La proteína lipasa endotelial es biomarcador urinario prometedor para el diagnóstico de cancer

gástrico La proteína lipasa endotelial es biomarcador urinario prometedor para el diagnóstico de cáncer gástrico
Abstract
Antecedentes
El cáncer gástrico es una de los tumores malignos más comunes en el mundo . Encontrar biomarcadores diagnósticos eficaces en la orina o suero representaría la solución más ideal para la detección de cáncer gástrico durante el examen físico anual. Este estudio fue evaluar el potencial de la lipasa endotelial (EL) como un biomarcador urinario para el diagnóstico de cáncer gástrico.
Métodos
Los niveles de expresión de EL se midió usando transferencia de Western y experimentos de tinción inmunohistoquímica en (tejido, suero, y orina) muestras de pacientes con cáncer gástrico en comparación con
personas sanas. También se verificaron los niveles de EL en las muestras de orina de otros tipos de cáncer (pulmón, cáncer de colon y recto) y lesiones benignas (gastritis y leiomioma gástrico) para comprobar si EL era específico para el cáncer gástrico.
Resultado
Hemos observado una separación clara entre los niveles de expresión de eL en las muestras de orina de 90 pacientes con cáncer gástrico y de 57 voluntarios sanos. Se fue de aproximadamente 9,9 veces disminución media de los niveles de expresión EL en las muestras de orina de cáncer gástrico en comparación con los controles sanos (P
< 0,0001), el logro de un valor AUC 0,967 para el ROC (característica operativa del receptor) curva, demostrando que es altamente precisa como marcador diagnóstico para el cáncer gástrico. Curiosamente, los niveles de expresión de EL en muestras de tejido y suero no eran tan discriminativo como en muestras de orina (P
= 0,90 y P = 0,79
). En experimentos de inmunohistoquímica, la expresión positiva de la proteína EL se encontró en el 67% (8/12) de los gástrica adyacente no canceroso y en el 58% (7/12) de las muestras de cáncer gástrico. No hubo estadística significativa en los niveles de expresión de esta proteína entre el cáncer gástrico y los tejidos no cancerosos que emparejan (P = 0,67)
.
Conclusiones Francia El EL urinaria como un biomarcador altamente precisa cáncer gástrico que es potencialmente . aplicables a la detección general con alta sensibilidad y especificidad
el preparaciones virtuales comentario el preparaciones virtuales (s) de este artículo se puede encontrar aquí: http:... //www diagnosticpathol gía diagnomx eu /vs /4527331618757552
Palabras clave
endotelial lipasa gástrica biomarcador diagnóstico de cáncer Antecedentes
el cáncer gástrico es uno de los tumores malignos más comunes en el mundo, lo que representa la tercera causa principal de muerte por cáncer en los hombres y la quinta causa en las mujeres [1]. Aproximadamente dos tercios de los casos de cáncer gástrico se producen en los países menos desarrollados, que son casi tres veces más alta per cápita que en los países desarrollados, como los países de Europa y América del Norte [2]. El cáncer gástrico tiene altas tasas de mortalidad, ya que no presenta síntomas clínicos evidentes en la etapa temprana. Los estudios sugieren que si se ha detectado y resecada en la primera etapa del tumor, la tasa de supervivencia promedio de 5 años es relativamente alta [3, 4]. Por lo tanto, el diagnóstico y el tratamiento precoz representan una clave para mejorar el pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico.
