Endoteliálny lipázy proteín je sľubná močový biomarker pre diagnostiku žalúdočného cancer

endoteliálny lipázy proteín je sľubná močový biomarker pre diagnostiku karcinómu žalúdka
Abstract
pozadí
žalúdočné rakovina je jedným z najbežnejších zhubných nádorov v celom svete , Hľadanie efektívnych diagnostických biomarkerov v moči alebo sére by predstavovalo najideálnejšie riešenie pre detekciu rakoviny žalúdka počas ročného fyzikálneho vyšetrenia. Tejto štúdie bolo zhodnotiť potenciál endoteliálny lipázy (EL) ako močového biomarkeru pre diagnostiku rakoviny žalúdka.
Metódy
expresné hladiny EL bola meraná pomocou Western blotting a Imunohistochemické farbenie pokusy o (tkaniva, sérum, a moču) vzorky pacientov s karcinómom žalúdka oproti
zdravých ľudí. Tiež sme overovali úrovne EL vo vzorkách moču z iných typov rakoviny (pľúc, hrubého čreva a konečníka rakoviny) a benígnych lézií (gastritídy a žalúdočné leiomyóm) pre kontrolu, či EL bola špecifická pre rakovinu žalúdka.
Výsledok
sme pozorovali jasné oddelenie medzi úrovňami expresie EL vo vzorkách moču z 90 pacientov s karcinómom žalúdka a 57 zdravých dobrovoľníkov. To bolo približne 9,9 krát priemerný pokles hladín EL expresie vo vzorkách moču karcinómu žalúdka v porovnaní s zdravými kontrolami (P Hotel &0,0001), dosiahnutie 0,967 AUC hodnoty pre ROC (receiver operating charakteristické krivky), čo ukazuje, je to vysoko presný ako diagnostický marker pre rakovinu žalúdka. Je zaujímavé, že expresné hladiny EL v tkanivových a sérových vzorkách nie sú zďaleka tak diskriminačné ako vo vzorkách moču (P
= 0,90 a p = 0,79
). V imunohistochemické pokusy, pozitívna expresia proteínu EL bola nájdená u 67% (8/12) zo žalúdka priľahlé noncancerous a v 58% (7/12) vzoriek s rakovinou žalúdka. Nebol žiadny významný štatistický v expresných hladín tohto proteínu medzi rakovinou žalúdka a zodpovedajúce nenádorové tkanív (P
= 0,67).
Závery
močového EL ako vysoko presnom žalúdočné rakoviny biomarkerov, ktorý je potenciálne . o súhrnnom skríningu s vysokou citlivosťou a špecifickosťou
Virtuálne Snímky
Virtuálne snímka (y) tohto článku nájdete tu: http: ... //www diagnosticpathol nika diagnomx eu /vs /4527331618757552
Kľúčové slová
endoteliálny lipázy biomarkery žalúdka Diagnóza rakoviny Doterajší
žalúdočné rakovina je jedným z najbežnejších zhubných nádorov v celom svete, čo predstavuje tretiu najčastejšiu príčinu úmrtia na nádorové ochorenia u mužov a piatou najčastejšou príčinou u žien [1]. Približne dve tretiny žalúdočných prípadov rakoviny sa vyskytujú v menej rozvinutých krajinách, ktoré sú takmer trikrát vyšší na jedného obyvateľa ako v rozvinutých krajinách, ako je napríklad európskych krajín a Severnej Ameriky [2]. Rakovina žalúdka má vysokú úmrtnosť, pretože nemá žiadne zjavné klinické príznaky v počiatočnom štádiu. Štúdie naznačujú, že pokiaľ bol zistený nádor a resekcie v počiatočnej fáze, priemer 5-ročné prežitie je pomerne vysoká [3, 4]. Z tohto dôvodu, včasná diagnóza a liečba predstavujú kľúč k zlepšeniu prognózy pacientov s karcinómom žalúdka.
