L'utilità di citocheratine 7 e 20 (/20 CK7) immunoistochimica nella distinzione di breve segmento di esofago di Barrett da metaplasia intestinale gastrica: E 'affidabile

? L'utilità di citocheratine 7 e 20 (CK7 /20) immunoistochimica nella distinzione di breve segmento di esofago di Barrett da metaplasia intestinale gastrica: E 'affidabile
Abstract
sfondo
Lo scopo del presente studio immunoistochimico correlativa? era quello di valutare l'utilità di citocheratina (CK7 e CK20) espressione nella diagnosi di breve segmento di esofago di Barrett, in particolare la sua efficacia nel differenziare Barrett mucosa dalla metaplasia intestinale del cardias e corpus.
Metodi
Due gruppi di campioni di biopsia endoscopica sono stati esaminati, tra cui 20 campioni di biopsia endoscopica di breve segmento di esofago di Barrett (Gruppo A) e pari numero esibendo Helicobacter pylori associata
intestinale metaplasia del cardias e corpus (Gruppo B). Tutti sono stati indagati mediante immunoistochimica utilizzando il metodo standard per ABC CK7 e di espressione CK20. test esatto di Fisher è stato utilizzato per l'analisi statistica di Barrett CK7 /20 e CK7 gastrico /20 modelli tra i gruppi
Risultati
Il modello previsto di reattività a Barrett mucose (CK7:. positività forte diffusa nelle ghiandole superficiali e profonde; CK20: positività in epitelio di superficie e ghiandole superficiali) è stata osservata in 2 casi di Gruppo a esemplari. Il modello gastrica atteso (CK7: immunostaining di leopardo con coinvolgimento variabile di ghiandole profonde; CK20: immunocolorazione chiazze di ghiandole superficiali e profonde in incompleta intestinale metaplasia /assenza di CK7 immunoreattività con una forte colorazione CK20 nelle ghiandole superficiali e profonde in metaplasia intestinale completo) è stato visto in 8 casi di esemplari Gruppo B. I rispettivi valori di sensibilità e falso-negatività del CK7 /20 colorazione per modello Barrett nel gruppo A sono stati il ​​10% e il 90%, rispettivamente. Questi valori per pattern gastrica nel Gruppo B erano 40% e 60% rispettivamente. I valori di specificità e falso-positività di entrambi i modelli erano stessi (100% e 0%, rispettivamente). Non vi era alcuna differenza statisticamente significativa per il modello di Barrett tra i due gruppi (P = 0,487
), mentre l'osservazione di modello gastrica era significativamente più alta nel gruppo B rispetto al gruppo A (P
= 0.02).
Conclusioni
abbiamo concluso che questi ipotizzato e recentemente applicati criteri diagnostici coinvolgendo CK7 e CK20 immunoreattività non sono affidabili nel distinguere breve segmento di esofago di Barrett da metaplasia intestinale come si vede nella cardias e corpus.
Sfondo
esofago di Barrett ( BE) è associato ad un aumentato rischio di adenocarcinoma esofageo, un tumore maligno che ha avuto una rapida crescente incidenza di recente [1-3]. L'eziologia della BE è sconosciuta, ma la predisposizione genetica con i cambiamenti ulcerosa da malattia da reflusso gastro-esofageo (GERD) potrebbe essere responsabile [4].
ESSERE dovrebbe essere sospettata in endoscopia, quando il normale, epitelio squamoso-biancastro che appare è sostituito da una rossa, mucosa vellutata appare nell'esofago distale. La diagnosi affidabile di BE è difficile correlati a errori di campionamento a causa di determinazione della posizione esatta della giunzione gastro-esofageo, come in ernia iatale. difficoltà diagnostiche sorgono quando le offerte endoscopista con il corto-segmento BE. Giunzionale, fundica e specializzate (intestinale) tipi di epitelio ghiandolare sono stati descritti per la definizione di BE da Paull et al.
[5]. Ma è stato recentemente riportato che l'individuazione di quest'ultimo è un criterio affidabile per la diagnosi di BE [4, 6]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) potrebbe essere associato con cardite e metaplasia intestinale del cardias [7]. Pertanto, metaplasia intestinale che coinvolgono il cardias relativa a Helicobacter
gastrite possono essere istologicamente indistinguibile da metaplasia intestinale dell'esofago distale.