Aunque gran cantidad de esfuerzo se ha puesto en el desarrollo de la tecnología para facilitar el diagnóstico mediante gastroscopia y análisis inmunohistoquímico, la naturaleza invasiva de estos procedimientos hace que sea poco práctico para el cribado a gran escala para el cáncer gástrico. biomarcadores diagnósticos eficaces en la orina o suero representarían la solución más ideal para el problema, lo que permite realizar pruebas para el cáncer gástrico mediante análisis de sangre o de orina durante los exámenes físicos anuales. Se han propuesto varios marcadores séricos de diagnóstico para el cáncer gástrico, como MG7-Ag [5], el antígeno carcinoembrionario (CEA), MUC1 y MUC5AC [6]. El estado de la técnica es que prácticamente todos ellos sufren de sensibilidades y especificidades bastante bajos en el diagnóstico del cáncer, y por lo tanto no han sido ampliamente utilizados clínicamente [7]. En comparación con el tejido y suero, la recolección de orina es relativamente más fácil y menos invasiva. Puede ser más adecuado para el cribado a gran escala para la detección del cáncer [8]. El uso de análisis proteómicos comparativos, una serie de posibles biomarcadores urinarios se han propuesto y bien probado para otros tipos de cánceres, tales como la cistatina B y clusterina para el cáncer de vejiga [9, 10], la anhidrasa carbónica IX y catepsina D para el cáncer renal [11, 12], y ADAM12 para el cáncer de mama [13]. Para el cáncer gástrico, se han reportado varios biomarcadores, tales como pepsinógeno I, la prostaglandina E2, y soluble c-erbB-2 [14-16]. La capacidad de diagnóstico actual para el cáncer gástrico es todavía ser evaluado a fondo, ya que no han sido ampliamente utilizados en diagnóstico clínico. Por lo tanto, existe claramente una necesidad urgente para la identificación y validación de nuevos marcadores de diagnóstico y fiables para la detección del cáncer gástrico.
Hemos realizado previamente un estudio de la biología de sistemas para identificar potenciales biomarcadores candidatos para el diagnóstico de cáncer gástrico. En ese estudio, se analizaron los datos de expresión de genes de 80 pares de cáncer gástrico tejidos y tejidos no cancerosos adyacentes recogidas de pacientes con cáncer gástrico usando chips de micromatriz, y se identificaron cientos de genes expresados ​​diferencialmente en el cáncer frente
tejidos de control [17 ]. a continuación, hemos entrenado una máquina de vectores de soporte (SVM) clasificador basado predecir cuál de estos genes expresados ​​diferencialmente pueden tener sus proteínas excretadas en la orina. Entre la proteína predicha excretor, encontramos EL muestra un alto poder de discriminación en cuanto a su expresión en las muestras de orina de pacientes con cáncer gástrico en comparación con las personas sanas
[18].
Este sentido, ampliar nuestro estudio anterior con el objetivo de (a) más confirmar que EL tiene una alta capacidad de discriminación entre las muestras de orina de pacientes con cáncer gástrico y las personas sanas más de un conjunto mayor de muestras, y (b) demostrar que EL es altamente específico para el cáncer gástrico mediante la comparación de sus abundancias en muestras de orina de cáncer gástrico con otro tipo de cáncer tipos y lesiones benignas.
Métodos cOLECCIÓN Muestra
Todas las muestras se recogieron en tres hospitales de la Universidad de Jilin Norman Bethune Medical College, Changchun, china y en el hospital del cáncer afiliado a la Universidad médica de Xinjiang, Urumqi, china. Los tejidos de cáncer gástrico y los tejidos no cancerosos coincidentes fueron resecados quirúrgicamente de pacientes con cáncer gástrico. Las muestras de orina al azar a la captura de suero y mañana se obtuvieron de los pacientes con cáncer antes de la cirugía. Se recogieron estas muestras de especímenes, durante el período comprendido entre marzo de 2011 hasta septiembre de 2012. Un total de 90 casos de cáncer gástrico (67males y 23 mujeres, con edades: 