La protéine endothéliale de lipase est biomarqueur urinaire prometteuse pour le diagnostic de cancer

gastrique La protéine endothéliale de lipase est biomarqueur urinaire prometteuse pour le diagnostic du cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
Le cancer gastrique est l'une des tumeurs malignes les plus courantes dans le monde . Trouver des biomarqueurs de diagnostic efficaces dans l'urine ou le sérum représenterait la solution la plus idéale pour la détection du cancer gastrique lors de l'examen physique annuel. Cette étude a été d'évaluer le potentiel de la lipase endothéliale (EL) en tant que biomarqueur urinaire pour le diagnostic du cancer gastrique.
Méthodes
Les niveaux d'EL d'expression a été mesurée en utilisant Western Blot et des expériences de coloration immunohistochimique sur (tissu, du sérum, et urine) échantillons de patients atteints de cancer gastrique par rapport à
personnes en bonne santé. Nous avons également vérifié les niveaux EL dans les échantillons d'urine d'autres types de cancer (cancers du poumon, du côlon et du rectum) et des lésions bénignes (gastrite et léiomyome gastrique) pour vérifier si EL était spécifique au cancer de l'estomac.
Résultat
Nous avons observé une séparation claire entre les niveaux d'expression EL dans les échantillons d'urine de 90 patients atteints de cancer gastrique et de 57 volontaires en bonne santé. Il était d'environ 9,9 diminution moyenne pli des niveaux d'expression EL dans les échantillons d'urine de cancer gastrique par rapport aux témoins sains (P
< 0,0001), la réalisation d'une valeur AUC 0,967 pour le ROC (receiver operating caractéristique) courbe, démontrant il est très précis en tant que marqueur diagnostique du cancer gastrique. Fait intéressant, les niveaux d'expression de EL dans des échantillons de tissus et de sérum ne sont pas presque aussi discriminante que dans des échantillons d'urine (P
= 0,90 et P
= 0,79). Dans les expériences d'immunohistochimie, expression positive de la protéine EL a été trouvé dans 67% (8/12) de l'estomac adjacent noncancerous et 58% (7/12) des échantillons de cancer gastrique. Il n'y avait pas statistiquement significative dans les niveaux d'expression de cette protéine entre le cancer de l'estomac et les tissus non cancéreux correspondant (P = 0,67)
. Conclusions de
Le urinaire EL comme un biomarqueur du cancer gastrique très précis qui est potentiellement . applicables au dépistage général avec une grande sensibilité et une spécificité
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Endothelial lipase gastrique Biomarker Diagnostic du cancer Contexte Mots-clé
cancer gastrique est l'une des tumeurs malignes les plus courantes dans le monde, ce qui représente la troisième principale cause de décès lié au cancer chez les hommes et la cinquième cause chez les femmes [1]. Environ les deux tiers des cas de cancer de l'estomac se produisent dans les pays moins développés, qui sont presque trois fois plus élevé par habitant que dans les pays développés, comme les pays européens et d'Amérique du Nord [2]. Le cancer gastrique a des taux de mortalité élevés, car il n'a pas de symptômes cliniques évidents dans le stade précoce. Des études suggèrent que si la tumeur a été détectée et réséqué au stade précoce, le taux moyen de survie à 5 ans est relativement élevée [3, 4]. Par conséquent, le diagnostic précoce et le traitement représentent une clé pour améliorer le pronostic des patients atteints de cancer gastrique.
