La utilidad de citoqueratinas 7 y 20 (/20 CK7) inmunohistoquímica en la distinción de corto segmento de esófago de Barrett de metaplasia intestinal gástrica: ¿Es fiable

? La utilidad de citoqueratinas 7 y 20 (20 CK7 /) inmunohistoquímica en la distinción de corto segmento de esófago de Barrett de metaplasia intestinal gástrica: ¿Es fiable
Resumen Antecedentes
Francia El propósito del presente estudio inmunohistoquímico correlativa? fue evaluar la utilidad de citoqueratina (CK7 y CK20) expresión en el diagnóstico de corto segmento de esófago de Barrett, sobre todo su eficacia en la diferenciación de la mucosa de Barrett metaplasia intestinal del cardias gástrico y corpus.
Métodos
Dos grupos de especímenes de biopsia endoscópica se examinaron, incluyendo 20 especímenes de biopsia endoscópica de corto segmento de esófago de Barrett (Grupo A) e igual número exhibiendo Helicobacter pylori servicios asociados metaplasia intestinal del cardias gástrico y corpus (Grupo B). Todos fueron investigados por inmunohistoquímica utilizando el método ABC estándar para CK7 y CK20 expresión. Se utilizó la prueba exacta de Fisher para el análisis estadístico de Barrett CK7 /20 y CK7 gástrica /20 patrones entre los grupos
Resultados
El patrón esperado de la reactividad en mucosa de Barrett (CK7:. positividad fuerte difusa en las glándulas superficiales y profundas; CK20: positividad en el epitelio superficial y glándulas superficiales) se observó en 2 casos de muestras del Grupo a. fue visto:;: El patrón gástrica esperado (inmunotinción irregular de las glándulas superficiales y profundas en incompleta metaplasia intestinal /ausencia de CK7 inmunoreactividad con una fuerte tinción CK20 en las glándulas superficiales y profundas en la metaplasia intestinal completa CK7 CK20 inmunotinción irregular con afectación variable de glándulas profundas) en 8 casos de especímenes Grupo B. Los respectivos valores de sensibilidad y de falsa negatividad de CK7 /20 de tinción para el patrón de Barrett en el grupo A fueron de 10% y 90%, respectivamente. Estos valores para el patrón gástrica en el Grupo B fueron 40% y 60%, respectivamente. Los valores de especificidad y falsos positividad de ambos patrones fueron mismo (100% y 0%, respectivamente). No hubo diferencia estadísticamente significativa para el patrón de Barrett entre los dos grupos (P = 0,487
), mientras que la observación del patrón de gástrico fue significativamente mayor en el grupo B que en el Grupo A (P
= 0,02).
conclusiones
se concluye que estas hipótesis y recientemente aplicaron los criterios diagnósticos que implican CK7 y CK20 inmunoreactividad no son fiables para distinguir a corto segmento de esófago de Barrett de metaplasia intestinal como se ve en cardias gástrico y corpus.
Antecedentes
esófago de Barrett ( BE) se asocia con un mayor riesgo de adenocarcinoma de esófago, un tumor maligno que ha tenido un rápido aumento de la incidencia recientemente [1-3]. La etiología de la BE es desconocida, pero la predisposición genética con los cambios ulcerosa de la enfermedad por reflujo gastroesofágico (ERGE) podría ser responsable [4].
Sea se debe sospechar en la endoscopia cuando se sustituye el, epitelio escamoso de aspecto blanquecino normales por una roja, la mucosa de apariencia aterciopelada en el esófago distal. El diagnóstico fiable de BE es difícil relacionada a errores de muestreo debido a la determinación de la ubicación exacta de la unión gastroesofágica, tales como en la hernia de hiato. surgen dificultades diagnósticas cuando las ofertas endoscopista con el corto segmento BE. Unión, se describieron los tipos (intestinales) fúndica y especializados de epitelio glandular de la definición de la SER por Paull et al.
[5]. Pero se informó recientemente de que la detección de este último es un criterio fiable para el diagnóstico de BE [4, 6]. Helicobacter pylori gratis (H. pylori
) podría estar asociado con la carditis y metaplasia intestinal del cardias [7]. Por lo tanto, metaplasia intestinal que implican el cardia relacionada con Helicobacter
gastritis pueden ser histológicamente indistinguible de metaplasia intestinal del esófago distal.
Se ha sugerido que los subconjuntos de citoqueratina 7 y 20 (CK7 y CK20) podrían ser útiles para distinguir tanto a largo y corto segmento de ser de metaplasia intestinal del estómago proximal [8-11]. El propósito de este estudio fue evaluar la citoqueratina (CK7 y CK20) expresión en el diagnóstico de corto segmento de esófago de Barrett, en particular su utilidad en el diagnóstico diferencial de la mucosa de Barrett desde la metaplasia intestinal del cardias gástrico y corpus.
Métodos
especímenes de endoscopia de los pacientes remitidos por el Instituto de Gastroenterología de la Universidad de Mármara fueron revisados ​​a partir de los archivos del Departamento de Patología de la misma universidad entre 1998 y 2002. al menos 4 biopsias fueron tomadas de unión escamoso-columnar irregular (SCJ) con penínsulas o lenguas de epitelio columnar y las islas de epitelio escamoso o columnar para cada caso. Cuando se observó más de una península o de la lengua del epitelio columnar en el esófago distal por vía endoscópica, 4 biopsias se tomaron de cada península y que fueron enviados a un examen histopatológico en tubos Eppendorph separadas. También la biopsia se realizó pequeñas penínsulas con vasos lineales distal a la SCJ y cualquier alteración focal.
