Полезность цитокератины 7 и 20 (CK7 /20) иммуногистохимия в отличие от короткого сегмента пищевода Барретта из желудка кишечной метаплазии: Является надежным

полезность цитокератины 7 и 20 (CK7 /20) иммуногистохимия в отличие от короткого? -звенного Барретта пищевод из желудка кишечной метаплазии: Является надежным
Аннотация
фона
цель настоящего корреляционного иммуногистохимического исследования состояла в том, чтобы оценить полезность цитокератином (CK7 и CK20) выражение в диагностике короткого -звенного Барретта пищевод, в частности, его эффективность в дифференциации слизистой оболочки Барретта из кишечной метаплазии кардиального отдела желудка и тела.
Методы
обследовали две группы эндоскопической биопсии, в том числе 20 эндоскопических биоптатов короткого сегмента пищевода Барретта ( Группа A) и равное число выставляется хеликобактерной
связанный кишечный метаплазия кардиального отдела желудка и тела (группа в). Все они были исследованы с помощью иммуногистохимии с использованием стандартного метода ABC для CK7 и экспрессии CK20. точный критерий Фишера использовали для статистического анализа Barrett CK7 /20 и желудка CK7 /20 моделей между группами
Результаты
The ожидаемом картина реактивности в слизистой оболочке Баррета (CK7: сильный. диффузная позитивности в поверхностных и глубоких желез; CK20: положительность в поверхностном эпителии и поверхностных желез) был замечен в 2-х случаях образцов группы а. Ожидаемая картина желудка (CK7: пятнистый иммунное с переменным вовлечением глубоких желез; CK20: пятнистый иммунное поверхностных и глубоких желез в неполной кишечной метаплазии /отсутствие CK7 иммунореактивности с сильным CK20 окрашивания в поверхностных и глубоких желез в полной кишечной метаплазии) был замечен в 8 случаях образцов группы B. Соответствующие значения чувствительности и ложно-отрицательности CK7 /20 для окрашивания Барретт рисунка в группе А составили 10% и 90%, соответственно. Эти значения для желудка образца в группе B были 40% и 60%, соответственно. Значения специфичности и ложно-позитивности обоих образцов были одинаковыми (100% и 0% соответственно). Там не было выявлено статистически значимых различий для Barrett узора между двумя группами (P = 0,487
), в то время как наблюдение за желудочной картина в группе В значительно выше, чем в группе А (P
= 0,02).
Выводы
Мы пришли к выводу, что эти выдвинули гипотезу, а в последнее время применяются диагностические критерии, связанные с CK7 и CK20 иммунореактивности не надежны в различении короткого сегмента пищевода Барретта из кишечной метаплазии, как показано на кардии и тела.
фона
Barrett пищевод ( BE) связано с повышенным риском развития аденокарциномы пищевода, злокачественной опухоли, которая имела быстрый рост заболеваемости в последнее время [1-3]. Этиология ВЕ неизвестна, но генетическая предрасположенность с язвенным изменениями от желудочно-пищеводного рефлюксной болезни (ГЭРБ) может быть ответственным [4].
BE следует подозревать в эндоскопии, когда заменяется нормальным, беловато-появляясь эпителий красным, бархатистой явившейся слизистой оболочки в дистальном отделе пищевода. Достоверная диагностика ВЕ трудно связана с ошибками выборки из-за определения точного местоположения желудочно-пищеводного перехода, например, в грыжей пищеводного отверстия диафрагмы. Диагностические трудности возникают, когда эндоскопист имеет дело с коротким сегментом BE. Junctional, фундальный и специализированные (кишечные) виды железистого эпителия были описаны для определения BE по Полл и др.
[5]. Но это было недавно сообщили, что обнаружение последнего является надежным критерием для диагностики BE [4, 6]. Helicobacter Pylori
(H. Pylori
) могут быть связаны с кардитом и кишечной метаплазии кардии [7]. Таким образом, кишечной метаплазией с участием кардии, связанной с Helicobacter
гастрита могут быть гистологически неотличим от кишечной метаплазии дистальной части пищевода.
Было высказано предположение, что Цитокератин подмножества 7 и 20 (CK7 и CK20) могут быть полезны для различения обоих долгосрочный и краткосрочный сегмент составляет от кишечной метаплазии проксимального отдела желудка [8-11]. Цель данного исследования состояла в том, чтобы оценить цитокератин (CK7 и CK20) выражение в диагностике короткого сегмента пищевода Барретта, в частности, его полезности в дифференциальной диагностике Барретта слизистой оболочки кишечника от метаплазии кардиального отдела желудка и тела.
Методы
Эндоскопические образцы пациентов из упомянутых Мраморного университета институт гастроэнтерологии были рассмотрены из файлов департамента патологии в том же университете в период с 1998 по 2002 год по крайней мере 4 биопсии были взяты из нерегулярной squamo-столбчатый перехода (ВСП) с полуостровов или языки цилиндрического эпителия и острова плоскоклеточный или цилиндрического эпителия для каждого случая. Когда более чем один полуостров или язык цилиндрического эпителия в дистальных отделах пищевода наблюдалось эндоскопически, 4 биопсий была взята из каждого полуострова, и они были отправлены в гистологического обследования в отдельных eppendorph трубок. Малые полуостровов с линейными судами дистальнее и ВСП любом фокусном ненормальности были также биопсию.