Bien que beaucoup d'efforts ont été mis dans le développement de la technologie pour faciliter le diagnostic en utilisant gastroscopie et l'analyse immunohistochimique, la nature invasive de ces procédures, il est pratique pour le dépistage à grande échelle pour le cancer gastrique. biomarqueurs diagnostiques efficaces dans l'urine ou le sérum représenterait la solution la plus idéale au problème, ce qui permet de tester pour le cancer gastrique par des tests sanguins ou d'urine au cours des examens physiques annuels. Plusieurs marqueurs sériques de diagnostic ont été proposées pour le cancer gastrique, tel que MG7-Ag [5], l'antigène carcinoembryonnaire (CEA), MUC1 et MUC5AC [6]. L'état de la technique est que la quasi-totalité d'entre eux souffrent d'assez faibles sensibilités et spécificités dans le diagnostic du cancer, et donc n'a pas été largement utilisé en clinique [7]. Par rapport aux tissus et le sérum, le collecteur d'urine est relativement plus facile et moins invasives. Il peut être plus approprié pour le criblage à grande échelle pour la détection du cancer [8]. En utilisant des analyses comparatives protéomiques, un certain nombre de biomarqueurs urinaires potentiels ont été proposés et bien testé pour d'autres types de cancers, tels que la cystatine B et clustérine pour le cancer de la vessie [9, 10], l'anhydrase carbonique IX et de la cathepsine D pour le cancer du rein [11, 12] et ADAM12 pour le cancer du sein [13]. Pour le cancer gastrique, plusieurs marqueurs biologiques ont été rapportés, tels que pepsinogène I, la prostaglandine E2 et soluble c-erbB-2 [14-16]. La capacité de diagnostic réel pour le cancer gastrique doit encore être soigneusement évaluée, comme ils l'ont pas été largement utilisés dans de diagnostic clinique. Par conséquent, il est clairement un besoin urgent pour l'identification et la validation de nouveaux marqueurs de diagnostic et fiables pour le dépistage du cancer gastrique.
Nous avons déjà réalisé une étude de la biologie des systèmes pour identifier des biomarqueurs candidats potentiels pour le diagnostic du cancer gastrique. Dans cette étude, nous avons analysé les données d'expression génique des 80 paires de tissus de cancer de l'estomac et des tissus non cancéreux adjacents prélevés sur des patients atteints de cancer gastrique en utilisant des puces de puces à ADN, et identifié des centaines de gènes exprimés de manière différentielle dans le cancer par rapport à
tissus témoins [17 ]. Nous avons ensuite formé une machine à vecteurs de support (SVM) classificateur de prédire lequel de ces gènes exprimés de manière différentielle peuvent avoir leurs protéines excrétées dans l'urine. Parmi la protéine excréteur prédit, nous avons trouvé EL montre haute pouvoir discriminant en termes de son expression dans des échantillons d'urine de patients atteints de cancer gastrique par rapport à
personnes en bonne santé [18].
Ici, nous étendons notre précédente étude visant à (a) plus confirmer que EL a haute puissance discriminative entre les échantillons d'urine de patients atteints de cancer de l'estomac et des personnes en bonne santé sur un plus grand ensemble d'échantillons, et (b) montrent que EL est hautement spécifique au cancer gastrique en comparant ses abondances dans des échantillons d'urine de cancer gastrique avec d'autres cancers le prélèvement d'échantillons de méthodes de types et lésions bénignes.