31-85 años) y 57 voluntarios sanos (30 varones y 27 mujeres, con edades se estudiaron 29-76 años). Los casos de cáncer gástrico fueron diagnosticados mediante análisis histológico de tipo intestinal y difuso de acuerdo con la clasificación de Lauren. Además, las muestras de orina se obtuvieron de 9 pacientes con cáncer de pulmón, 10 pacientes de cáncer de colon, los pacientes de cáncer 10 recto, 2 pacientes gastritis, y 2 pacientes leiomioma gástricos, que se utilizan para comprobar si EL es específica para el cáncer gástrico. Los siguientes criterios fueron utilizados en la recogida de muestras: los pacientes (i) el cáncer no deberían haber iniciado ningún tratamiento en el cáncer; y (ii) los voluntarios del grupo control sano no deben tener ninguna enfermedad sistémica grave en el pasado. Un formulario de consentimiento informado por escrito fue firmado por cada participante después de que fueron informados sobre el propósito del estudio, que fue aprobado por los Comités de Ética de Investigación en Jilin University College of Medicine y la Universidad Médica de Xinjiang, respectivamente. La Tabla 1 resume la información de los voluntarios sanos y pacientes que participan en este study.Table 1 La información de los voluntarios sanos y pacientes que participan en este estudio
Características
Tejido
Suero

orina
12 página 12
90
La media de edad de cáncer gástrico gratis (rango)
60 (42-76)
63 (84-39)
60 (31-85)
Género
6 página 7
67
Mujer
localización 6 página 5
23
tumor masculino
Cardia
3
2
39
Body
5
6
26
Antrum
3
4
16
Diffuse
1
0
9
Operation
Gastrectomía total
4 de 5
29
gastrectomía subtotal página 8 página 7
61
Lauren clasificación
intestinal página 5 página 4
39
difuso página 7 página 8
51
tipo Histología
alta o moderada página 5 página 5
43
pobre o indiferenciado
7 página 7
47 Francia stages tumorales
Ι y ΙΙ
2 4 31

ΙΙΙ y ΙV
10 página 8 59

profundidad de la invasión
T1 y T2 página 5 página 9
30
T3 y T4 página 7 página 3
60
nodo estado
N0 página 3 página 3
29
N1 y N2 estado página 9 página 9
61
Metástasis
M0 página 5
10
71
M1 página 7
2 19
El cáncer de pulmón -
- página 9
La edad media (intervalo)
46 (42- 57): perfil del cáncer de colon CD -
- 10
La edad media (intervalo)
53 (46-65)
cáncer de recto
- -
9
La edad media (intervalo)
62 (47-78) página 12 página 12
57
La edad media sana gratis (rango)
60 (42 -76)
54 (41-72)
47 (29-76)
/inflamación crónica
Gastritis - CD -
2 La edad media (intervalo)
56 (43-69)
Gastritic leiomioma
2 La edad media (intervalo) -
-
56 (51-62)
Western Blot análisis
los tejidos se muelen en polvo en nitrógeno líquido y después se lisaron en tampón de extracción de proteínas [0,5 mol /l de Tris · Cl (pH 7,4), 150 mmol /L de NaCl, 0,1 mmol /L de etileno diamina tetra acético (EDTA) (pH 7,0) , 1 mmol /L fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), 2,5 mg /ml de aprotinina, 1 mmol /L de ditiotreitol (DTT), 1% de Triton X-100, 1% desoxicolato de sodio (SDS)]. Todos los reactivos fueron adquiridos de Beyotime (Beyotime, Shanghai, China). Las muestras de suero y orina se almacenaron en presencia de inhibidor de proteasa (Roche, Basilea, Suiza) recipientes estériles y se centrifugó (1000 x g durante 10 minutos a 4 ° C) para eliminar los componentes celulares. Los sobrenadantes se recogieron y se almacenaron a -80 ° C (la más larga de almacenamiento durante 6 meses). 2 ml de muestras de orina se dializaron frente a agua destilada a través de una membrana de filtración (Dinguo, Beijing, China) de 8 kDa de corte a 4 ° C y después se liofilizó a -20 ° C. las muestras de orina liofilizadas se resuspendieron en solución salina tamponada con fosfato 10 mM (PBS) (pH 7,5). Las concentraciones de proteína se midieron utilizando la BCA kit de ensayo de proteínas (Beyotime, Shanghai, China). los niveles de creatinina en orina fueron cuantificados por el método de picrato alcalino (reacción de Jaffe) con creatinina una prueba de rutina semi-autoanalizador (Vital Micro 300, Países Bajos).
