Stomach Health > žalúdok zdravie >  > Stomach Knowledges > výskumy

Užitočnosť cytokeratinům 7 a 20 (CK7 /20) imunohistochémia v rozdiele krátkodobých segmente Barrettova pažeráka od žalúdka, črevné metaplázia: Je to spoľahlivý?

Užitočnosť cytokeratinům 7 a 20 (CK7 /20) imunohistochémia v rozdiele krátkodobých segmente Barrettova pažeráka od žalúdka, črevné metaplázia: Je to spoľahlivý
Abstract Background
účely tohto korelativního imunohistochemické štúdie? bolo posúdiť užitočnosť cytokeratin (CK7 a CK20) výraz v diagnostike krátkeho segmente Barrettova pažeráka, najmä jeho účinnosť pri rozlišovaní Barrett sliznicu čriev metaplázia žalúdočnej kardio a korpusu.
Metódy
dvoma skupinami endoskopické biopsie boli posúdené, vrátane 20 endoskopických biopsiou krátkeho segmentu Barrettova pažeráka (skupina a) a rovnakého počtu vystavujúcich Helicobacter pylori
spojené črevnej metaplázia žalúdočnej kardio a korpusu (skupina B). Všetky boli skúmané imunohistochemicky pomocou štandardnej metódy ABC pre CK7 a prejavu CK20. Fisherov presný test bol použitý pre štatistickú analýzu Barrett CK7 /20 a žalúdočné CK7 /20 vzorov medzi skupinami
Výsledky
predpokladaného vzor reaktivity v Barrett sliznice (CK7 :. Silné difúznou pozitivita v povrchných a hlbokých žliaz; CK20: pozitivita na povrchu epitelu a povrchné žliaz) bol videný v 2 prípadoch exemplárov skupiny a. Očakávaný žalúdočné pattern (CK7: kusé imunologické s variabilným zapojením hlbokých žliaz; CK20: škvrnité imunologické povrchových a hlbokých žliaz v neúplnom črevnej metaplázia /neprítomnosti CK7 imunoreaktivity so silným farbením CK20 v povrchových i hlbokých žliaz v kompletnom črevnej metaplázia) bol videný v 8 prípadoch exemplárov skupiny B. Príslušné hodnoty citlivosti a falošnú negativitu CK7 /20 farbenie na Barrett vzor v skupine A bolo 10% a 90%, resp. Tieto hodnoty pre žalúdočné vzor v skupine B bola 40% a 60%, v danom poradí. Hodnoty špecificity a falošne pozitivity oboch vzoriek boli rovnaké (100% a 0%, v tomto poradí). Nebol žiadny štatisticky významný rozdiel pre Barrett vzor medzi oboma skupinami (P = 0,487)
, zatiaľ čo pozorovanie žalúdočné vzorka bol v skupine B významne vyššia ako v skupine A (P
= 0,02).
závery
Došli sme k záveru, že táto hypotéza, a nedávno použitá diagnostické kritériá zahŕňajúce CK7 a CK20 imunoreaktivita nie sú spoľahlivé pri rozlišovaní krátkeho segmentu Barrett pažerák z črevnej metaplázia, ako je vidieť v kardio a korpusu.
pozadí
Barrett pažeráka ( BE) je spojená so zvýšeným rizikom adenokarcinómu pažeráka, zhubného nádoru, ktorý má za sebou rýchlo stúpajúca výskyt nedávno [1-3]. Etiológia BE je neznámy, ale genetická predispozícia s ulceróznej zmeny z gastro-ezofageálne refluxnej choroby (GERD) by mohol byť zodpovedný [4].
BE by mala byť podozrenie na endoskopiu, ak je bežná, belavý-objaviť dlaždicového epitelu sa nahrádza červenú, zamatovo vyzerajúce sliznicou v distálnom pažeráku. Spoľahlivá diagnóza BE je ťažké súvisí výberové chyby v dôsledku presného umiestnenia gastroezofageálneho spojenia, ako v hiátová prietrže. Diagnostické ťažkosti vznikajú, keď sa zaoberá krátkom úseku endoskopista BE. Junkční, fundic a špecializované (črevné) typy žľazového epitelu boli popísané pre definíciu BE tým Paull et al.