Tous les échantillons ont été prélevés dans trois hôpitaux de l'Université de Jilin Norman Bethune Medical College, Changchun, en Chine et à l'Hôpital du cancer affilié à l'Université médicale du Xinjiang, Urumqi, Chine. Les tissus du cancer gastrique et les tissus non cancéreux correspondant n'a été réséquées chirurgicalement chez des patients atteints de cancer gastrique. Les échantillons d'urine aléatoire capture sérum et le matin ont été obtenues à partir des patients atteints de cancer avant l'intervention chirurgicale. Ces échantillons de spécimens ont été collectés, au cours de la période allant de Mars 2011 Septembre 2012. Un total de 90 cas de cancer gastrique (67males et 23 femmes; tranche d'âge: 31-85 ans) et 57 volontaires sains (30 hommes et 27 femmes; tranche d'âge : 29-76 ans) ont été étudiés. Les cas de cancer gastrique ont été diagnostiqués par des analyses histologiques comme type intestinal et diffus selon la classification de Lauren. En outre, des échantillons d'urine ont été obtenus à partir de 9 patients au cancer du poumon 10 chez des patients atteints de cancer du colon, les patients atteints de cancer 10 du rectum, 2 patients souffrant de gastrite, et 2 patients atteints d'un léiomyome gastrique, qui sont utilisées pour vérifier si EL est spécifique au cancer de l'estomac. Les critères suivants ont été utilisés dans la collecte de l'échantillon: patients (i) du cancer ne devraient pas avoir commencé un traitement sur leur cancer; et (ii) des bénévoles dans le groupe témoin sain ne devrait pas avoir une maladie systémique grave dans le passé. Un formulaire de consentement éclairé écrit a été signé par chaque participant après avoir été informés de l'objet de l'étude, qui a été approuvé par les comités d'éthique de la recherche à Jilin University College of Medicine et de l'Université médicale du Xinjiang, respectivement. Le tableau 1 résume les informations des volontaires sains et des patients impliqués dans cette study.Table 1 L'information des volontaires sains et des patients impliqués dans les caractéristiques de cette étude

Tissue
Sérum

urine
12 ans
12
90
moyenne (gamme) de cancer gastrique
60 (42-76)
63 (84-39)
60 (31-85)
Sexe
l'emplacement 6
5
23
Tumor de 6
7
67
Femme Homme
Cardia
3
2
39
Body
5
6
26
Antrum
3
4
16
Diffuse
1
0
9
Operation
Gastrectomie totale 4
5
29
Total gastrectomie
Intestinal de 8
7
61
Lauren classement
5
4
39
diffuse
7 8
51
haute ou modérée de
histologie type 5
5
43
pauvres ou indifférenciée
7
7
47
étapes tumorales
Ι et ΙΙ
2 4
31
10 8
59 de ΙΙΙ et ΙV
Profondeur de l'invasion de la T1 et 5
9
30
T3 T2 et T4
7 3
60
Node état
N0 3
3
29
N1 et N2 état
9
9
61
Métastase
M0
5
10
71
M1
7 2
19
cancer du poumon
-
- 9
âge moyen (plage)
46 (42- 57)
cancer du côlon
-
- 10
âge moyen (plage)
53 (46-65)
cancer Rectum
- -
9
âge moyen (plage)
62 (47-78)
12 ans
12
57
moyenne (gamme) de santé
60 (42 -76)
54 (41-72)
47 (29-76)
Gastrite /inflammation chronique
- - 2
âge moyen (plage)
56 (43-69)
gastritique fibrome 2
âge moyen (plage)
-
- 56 (51-62)
Western blot analyse
les tissus ont été broyés en poudre dans de l'azote liquide, puis lysées dans l'extraction des protéines tampon [0,5 mol /L de Tris-Cl (pH 7,4), 150 mmol /L de NaCl, 0,1 mmol /L éthylènediaminetétra acide acétique (EDTA) (pH 7,0) , 1 mmol /L de fluorure de phénylméthylsulfonyle (PMSF), 2,5 mg /ml d'aprotinine, 1 mmol /l dithiothréitol (DTT), 1% de Triton X-100, le désoxycholate de sodium à 1% (SDS)]. Tous les réactifs ont été achetés à Beyotime (Beyotime, Shanghai, Chine). Des échantillons de sérum et d'urine ont été conservés en présence d'inhibiteur de protéase (Roche, Bâle, Suisse) des récipients stériles et centrifugée (1000 x g pendant 10 minutes à 4 ° C) pour éliminer les composants cellulaires. Les surnageants ont été recueillis et stockés à -80 ° C (la plus longue de stockage pendant 6 mois). 2 ml d'échantillons d'urine ont été dialysées contre de l'eau distillée à travers une membrane de filtration (Dinguo, Beijing, Chine) de 8 kDa coupure à 4 ° C, puis lyophilisées à -20 ° C. des échantillons d'urine lyophilisés ont été remis en suspension dans 10 mM de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) (pH 7,5). Les concentrations de protéines ont été mesurées en utilisant le BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Shanghai, Chine). taux de créatinine urinaire ont été quantifiées par la méthode de picrate alcalin (la réaction de Jaffe) avec la créatinine un test de routine semi-autoanalyseur (Vital Micro 300, Pays-Bas).