esofágica y gástrica se tomaron biopsias anterógrada o retrógrada con retroflexión del endoscopio cuando era necesario. El enfoque retroflexión fue preferido para el muestreo de cardias. Los casos que fueron diagnosticados histopatológicamente como a corto segmento de SER se incluyeron en el estudio. A corto segmento de SER se definió por vía endoscópica en forma de lenguas de menos de 3 cm de longitud por encima de la unión esófago-gástrica (UEG), con su parecido con el intestino delgado que tiene microvellosidades bien formados y metaplasia intestinal, ya sea con hematoxilina y eosina (H & E) (figura 1) o células caliciformes positivas azul Alcian pH 2,5 (Figura 2) en el examen microscópico. La Figura 1 muestra la sección de la salida gastroesofágico estar con células caliciformes, H & E, x 40
Figura 2 tinción con azul intenso de las células caliciformes con pH 2,5 con azul Alcian /PAS, × 40 Francia El grupo de estudio consistió en 20 pacientes con corto segmento BE (Grupo A) y el mismo número de pacientes con metaplasia intestinal gástrica (cardias y el corpus) acompañado por H. pylori
gastritis (Grupo B). Las muestras de biopsia que se obtuvieron dentro de 5 mm de distancia por debajo de la UEG fueron considerados como mucosa del cardias.
Las muestras fueron fijadas en 10% formalina tamponada y embebidos en parafina. Las secciones seriadas se cortaron de cada muestra. Todas las secciones se tiñeron con la rutina H & E mancha. Schiff ácido periódico (PAS), Alcian pH 2,5 y azul Alcian pH 0,5 azul se utilizaron para identificar mucina neutra, sialomucin y sulphomucin, respectivamente. Tinción de Giemsa se utilizó para revelar H. pylori
. Se excluyeron los casos sin metaplasia de células caliciformes detectada por tinción con azul de Alcian tanto para el Grupo A y Grupo BH pylori
fue confirmado con la tinción de Giemsa para los casos en el grupo B.
endoscópicos biopsias fueron agrupados como completo (tipo I) o incompletos (tipo II) metaplasia intestinal de acuerdo con los criterios definidos previamente [12]. La ordenación propuesta Barrett CK7 /CK20 (CK7: positividad fuerte difusa en las glándulas superficiales y profundas; CK20: positividad en el epitelio superficial y glándulas superficiales) y el patrón gástrica CK7 /CK20 (CK7: inmunotinción irregular con afectación variable de glándulas profundas; CK20: irregular inmunotinción de las glándulas superficiales y profundas en la metaplasia intestinal incompleta /ausencia de CK7 inmunoreactividad con una fuerte tinción CK20 en las glándulas superficiales y profundas en la metaplasia intestinal completa) fueron evaluados para todos los casos. Seis biopsias de control a posteriori se constituyeron a partir de pacientes cuyas biopsias mostraron SCJ normal (n = 3) y cardias normal (n = 3) microscópicamente.
Grupo A
Los datos clínicos como la edad, el sexo, los síntomas de reflujo gastro-esofágico, y hallazgos endoscópicos y corto segmento de mucosa de Barrett se obtuvieron de cada caso. Los pacientes con estar dentro de los últimos 3 cm de esófago distal se incluyeron al grupo A. Los pacientes con H. pylori positivo
fueron excluidos del estudio.
Grupo B
Los datos clínicos como la edad, el sexo, la gastroenteritis -esophageal síntomas de reflujo, hallazgos endoscópicos y H. pylori
estado se obtuvieron de cada caso. Los pacientes con H. pylori positivo
se incluyeron en el estudio. Se estudiaron veinte biopsias endoscópicas (cardias, n = 9 y corpus, n = 11) con evidencia histológica de la metaplasia intestinal.
estudios inmunohistoquímicos
se seleccionó un bloque de tejido para cada caso. Los bloques se cortaron a 5 micras secciones. Las láminas fueron deparaffinized y rehidratada a través alcoholes graduados. La recuperación del antígeno se llevó a cabo mediante el uso de tampón de citrato en el microondas tanto para CK7 y CK20. Los portaobjetos se incubaron en 3% de peróxido de hidrógeno /metanol durante 20 min para bloquear la tinción de fondo no específica debido a la peroxidasa endógena. Usando el complejo estreptavidina-peroxidasa estándar biotina método (ABC), CK7 (clon OV-TL 12/30, Neomarkers, Fremont, CA, EE.UU.) y CK20 (K20.4 clon, Neomarkers, Fremont, CA, EE.UU.) se realizaron en todas las diapositivas. Los portaobjetos se incubaron durante 30 minutos en solución de anticuerpo secundario. Diaminobencidina (DAB) sirvió como el cromógeno. Las diapositivas se counterstained con hematoxilina. Las muestras de carcinoma de mama y carcinoma de colon se utilizaron como controles positivos para CK7 y CK20, respectivamente. Los controles negativos fueron producidos con las mismas muestras de tumor y métodos de tinción por omisión de los anticuerpos primarios análisis estadístico.