Hoci veľké množstvo úsilia bolo uvedené do vývoja technológií s cieľom uľahčiť diagnózu gastroskopia a imunohistochemické analýzou, invazívne povaha týchto postupov robí to nepraktické pre vo veľkom meradle pre skríning rakoviny žalúdka. Účinné diagnostické biomarkery v moči alebo v sére by predstavovalo najideálnejšie riešenie problému, ktorý umožňuje testovanie pre rakovinu žalúdka cez analýzu krvi a moču počas každoročných lekárskych prehliadkach. Bolo navrhnutých niekoľko diagnostických sérové ​​markery pre rakovinu žalúdka, ako je mg7-Ag [5], karcinoembryonálneho antigénu (CEA), MUC1 a MUC5AC [6]. Stavu techniky je to, že prakticky všetky z nich trpí pomerne nízka citlivosť a osobitosti diagnostike rakoviny, a teda nie sú široko používané klinicky [7]. V porovnaní s tkanivom a v sére, zberu moču je relatívne jednoduchšie a menej invazívne. To môže byť vhodné pre skríning vo veľkom meradle pre detekciu karcinómu [8]. Za použitia porovnávacej proteomických analýz, rad potenciálnych močových biomarkerov boli navrhnuté a tiež testované na iné typy rakoviny, ako je napríklad cystatinu B a klusterinu pre rakovinu močového mechúra [9, 10], karboanhydrázy IX a kathepsinu D pre karcinóm obličiek [11, 12], a ADAM12 rakoviny prsníka [13]. U rakoviny žalúdka, boli hlásené niekoľko biomarkery, ako je pepsinogénu I, prostaglandínu E2 a rozpustného c-ErbB-2 [14-16]. Vlastné diagnostické schopnosti pre rakovinu žalúdka je potrebné ešte dôkladne posúdené, pretože neboli široko používaný v klinickej diagnostiky. Preto je tu jasne naliehavá potreba pre identifikáciu a overovanie nových a spoľahlivých diagnostických markerov pre skríning rakoviny žalúdka.
Sme už skôr uskutočňuje štúdiu systémovej biológie identifikovať potenciálne kandidátske biomarkerov pre diagnostiku rakoviny žalúdka. V tejto štúdii sme analyzovali dáta génovej expresie 80 párov žalúdočné rakovinové tkanive a priľahlých nerakovinových tkanív odobratých od pacientov s karcinómom žalúdka pomocou microarray čipy, a určil stovky odlišne exprimovaných génov v karcinómu v porovnaní s kontrolnou tkanív
[17 ]. Potom sme vyškolení support Vector machines (SVM) na klasifikátor si predpovedať, ktoré z týchto odlišne exprimovaných génov môže mať ich bielkoviny vylučuje do moču. Medzi predpovedanej vylučovacia proteínu sme zistili, EL vykazuje vysokú diskriminačný výkon z hľadiska jeho vyjadrenia vo vzorkách moču pacientov s karcinómom žalúdka oproti
zdravých ľudí [18].
Tu sme rozšírili náš predchádzajúcej štúdii, ktorej cieľom je (a) ďalej potvrdzujú, že EL má vysokú diskriminačnú sily medzi vzorkami moču pacientov s rakovinou žalúdka a zdravých ľudí nad väčšieho súboru vzoriek, a (b) ukazujú, že EL je vysoko špecifický pre rakovinu žalúdka na základe porovnania jeho abundances vo vzorkách moču rakoviny žalúdka s inými rakovinou typov a benígnych lézií.