Пищеводу и желудочные биопсии были взяты антеградной или ретроградным с ретрофлексии эндоскопа, когда это было необходимо. Ретрофлексии подход предпочтителен для выборки кардии. Случаи, которые были диагностированы гистопатологически в качестве короткого сегмента BE были включены в исследование. Short-сегмент BE был определен эндоскопически как языки менее 3 см в длину выше пищеводно-желудочного перехода (EGJ) с его сходством с тонкой кишки, имеющих хорошо сформированные микроворсинки и кишечной метаплазии либо с гематоксилином и эозином (H &Amp; E) (рис 1) или Альциановый синий pH2.5 бокаловидных клеток (рис 2) при микроскопическом исследовании. Рисунок 1 Раздел из желудочно-пищеводного перехода показ BE с бокаловидных клеток, H &Amp; E, × 40
Рисунок 2 интенсивное синее окрашивание бокаловидных клеток с Альциановый синего рН 2,5 /PAS, × 40
Исследовательская группа состояла из 20 пациентов с коротким сегментом BE (группа а) и равное число больных с желудочной кишечной метаплазии (кардии и тела) в сопровождении хеликобактерной
гастрит (группа в). Биоптаты, которые были получены в пределах 5 мм расстоянии ниже EGJ рассматривались как кардиальной слизистой оболочки.
Образцы фиксировали в 10% забуференном формалине и заливали в парафин. Серийные срезы были вырезаны из каждого образца. Все срезы окрашивали рутинного H &Amp; E пятно. Шифф Периодическая кислота (PAS), Альциановый синий рН 2,5 и Альциановый синего рН 0,5 использовали для идентификации нейтральной муцин, sialomucin и sulphomucin соответственно. Гимза была использована для выявления H. Pylori
. Мы исключили случаи без обнаруженного бокаловидных клеток метаплазии по Альциановый синим пятном как для группы А и группы BH пилори
инфекция была подтверждена Гимза для случаев в группе B.
эндоскопических биопсий были сгруппированы как полный (тип I) или неполные (тип II) кишечной метаплазии в соответствии с ранее определенными критериями [12]. Предлагаемый шаблон Barrett CK7 /CK20 (CK7: сильная диффузная позитивности в поверхностных и глубоких желез; CK20: положительность в поверхностном эпителии и поверхностных желез) и желудка CK7 /образец CK20 (CK7: пятнистый иммунное с переменным вовлечением глубоких желез; CK20: пятнистый иммунное поверхностных и глубоких желез в неполной кишечной метаплазии /отсутствие CK7 иммунореактивности с сильным CK20 окрашивания в поверхностных и глубоких желез в полной кишечной метаплазии) были оценены для всех случаев. Шесть биопсий контрольных составили ретроспективно у пациентов, у которых биопсия показала нормальный SCJ (п = 3) и нормальным кардии (п = 3) микроскопически.
Группа A
Клинические данные, включая возраст, пол, желудочно-пищеводного рефлюкса симптомов, и эндоскопические находки и короткого сегмента Барретта слизистой оболочке были получены от каждого конкретного случая. У пациентов с BE в течение последних 3 см дистального отдела пищевода были включены в группу А. Пациенты с положительным H. Pylori
были исключены из исследования.
Группа B
Клинические данные, включая возраст, пол, гастро -esophageal симптомы рефлюкса, эндоскопические находки и H. Pylori
состояния были получены от каждого конкретного случая. Пациенты с положительным H. Pylori
были включены в исследование. Были изучены двадцать эндоскопических биопсий (кардии, п = 9 и корпус, п = 11) с гистологическими признаками кишечной метаплазии.
иммуногистохимического исследования
Один блок ткани был выбран для каждого конкретного случая. Блоки были разрезаны на участках 5 мкм. Срезы депарафинизировали и регидратации через градуированных спиртов. Антиген поиска проводили с использованием цитратного буфера в микроволновой печи и для CK7 и CK20. Срезы инкубировали в 3% перекиси водорода /метанолом в течение 20 мин, чтобы блокировать неспецифическую фоновое окрашивание за счет эндогенной пероксидазы. С помощью стандартного стрептавидин-биотин пероксидазной комплексный метод (АВС), CK7 (клон OV-TL 12/30, Neomarkers, Fremont, CA, США) и CK20 (клон K20.4, Neomarkers, Fremont, CA, США) были выполнены на все слайды. Срезы инкубировали в течение 30 минут в растворе вторичного антитела. Диаминобензидин (DAB) служил в качестве хромоген. Срезы контрастному окрашиванию гематоксилином. Образцы клеток карциномы молочной железы и карциномы толстой кишки, были использованы в качестве положительного контроля для CK7 и CK20, соответственно. Отрицательные контроли были произведены с тем же образцы опухолей и методы окрашивания, опуская первичных антител.
Статистический анализ
точный критерий Фишера использовали для анализа Барретта и желудочной моделей. Результат считают статистически значимым, если значение Р
была меньше или равна альфа-уровне 0,05.