Western blot se utilizó para medir los niveles de expresión de EL. 20 g de proteínas totales se utilizaron en el experimento. Todas las muestras se separaron usando 4-15% de SDS-PAGE (Bio-Rad Laboratories Inc., EE.UU.) y se transfirieron a una membrana de PVDF (Bio-Rad Laboratories Inc., EE.UU.). La membrana se incubó en solución de bloqueo leche 5% durante 2 horas a temperatura ambiente. La membrana se incubó con un anticuerpo primario policlonal de cabra anti-humano EL (1: 400; Santa Cruz Biotecnología, EE.UU.) a temperatura ambiente durante 1 hora, que se lavó tres veces durante 5 minutos en solución salina tamponada con fosfato (PBS) y luego reaccionar con un anticuerpo de cabra anti-conejo secundaria (1: 5000; Beyotime, Shanghai, china). Para los tejidos, anticuerpos β-actina (1: 1000; Santa Cruz Biotecnologías, EE.UU.) fue recubated para garantizar la igualdad de carga. Al final, la membrana se cubrió completamente con una cantidad igual de potenciador y disolución de peróxido de un ECL plus Kit (Beyotime, Shanghai, China) durante 1 minuto, y luego todas las membranas se expusieron a la película. La densidad de la banda se cuantificó usando gel de imágenes de sistema (Tañón, Shanghai, China). La cantidad fija de 1 ng purificó estándar EL (I + & D Systems, Inc., EE.UU.) se utilizó como control positivo para la calibración. Con consideración las variaciones en la formación de orina y la excreción, la densitometría de EL de la orina se expresó en relación a las concentraciones de creatinina en orina.
Inmunohistoquímica
Para la medición de los niveles de expresión de EL en el cáncer frente a
tejidos de control no cancerosas adyacentes, ambos tipos de los tejidos se fijaron durante 12-16 horas en 4% para-formaldehído (pH 7,0), se incluyeron en parafina y cortadas en 4 micras de grosor. Plus diapositivas se hornearon a 60 ° C durante 30 minutos. La parafina se retiró usando xileno durante 30 minutos, y las secciones se rehidrataron a través de una serie de soluciones de alcohol antes del tratamiento con ácido cítrico 1 mM, pH 6,0, a 100 ° C durante 5 minutos y con 1% H 2O 2 durante 30 minutos. Después de ser lavado con agua destilada, las secciones se incubaron a temperatura ambiente con 5% suero porcino en PBS durante 30 minutos y el anticuerpo EL (1: 400; Santa Cruz Biotechnologies, USA) diluido en PBS durante la noche a 4 ° C, se lavaron tres veces para 5 minutos en PBS. Los anticuerpos unidos se visualizaron con el reactivo de color diaminobencidina (Bios, Pekín, China). Las secciones se contratiñeron con hematoxilina de Mayer. Dos patólogos sin conocimiento del estado clínico de los pacientes evaluados todas las secciones teñidas de forma independiente. Se contaron las células a gran aumento en cada caso (× 400), y se calculó el porcentaje de células con tinción positiva. La proporción de células que muestran expresión EL se clasificó como sigue: 0 = menos de 10%; 1 = 11% -50%; 2 = 51% -75%; 3 = más del 75%. La intensidad de la tinción se clasifica por la intensidad relativa de la siguiente manera: 0 = negativo; 1 = débil; 2 = intermedio; 3 = fuerte tinción. Las puntuaciones de proporción e intensidad fueron luego se multiplica tener un índice de puntuación total. Por el análisis estadístico, las puntuaciones más bajas que 2 se consideraron negativos, y las puntuaciones de 2 o más se consideraron positivos.