metódy
Odber
Všetky vzorky boli odobraté v troch nemocniciach Jilin University Norman Bethune Medical College, Changchun, Čína a v nemocnici rakoviny spojený s Sin-ťiangu Medical University, Urumqi, Čína. Žalúdočné rakovinové tkanivá a zodpovedajúce non-rakovinové tkanivá boli chirurgicky resekováno od pacientov s rakovinou žalúdka. Vzorky moču random-úlovok v sére a ráno bola pred chirurgickým zákrokom získané od pacientov s rakovinou. Tieto vzorky boli odobraté vzorky, v období od marca 2011 do septembra 2012. Celkom 90 prípadov karcinómu žalúdka (67males a 23 žien, vekové rozmedzie: 31-85 rokov) a 57 zdravých dobrovoľníkov (30 mužov a 27 žien; veková skupina : 29-76 rokov) boli študované. Prípady karcinómu žalúdka bola diagnostikovaná pomocou histologické analýzy je napríklad črevné a difúzneho typu podľa klasifikácie Laurena. Okrem toho, vzorky moču boli získané z 9 pacientov s rakovinou pľúc, 10 od pacientov s nádorovým ochorením hrubého čreva, konečníka pacientov s nádorovým ochorením 10, u 2 pacientov s gastritídou, a u 2 pacientov žalúdka leiomyóm, ktoré sa používajú na kontrolu, či EL je špecifický pre rakovinu žalúdka. Nasledujúce kritériá boli použité pri odbere vzorky: pacientov (i) s rakovinou by nebol spustený žiadnu liečbu na ich rakoviny; a (ii) dobrovoľníci zdravé kontrolnej skupiny by nemala mať žiadne závažné systémové ochorenie v minulosti. Písomný informovaný súhlas forma bola podpísaná každého účastníka po tom, čo boli informovaní o účele štúdia, ktorá bola schválená výskumných etických komisií v Ťi-lin University College of Medicine a Xinjiang lekárskej fakulty, resp. Tabuľka 1 zhŕňa informácie o zdravých dobrovoľníkov a pacientov zapojené do tohto study.Table 1 Informácie o zdravých dobrovoľníkov a pacientov zapojených do tejto štúdie
Charakteristika
Tissue
Serum

Moč
rakovinou žalúdka
12
12
90
Priemerný vek (rozsah)
60 (42 - 76)
63 (84-39)
60 (31 až 85)
Pohlavie
Muž
6
7
67
Žena
polohe 6
5
23
nádoru
Cardia
3
2
39
Body
5
6
26
Antrum
3
4
16
Diffuse
1
0
9
Operation
Celková gastrektómia
4
5
29
Medzisúčet gastrektómia
8
7
61
klasifikácie Laurena
črevných
5
4
39
Difúzna
7
8
51
HISTOLÓGIA Type
vysokej alebo strednej
5
5
43
zlá alebo nediferencovaný
7
7
47
štádia nádoru
Ι a ΙΙ
2.
4.
31
ΙΙΙ a ΙV
10
8
59
hĺbkou invázie
T1 a T2
5
9
30
T3 a T4
7 Sims 3
60
Node stav
N0 Sims 3 Sims 3
29
N1 a N2
9
9
61
metastázy stav
M0
5
10
71
M1
7
2
19
rakovina pľúc - -
9
Priemerný vek (rozsah)
46 (42- 57)
rakovina hrubého čreva štáty - -
10
Mean rakovinu konečníka vek (rozsah)
53 (46-65) -
-
9
Priemerný vek (rozsah)
62 (47-78)
zdravých
12
12
57
Priemerný vek (rozsah)
60 (42 -76)
54 (41 až 72)
47 (29-76)
gastritídu /chronický zápal štáty - -
2
Priemerný vek (rozsah)
56 (43-69)
Gastritic myómu
2
Priemerný vek (rozsah) - -
56 (51 až 62)
Western blotting analýza
tkanivá boli rozdrví na prášok v tekutom dusíku a potom lyžovanie v extrakčnom proteín pufri [0,5 mol /l Tris-Cl (pH 7,4), 150 mmol /l NaCl, 0,1 mmol /l etyléndinitriltetraoctová aceticacid (EDTA) (pH 7,0) , 1 mmol /l fenylmetylsulfonyl fluorid (PMSF), 2,5 mg /ml aprotinínu, 1 mmol /l dithiothreitolu (DTT), 1% Triton X-100, 1% deoxycholát sodný (SDS)]. Všetky činidlá boli zakúpené od Beyotime (Beyotime, Shanghai, Čína). Séra a moču boli uložené v prítomnosti inhibítora proteázy (Roche, Bazilej, Švajčiarsko), sterilné nádoby a centrifugovány (1000 x g počas 10 minút pri 4 ° C) pre odstránenie bunkovej komponenty. Supernatanty boli spojené a skladované pri -80 ° C (najdlhšia skladovanie po dobu 6 mesiacov). 2 ml vzorky moču boli dialyzované proti destilovanej vode cez filtračnú membránu (Dinguo, Beijing, Čína) 8 kDa cut-off pri 4 ° C a potom sa vysuší zmrazením pri -20 ° C. Lyofilizovanej vzorky moču boli resuspendované v 10 mM fyziologickom roztoku pufrovanom fosfáty (PBS) (pH 7,5). Koncentrácie proteínov sa merali pomocou BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Shanghai, Čína). Močové hladiny kreatinínu boli kvantizovány alkalickou metódou pikrátom (Jaffe je reakcia) s kreatinínom rutinné testy semi-autoanalyser (Vital Micro 300, Holandsko).