Результаты В общей сложности 40 пациентов были включены в исследование. Средний возраст пациентов составил 46 (диапазон 28-77) лет в группе А и 50 (диапазон 25-73) лет в группе B. соотношение мужчин и женщин было 4 к 1 в группе А, в то время как это было 2 3 в группе В. клинические и иммуногистохимические особенности были суммированы в таблице 1.Table 1 клинических и иммуногистохимических результаты у пациентов с коротким сегментом BE желудка и кишечная метаплазия
<й>
короткий отрезок BE (п = 20)

Желудочный кишечная метаплазия (п = 20)

Возраст (год) а
28-77
25-73 <бр> Мужчина /Женщина
4/1
2/3
Barrett CK7 /20 patternb (%)
10
0
Желудочный CK7 /20 patternc (%) страница 5
40
Другие модели (%) 85

60
Диапазон значений б Определено в ссылочномс, определяемый в ссылочном
Группа а
симптомы рефлюкса были найдены в 14 случаев (70%) с ВЕ. Высокая частота грыжи пищеводного отверстия диафрагмы (65%) был обнаружен в этой группе. Три случая показали низкосортной дисплазию из общего числа. Тринадцать случаев выявлено неполное кишечной метаплазии и 7 случаев были полными кишечная метаплазия с помощью альциановым синего пятна. Планируемый Barrett CK7 /20 рисунок был идентифицирован только 2 из 20 случаев (Рисунок 3). Один случай показал, ожидается желудка CK7 /CK20 рисунок. Напоминание имели переменные модели окрашивания; как никакой иммуноокрашиванием (п = 6) или фокусного иммунным окрашиванием (п = 11) для CK7 с фокусным или диффузным иммунным окрашиванием для CK20, что не поместилось в связи с ожидаемым Barrett CK7 /20 рисунка (рисунок 4). Чувствительность, специфичность, ложно-положительных результатов, и ложно-негативность CK7 /20 для окрашивания Барретт рисунка были 10%, 100%, 0% и 90%, соответственно. Рисунок 3 а. Диффузный умеренное CK7 иммунное поверхностных и глубоких желез в ВЕ, × 40, б. Ленточная как CK20 иммунное поверхностного эпителия и поверхностных желез в ВЕ, × 40
Рисунок 4 а. При отсутствии CK7 иммунное в ВЕ, × 100, б. Пятнистая CK20 иммунное поверхностных и глубоких желез в ВЕ, × 100
Группа B Одиннадцать
случаев показали полную кишечной метаплазии, в то время как 9 случаев показала неполное кишечная метаплазия с помощью альциановым синего пятна. Восемь случаев выражается желудка CK7 /20 рисунок (кардии, п = 5 и Corpus, п = 3). Шесть из них показали полное и неполное 2 желудка CK7 /20 рисунок. Барретт CK7 /20 картины не наблюдалось ни у одного пациента с желудочной кишечной метаплазии. Окрашивание характеристики остальных 12 случаев не вяжется с ожидаемым желудочной CK7 /20 рисунка; в связи с пятнистой CK7 и /или очаговой CK20 иммунопозитивность в случаях с полной кишечной метаплазии и отсутствие CK7 иммунопозитивность и /или диффузного CK20 иммунопозитивность в случаях с неполной кишечной метаплазии. Чувствительность, специфичность, ложно-положительных результатов, и ложно-негативность CK7 /20 для окрашивания Барретт рисунка были 40%, 100%, 0% и 60%, соответственно.
Там не было никаких существенных различий для Barrett узора между две группы (2/20 в группе А против
0/20 в группе B, P
= 0,487), в то время как наблюдение за желудочной картина в группе в значительно выше, чем в группе А (8/20 против .
1/20, P
= 0,02).
нормальный SCJ показал неоднородную иммунопозитивность для CK7 без иммунореактивности для CK20, но нормальная кардии желудка выявлено immunonegativity для CK7 в сочетании с пятнистой иммунопозитивность для CK20, который ограничен к поверхности
эпителий. Обсуждение
кишечная метаплазия может развиться в кардии у больных либо с короткими сегментами BE или кардит особенно вызванные H. Pylori