[5]. Ale to bolo nedávno oznámené, že detekcia je tento spoľahlivým kritériom pre diagnostiku BE [4, 6]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) môže byť spojené so karditídy a črevné metaplázia kardio [7]. Z tohto dôvodu, črevná metaplázia zahŕňajúce kardia vzťahujúce sa k Helicobacter
žalúdka môže byť histologicky nerozoznateľné od črevnej metaplázia distálneho pažeráka.
Bolo navrhnuté, že cytokeratin podmnožiny 7 a 20 (CK7 a CK20) môžu byť užitočné pre rozlišuje oceňujú segment byť vyňaté z črevnej metaplázia proximálneho žalúdka [8-11]. Účelom tejto štúdie bolo zhodnotiť cytokeratin (CK7 a CK20) výraz v diagnostike krátkeho segmente Barrettova pažeráka, najmä jeho užitočnosti pri diferenciálnej diagnostike Barrett sliznice čriev metaplázia žalúdočnej kardio a korpusu.
Metódy
Endoskopické vzorky pacientov s uvedenými z Marmarského University Institute of Gastroenterology boli preskúmané z evidencie ústavu patológie na tej istej univerzite v rokoch 1998 a 2002. najmenej 4 biopsiou boli prevzaté z nepravidelného Squamata-stĺpovitý križovatky (SCJ) s polostrovy alebo jazýčky cylindrického epitelu a ostrovčeky dlaždicového alebo cylindrického epitelu pre každý prípad. Pri viac ako jeden polostrov alebo jazyk cylindrického epitelu v distálnej pažeráku bol pozorovaný endoskopicky, 4 biopsia odfotil z každej polostrova a oni boli poslaní do histopatologické vyšetrenie v oddelených eppendorph rúrok. boli tiež biopsiu malé polostrovy s lineárnymi plavidiel distálnej k SCJ a akékoľvek abnormality fokálna.
pažeráka a žalúdka biopsie boli odobraté Anterográdna alebo retrográdna s cerebrálnost endoskopu, keď to bolo potrebné. Retroflexed prístup bol výhodný pre odber vzoriek Cardia. Prípady, ktoré boli diagnostikované histopatologicky ako krátkodobom segmente rovná boli zaradení do štúdie. Short-segmentu rovná bola definovaná endoskopicky ako jazyky menej ako 3 cm v dĺžke nad esofago-žalúdočné križovatky (EGJ) s jeho podobnosť s tenkého čreva majú dobre tvarované mikroklcích a črevné metaplázia buď hematoxylínom a eosínu (H & E) (obr 1) alebo Alcian modré pH 2,5 pozitívny pohár buniek (obrázok 2) na mikroskopické vyšetrenie. Obrázok 1 Sekcia z gastro-pažerákového spojovacie ukazujúci BE s pohárikových buniek, H &E, x 40
Obrázok 2 intenzívne modré zafarbenie pohárikových buniek s modrým Alcian pH 2,5 /PAS, x 40
Študijná skupina sa skladala z 20 pacienti s krátkym segmentu BE (skupina a) a rovnaký počet pacientov s žalúdočné črevnej metaplázia (kardio a korpusu) sprevádzané H. pylori
gastritídu (skupina B). Biopsia, ktoré boli získané v rámci mm vzdialenosti pod EGJ 5 boli považované za srdcovú sliznice.
Vzorky boli fixované v 10% pufrovanom formalínu a vložené do parafínu. Sériové rezy boli narezané z každej vzorky. Všetky rezy boli zafarbené rutinnom H &E škvrnu. Schiff periodickej kyseliny (PAS), Alcian modrá pH 2,5 a pH 0,5 Alcian modrej boli použité na identifikáciu neutrálne mucín, sialomucin a sulphomucin, resp. Giemsa farbenia bol použitý k odhaleniu H. pylori
. Vylúčili sme prípady bez zisteného pohárikových buniek metaplázia podľa Alcian modranie pre skupiny A a skupiny BH pylori
infekcia bola potvrdená s farbivom Giemsa pre prípady v skupine B.
endoskopickou biopsiou boli zoskupené ako kompletný (typ I) alebo neúplné (typ II), črevná metaplázia podľa vopred stanovených kritérií [12]. Navrhovaný Barrett CK7 /CK20 pattern (CK7: silné difúzna pozitivita v povrchných a hlbokých žľazy; CK20: pozitivita na povrchu epitelu a povrchné žliaz) a žalúdočné CK7 /CK20 pattern (CK7: kusé imunologické s variabilným zapojením hlbokých žliaz; CK20: kusé imunologické povrchových a hlbokých žliaz v neúplnom črevnej metaplázia /neprítomnosti CK7 imunoreaktivity s výrazným farbením CK20 v povrchových a hlbinných žliaz v kompletnom črevnej metaplázia) boli vyhodnotené pre všetky prípady. Šesť kontrolné biopsie boli tvorené spätne od pacientov, u ktorých biopsia ukázala normálne SCJ (n = 3) a normálne kardio (n = 3) pod mikroskopom.