Western blot bol použitý na meranie hladiny expresie EL. 20 ug celkových proteínov boli použité v experimente. Všetky vzorky boli oddelené za použitia 4-15% SDS-PAGE (Bio-Rad Laboratories Inc., USA) a prenesené na PVDF membránu (Bio-Rad Laboratories Inc., USA). Bola membrána inkubovaná v 5% blokovacím roztoku mlieko po dobu 2 hodín pri teplote miestnosti. Membrána bola inkubovaná s polyklonálne kozie anti-ľudský EL primárny protilátkou (1: 400, Santa Cruz Biotechnologies, USA) pri teplote miestnosti po dobu 1 hodiny, ktorý sa premyje trikrát po dobu 5 minút vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (PBS) a potom reagoval s králičie anti-kozie sekundárnej protilátky (1: 5000; Beyotime, Shanghai, Čína). Pre tkanív, beta-aktínu protilátky (1: 1000; Santa Cruz Biotechnologies, USA) bol recubated s cieľom zabezpečiť rovnaké zaobchádzanie. Na konci bola membrána úplne pokrytá rovnakým množstvom zosilňovače a roztoku peroxidu z ECL kladného pólu (Beyotime, Shanghai, Čína) po dobu 1 minúty, a potom všetky membrány boli vystavené filmu. Hustota kapely bola kvantifikovaná pomocou gélovej Image System (Tanon, Shanghai, Čína). Pevná množstvo 1 ng čistí EL štandard (R &D systems, Inc., USA) bol použitý ako pozitívna kontrola pre kalibráciu. S úvahy rozdiely v tvorbe moču a vylučovanie, denzitometria EL z moču boli vyjadrené relatívne vzhľadom ku moču koncentrácie kreatinínu.
Imunohistochémia
pre meranie úrovne expresie EL v rakoviny proti
susednými nenádorové tkaniva control, oba typy z tkaniva boli stanovené za 12-16 hodín v 4% para-formaldehydu (pH 7,0), vložené do parafínu a rez do 4 um silné oddiely. A sklíčka sa pečie pri teplote 60 ° C počas 30 minút. Parafín bol odstránený za použitia xylénu počas 30 minút a boli rezy rehydratovaný radom alkoholových roztokoch pred spracovaním s 1 mM kyseliny citrónovej, pH 6,0, pri teplote 100 ° C po dobu 5 minút a s 1%, H 2O 2 po dobu 30 minút. Potom, čo bol premytý destilovanou vodou, rezy boli inkubované pri teplote miestnosti s 5% prasačieho séra v PBS po dobu 30 minút a EL protilátkou (1: 400; Santa Cruz Biotechnologies, USA) zriedených v PBS cez noc pri 4 ° C, premyje sa trikrát 5 minút v PBS. Naviazané protilátky boli vizualizované pomocou farebného činidla Diaminobenzidine (Bios, Peking, Čína). Rezy boli kontrastne Mayerovým hematoxylínom. Dva patológovia bez znalosti klinického stavu pacienta vyhodnotené všetky farbených sekcií nezávisle na sebe. Bunky boli počítané pri vysokom zväčšení, v každom prípade (× 400), a percento pozitívne farbených buniek bolo vypočítané. Podiel buniek vystavujúcich EL expresia bola do nasledujúcich kategórií: 0 = menej ako 10%; 1 = 11% -50%; 2 = 51% -75%; 3 = viac ako 75%. Intenzita farbenia bolo do kategórií podľa relatívnej intenzita takto: 0 = negatívna; 1 = slabé; 2 = stredné; 3 = silné farbenie. Podiel a intenzity skóre sa potom násobí mať celkový index skóre. Per štatistické analýzy, skóre nižšie ako 2, boli považované za negatívne, a skóre 2 alebo vyššej boli považované za pozitívne.