Western blot a été utilisé pour mesurer les niveaux d'EL d'expression. 20 pg de protéines totales ont été utilisés dans l'expérience. Tous les échantillons ont été séparés en utilisant 4-15% de SDS-PAGE (Bio-Rad Laboratories Inc., USA) et transférés sur une membrane PVDF (Bio-Rad Laboratories Inc., USA). La membrane a été incubée dans une solution de blocage du lait 5% pendant 2 heures à la température ambiante. La membrane a été incubée avec un anticorps primaire EL polyclonale de chèvre anti-humain (1: 400; Santa Cruz Biotechnologies, États-Unis) à la température ambiante pendant 1 heure, puis on lave trois fois pendant 5 minutes dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et ensuite réagir avec un anti-anticorps de chèvre de lapin secondaire (1: 5000; Beyotime, Shanghai, Chine). Pour les tissus, anticorps β-actine (1: 1000; Santa Cruz Biotechnologies, États-Unis) a été recubated pour assurer l'égalité de chargement. A la fin, la membrane a été entièrement recouverte d'une quantité égale d'activateur et de solution de peroxyde d'une ECL, plus Kit (Beyotime, Shanghai, Chine) pendant 1 minute, puis toutes les membranes ont été exposées au film. La densité de la bande a été quantifiée à l'aide d'images de système Gel (Tanon, Shanghai, Chine). Le montant fixe de 1 ng purifié EL standard (R & D Systems, Inc., USA) a été utilisé comme témoin positif pour l'étalonnage. En tenant compte des variations dans la formation de l'urine et l'excrétion, la densitométrie de EL de l'urine a été exprimée par rapport aux concentrations de créatinine urinaire.
Immunohistochimie
Pour mesurer les niveaux de EL d'expression dans le cancer par rapport
tissus témoins non cancéreuses adjacentes, les deux types des tissus ont été fixés pendant 12-16 heures à 4% de para-formaldéhyde (pH 7,0), noyées dans de la paraffine et découpés en coupes de 4 um d'épaisseur. De plus les lames ont été cuites à 60 ° C pendant 30 minutes. Paraffinique a été éliminé en utilisant le xylène pendant 30 minutes, et les sections ont été réhydratées dans une série de solutions d'alcool avant le traitement avec 1 mM d'acide citrique, pH 6,0, à 100 ° C pendant 5 minutes avec 1% de H 2 O 2 pendant 30 minutes. Après avoir été lavé avec de l'eau distillée, les coupes ont été mises en incubation à température ambiante avec 5% de sérum de porcin dans du PBS pendant 30 minutes et EL anticorps (1: 400; Santa Cruz Biotechnologies, USA) dilués dans du PBS pendant une nuit à 4 ° C, lavées trois fois pour 5 minutes dans du PBS. Les anticorps liés ont été visualisés avec le réactif de couleur Diaminobenzidine (Bios, Beijing, Chine). Les sections ont été colorées avec de l'hématoxyline de Mayer. Deux pathologistes sans connaissance de l'état clinique des patients évalués toutes les sections colorées indépendamment. Les cellules ont été comptées à un grossissement élevé dans chaque cas (x 400), et le pourcentage de cellules présentant une coloration positive a été calculée. La proportion de cellules présentant EL expression a été classé comme suit: 0 = moins de 10%; 1 = 11% -50%; 2 = 51% -75%; 3 = plus de 75%. L'intensité de coloration a été classée par l'intensité relative comme suit: 0 = négatif; 1 = faible; 2 = intermédiaire; 3 = forte coloration. Les scores de proportion et d'intensité ont ensuite été multipliée pour avoir un indice de score total. Par l'analyse statistique, des scores inférieurs à 2 ont été considérés comme négatifs, et les scores de 2 ou plus ont été considérés comme positifs.