El análisis estadístico Francia El test de chi-cuadrado y la prueba de rangos con signos de Wilcoxon se utilizó para analizar los niveles de expresión de EL en el cáncer vinculado y muestras de tejidos cancerosos. Para analizar la diferencia de El niveles de expresión en las muestras de suero y orina entre los pacientes con cáncer gástrico y los controles sanos, respectivamente, se utilizó la prueba de Mann-Whitney. Se empleó la prueba de chi-cuadrado para evaluar la relación entre los niveles urinarios de expresión EL y variables clínico. El poder de discernimiento de los niveles de expresión de EL en la orina entre las muestras del grupo de cáncer y de control se examinó utilizando el receptor de funcionamiento característico (ROC) curva y el área bajo la curva ROC (AUC). Todas las pruebas fueron de dos colas y un P-valor
< 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software estadístico GraphPad Prism 5.
Resultados
los niveles de expresión de EL en la orina
Para el análisis semi-cuantitativo de proteínas de la orina, se utilizó niveles relativos de expresión de EL con respecto a la de la creatinina en orina en cada muestra que se normalice la expresión EL través de diferentes muestras de orina. Se observó una separación clara entre los niveles de expresión EL en las muestras de orina de 90 pacientes de cáncer gástrico (1,39 ± 0,68) y de 57 voluntarios sanos (0,14 ± 0,32). Hemos observado una disminución promedio de aproximadamente 9,9 veces de los niveles de proteína EL en las muestras de orina de pacientes con cáncer gástrico en comparación con los controles sanos (P
< 0,0001). Los resultados se pueden ver en la Figura 1A y la Figura 2A. Hemos trazado la curva ROC para la precisión de la clasificación utilizando los niveles de expresión de EL través de todas estas muestras de orina, para proporcionar una visión de conjunto de la fuente de discernimiento de la proteína. Tenga en cuenta que la AUC proporciona un índice ampliamente aceptado para medir la calidad del clasificador subyacente con AUC = 1,0 que representa la clasificación perfecta y AUC = 0,5 representa ninguna separación. EL ha alcanzado un valor de AUC en 0.967 con el intervalo de confianza del 95% (CI) siendo [0,942 a 0,993], lo que indica que EL urinaria puede servir como un biomarcador de cáncer gástrico muy prometedor para el propósito de diagnóstico (Figura 2B). Figura 1 Un análisis de Western blot representativo de EL abundancia de proteínas. carril control positivo (+) contenía el producto estándar EL comercial, que se utilizó para normalizar la respuesta de la señal a través de todos los geles. (A), la abundancia de proteína EL en muestras de orina; (B), la abundancia EL en muestras de tejido de cáncer y su adecuación a las muestras no cancerosas de los pacientes con cáncer gástrico con ningún tratamiento. El β-actina sirve como control interno de carga para la estimación de los niveles de abundancia relativa de proteínas; (C), EL abundancia de proteínas en muestras de suero.
Figura 2 abundancias de proteínas en orina EL en pacientes con cáncer gástrico en comparación con controles sanos. Cada punto de datos es un individuo. (A), la abundancia EL en muestras de pacientes con cáncer gástrico significativamente más bajos que en las muestras de controles sanos; (B), las curvas ROC de proteína EL urinaria. El valor AUC fue 0,967.
Observamos que la banda de EL en Western blot estaba ausente en las muestras de orina de 71 de los 90 pacientes con cáncer gástrico y todos los 57 voluntarios sanos que la banda EL en sus muestras de orina. Uso de ausencia /presencia de la banda de EL como el punto de corte en llamar a una persona que tiene cáncer de estómago o no, los datos anteriores da lugar a una sensibilidad llamando al 79% [IC del 95%, desde 0,690 hasta 0,867] y la especificidad en 100% [95% IC, 0,937-1,000].