Štatistická analýza
chi-kvadrát test a Wilcoxonův podpísanú rank teste boli použité na analýzu expresných hladín EL v spárovaného rakovina a vzorky nenádorové tkaniva. Analyzovať rozdiel EL hladín expresie vo vzorkách séra a moču medzi pacientmi s rakovinou žalúdka a zdravými kontrolami respektíve bol použitý Mann-Whitney test. Tento test chi-square sa na ohodnotenie vzťahu medzi moču EL expresných hladín a klinicko-premenných. Náročné sila expresných hladín EL v moči medzi vzorkami z rakoviny a kontrolnou skupinou bol skúmaný pomocou prijímač prevádzkové charakteristiky (ROC) krivky a plocha pod ROC krivkou (AUC). Všetky testy boli dva chvostom a P-hodnota
< 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú. Všetky štatistické analýzy boli vykonané za použitia GraphPad Prism 5 štatistického softvéru.
Výsledky
expresných hladín EL v moči Apartmán V semi-kvantitatívny rozbor moču proteínov sme použili relatívnej úrovne expresie EL keďže z močového kreatinínu v každej vzorke normalizovať EL expresie medzi rôznymi vzorkami moču. Pozorovali sme zreteľne oddeľuje expresných hladín EL vo vzorkách moču z 90 pacientov s rakovinou žalúdka (1,39 ± 0,68) a 57 zdravých dobrovoľníkov (0,14 ± 0,32). Pozorovali sme je približne 9,9 násobné priemerný pokles hladín EL proteínov vo vzorkách moču pacientov s karcinómom žalúdka v porovnaní so zdravými kontrolami (P Hotel &0,0001). Výsledky je možné vidieť na obrázku 1A a obrázku 2A. Máme vynesené krivky ROC za presnosť klasifikácie pomocou expresných hladín EL naprieč všetkými týmito vzorkami moču, poskytnúť celkový pohľad na náročné sile proteínu. Všimnite si, že AUC poskytuje široko prijímaný index pre meranie kvality podkladovej klasifikátora s AUC = 1,0 predstavuje dokonalé klasifikáciu a AUC = 0,5 predstavujúce žiadna separácia. EL dosiahla hodnoty AUC u 0,967 s 95% intervalu spoľahlivosti (CI) byť [0.942-0.993], čo znamená, že močový EL môže slúžiť ako veľmi sľubné karcinómu žalúdka biomarker na diagnostické účely (obrázok 2B). Obrázok 1 Reprezentatívne Western blot analýzu proteínov hojnosti EL. Pozitívne kontrolné pruh (+) obsahoval komerčné EL štandardný produkt, ktorý bol použitý pre normalizáciu odozvy signálu cez všetky gély. (A), Hojnosť EL proteínu na vzorkách moču; (B), EL množstvo vzoriek rakoviny tkanív a zodpovedajúce noncancerous vzoriek od pacientov s karcinómom žalúdka bez liečby. Β-aktínu slúži ako interná kontrola nanášania pre odhad relatívnej úrovne proteín množstvo; (C), EL proteín množstvo vo vzorkách séra.
Obrázok 2 močového EL proteínové abundances u pacientov s karcinómom žalúdka v porovnaní so zdravými kontrolami. Každý bod je jeden jedinec. (A), EL množstvo vo vzorkách pacientov s rakovinou žalúdka podstatne nižšie, než vo vzorkách od zdravých kontrol; (B), ROC krivky moču EL proteínu. Hodnota AUC bola 0,967.
Berieme na vedomie, že EL kapela Western Blot bol neprítomný vo vzorkách moču 71 pacientov s rakovinou žalúdka 90. a všetkých 57 zdravých dobrovoľníkov mať EL kapelu vo svojich vzorkách moču. Použitie neprítomnosť /prítomnosť EL pásme ako cutoff v povolaní osoba, ktorá má rakovinu žalúdka, alebo nie, vyššie uvedené údaje dáva vzniknúť volajúci citlivosť, ktorá činí 79% [95% CI 0,690 do 0,867] a špecifickosť 100% [95% CI, 0,937-1,000].