Skupina A
Klinické údaje vrátane veku, pohlavia, gastro-refluxnej príznaky, a endoskopické nálezy a krátkeho segmentu Barrett sliznice boli získané od každého prípadu. Pacienti s BE počas posledných 3 cm distálneho pažeráka bola zaradená do skupiny A. pacientov s pozitívnymi H. pylori
boli vylúčení zo štúdie.
Skupina B
Klinické dáta, vrátane veku, pohlavia, gastro -esophageal príznaky reflux, endoskopické nálezy, a H. pylori
status boli získané od každého prípadu. Pacienti s pozitívnym H. pylori
boli zaradení do štúdie. Dvadsať endoskopické biopsia (kardia, n = 9 a corpus, n = 11) s histologické dôkazov črevnej metaplázia boli študované.
Imunohistochemické štúdie
Jedna tkanivo blok bol vybraný pre každý prípad. Bloky boli narezané na 5 um sekcií. Sklíčka bola deparafinizovány a rehydratuje cez odstupňovaných alkoholov. Antigén vyhľadávanie bolo vykonané pomocou citrátu v mikrovlnnej rúre ako pre CK7 a CK20. Sklíčka sa vyliahli pri 3% peroxidu vodíka /metanol po dobu 20 minút, aby sa blokovanie nešpecifickej farbenie pozadia v dôsledku endogénnej peroxidázy. Za použitie štandardného streptavidín-biotín peroxidázový komplex metóda (ABC), CK7 (klon OV-TL 12/30, Neomarkers, Fremont, CA, USA) a CK20 (klon K20.4, Neomarkers, Fremont, CA, USA) boli vykonané na všetky sklíčka. Sklíčka sa vyliahli po dobu 30 minút v sekundárnom roztoku protilátky. Diaminobenzidine (DAB) slúžil ako chromagen. Sklíčka bola kontrastne hematoxylínom. Vzorky karcinómu prsníka a karcinómu hrubého čreva boli použité ako pozitívne kontroly pre CK7 a CK20, v danom poradí. Negatívne kontroly boli vyrobené s rovnakým vzorkami nádorov a metódy farbenia vynechaním primárnej protilátky.
Štatistická analýza
Fisherov presný test bol použitý pre analýzu Barrett a žalúdočných vzory. Výsledkom bola považovaná za štatisticky významnú, ak bola hodnota P
menšie alebo rovné alfa-úrovni 0,05.
Výsledky
Celkom 40 pacientov bolo zahrnuté do štúdie. Priemerný vek pacientov bol 46 (rozmedzie 28-77) rokov v skupine A a 50 (rozmedzie 25-73) rokov v skupine B. Pomer mužov a žien bolo 4 až 1 v skupine A, zatiaľ čo to bolo 2 až 3 v skupine B boli klinické a imunohistochemické rysy zhrnuté v tabuľke 1.Table 1 klinickej a imunohistochemické nálezy u pacientov s krátkym segmentu BE a žalúdočné črevné metaplázia

Short-segmentu BE (n = 20)
Žalúdočné črevnej metaplázia (n = 20)
Age (yr) so systémom
28-77
25-73
muž /žena
4/1 2/3
Barrett CK7 /20 patternb (%)
10 NETHRY.cz 0
žalúdka CK7 /20 patternc (%)
5
40
Ostatné vzory (%)
85
60
Range b definície v odkazec definovaný v referenčnom
skupina A
príznakov refluxu boli nájdené v 14 prípadov (70%) s Be. Vysoká frekvencia hiátová hernia (65%) bola nájdená v tejto skupine. Tri prípady ukázali, low-grade dysplázia z celkového počtu. Trinásť prípadov odhalilo neúplnú črevnej metaplázia a 7 prípadov boli kompletné črevné metaplázia pomocou Alcian modrú škvrnu. Predpokladaný Barrett CK7 /20 vzor bol identifikovaný iba dva z 20 prípadov (obrázok 3). Jeden prípad vykazoval očakávaný žalúdočné CK7 /CK20 vzor. Pripomenutie mal premenlivé vzory farbenie; ako žiadny immunostaining (n = 6) alebo ohniskovej immunostaining (n = 11) pre CK7 s fokálnou alebo difúznym immunostaining pre CK20, ktorý nezapadal s predpokladaným Barrett CK7 /20 vzoru (Obrázok 4). Senzitivita, špecificita, falošná pozitivita, a falošná negativita-CK7 /20 farbenie na Barrett vzorka bola 10%, 100%, 0% a 90%, resp. Obrázok 3 a. Difúzny miernu CK7 imunologické povrchných a hlbokých žliaz v BE, × 40, b. Band-like CK20 imunologické povrchového epitelu a povrchné žliaz v BE, × 40