a continuación, examinó los niveles de expresión de eL en muestras de orina de los pacientes con cáncer gástrico y su relación con los distintos factores clínico-patológicos, a saber, el género, la diferenciación histología, estadio tumoral, invasión y metástasis de estado. No hay relaciones estadísticas significativas entre los niveles de expresión de EL y cualquiera de estos factores pueden ser detectados. La correlación entre los niveles urinarios de expresión EL y los factores clínico-patológicos se presentan en la Tabla 2 Correlación entre 2.Table EL expresión y clinicopathological características clínico-urinario
(n)
EL ausente (%)

EL presente (%)
P
n = 71
n = 19
Género
Hombre, (67)
51 (72)
16 (84)
0,27
Mujer, (23)
20 (28) página 3 (16)
tipo histológico
alta o moderada, (43) guía 31 (44) página 12 (63)
0,13
pobre o indiferenciado, (47) guía 40 (56) página 7 ( 37)
clasificación de Lauren
intestinal, (39)
29 (41)
10 (53)
0,36
difusa, (51)
42 (59)
9 (47) Francia stages tumorales
Ι y ΙΙ, (31) guía 22 (31) página 9 (47)
0,18
ΙΙΙ y ΙV, (59)
49 (69)
10 (53)
profundidad de la invasión
T1 y T2, (30)
21 (30) página 9 (47)
0,14
T3 y T4, (60)
50 (70)
10 (53)
nodo estado
Ausente, (29)
23 (32) página 6 (32)
0.95
Presente, (61)
48 (68) página 13 (68)
estado de metástasis
M0 (71)
55 (77)
16 (84)
0,52
M1 (19)
16 (23) Estrellas: 3 (16)
también hemos comprobado si EL es específico para el cáncer gástrico. Como un primer esfuerzo, hemos examinado los niveles de expresión EL en muestras de orina de otros tres tipos de cáncer (pulmón, cánceres de colon y recto) y lesiones benignas (gastritis y leiomioma gástrico). El ensayo se realiza en muestras de orina de 9 cáncer de pulmón, 10 cáncer de colon, cáncer de recto 10, 2 gastritis, y 2 pacientes leiomioma gástricos. Claramente podemos ver que 9 de 9, 9 de cada 10, 10 de los 10, 2 de 2, y 2 de cada 2 muestras tienen la banda de EL en las muestras de orina de los cánceres de pulmón, cáncer de colon, cáncer de recto, gastritis y leiomioma pacientes gástricos, respectivamente (Figura 3). Mientras que este resultado no garantiza que la falta de EL en la orina es un indicador de sólo el cáncer gástrico, sugiere fuertemente que EL es altamente específico. pruebas más grandes se llevará a cabo en nuestro estudio de seguimiento, lo que implicará sustancialmente más pacientes de otras enfermedades posiblemente relacionados con el cáncer gástrico, como el cáncer de páncreas y cáncer de esófago. Figura 3 abundancias EL en muestras de orina de otros tipos de cáncer y lesiones benignas. (A), Nueve muestras de cáncer de pulmón; (B), diez muestras de cáncer de colon; (C), diez cánceres rectales muestras; (D), dos gastritis y dos muestras leiomioma gastritic. (+) El carril de control positivo. Sobre El niveles de expresión en los tejidos y sueros Francia El estudio indica que la proteína EL está ausente en las muestras de orina de cáncer gástrico. Teniendo en cuenta que la orina contiene tanto proteína secretada de urotelio, así como proteínas de la lisis de plasma o de células, también hemos examinado los niveles de expresión de EL en el tejido o suero de pacientes con cáncer gástrico, con el objetivo de inferir las razones para esta ausencia observada. Western blot se llevó a cabo para medir los niveles de expresión de EL en muestras de tejido de cáncer y búsqueda de muestras no cancerosas de 12 pacientes con cáncer gástrico no tratados (Figura 1B). No se observó ninguna diferencia significativa en los niveles de expresión de EL entre las muestras de tejido de cáncer gástrico y las muestras no cancerosas que emparejan (prueba de rangos con signo de Wilcoxon, P = 0,90
).
En los experimentos de tinción inmunohistoquímica, se encontró que los gránulos marrones predominantemente aparecido en el citoplasma (Figura 4). Expresión positiva de la proteína EL se encontró en 58% (7/12) de cáncer gástrico y en 67% (8/12) de las muestras no cancerosas adyacentes gástricos (Tabla 3). No hubo diferencias en los niveles de expresión de esta proteína entre el cáncer gástrico y los tejidos no cancerosos que emparejan (prueba de chi-cuadrado, p = 0,67)
. También se examinó la posible relación entre los niveles de expresión de EL y factores clínico-patológicos potencialmente relevantes mencionados anteriormente. No se detectó ninguna relación. Los resultados se presentan en la Tabla 4. La Figura 4 El análisis inmunohistoquímico de EL en los tejidos de cáncer gástrico y combinar las muestras no cancerosas. Los gránulos marrones de EL predominantemente aparecieron en el citoplasma. tejidos adyacentes no cancerosos teñidas con (A) (× 400). cáncer de los tejidos teñidos con (B) (x400).