Analyse statistique
Le test du chi-carré et le test de rang signé de Wilcoxon ont été utilisés pour analyser les niveaux d'EL d'expression dans le cancer est associé et des échantillons de tissus non cancéreux. Afin d'analyser la différence entre les niveaux d'expression EL dans les échantillons de sérum et d'urine entre les patients atteints d'un cancer de l'estomac et des témoins sains, respectivement, test de Mann-Whitney a été utilisé. Le test du chi carré a été utilisé pour évaluer la relation entre les taux urinaires d'expression EL et les variables clinicopathologiques. Le pouvoir discerner des niveaux d'expression de EL dans l'urine entre les échantillons du groupe de cancer et de contrôle a été examinée à l'aide du récepteur caractéristique de fonctionnement (ROC) courbe et l'aire sous la courbe ROC (AUC). Tous les tests étaient à queue et un P
-value < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Toutes les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant le logiciel GraphPad Prism 5
statistique. Les résultats
niveaux d'expression dans les urines EL
Pour l'analyse semi-quantitative des protéines urinaires, nous avons utilisé les niveaux relatifs d'expression EL par rapport à celle de la créatinine urinaire dans chaque échantillon pour normaliser EL expression dans différents échantillons d'urine. Nous avons observé une nette séparation entre les niveaux d'expression EL dans les échantillons d'urine de 90 patients gastriques de cancer (1,39 ± 0,68) et de 57 volontaires sains (0,14 ± 0,32). Nous avons observé une diminution moyenne environ 9,9 fois des niveaux de protéine EL dans les échantillons d'urine de patients atteints de cancer gastrique par rapport à des témoins sains (P
< 0,0001). Les résultats sont visibles sur la figure 1A et la figure 2A. Nous avons tracé la courbe ROC pour la précision de la classification en utilisant les niveaux d'expression EL à travers tous ces échantillons d'urine, afin de fournir une vue d'ensemble de la puissance de discernement de la protéine. Notez que l'ASC fournit un indice largement acceptée pour mesurer la qualité du classificateur sous-jacente avec AUC = 1.0 représente la classification parfaite et AUC = 0,5 représentant pas de séparation. EL a atteint une valeur AUC à 0,967 avec l'intervalle de 95% de confiance (IC) étant [de 0,942 à 0,993], indiquant que EL urinaire peut servir de biomarqueur du cancer gastrique très prometteur dans le but de diagnostic (figure 2B). Figure 1 Une analyse Western blot représentatif de EL abondance des protéines. voie de contrôle positif (+) contient le produit commercial EL standard, qui a été utilisée pour normaliser la réponse du signal dans tous les gels. (A) L'abondance de la protéine EL sur des échantillons d'urine; (B), EL abondance sur des échantillons de tissus cancéreux et non cancéreux correspondant à des échantillons provenant de patients atteints de cancer gastrique sans traitement. La β-actine sert de témoin de charge interne pour estimer les niveaux de protéines d'abondance relative; (C), EL abondance des protéines dans des échantillons de sérum.
Figure 2 urinaire EL abondances de protéines chez les patients atteints de cancer gastrique par rapport aux témoins sains. Chaque point de données est un individu. (A), EL abondance dans des échantillons de patients atteints de cancer gastrique significativement inférieure à celle dans les échantillons provenant des témoins sains; (B), les courbes ROC de protéines urinaires EL. La valeur AUC était 0,967.
Nous notons que le groupe EL en Western blot était absent dans les échantillons d'urine de 71 des 90 patients atteints de cancer gastrique et tous les 57 volontaires en bonne santé ont la bande EL dans leurs échantillons d'urine. Utilisation de l'absence /présence de la bande EL comme seuil pour appeler une personne ayant un cancer de l'estomac ou non, les données ci-dessus donne lieu à une sensibilité appelant à 79% [IC 95%, de 0,690 à 0,867] et une spécificité de 100% [95% CI, 0,937 à 1,000].