potom sme skúmali úrovne expresie EL vo vzorkách moču pacientov s rakovinou žalúdka a jej vzťah k rôznym klinicko-faktory, konkrétne pohlavie, histológia diferenciácie, štádiom nádoru, invázia a metastáz stave. môžu byť detekované žiadne významné štatistické vzťahy medzi úrovňami expresie EL a niektoré z týchto faktorov. Korelácia medzi močových EL expresných hladín a klinicko-faktorov sú uvedené v tabuľke 2.Table 2 korelácia medzi močovou El prejavu a klinicko vlastnosti
klinicko (n)
EL prítomné (%)

EL prítomný (%)
P
n = 71
n = 19
Pohlavie
Muž (67)
51 (72)
16 (84)
0,27
Žena (23)
20 (28) Sims 3 (16)
histologický typ
vysokej alebo strednej (43),
31 (44)
12 (63)
0,13
zlá alebo nediferencovaný (47),
40 (56)
7 ( 37)
klasifikácie Laurena
Črevné (39),
29 (41)
10 (53)
0,36
difúzne (51)
42 (59)
9 (47)
fázach nádorových
Ι a ΙΙ (31)
22 (31)
9 (47)
0,18
ΙΙΙ a ΙV (59),
49 (69)
10 (53)
hĺbkou invázie
T1 a T2 (30),
21 (30)
9 (47)
0,14
T3 a T4 (60)
50 (70)
10 (53)
Node status
Absent (29),
23 (32)
6 (32)
0,95
Present (61),
48 (68)
13 (68)
stav metastázy
M0 (71)
55 (77)
16 (84)
0,52
M1 (19)
16 (23) Sims 3 (16)
tiež sme preverili, či EL je špecifický pre rakovinu žalúdka. Ako počiatočné úsilie, sme skúmali úrovne EL expresie vo vzorkách moču z ostatných troch typov rakoviny (pľúc, hrubého čreva a konečníka Rakoviny) a benígnych lézií (gastritídy a žalúdočné leiomyóm). Tento test bol vykonaný na vzorkách moču 9 rakoviny pľúc, rakoviny hrubého čreva 10, 10 rakovina konečníka, žalúdka, 2 a 2 pacientov s žalúdočnými leiomyóm. Jasne vidíme, že 9 z 9, 9 z 10, 10 z 10, 2 zo 2 a 2 zo 2 vzorky majú EL kapelu vo vzorkách moču rakoviny pľúc, rakoviny hrubého čreva, rakovina konečníka, žalúdka a pacienti žalúdočné leiomyóm, respektíve (obrázok 3). Aj keď tento výsledok nezaručuje, že nedostatok EL v moči je ukazovateľom iba rakoviny žalúdka, to silne naznačujú, že EL je vysoko špecifická. Väčšia testy budú prebiehať v našej follow-up štúdii, ktorá bude zahŕňať podstatne viac pacientov z iných chorôb, čo možno súvisí s rakovinou žalúdka ako je rakovina pankreasu a rakoviny pažeráka. Obrázok 3 EL abundances vo vzorkách moču z iných typov rakoviny a benígnych lézií. (A), deväť vzoriek rakovinu pľúc; (B), Desať vzoriek s rakovinou hrubého čreva; (C), Desať rektálna rakoviny vzorky; (D), dva zápal žalúdka a dve gastritic vzorky myómu. (+) Pozitívne kontrolné pruh.
EL hladiny expresie v tkanivách a sére
Štúdia ukazuje, že EL proteín je prítomný vo vzorkách žalúdočné rakovina moču. Vzhľadom k tomu, že moč obsahuje tak bielkovinu vylučovaný z urotelu, rovnako ako proteínov z plazmy alebo rozkladu buniek, sme tiež skúmali úrovne EL expresie v tkanivách alebo sére pacientov s karcinómom žalúdka, s cieľom odvodiť dôvody tohto pozorovanej neprítomnosti. Western blot bol vykonaný pre meranie úrovne EL expresie vo vzorkách karcinómu tkanív a zodpovedajúce nenádorové vzoriek od 12 neliečených pacientov s rakovinou žalúdka (obrázok 1B). Žiadny významný rozdiel v expresných hladín EL sa pozorovala medzi vzorkami žalúdočné rakovina tkaniva a zodpovedajúce noncancerous vzoriek (Wilcoxonův podpísal rank test, P
= 0,90).