E 'stato suggerito che sottoinsiemi citocheratina 7 e 20 (CK7 e CK20) potrebbero essere utili per distinguere il lungo e breve segmento di essere da metaplasia intestinale dello stomaco prossimale [8-11]. Lo scopo di questo studio era di valutare la citocheratina (CK7 e CK20) espressione nella diagnosi di breve segmento di esofago di Barrett, in particolare la sua utilità nella diagnosi differenziale di Barrett mucosa dalla metaplasia intestinale del cardias e corpus.
Metodi
campioni endoscopici dei pazienti di cui da Marmara Istituto universitario di Gastroenterologia sono stati esaminati dai file del Dipartimento di Patologia presso la stessa università tra il 1998 e il 2002. almeno 4 biopsie sono state prese da irregolare giunzione squamo-colonnare (SCJ) con penisole o lingue di epitelio colonnare e le isole di epitelio squamoso o colonnare per ciascun caso. Quando più di una penisola o della lingua di epitelio colonnare nell'esofago distale è stata osservata endoscopicamente, 4 biopsie è stata presa da ciascun penisola e sono stati inviati per l'esame istopatologico in tubi eppendorph separati. Le piccole penisole con vasi lineari distale al SCJ e ogni anomalia focale sono stati anche sottoposti a biopsia.
Esofagea e biopsie gastriche sono state prese anterograda o retrograda con retroflessione dell'endoscopio quando era necessario. L'approccio retroflessa è stato preferito per il campionamento del cardias. I casi che sono stati diagnosticati istopatologico più breve settori siano stati inclusi nello studio. A breve segmento BE è stata definita endoscopicamente come lingue meno di 3 cm di lunghezza al di sopra della giunzione esofago-gastrica (EGJ) con la sua somiglianza con tenue avere microvilli ben formati e metaplasia intestinale o con ematossilina e eosina (H & E) (Figura 1) o cellule caliciformi positive blu pH2.5 Alcian (Figura 2) all'esame microscopico. Figura 1 Sezione da gastro-esofageo che mostra giunzione BE con cellule caliciformi, H & E, × 40
Figura 2 intenso colorazione blu delle cellule calice con Alcian blu pH 2,5 /PAS, × 40
Il gruppo di studio consisteva di 20 i pazienti con breve segmento Be (gruppo A) e il numero uguale di pazienti con metaplasia intestinale gastrica (cardias e corpo) accompagnati da H. pylori
gastrite (Gruppo B). campioni bioptici che sono stati ottenuti a breve distanza a 5 mm sotto il EGJ sono stati considerati come mucosa cardiaco.
I campioni sono stati fissati in formalina 10% tamponata e inclusi in paraffina. Sezioni seriali sono stati tagliati da ogni campione. Tutte le sezioni sono state colorate con routine di H & E macchia. Schiff acido periodico (PAS), Alcian blu pH 2,5 e Alcian blu pH 0,5 sono stati utilizzati per identificare mucina neutro, sialomucin e sulphomucin, rispettivamente. Giemsa è stato utilizzato per rivelare H. pylori
. Abbiamo escluso i casi senza rilevato metaplasia cellulare calice da alcian blu sia per il Gruppo A e Gruppo BH pylori
infezione è stata confermata con Giemsa per i casi in Gruppo B.
endoscopica biopsie sono stati raggruppati come completo (tipo I) o incompleti (tipo II) metaplasia intestinale secondo i criteri precedentemente definiti [12]. Il modello proposto Barrett CK7 /CK20 (CK7: positività forte diffusa nelle ghiandole superficiali e profonde; CK20: positività in epitelio di superficie e ghiandole superficiali) e CK7 /modello CK20 gastrica (CK7: immunostaining di leopardo con coinvolgimento variabile di ghiandole profonde; CK20: Soleggiato immunocolorazione delle ghiandole superficiali e profonde in incompleta intestinale metaplasia /assenza di CK7 immunoreattività con una forte colorazione CK20 nelle ghiandole superficiali e profonde in metaplasia intestinale completa) sono stati valutati per tutti i casi. Sei biopsie di controllo sono stati costituiti in modo retrospettivo dal pazienti il ​​cui biopsie ha mostrato normale SCJ (n = 3) e Cardia normale (n = 3) al microscopio.
Gruppo A
I dati clinici tra cui l'età, il sesso, i sintomi di reflusso gastro-esofageo, e reperti endoscopici e di breve segmento di Barrett mucosa sono stati ottenuti da ogni singolo caso. I pazienti con BE negli ultimi 3 cm di esofago distale sono stati inclusi al gruppo A. I pazienti affetti da H. pylori positiva
sono stati esclusi dallo studio.