Nous avons ensuite examiné les niveaux d'expression EL dans des échantillons d'urine des patients atteints de cancer gastrique et sa relation avec les divers facteurs clinicopathologiques, à savoir le sexe, la différenciation de l'histologie, le stade de la tumeur, l'invasion et l'état de métastases. Aucune relation statistique significative entre les niveaux d'expression EL et aucun de ces facteurs peuvent être détectés. La corrélation entre les taux urinaires d'expression EL et les facteurs clinicopathologiques sont présentés dans le tableau 2.Table 2 Corrélation entre clinicopathologique (n) de l'expression et clinico caractéristiques EL urinaires
EL absent (%)

EL présente (%)
P
n = 71
n = 19
Sexe
Homme, (67)
51 (72)
16 (84)
0,27
Femme, (23)
20 (28)
3 (16)
Le type histologique
élevé ou modéré, (43)
31 (44)
12 (63)
0,13
médiocre ou indifférenciée, (47)
40 (56)
7 ( 37)
Intestinal classement Lauren (39)
29 (41)
10 (53)
0,36
diffuse, (51)
42 (59)
9 (47)
étapes tumorales
Ι et ΙΙ, (31)
22 (31)
9 (47)
0,18
ΙΙΙ et ΙV, (59)
49 (69)
10 (53)
Profondeur de T1 et T2 de l'invasion, (30)
21 (30)
9 (47)
0,14
T3 et T4, (60)
50 (70)
10 (53)
Node statut
Absent, (29)
23 (32)
6 (32)
0,95
Présent, (61)
48 (68)
13 (68)
état Métastase
M0 (71)
55 (77)
16 (84)
0,52
M1 (19)
16 (23)
3 (16)
Nous avons également vérifié si EL est spécifique au cancer de l'estomac. Comme un premier effort, nous avons examiné les niveaux d'expression EL dans des échantillons d'urine de trois autres types de cancer (cancers du poumon, du côlon et du rectum) et des lésions bénignes (gastrite et léiomyome gastrique). Le test a été effectué sur des échantillons d'urine de 9 cancer du poumon, 10 le cancer du côlon, du rectum 10 cancer, 2 gastrite, et 2 patients atteints d'un léiomyome gastrique. Il est clair que nous pouvons voir que 9 sur 9, 9 sur 10, 10 sur 10, 2 sur 2 et 2 sur 2 échantillons ont la bande EL dans les échantillons d'urine de cancers du poumon, les cancers du côlon, du rectum, la gastrite et les patients atteints de léiomyome gastrique, respectivement (figure 3). Bien que ce résultat ne garantit pas que le manque d'EL dans l'urine est un indicateur de cancer gastrique seulement, il ne suggère fortement que EL est très spécifique. Grandes tests seront effectués dans notre étude de suivi, ce qui impliquera beaucoup plus de patients d'autres maladies pouvant être liés au cancer de l'estomac, comme le cancer du pancréas et de cancer de l'oesophage. Figure 3 EL abondances dans des échantillons d'urine d'autres types de cancer et de lésions bénignes. (A), neuf échantillons de cancer du poumon; (B) Dix échantillons de cancer du côlon; (C) Dix échantillons de cancers du rectum; (D), deux gastrites et les deux échantillons de léiomyome gastritique. (+) La voie de contrôle positif.
Niveaux d'expression EL dans les tissus et sérums
L'étude indique que la protéine EL est absente dans les échantillons d'urine du cancer gastrique. Étant donné que l'urine contient à la fois la protéine sécrétée à partir urothélium ainsi que les protéines du plasma ou la lyse cellulaire, nous avons également examiné les niveaux d'expression EL dans le tissu ou le sérum des patients atteints d'un cancer de l'estomac, dans le but d'en déduire les raisons de cette absence observée. Western blot a été réalisée pour mesurer les niveaux d'expression EL dans des échantillons de tissus cancéreux et correspondant à des échantillons non cancéreuses de 12 patients atteints de cancer gastrique non traitées (figure 1B). Aucune différence significative dans les niveaux de EL d'expression a été observée entre les échantillons de tissus du cancer gastrique et les échantillons noncancerous correspondant (le test de rang signé de Wilcoxon, P
= 0,90).