se utilizó la prueba exacta de Fisher para el análisis de Barrett y patrones gástricos. Un resultado se consideró estadísticamente significativa si el valor de p
era menor o igual a un nivel alfa de 0,05.
: Resultados de la En total, 40 pacientes fueron incluidos en el estudio. La edad media de los pacientes fue de 46 (rango, 28-77 años) en el grupo A y 50 (intervalo, 25-73) años en el Grupo B. La razón hombre-mujer fue de 4 a 1 en el Grupo A, mientras que fue de 2 a 3 en el Grupo B. Las características clínicas e inmunohistoquímicas se resumen en la Tabla 1 1.Table hallazgos clínicos e inmunohistoquímicos en pacientes con corto segmento BE y metaplasia intestinal gástrica

corto segmento BE (n = 20) guía empresas gástrico metaplasia intestinal (n = 20)
Edad (años) a
28-77 25-73

Hombre /Mujer
4/1 2/3

Barrett CK7 /20 patternb (%)
10
0
gástrico CK7 /20 patternc (%) página 5
40
Otros patrones (%)
85
60
se encontró un rango b Definido en referenciac definidos, en función
Grupo a
síntomas de reflujo en 14 casos (70%) con EB. Alta frecuencia de hernia hiatal (65%) se encontró en este grupo. Tres casos mostraron displasia de bajo grado de total. Trece casos revelaron metaplasia intestinal incompleta y 7 casos eran metaplasia intestinal completa mediante el uso de la mancha azul Alcian. El patrón anticipado Barrett CK7 /20 se identificó sólo 2 de los 20 casos (Figura 3). Uno de los casos mostró CK7 anticipa gástrica /patrón CK20. El recordatorio tenía patrones de tinción variables; como ninguna inmunotinción (n = 6) o inmunotinción focal (n = 11) para CK7 con inmunotinción focal o difuso de CK20, que no encaja con la esperada Barrett CK7 /20 patrón (Figura 4). La sensibilidad, la especificidad, la falsa positividad, y la falsa negatividad de CK7 /20 de tinción para el patrón de Barrett eran 10%, 100%, 0%, y 90%, respectivamente. Figura 3 a. Difusa inmunotinción CK7 moderado de glándulas superficiales y profundas en BE, × 40, b. Similar a una banda inmunotinción CK20 del epitelio superficial y las glándulas superficiales en BE, × 40
Figura 4 a. En ausencia de inmunotinción CK7 en BE, × 100, b. Nubes y CK20 inmunotinción de las glándulas superficiales y profundas en BE, × 100
Grupo B Opiniones Once casos mostraron metaplasia intestinal completa, mientras que 9 casos mostraron metaplasia intestinal incompleta mediante tinción con azul Alcian. Ocho casos expresaron la CK7 /20 patrón gástrica (cardias, n = 5 y corpus, n = 3). Seis de ellos mostraron completa y 2 incompleta gástrica CK7 /20 patrón. Barrett CK7 /20 patrón no se observó en cualquier paciente con metaplasia intestinal gástrica. Las características de tinción de los 12 casos restantes no se ajustaban a la CK7 gástrica /20 patrón anticipado; debido a la CK7 irregular y /o focal immunopositivity CK20 en los casos con metaplasia intestinal completa y ausencia de CK7 immunopositivity y /o difusa immunopositivity CK20 en los casos con metaplasia intestinal incompleta. La sensibilidad, la especificidad, la falsa positividad, y la falsa negatividad de CK7 /20 de tinción para el patrón de Barrett eran 40%, 100%, 0%, y 60%, respectivamente.
No hubo diferencia significativa para el patrón de Barrett entre el dos grupos (2/20 en el grupo a vs.
0/20 en el grupo B, P
= 0,487), mientras que la observación del patrón de gástrico fue significativamente mayor en el grupo B que en el Grupo a (8/20 vs .
1/20, P
= 0,02).
normal SCJ mostró immunopositivity irregular para CK7 sin ninguna inmunoreactividad para CK20, pero cardias gástrico normal, reveló immunonegativity para CK7 combinado con immunopositivity irregular para CK20, que se limita a la superficie del epitelio.
Discusión
metaplasia intestinal se puede desarrollar en el cardias en pacientes con cualquiera de segmento corto BE o carditis especialmente causada por H. pylori