. Различие между этими двумя структурами имеет важное значение, так как этиология и риск развития аденокарциномы различны [7]. BE, как полагают, вызвано ГЭРБ и связано с повышенным риском развития аденокарциномы пищевода [1, 2, 4]. Микроскопически, BE может быть определена как замена пищевода плоскоклеточного эпителия метапластического специализированной (intestinalized) цилиндрического эпителия. Другие эпителиальные типы узловой тип и тип дна матки эпителий. Диагноз ВЕ требует подтверждения биопсии кишечной метаплазии с альциановым голубым pH2.5 бокаловидных клеток в дополнение к типичным эндоскопических находок. Точный уровень ВСП, проксимальных аспект желудочных складок, и линейно ориентированных на слизистые оболочки сосудов в дистальной части пищевода и EGJ должны быть определены [13]. SCJ обычно соответствует проксимального края линейных складок желудка, что означает EGJ. Малые суда, ориентированные параллельно длинной оси пищевода исчезают при нормально расположенной ВСП. Тем не менее, обнаружение ненормального расширения этих сосудов ниже и выше ВСП проксимальным краем желудочных складок свидетельствует о наличии цилиндрического эпителия в дистальном отделе пищевода [14].
Отличительный быть от других лиц, которые могут оказывать такую ​​же гистопатологическая особенности имеет первостепенное значение. Из-за каких-либо абсолютных гистологических критериев диагностики слизистой оболочки Barrett было установлено ранее, недавние исследования [8-11, 15-19] в основном зависит от моделей некоторых цитокератиновых подмножеств, особенно две различные модели CK7 /20 окрашивания. Цитокератины высоко консервативны полипептиды и представляют собой группу цитоскелета структурных белков, присутствующих во всех эпителиев. Есть по крайней мере 20 различных форм цитокератины в эпителиальных клетках и переменных форм выражения в зависимости от типа, местоположения и дифференцировки эпителия [20]. CK7, по существу, не экспрессируется в нормальном эпителии желудочно-кишечного тракта, в то время как CK20 выражается в кишечном эпителии, желудочная foveolar эпителия и эндокринных клеток в верхних отделах пилорического желез. Барретт CK7 /20 образец был впервые определен Ормсби и др.
[8], как окрашивание поверхностного эпителия для CK20 и окрашивания как поверхностных и глубоких метапластического эпителия для CK7. Назначенный желудка CK7 /20 рисунок сгруппирована в двух шаблонов относительно типа кишечной метаплазией (неполное /полное) тех же авторов. Согласно их предложению, пятнистый выражение CK7 с переменным вовлечением глубоких желез была замечена в неполной кишечной метаплазии желудка, в то время как сильное выражение CK20 в поверхностных и глубоких желез с отсутствием экспрессии CK7 был замечен в полной кишечной метаплазии желудка. В этом новаторского исследования, Barrett CK7 /20 картина была высокой чувствительностью и специфичностью по сравнению со случаями с желудочной кишечной метаплазии. Тем не менее, H. Pylori
состояние дел не было упомянуто. Исследования Гликман и др
[9] и Йованович и др.
[15] подтвердили выводы Ormsby в 91% и 94% случаев их с длинными сегментами BE, соответственно. С другой стороны, исследования некоторых других исследователей не смогли поддержать выводы Ormsby в; предложенная Barrett CK7 /20 картина была обнаружена у 54% пациентов с длительно сегмента BE Мохаммед и др.
[16] и только 39% пациентов с длительным сегмента BE Эль-Zimaity и др. <бр> [17].
Ormsby и др.
[11] позже оценили полезность CK7 /20 моделей в коротком сегменте BE в другом исследовании, и обнаружили, что "диагностический" Barrett CK7 /20 рисунок присутствовал в 82 % пациентов с коротким сегментом BE. Несмотря на то, Мохаммед и др.
[16] обнаружили, почти такой же процент (81%) в течение короткого отрезка BE случаи с Ormsby и др.