Dans des expériences de coloration immunohistochimique, nous avons constaté que les granules bruns principalement apparu dans le cytoplasme (figure 4). une expression positive de la protéine El a été trouvée dans 58% (12/07) des cancers gastriques et 67% (8/12) des échantillons non cancéreuses gastriques adjacents (tableau 3). Il n'y avait aucune différence dans les niveaux d'expression de cette protéine entre le cancer de l'estomac et les tissus non cancéreux correspondant (test du chi-carré, P
= 0,67). Nous avons également examiné toute relation possible entre les niveaux d'expression EL et des facteurs clinicopathologiques potentiellement pertinents mentionnés précédemment. Aucune relation n'a été détectée. Les résultats sont présentés dans le Tableau 4. La Figure 4 Analyse immunohistochimique de l'EL dans les tissus du cancer gastrique et correspondant à des échantillons non cancéreux. Les granules bruns de EL principalement apparus dans le cytoplasme. tissus adjacents noncancerous colorées avec (A) (× 400). tissus cancéreux colorées avec (B) (× 400).
Tableau 3 EL expression dans le cancer gastrique et noncance adjacent échantillons rous
n
L'expression de la protéine EL

P
négatif
positif
contrôle Adjacent
12
4 (33%)
8 (67%)
0,67
12
5 (42%)
7 (58%)
Tableau 4 EL expression et clinico facteurs dans les tissus de cancer gastrique
clinicopathologique de cancer gastrique
n
P EL
négatif
Homme positif
Sexe
6 2
4
0,56
Femme
6
3 3
Age (année)
≤50 3
1 2
0,74
> 50
9 4
5
Lauren classement
Intestinal
5 3
2
0,28
diffuse
7 2
5
Le type histologique
hautement différencié 1 1
0
0,36
Modérément différencié
4 2
2
mal différenciées
7 2
5
tumoraux étapes
I et II 2
1
1
0.79
10 4
6
Profondeur de III et IV de l'invasion de la T1 et 5 2
3 de
T2 0,92
T3 et 7 3
4
métastases ganglionnaires de T4
positif 3
1 2
0,74
négatif
9 4
5
Nous avons ensuite mesuré les niveaux d'expression EL dans le sérum de 12 patients atteints de cancer gastrique par rapport
ceux de 12 personnes en bonne santé (figure 1C). On peut voir qu'il n'y a pas de distinction claire entre les échantillons de cancer et le contrôle sain (test de Mann-Whitney, P
= 0,79). Nous notons que les niveaux d'expression EL ont une distribution large gamme dans les deux séries d'échantillons.
Discussion
Dans notre étude précédente, nous avons développé une méthode de calcul roman et l'a appliqué à prédire que EL pourrait servir très prometteur marqueur urinaire de diagnostic pour le cancer gastrique. Ici, nous avons en outre confirmé cette prédiction sur échantillon plus grand ensemble, et en plus nous avons découvert que la protéine EL est hautement spécifique au cancer gastrique.
EL est un nouveau membre de la famille des gènes de triglycéride lipase, et présente une homologie de séquence élevée avec lipoprotéine lipase (LPL) (45%), la lipase hépatique (LH) (41%) et de la lipase pancréatique (PL) (21%) [19, 20]. EL possède essentiellement une phospholipase et possède une activité de lipase triglycéride, qui joue un rôle important dans le plasma lipoprotéines à haute densité du métabolisme et du développement de l'athérosclérose [21 à 25]. Plusieurs études ont montré que la LPL joue un rôle important dans la carcinogenèse, notamment colorectaux et les cancers du pancréas et le cancer du poumon [26, 27]. Cependant, EL n'a pas été rapporté d'être associés à toute forme de cancer, sauf pour les tumeurs des cellules germinales testiculaires, tandis que le mécanisme, il est difficile [28].
La découverte que les niveaux d'EL d'expression est significativement réduite dans l'urine des patients atteints de cancer gastrique , tout en montrant aucune différence entre les échantillons de sérum correspondants, ainsi que des échantillons de tissus est très intrigante. L'une des raisons possibles pourrait être due aux propriétés du système de filtration glomérulaire. Il est connu que les protéines plasmatiques ont été filtrés si les glomérules sur la base de leurs tailles, des charges et la structure forme [29]. Les petites et chargées positivement molécules ont été plus facilement filtrés dans l'urine que les protéines grandes et chargées négativement. La séquence de EL a un certain nombre de groupes chargés positivement [30], qui peut être une raison pour laquelle il peut être filtré dans l'urine des personnes en bonne santé. Cependant, le micro-environnement des cellules cancéreuses ont tendance à être plus acide [31], qui peuvent potentiellement changer positivement chargés des grappes de frent négatives, et donc empêcher les molécules d'être filtrée dans les urines. Certes, la raison précise est encore à être compris, et garantit d'autres études.