Obrázok 4 a. Neprítomný CK7 imunologické v BE, × 100, nar. Nerovnomerný CK20 imunologické povrchových a hlbokých uzlín BE × 100
Skupina B
jedenástich prípadov ukázala úplnú črevnej metaplázia, zatiaľ čo 9 prípadov ukázali, neúplné črevnej metaplázia pomocou Alcian modrú škvrnu. Osem prípadov vyjadril žalúdočné CK7 /20 vzor (Cardia, n = 5 a corpus, n = 3). Šesť z nich ukázala kompletné a nekompletné 2 žalúdka CK7 /20 vzor. Barrett CK7 /20 vzor nebol pozorovaný u žiadneho pacienta s žalúdočnej črevné metaplázia. Farbenie charakteristiky zvyšných 12 prípadoch nezapadal s predpokladaným žalúdočnej CK7 /20 vzoru; vzhľadom k nepravidelným CK7 a /alebo fokálne CK20 immunopositivity v prípadoch s kompletným črevnej metaplázia a absencia CK7 immunopositivity a /alebo difúzneho CK20 immunopositivity v prípadoch s neúplným črevnej metaplázia. Senzitivita, špecificita, falošná pozitivita, a falošná negativita-CK7 /20 farbenie na Barrett vzorka bola 40%, 100%, 0% a 60%, resp.
Nebol žiadny významný rozdiel pre Barrett vzor medzi obe skupiny (2/20 v skupine A vs.
0/20 v skupine B, P
= 0,487), zatiaľ čo pozorovanie žalúdočné vzor bol v skupine B významne vyššia ako v skupine A (8/20 vs. .
1/20, P
= 0,02).
normálne SCJ ukázalo nerovnomerný immunopositivity pre CK7 bez imunoreaktivity pre CK20, ale normálne žalúdočnej kardio odhalil immunonegativity pre CK7 v kombinácii s nepravidelným immunopositivity pre CK20, ktorá je obmedzená na povrch epitelu.
Diskusia
črevnej metaplázia môže vyvinúť v kardio u pacientov buď s krátkym segmentu rovná alebo karditída predovšetkým spôsobené H. pylori
. Rozdiel medzi týmito dvoma entitami, je dôležité, pretože je etiológie a riziko vzniku adenokarcinóm sú rôzne [7]. BE sa predpokladá, že je spôsobená GERD a spojená so zvýšeným rizikom adenokarcinómu pažeráka [1, 2, 4]. Mikroskopicky, BE môže byť definovaný ako nahradenie pažeráka dlaždicového epitelu u špecializovaného metaplastického (intestinalized) cylindrického epitelu. Ostatné typy sú epitelové junkční typ a pozadia typ epitelu. Diagnóza BE vyžaduje potvrdenie biopsia črevnej metaplázia s Alcian blue pH 2,5 pozitívnych pohárikových buniek v Okrem typických endoskopických nálezov. Presná úroveň SCJ, proximálna aspekt žalúdočných záhybov, a lineárne orientovaná slizničné cievy v distálnom pažeráku a EGJ by mali byť určené [13]. SCJ zvyčajne zodpovedá proximálnemu okraju lineárnych žalúdočných záhybov, čo znamená EGJ. Malých ciev orientované rovnobežne s pozdĺžnou osou pažeráka zmizne pri normálne nachádza SCJ. Avšak, detekcia abnormálne predĺženie týchto lodí pod SCJ a nad proximálnym okrajom žalúdočných záhybov je dôkazom prítomnosti cylindrického epitelu v distálnom pažeráku [14].