Tabla 3 de expresión EL en cáncer gástrico y noncance adyacente muestras rous
n
La expresión de la proteína EL

P
negativo positivo

control adyacentes página 12 página 4 (33%) página 8 (67%)
0,67
El cáncer gástrico página 12 página 5 (42%) página 7 (58%) sobre Table 4 EL expresión y clinicopathological factores en los tejidos de cáncer gástrico
clinicopathological

n
EL
P
negativo positivo

Sexo Masculino

6
2 4
0,56
Mujer página 6 página 3 página 3
Edad (años)
≤50 página 3
1
2 0,74 Hotel > 50 página 9
4 de 5
Lauren clasificación
intestinal página 5 página 3 página 2
0,28
difuso página 7
2 5
tipo histológico
altamente diferenciada
1 | 1 | 0
0,36
moderadamente diferenciado
4
2 2 página 7
2 5 Francia stages tumorales
pobremente diferenciados
I y II
2 1 | 1 | 0,79
III y IV
10
4 de 6
profundidad de la invasión
T1 y T2 página 5
2 3
0,92
T3 y T4 página 7 página 3
4 de metástasis de ganglios linfáticos positivos
página 3
1
2 0,74
negativo
9
4 de 5
a continuación, mide los niveles de expresión de eL en los sueros de los 12 pacientes con cáncer gástrico en comparación con los de
12 personas sanas (Figura 1C). Se puede observar que no hay una clara distinción entre las muestras de cáncer y el control sano (prueba de Mann-Whitney, P
= 0,79). Observamos que los niveles de expresión de EL tienen una distribución amplia gama de ambos conjuntos de muestras.
Discusión
En nuestro estudio anterior, hemos desarrollado un nuevo método de cálculo y lo aplicó a predecir que EL podría servir como una muy prometedora marcador urinaria de diagnóstico para el cáncer gástrico. Aquí, hemos confirmado aún esta predicción en el set número mayor de muestras, y, además, nos descubierto que la proteína EL es altamente específico para el cáncer gástrico.
EL es un nuevo miembro de la familia de genes triglicérido lipasa, y tiene alta homología de secuencia con la lipoproteína lipasa (LPL) (45%), la lipasa hepática (HL) (41%) y la lipasa pancreática (PL) (21%) [19, 20]. EL tiene principalmente una fosfolipasa y tiene algo de actividad de la lipasa de triglicéridos, que tiene un papel importante en el metabolismo de plasma lipoproteínas de alta densidad y desarrollo de la aterosclerosis [21-25]. Varios estudios han demostrado que la LPL juega un papel importante en la carcinogénesis, incluyendo colorrectal y los cánceres de páncreas y cáncer de pulmón [26, 27]. Sin embargo, EL no se ha informado de estar asociado con cualquier tipo de cáncer, excepto para los tumores de células germinales testiculares, mientras que el mecanismo no está claro [28].
El descubrimiento de que los niveles de expresión de EL se reduce significativamente en la orina de pacientes con cáncer gástrico , mientras que muestra ninguna diferencia entre las muestras de suero correspondientes, así como muestras de tejido es muy intrigante. Una posible razón puede ser debido a las propiedades del sistema de filtración glomerular. Se sabe que las proteínas de plasma se filtró a través de los glomérulos sobre la base de sus tamaños, cargas y estructura en forma de [29]. Las moléculas pequeñas con carga positiva y se filtraron más fácilmente en la orina de proteínas grandes y con carga negativa. La secuencia de EL tiene un número de grupos cargados positivamente [30], que puede ser una razón por la que se puede filtrar a cabo en la orina de personas sanas. Sin embargo, el microambiente de las células de cáncer tienden a ser más ácida [31], lo que potencialmente puede cambiar positivamente cargada grupos de los EL a los negativos, evitando por lo tanto las moléculas de ser filtrado en la orina. Ciertamente, la razón exacta aún no se ha entendido, y merece estudios adicionales.
