna ljudska Etičko povjerenstvo Västra Götaland županije u Švedskoj (706/03 i 85/06) odobrila studiju i pismeni informirani pristanak dobiven je od svih sudionika. To je jedini autoritet daje etičku dozvolu za istraživanje na ljudima u Švedskoj, a to nije izravno povezana s bolnicama ili sveučilišta. Pregled

Miševi pregled

Ženski C57BL /6 miševa nabavljeni su od Charles River Laboratories (Sulzfeld, Germany), ili u slučaju pokusa cijepljenja od Taconic (ejby, Danska). Miševi su zaraženi u dobi od 8-12 tjedana. Pregled

bakterije i infekcije miševa

H. pylori pregled SS1 uzgojen na Columbia agar ploče koje ISO 2 dana na 37 ° C, nakon čega su prenesena na Brucella bujon, uz dodatak 5% fetalnog telećeg seruma (FCS) i antibiotici (vankomicin, 10 ug /ml; polimiksin B 20 u /ml, trimetoprim, 5 ug /ml) i inkubiraju preko noći mućkanja na 37 ° C u microaerophilic uvjetima. Prije infekcije, pokretljivost bakterija je potvrđena mikroskopijom. Koncentracija bakterija procijenjena spektrofotometrijski. Miševi su primili 3 x 10 ^{8 jedinica koje tvore kolonije od SS1 intragastrično. Pregled}

sublingvalni imunizacija pregled

Miševi su dobili četiri od 10 doza, ul 500 ug H. pylori pregled lizat (pripravljen iz soja Hel305 kao što je ranije opisano [46]) u kombinaciji s 10 ug kolera toksin (List Biological Laboratories Inc., Madison, NJ), sublingvalno, na 1-tjednim intervalima [47], [48]. Dva tjedna nakon posljednje imunizacije, miševi su bili stimulirani intragastrično s 3 × 10 ^{8 kolonija koje formiraju jedinice H. pylori
SS1. pregled}

Procjena bakterijske kolonizacije Netlogu

Za kvantitativnu procjenu bakterijske kolonizacije u imunizacije eksperimenata, jedna polovica trbuha blago se isperu s PBS i homogenizirane pomoću Ultra Turrax homogenizatora ( IKA Laboratorij Tehnologija, Staufen, Njemačka). Serijska razrjeđenja homogenata je stavljeno na agar-pločice Skirrow. Kada želuca lamina propria stanice su izolirane iz cijelog želudac ne može izvesti kvantitativna procjena želučani bakterijskog opterećenja. U ovom slučaju, želudac, koja je izrezana uzduž veće zakrivljenosti i isprani u PBS, je blago iscrtkana na Skirrow agar pločama. Prisutnost H. pylori pregled kolonije je potvrđena testom ureaze. Na taj način bismo mogli potvrditi H. pylori pregled, kolonizacija i dalje koristiti cijeli želudac za izolaciju stanica. pregled

Izolacija želuca lamina propria stanica pregled

žljezdano želudac je izrezati na 5 mm komade i inkubira ukupno tri puta s H.

• PLoS ONE: Točnost i cut-off Vrijednosti Pepsinogens I, II i gastrin 17 za dijagnozu želučani fundusa atrofije: Utjecaj gastritis
• PLoS ONE: Bakterijska mikrobiota profiliranje u gastritis bez Helicobacter pylori infekcije ili nesteroidnih protu-upalnih uporabe droga