Charakteristické BE od iných subjektov, ktoré môže viesť k podobným histopatologickým funkcia je prvoradá. Kvôli žiadna absolútna histologických kritérií pre diagnostiku Barrett sliznicu doteraz nebola stanovená, nedávne štúdie [8-11, 15-19] závisieť predovšetkým na vzoroch niektorých cytokeratinových podskupín, a to najmä dva odlišné vzory CK7 /20 farbenie. Cytokeratiny sú vysoko konzervované a polypeptidy predstavujú skupinu cytoskeletálnych štruktúrnych proteínov prítomných vo všetkých epitelu. Existuje aspoň 20 odlišných foriem cytokeratinům v epitelových bunkách a variabilný vzory expresie v závislosti od typu, umiestnenia a diferenciáciu epitelu [20]. CK7, v podstate nie je exprimovaný v normálnom epitelu gastrointestinálneho traktu, pričom CK20 sa vyjadruje v črevného epitelu, žalúdočné foveolární epitelu a endokrinných buniek v horných častiach pyloru žliaz. Barrett CK7 /20 vzor bol prvýkrát definovaný Ormsby et al. [8] ako farbenie povrchné epitelu pre CK20 a farbenie ako povrchné a hlboké metaplastického epitelu pre CK7
. Určený žalúdočné CK7 /20 vzor bol rozdelený do dvoch vzorov, pokiaľ ide o typ črevnej metaplázia (neúplné /úplný) od rovnakých autorov. Podľa ich návrhu, nerovnomerný CK7 výraz s premennou zapojením hlbokých žliaz bol videný v neúplnom žalúdočné črevnej metaplázia, zatiaľ čo silný CK20 výraz v povrchných a hlbokých žliaz s absenciou CK7 expresie bol pozorovaný v úplnom žalúdočné črevnej metaplázia. V tejto priekopníckej štúdii Barrett CK7 /20 vzor bol vysoko citlivé a špecifické, kedy v porovnaní s pacientmi s žalúdočnými črevnej metaplázia. Avšak, H. pylori
stav prípadov nebolo spomenuté. Štúdia Glickman et al
[9] a Jovanovic et al.
[15] potvrdila nálezy Ormsby v 91% a 94% z ich prípadov s dlhým segmentu BE, resp. Na druhú stranu, štúdie od niektorých iných výskumníkov neboli schopné podporovať zistenie Ormsby je; navrhovaný Barrett CK7 /20 vzor bol nájdený u 54% pacientov s dlhými segmentu BE Mohamed et al.
[16], a iba 39% pacientov s dlhodobými segmentu BE podľa El-Zimaity et al.
[17].
Ormsby et al.
[11] neskôr vyhodnotil užitočnosť CK7 /20 vzorov v krátkom úseku BE v inej štúdii a zistili, že bol "diagnostické" Barrett CK7 /20 vzor prítomný vo 82 % pacientov s krátkym segmentu BE. Aj keď Mohammed a kol.
[16] zistilo takmer rovnaké percento (81%), pre krátky segmentu nastať prípady, s Ormsby et al.
[11], zistili, že rovnaký vzor v 30,7% pacientov s črevnej metaplázia v kardio a ďalšie zaujímavé u 55% biopsiou, ktoré mali buď normálne alebo zapálenú žalúdočnú sliznicu, bez črevnej metaplázia.
v tejto štúdii, 10% pacientov s krátkou segmentu rovná ukázala očakávaný CK7 /20 vzor a 40 % pacientov s žalúdočným črevnej metaplázia ukázala očakávaný žalúdočné CK7 /20 vzor s príslušnou kompletné alebo nekompletné črevnej metaplázia. Citlivosť Barrett CK7 /20 vzorom bola veľmi nízka (10%) v skupine BE aj napriek svojej vysokej špecificitou (100%). Citlivosť žalúdočné CK7 /20 vzor bol tiež nízky (40%) v žalúdočnej črevné metaplázia skupinu, aj keď špecificita bola vysoká (100%) v tejto skupine rovnako. Žalúdočné CK7 /20 vzorka bol v žalúdku črevnej metaplázia skupiny významne vyššia ako v skupine BE (P
= 0,02), zatiaľ čo Barrett CK7 /20 vzor sa významne líšia medzi týmito dvoma skupinami (P = 0,487
). Na základe týchto výsledkov, použiť dva odlišné vzorce CK7 /20 farbenie nemohli byť prijaté ako metóda spoľahlivá v rozlišovaní short-segment, BE od žalúdka črevnej metaplázia, pretože oba modely majú veľmi nízku citlivosť a veľmi vysoké hodnoty falošne negativita.