[11], они обнаружили ту же картину в 30,7% больных кишечная метаплазия в кардии и интереснее в 55% биопсий, которые имели либо нормальный или воспаленную слизистую оболочку желудка без кишечной метаплазии.
в настоящем исследовании, 10% пациентов с короткого сегмента BE показал ожидаемый CK7 /20 рисунок и 40 % пациентов с желудочной кишечной метаплазии показало предполагаемую желудка CK7 /20 модели с соответствующим полным или неполным кишечной метаплазии. Чувствительность Barrett CK7 /20 рисунка была очень низкой (10%) в группе ВЕ, несмотря на высокую специфичность (100%). Чувствительность желудка CK7 /20 узора был также низким (40%) в желудочно-кишечной метаплазии группе, хотя специфичность была высокой (100%) в этой группе, а также. Желудочный CK7 /20 картина была в желудочном кишечной метаплазии группе значительно выше, чем в группе ВЕ (P
= 0,02), в то время как Барретт CK7 /20 картина существенно не отличалась между этими двумя группами (P = 0,487
). На основании этих результатов, чтобы использовать два различных моделей CK7 /20 окрашивания не может быть принят в качестве надежного метода в дифференциации короткого сегмента BE из желудка кишечной метаплазии, поскольку обе модели имеют очень низкую чувствительность и очень высокие значения ложных негатива.
в кабинете Couvelard [10] 31% пациентов и в Ормсби в исследовании 15% пациентов с короткого сегмента связаны с Barrett CK7 /20 шаблон был H. Pylori
инфекции. Хотя процент положительного H. Pylori
случаях у пациентов с коротким сегментом ассоциироваться с Barrett CK7 /20 рисунка не было упомянуто в исследовании Мухаммеда [16], 6% пациентов имели H. Pylori
инфекция с короткого сегмента BE. Так как кишечная метаплазия может рассматриваться как в хеликобактерной
инфекции и BE, сочетание этих лиц не должно быть интерпретируемый для оценки полезности цитокератиновых подмножеств. Мы исключили H. Pylori
положительные случаи, даже если он был поставлен диагноз ВЕ. Таким образом, различия между нашего исследования и ранее сообщалось, результаты могут быть из-за этого строгого различения антихеликобактерной
положительных случаев быть в настоящем исследовании. Различия в биопсии протоколов между предыдущими исследованиями и настоящего исследования (количество, размер или участка образца, anterograd или ретрофлексии подход), возможно, был еще одной причиной различий в результатах. Для того, чтобы определить точное местонахождение anterograd подхода кардии следует использовать. Однако, что касается нормального сердечного эпителия, его существование остается до сих пор неясно, так как результаты различных исследований противоречивы [21-23]. Хотя эти два исследования предполагают, что нормальная сердечная эпителий представляет собой форму метапластического эпителия вторичной по отношению к гастроэзофагеального рефлюкса [21, 22], в другом исследовании сообщает Килгор и др предполагает, что сердечная слизистая существует как нативной структуры [23]. Дальнейшие исследования могут предоставить информацию о сердечной слизистой оболочки, особенно его "связь с изменениями рефлюкса и ВЕ.
Выводы
На основании наших результатов, мы менее уверены в использовании предложенных CK7 /20 шаблонов для дифференциации короткий отрезок BE из желудка кишечной метаплазии. Важно признать эндоскопические особенности, которые помогают диагностировать ВЕ для эндоскопистов, так как гистологию кишечной метаплазией в кардии, связанные с другими этиологией и пищевода Барретта одинакова. Мы полагаем, что определение ВЕ должно быть основано на клинике, эндоскопического и гистологического исследования, а не картина CK7 /20 иммунным окрашиванием
Список сокращений
BE:.
Барретта Пищевод <бр>