Urine est une source non-invasive idéal pour la détection du cancer. Toutefois, il convient de noter que l'urine a un degré de variabilité dans les concentrations en protéines élevée tout au long d'une journée, qui peut être influencée par divers facteurs (âge, le régime alimentaire, et le moment de la collecte). Pour cette raison, il est essentiel de normaliser la concentration en protéines dans les urines pour mesurer les niveaux de protéine d'expression. Par conséquent, nous avons utilisé les niveaux relatifs d'expression EL par rapport à celle de la créatinine urinaire dans chaque échantillon pour normaliser les niveaux d'expression EL entre les différents échantillons d'urine. Les résultats de cette étude suggèrent que la perte de urinaire EL expression peut fournir une indication préliminaire du cancer gastrique au cours du dépistage à grande échelle et des examens plus directs tels que test de gastroscopie et de la pathologie sur l'échantillon de biopsie sera nécessaire pour le diagnostic final. De nombreuses études indiquent que biomarqueur de diagnostic peut être un indicateur de pronostic et de survie utile pour les cancers gastriques [32-34]. Il n'a pas seulement pour prédire les informations de pronostic de patients atteints de cancer, mais aussi pour fournir à la stratégie de traitement pour le médecin. Donc, nous avons examiné la corrélation entre les niveaux d'expression EL et les caractéristiques clinico dans le cancer gastrique. Bien que EL fait un marqueur de diagnostic prometteur pour le cancer gastrique, on n'a pas trouvé d'relations solides entre le niveau d'expression EL et les caractéristiques clinico pronostiques de la tumeur comme le type de tumeur, l'invasion et la classification TNM. En outre, en raison de la courte durée de l'étude et le manque de suivi régulier des patients, nous ne pouvons pas évaluer le taux de survie dans cette étude. Les données existantes limitées ont montré que EL expression ne peut pas être utilisé comme indicateurs de pronostic et de survie utiles pour le cancer gastrique. La prochaine étude, nous avons cherché à étudier l'expression EL protéique dans un plus grand nombre de patients atteints de différentes tumeurs et ses études de suivi, et d'explorer le mécanisme exactement du rôle de EL dans la carcinogenèse du cancer gastrique.
Conclusion
Dans conclusion, bien qu'il ne soit pas lié au stade de la tumeur ou de grade, EL urinaire pourrait être un biomarqueur du cancer gastrique très prometteur qui peut être applicable à des projections à grande échelle avec la fidélité de diagnostic élevé.
Remarques
Xueyan Dong, Guoqing Wang a contribué également à ce travail
abréviations
EL:.
lipase endothéliale
ROC:
récepteur fonctionnant courbe caractéristique

ASC:
l'aire sous la courbe ROC
Déclarations de REMERCIEMENTS
Nous remercions Xiaoming Xu pour ses contributions, Département de laboratoire de pathobiologie, Norman Bethune Medical College de l'Université de Jilin. Ce travail a été soutenu par les National Institutes of Health (1R01GM075331), "Distinguished Scholar" subvention du Cancer Coalition Géorgie, et le financement de semences de l'Université de Géorgie. Il a également été soutenu en partie par le Programme national de recherche fondamentale de la Chine (973 programme, 2011CB512003), National Natural Science Foundation de Chine (81271897 et 81071424), le Fonds de recherche spécialisée pour le programme de doctorat de l'enseignement supérieur de la Chine (20110061120093), Chine postdoctorale science Foundation (20110491311 et 2012T50304), Fondation de Jilin Département provincial de la santé (2011Z049) et fondation spéciale Bethune de l'Université de Jilin
des auteurs originaux soumis fichiers pour les images
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