v Couvelard štúdii [10] 31% pacientov a v Ormsby študijného 15% pacientov s krátkymi segmentu byť spojené s Barrett CK7 /20 vzor mal H. pylori
infekciu. Hoci percento pozitívneho H. pylori
prípadov u pacientov s krátkom úseku byť spojená s /20 vzoru Barrett CK7 nebol uvedený v Mohamedovej štúdii [16], mal 6% pacientov H. pylori
infekcie s krátkym segmentu BE. Vzhľadom k tomu, črevná metaplázia možno vidieť ako v H. pylori infekcie stroje a BE, kombinácia týchto subjektov, by nemali byť z interpretovaný pre hodnotenie užitočnosť cytokeratin podskupín. Vylúčili sme H. pylori
pozitívne prípady, aj keď to bola diagnostikovaná ako BE. Preto rozdiely medzi našej štúdii a bolo skôr oznámené výsledky mohli byť kvôli tejto prísne rozlišovanie H. pylori
pozitívnych prípadov bolo v tejto štúdii. Rozdiely v biopsiu protokolov medzi predchádzajúcimi štúdiami a tejto štúdie (počet, veľkosť alebo časť vzorky, anterograde alebo retroflexed prístup) by mohol byť ďalší dôvod k rozdielnym výsledkom. Pre identifikáciu by mala byť použitá presné umiestnenie anterograde prístupu kardio. Pokiaľ však ide o normálny srdcový epitelu, jeho existencia zostáva stále nejasné, pretože výsledky rôznych štúdií sú protichodné [21 až 23]. Kým dve štúdie naznačujú, že normálny srdcový epitel predstavuje formu metaplastického epitelu sekundárneho na gastro reflux [21, 22], ďalšie štúdie uvádza Kilgore et al naznačuje, že srdcové sliznice existuje ako natívny štruktúry [23]. Ďalšie štúdie môžu poskytnúť informáciu o srdcovej sliznicu, najmä jej "vzťah zmien refluxu a byť.
Závery
Na základe našich výsledkov, sme menej istí použitie navrhovaných CK7 /20 vzory pre rozlišovanie short-segmentu BE od žalúdka črevnej metaplázia. Je dôležité si uvedomiť, endoskopické rysy, ktoré napomáhajú diagnózu BE pre endoscopists, pretože histológie črevnú metaplázia v Cardia vzťahujúce sa k inej etiológie a Barrettova pažeráka je totožný. Navrhujeme, aby definícia BE by malo byť založené na klinike endoskopickej a histologické nálezy skôr než vzor CK7 /20 immunostaining
Zoznam skratiek
BE :.
Barrett pažerák

GERD:
Gastro-refluxná choroba
H. pylori
:
Helicobacter pylori

CK7:
cytokeratin 7
CK20:
cytokeratin 20
SCJ:
Squamata-sloupcovitý Junction
EGJ:
esofago-Žalúdočné Junction
H & E:
hematoxylín a eozín

PAS:
Periodic Acid Schiff
ABC:
Štandardné Streptavidin-biotín peroxidázy Complex

DAB:
Diaminobenzidine
ġej:
pažeráka Junction
vyhlásenie
Autori ďalej len "pôvodné predložený súbory obrazy
Nižšie sú uvedené odkazy na pôvodných predložených súborov autorov pre obrazy. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 12907_2003_16_MOESM2_ESM.jpeg autorského 12907_2003_16_MOESM1_ESM.jpeg autorov pôvodného súboru na obrázku 2 12907_2003_16_MOESM3_ESM.jpeg autorského pôvodného súboru pre Obrázok 3 12907_2003_16_MOESM4_ESM.jpeg autorského pôvodného súboru na Obrázok 4 protichodnými záujmami
Žiadne deklarovaný.

Other Languages