. Distinción entre estas dos entidades es importante ya que la etiología y el riesgo de desarrollar adenocarcinoma son diferentes [7]. SER se cree que es causada por la ERGE y asociado con un mayor riesgo de adenocarcinoma de esófago [1, 2, 4]. Microscópicamente, ser puede ser definido como el reemplazo del epitelio escamoso esofágico por metaplásico (intestinalized) epitelio columnar especializado. Otros tipos epiteliales son el tipo de unión y tipo del fondo uterino de los epitelios. El diagnóstico de BE requiere confirmación biopsia de metaplasia intestinal con células caliciformes positivas azul Alcian pH 2,5, además de hallazgos endoscópicos típicos. El nivel exacto de la SCJ, aspecto proximal de los pliegues gástricos, y linealmente orientada vasos de la mucosa en el esófago distal y la UEG debe ser identificado [13]. SCJ corresponde normalmente al margen proximal de los pliegues gástricos lineales que significa la UEG. Los pequeños vasos orientado paralelo al eje largo del esófago desaparecen en la SCJ situado normalmente. Sin embargo, la detección de la extensión anormal de estos vasos por debajo de la SCJ y por encima del margen proximal de los pliegues gástricos es una evidencia de la presencia de epitelio columnar en el esófago distal [14].
Distinción ser de otras entidades que pueden hacer histopatológico similares características es de suma importancia. Debido a criterios histológicos no hay absolutos para el diagnóstico de la mucosa de Barrett se ha establecido aún, estudios recientes [8-11, 15-19] dependen principalmente de los patrones de algunos subconjuntos de citoqueratina, especialmente los dos patrones distintos de CK7 /20 tinción. Las citoqueratinas son altamente conservados polipéptidos y representan un grupo de proteínas estructurales del citoesqueleto presentes en todos los epitelios. Hay por lo menos 20 formas distintas de citoqueratinas en las células epiteliales y los patrones variables de expresión dependiendo del tipo, la ubicación y la diferenciación del epitelio [20]. CK7, esencialmente, no se expresa en el epitelio normal del tracto gastrointestinal, mientras que CK20 se expresa en el epitelio intestinal, epitelio foveolar gástrico, y células endocrinas en las partes superiores de las glándulas pilórico. Barrett CK7 /20 patrón se definió por primera vez por Ormsby et al.
[8] como la tinción del epitelio superficial para CK20 y tinción de ambos epitelio metaplásico superficial y profunda para CK7. El gástrica CK7 /20 forma designada se agrupó en dos patrones con respecto al tipo de la metaplasia intestinal (incompleto /completo) por los mismos autores. De acuerdo con su sugerencia, expresión CK7 irregular con afectación variable de glándulas profundas se observó en incompleta metaplasia intestinal gástrica, mientras que la expresión fuerte CK20 en las glándulas superficiales y profundos con la ausencia de expresión CK7 se observó en metaplasia intestinal gástrica completa. En este estudio pionero, Barrett CK7 /20 patrón fue muy sensible y específica en comparación con los casos con metaplasia intestinal gástrica. Sin embargo, no fue mencionado por H. pylori
estado de los casos. Los estudios realizados por Glickman et al
[9] y Jovanovic et al.
[15] confirmó los hallazgos de Ormsby en el 91% y el 94% de sus casos con largo segmento BE, respectivamente. Por otra parte, los estudios realizados por otros investigadores no han sido capaces de apoyar los hallazgos de Ormsby; la propuesta de modelo de Barrett CK7 /20 se encontró en el 54% de los pacientes con largo segmento BE por Mohammed et al.
[16] y sólo el 39% de los pacientes con largo segmento de SER de El-Zimaity et al.
[17].
Ormsby et al.
[11] más tarde se evaluó la utilidad de CK7 /20 patrones en el corto segmento de estar en otro estudio y encontró que el "diagnóstico" Barrett CK7 /20 patrón estaba presente en el 82 % de pacientes con corto segmento BE. Aunque Mohammed et al.
[16] encontró casi el mismo porcentaje (81%) para el corto segmento BE casos con Ormsby et al.