Gruppo B
I dati clinici tra cui l'età, il sesso, gastro sintomi di reflusso -esophageal, reperti endoscopici, e H. pylori
stato sono stati ottenuti da ogni singolo caso. I pazienti affetti da H. pylori positiva
sono stati inclusi nello studio. Venti biopsie endoscopiche (cardias, n = 9 e corpus, n = 11) con evidenza istologica di metaplasia intestinale sono state studiate.
Studi di immunoistochimica
Un blocco di tessuto è stato selezionato per ogni singolo caso. I blocchi sono stati tagliati a 5 sezioni micron. I vetrini sono stati deparaffinate e reidratato con alcoli graduati. Antigen recupero è stato eseguito utilizzando tampone citrato in forno a microonde, sia per CK7 e CK20. I vetrini sono stati incubati nel 3% di perossido di idrogeno /metanolo per 20 minuti per bloccare colorazione di fondo aspecifica causata dalla perossidasi endogena. metodo, CK7 utilizzando il complesso perossidasi streptavidina-biotina standard (ABC) (clone OV-TL 12/30, NeoMarkers, Fremont, CA, USA) e CK20 (clone K20.4, NeoMarkers, Fremont, CA, USA) sono stati eseguiti su tutte le diapositive. I vetrini sono stati incubati per 30 minuti in soluzione di anticorpo secondario. Diaminobenzidina (DAB) è servito come il cromogeno. I vetrini sono stati di contrasto con ematossilina. I campioni di carcinoma della mammella e carcinoma del colon sono stati utilizzati come controlli positivi rispettivamente per CK7 e CK20,. I controlli negativi sono stati prodotti con gli stessi campioni tumorali e metodi di colorazione omettendo gli anticorpi primari
. Analisi statistica
test esatto di Fisher è stato utilizzato per l'analisi di Barrett e modelli gastrici. Un risultato è stato
considerato statisticamente significativo se il valore P
era pari o inferiore a un livello alfa 0,05. Risultati
In totale, 40 pazienti sono stati inclusi nello studio. L'età media dei pazienti era di 46 (range 28-77) anni nel Gruppo A e 50 (range 25-73) anni nel Gruppo B. Il rapporto maschi-femmine era di 4-1 nel Gruppo A, mentre era 2 a 3 nel Gruppo B. Le caratteristiche cliniche e di immunoistochimica sono stati riassunti nella tabella 1 1.Table risultati clinici e di immunoistochimica nei pazienti con breve segmento BE e gastrico metaplasia intestinale

a breve segmento BE (n = 20)
gastrico metaplasia intestinale (n = 20)
Età (anni)
a 28-77
25-73
Maschio /Femmina
4/1 2/3

Barrett CK7 /20 patternb (%) 10
0
gastrico CK7 /20 patternc (%)
5
40
Altri modelli (%)
85
60
un b intervallo definito in riferimentoc definito nella norma
Gruppo a
sintomi di reflusso sono stati trovati in 14 casi (70%) con BE. Alta frequenza di ernia iatale (65%) è stato trovato in questo gruppo. Tre casi hanno mostrato displasia di basso grado sul totale. Tredici casi hanno rivelato metaplasia intestinale incompleta e 7 casi erano completi metaplasia intestinale utilizzando alcian blu. Il previsto Barrett CK7 /20 modello è stato identificato solo 2 dei 20 casi (figura 3). Un caso ha mostrato anticipato CK7 gastrico /modello CK20. Il promemoria aveva pattern di colorazione variabile; come nessun immunocolorazione (n = 6) o immunocolorazione focale (n = 11) per CK7 con immunocolorazione focali o diffuse per CK20, che non in sintonia con il previsto Barrett CK7 /20 pattern (figura 4). La sensibilità, la specificità, false-positività, e falso-negatività di CK7 /20 colorazione per il modello di Barrett erano il 10%, 100%, 0% e 90%, rispettivamente. Figura 3 a. Diffuse moderata CK7 immunocolorazione delle ghiandole superficiali e profondi in BE, × 40, b. Band-come CK20 immunocolorazione di epitelio di superficie e le ghiandole superficiali in BE, 40 ×
figura 4 a. Assente immunostaining CK7 in BE, × 100, b. Soleggiato CK20 immunocolorazione delle ghiandole superficiali e profondi in BE, × 100

• Diminuita espressione di prenyl difosfato sintetasi subunità 2 correla con una ridotta sopravvivenza dei pazienti con cancer
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