V imunohistochemické farbenie pokusoch sme zistili, že hnedé granule prevažne objavilo v cytoplazme (obrázok 4). Pozitívne expresia proteínu EL bola nájdená u 58% (7/12), karcinómu žalúdka a 67% (8/12) žalúdočných susedných nenádorové vzoriek (tabuľka 3). Nebol zistený žiadny rozdiel v hladinách expresie tohto proteínu medzi rakovinou žalúdka a zodpovedajúce nenádorové tkanív (chi-kvadrát test, p
= 0,67). Tiež sme skúmal akýkoľvek možný vzťah medzi úrovňou EL prejavu a potenciálne súvisiace faktory klinicko uvedených vyššie. bol zistený žiadny vzťah. Výsledky sú uvedené v tabuľke 4. Obrázok 4 Imunohistochemické analýza EL v tkanivách karcinómu žalúdka a zodpovedajúce nenádorové vzoriek. Hnedé granule EL prevažne objavili v cytoplazme. Priľahlé nenádorové tkaniva zafarbené (A) (× 400). Rakovinové tkanivá farbená (B) (× 400).
Tabuľka 3 EL prejavu vo rakovinou žalúdka a priľahlých noncance Rous vzoriek
n
Expresia proteínu EL

P
Negatívne
pozitívnu
priľahlých kontrolu
12
4 (33%)
8 (67%)
0,67
rakovinou žalúdka
12
5 (42%)
7 (58%)
Tabuľka 4 EL expresných a klinicko-patologické faktory žalúdočné rakovinové tkanive
klinicko

n
EL
P
Negatívny
Pozitívna
rodovej rovnosti
Muž
6
2
4
0,56
Žena
6 Sims 3 Sims 3
Vek (rok)
≤50 Sims 3
1
2
0,74 Hotel > 50
9
4
5
Lauren klasifikácie
črevných
5 Sims 3
2
0,28
Difúzna
7
2
5
histologický typ
veľmi rozdielna
1
1
0
0,36
Stredne diferencovaný
4
2
2
zle diferencované
7
2
5
štádia nádoru
aj a II
2
1
1
0,79
III a IV
10
4
6
hĺbkou invázie
T1 a T2
5
2 Sims 3
0,92
T3 a T4
7 Sims 3
4
lymfatických uzlín
Pozitívne Sims 3 foto 1
2
0,74
Negatívne
9
4
5
potom sme merali hladiny expresie EL v sére 12 pacientov s rakovinou žalúdka v porovnaní
tých 12 zdravých osôb (Obrázok 1C). Je vidieť, že neexistuje žiadny jasný rozdiel medzi vzorkami s rakovinou a zdravé kontrolné (Mann-Whitney test, p = 0,79)
. Berieme na vedomie, že hladiny expresie EL majú širokú distribúciu rozsah v oboch sadách vzoriek.
Diskusia
V našej predchádzajúcej štúdii sme vyvinuli novú výpočtovú metódy a aplikovať ju predpovedajú, že EL by mohli slúžiť ako veľmi sľubný diagnostický močového markeru pre rakovinu žalúdka. Tu sme ďalej potvrdená túto predpoveď na celej sady vzoriek, a okrem toho sme zistili, že EL proteín je vysoko špecifický pre rakovinu žalúdka.
EL je novým členom génovej rodiny triglyceridu lipázy, a má vysokú sekvenčné homológie s lipoprotein lipázy (LPL) (45%), pečeňové lipas (HL) (41%) a pankreatické lipázy (PL) (21%) [19, 20]. EL má primárne fosfolipázu a má určitú triglyceridov lipázy, ktorý má dôležitú úlohu v plazmatické lipoproteíny s vysokou hustotou metabolizmu a vývoj aterosklerózy [21-25]. Niekoľko štúdií ukázalo, že LPL hrá dôležitú úlohu v karcinogenéze, vrátane rakoviny hrubého čreva a pankreasu a rakoviny pľúc [26, 27]. Avšak, EL nebola hlásená byť spojené s akýmkoľvek rakovinou okrem testikulárnych zárodočných buniek tumorov, pričom mechanizmus je nejasný [28].
Objav, že hladiny expresie EL je výrazne znížená v moči pacientov s rakovinou žalúdka a zároveň vykazuje žiadny rozdiel medzi zodpovedajúcimi vzorkami séra, rovnako ako vzorky tkanív, je veľmi zaujímavé. Jedným z možných dôvodov môže byť vzhľadom k vlastnostiam glomerulárnej filtrácie. Je známe, že plazmatické proteíny boli prefiltrovaná cez glomerulov na základe ich veľkosti, poplatkov a tvaru konštrukcie [29]. Malé a kladne nabité molekuly boli ľahšie filtrované do moču než veľké a záporne nabitých proteínov. Sekvencia EL má rad kladne nabitých klastrov [30], ktoré môžu byť dôvodom, že môže byť filtrovaný v moči zdravých ľudí. Avšak, mikroprostredie z nádorových buniek majú tendenciu byť kyslé [31], ktorá sa môže zmeniť kladne nabité zhluky Els k zápornej, teda bráni molekuly z filtrovaný do moču. Iste, presný dôvod je ešte potrebné chápať, a zaručuje ďalšie štúdium.