ГЭРБ:
Желудочно-пищеводного рефлюкса


H. Pylori
:
хеликобактер пилори



CK7:
цитокератину 7


CK20:
цитокератину 20


SCJ:
Squamo-столбчатый Junction


EGJ:
пищеводно-желудочный переход


H &Amp; E:
гематоксилином и эозином


PAS:
Периодическая кислота Schiff


ABC:
Стандартный стрептавидин-биотин пероксидазы комплекс

<бр> DAB:
диаминобензидин


GEJ:
Желудочно-пищеводный Junction на
Объявления
Авторы 'оригинальные файлы представлены для изображения
Ниже приведены ссылки на оригинальные файлы представленных авторов для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 12907_2003_16_MOESM2_ESM.jpeg Авторского 12907_2003_16_MOESM1_ESM.jpeg авторов исходного файла для Рисунок 2 12907_2003_16_MOESM3_ESM.jpeg Авторского исходного файла для Рисунок 3 12907_2003_16_MOESM4_ESM.jpeg Авторского исходного файла для фигурного 4 конкурирующими интересами
Не заявлен.

• Снижение экспрессии пренил дифосфат-синтазы субъединицей 2 коррелирует со снижением выживаемости больных ра…
• Хеликобактерной модификация липополисахарида, экспрессия антигена Льюиса, и желудочный колонизация являютс…