[11], encontraron el mismo patrón en el 30,7% de los pacientes con metaplasia intestinal en el cardias y más interesante en el 55% de las biopsias que tenían ya sea mucosa gástrica normal o inflamado sin metaplasia intestinal.
en el presente estudio, el 10% de los pacientes con segmento corto, se ha demostrado la CK7 anticipada /20 y 40 patrón % de los pacientes con metaplasia intestinal gástrica mostró el esperado gástrica CK7 20 patrón /con metaplasia intestinal completa o incompleta apropiado. La sensibilidad de Barrett CK7 /20 patrón fue muy baja (10%) en el grupo de EB a pesar de su alta especificidad (100%). La sensibilidad de gástrico patrón CK7 /20 también fue baja (40%) en el grupo metaplasia intestinal gástrica, aunque la especificidad fue alta (100%) en este grupo también. Gástrica patrón CK7 /20 fue significativamente mayor en el grupo metaplasia intestinal gástrica que en el grupo BE (P = 0,02
), mientras que Barrett CK7 /20 patrón no difirió significativamente entre los dos grupos (P = 0,487
). Sobre la base de estos resultados, el uso de dos patrones distintos de CK7 /20 tinción no podía ser aceptado como un método fiable para diferenciar a corto segmento BE de metaplasia intestinal gástrica, ya que ambos modelos tienen valores muy altos falsa negatividad muy baja sensibilidad y.
en el estudio de la Couvelard [10] el 31% de los pacientes y en el estudio de la Ormsby 15% de los pacientes con corto segmento de estar asociados con Barrett CK7 /20 patrón de la infección por H. pylori tenían
. Aunque el porcentaje de los terminales positivo H. pylori
casos en pacientes con corto segmento de estar asociado con un /20 patrón de Barrett CK7 no fue mencionado en el estudio de la Mohammed [16], el 6% de los pacientes tenían H. pylori
la infección con el corto segmento BE. Desde metaplasia intestinal se pueden ver tanto en H. pylori
infección y SER, combinación de estas entidades no debería ser interpretado de la para la evaluación de la utilidad de los subconjuntos de citoqueratina. Se excluyó el H. pylori
casos positivos, aún si no se diagnosticó como BE. Resultados Por lo tanto, las diferencias entre nuestro estudio y previamente informados puede haber sido debido a la estricta distinción de H. pylori
casos ser positivo en el presente estudio. Las diferencias en los protocolos de biopsia entre los estudios anteriores y el presente estudio (número, tamaño o el sitio de la muestra, anterógrada o de aproximación retroflexión) podrían haber sido otra de las razones para las diferencias en los resultados. Para identificar la ubicación exacta de la aproximación anterógrada cardias se debe utilizar. Sin embargo, en relación con el epitelio cardíaco normal, su existencia sigue siendo todavía poco clara, ya que los resultados de diferentes estudios son contradictorios [21-23]. Mientras que los dos estudios sugieren que el epitelio cardíaco normal representa una forma de epitelio metaplásico secundaria a reflujo gastroesofágico [21, 22], otro estudio publicado por Kilgore et al sugiere que mucosa cardíaco existe como una estructura nativa [23]. Otros estudios pueden proporcionar información sobre la mucosa del cardias, especialmente su "relación con los cambios de reflujo y BE.
Conclusiones
Sobre la base de nuestros resultados, estamos menos seguros de la utilización de las propuestas 20 patrones /CK7 para diferenciar a corto segmento BE de metaplasia intestinal gástrica. Es importante reconocer las características endoscópicas que ayudan al diagnóstico de BE para endoscopistas, ya que la histología de metaplasia intestinal en cardia relacionada con otras etiologías y esófago de Barrett es idéntico. Sugerimos que la definición de BE debe basarse en la clínica, endoscópica, y los hallazgos histológicos más que el patrón de CK7 /20 inmunotinción
Lista de abreviaturas
BE: Esófago de Barrett.