Moč je ideálny neinvazívna zdroj pre detekciu rakoviny. Malo by však byť poznamenané, že moč má vysoký stupeň variability v proteínových koncentráciách po celý deň, ktorá môže byť ovplyvnená rôznymi faktormi (vek, diéta, čas a zber). Z tohto dôvodu je kľúčom k normalizácii koncentrácie bielkovín v moči pri meraní úrovne expresie proteínu. Z tohto dôvodu sme použili relatívnej úrovne expresie EL keďže močového kreatinínu v každej vzorke normalizovať EL úrovne expresie v rôznych vzorkách moču. Výsledky tejto štúdie ukazujú, že strata močového EL expresie môže poskytnúť predbežnú indikácii rakoviny žalúdka počas vo veľkom meradle skríningu a viac priamych skúšok, ako je gastroskopia a patológie testu na vzorke biopsia bude potrebné pre konečnú diagnózu. Mnohé štúdie uvádzajú, že diagnostický biomarkerov môžu byť užitočným prognostickým a prežitie ukazovateľom pre karcinómov žalúdka [32-34]. Bolo to nielen predvídať informácie prognózu pacientov s rakovinou, ale tiež poskytuje liečebné stratégie pre lekára. Tak sme skúmali vzťah medzi El expresných hladín a klinicko-charakteristík karcinómu žalúdka. Hoci EL činí sľubný diagnostický marker rakoviny žalúdka, sme nenašli žiadne silné väzby medzi úrovňou EL prejavu a prognostické klinicko-charakteristiky nádoru má ako je typ nádoru, invázia a TNM staging. Navyše, vzhľadom ku krátkej dobe trvania štúdia a nedostatku pravidelného sledovania pacientov, nemôžeme posúdiť mieru prežitia v tejto štúdii. Obmedzené existujúce dáta ukázali, že EL výraz nemôže byť použitá ako užitočný prognostických a prežitie ukazovateľov pre rakovinu žalúdka. V ďalšej štúdii sme sa zamerali na preskúmanie expresie EL proteínu vo väčšom počte pacientov s rôznymi nádormi a jeho následných štúdií a preskúmať presne mechanizmus role EL v karcinogenéze rakoviny žalúdka.
Záver
záver, aj keď to nie je spojené s štádiu nádoru alebo triede, močová EL môže byť veľmi sľubný rakovina žalúdka biomarkerov, ktoré môžu byť použiteľné pre rozsiahle projekcie s vysokou diagnostickou presnosťou.
Poznámky
Xueyan Dong, Guoqing Wang prispel rovnako k tejto práci
Skratky
EL :.
endoteliárny lipáza
ROC:
prijímač pracujúci charakteristiku

AUC:
plocha pod ROC krivkou
deklarácia
Poďakovanie
Ďakujeme Xiaoming Xu pre jeho príspevky, Katedra patobiologie laboratória, Norman Bethune Medical College Jilin univerzity. Táto práca bola podporená zo strany National Institutes of Health (1R01GM075331), "Distinguished Scholar" grant od Georgia koalície proti rakovine, a financovanie semeno z University of Georgia. To bolo tiež čiastočne podporovaná Národná Basic programu výskumu Číny (973 programov, 2011CB512003), Národná prírodná Science Foundation Číny (81271897 a 81071424), špecializovaným Výskumného fondu doktorandské štúdium vysokého školstva Číny (20110061120093), Čína postdoktorandských vedecká nadácia (20110491311 a 2012T50304), nadácia Jilin zemskej zdravotníckeho oddelenia (2011Z049) a Bethune špeciálne zakladanie Jilin univerzity
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodných predložených súbory pre obrazy , Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Klinicko-patologické charakteristiky a prognostická analýza Lauren zaradenie do adenokarcinómom žalúdka v Číne
• MicroRNA-206 potláča žalúdočnú rast rakovinových buniek a metastáz