La orina es una fuente no invasivo ideal para la detección del cáncer. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la orina tiene un alto grado de variabilidad en las concentraciones de proteína a lo largo de un día, que puede ser influenciado por diversos factores (edad, la dieta, y el tiempo de recolección). Por esta razón, es una clave para normalizar la concentración de proteína en la orina en la medición de los niveles de expresión de proteína. Por lo tanto, hemos utilizado los niveles relativos de expresión de EL con respecto a la de la creatinina en orina en cada muestra para normalizar EL niveles de expresión a través de diferentes muestras de orina. Los resultados de este estudio sugieren que la pérdida de expresión EL urinaria puede dar una primera indicación de cáncer gástrico durante el cribado a gran escala y exámenes más directas, como prueba de la gastroscopia y patología en la muestra de la biopsia será necesaria para el diagnóstico final. Muchos estudios informan que biomarcador de diagnóstico puede ser un indicador de pronóstico y la supervivencia útil para el cáncer gástrico [32-34]. No era sólo para predecir la información de pronóstico de los pacientes con cáncer, sino también para proporcionar la estrategia de tratamiento para el médico. Así hemos examinado la correlación entre los niveles de expresión de EL y las características clínico-patológicas en el cáncer gástrico. A pesar de que EL hace un marcador de diagnóstico prometedora para el cáncer gástrico, no hemos encontrado ningún sólidas relaciones entre el nivel de expresión de EL y características clinicopatológicas de pronóstico del tumor, tales como el tipo de tumor, la invasión y la estadificación TNM. Además, debido a la corta duración del estudio y la falta de seguimiento regular de los pacientes, no podemos evaluar la tasa de supervivencia en este estudio. Los datos existentes limitados mostraron que EL expresión no puede ser utilizado como un útil indicadores de pronóstico y supervivencia para el cáncer gástrico. El siguiente estudio, que tuvo como objetivo investigar la expresión de la proteína EL en un mayor número de pacientes con diferentes tumores y sus estudios de seguimiento, y para explorar el mecanismo de exactamente el papel de EL en la carcinogénesis del cáncer gástrico.
Conclusión En
conclusión, a pesar de que no está relacionado con el estadio tumoral o grado, EL urinaria podría ser un biomarcador de cáncer gástrico altamente prometedora que puede ser aplicable a las proyecciones a gran escala con alta fidelidad de diagnóstico.
Notas
Xueyan Dong, Wang Guoqing contribuyó igualmente a este trabajo
abreviaciones
EL:.
lipasa endotelial
ROC:
curva de eficacia diagnóstica

AUC: Francia el área bajo la curva ROC
Declaraciones
Agradecimientos agradecemos
Xiaoming Xu por sus contribuciones, laboratorio del Departamento de Patología, Norman Bethune Medical College de la Universidad de Jilin. Este trabajo fue apoyado por los Institutos Nacionales de Salud (1R01GM075331), "Académico Distinguido" donación de la Coalición contra el Cáncer Georgia y financiación inicial de la Universidad de Georgia. También fue apoyado en parte por el Programa Nacional de Investigación Básica de China (programa 973, 2011CB512003), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81271897 y 81071424), Fondo de Investigación Especializada para el Programa de Doctorado de Educación Superior de China (20110061120093), China Postdoctoral Science Foundation (20110491311 y 2012T50304), Fundación de Jilin Departamento Provincial de Salud (2011Z049) y Bethune fundación especial, de la Universidad de Jilin
Autores 'original presentado archivos de imágenes
a continuación se presentan los enlaces a los archivos de los autores originales presentados para las imágenes . Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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