ERGE:
la enfermedad de reflujo gastro-esofágico
H. pylori
: Helicobacter pylori

CK7:
citoqueratina 7
CK20:
citoqueratina 20
SCJ:
escamocolumnar Junction
UEG:
esófago-gástrica Junction
H & e:
hematoxilina y eosina

PAS:
ácido periódico de Schiff
ABC:
estándar estreptavidina-biotina peroxidasa

DAB:
diaminobencidina
UGE:
gastro-esofágico Junction

Declaraciones
Autores "original expediente sometido a imágenes
a continuación se presentan los enlaces a los archivos originales presentados los autores de las imágenes. 'archivo original para la figura 1 12907_2003_16_MOESM2_ESM.jpeg autores 12907_2003_16_MOESM1_ESM.jpeg Autores archivo original para la figura 2 12907_2003_16_MOESM3_ESM.jpeg autores archivo original para la figura 3 12907_2003_16_MOESM4_ESM.jpeg autores archivo original de la figura 4 Conflicto de intereses
Ninguno declarado.

• Disminución de la expresión de prenil difosfato sintasa subunidad 2 se correlaciona con una menor supervivencia de los pacientes con cancer
• modificación Helicobacter pylori lipopolisacárido, la expresión del antígeno Lewis, y la colonización gástrica son el colesterol-dependent