O utilitário de citoqueratinas 7 e 20 (/20 CK7) imuno-histoquímica na distinção de curto segmento de esôfago de Barrett de metaplasia intestinal gástrica: É confiável

a utilidade das citoqueratinas 7 e 20 (/20 CK7) imuno-histoquímica na distinção de curta? -segment esôfago de Barrett de metaplasia intestinal gástrica:? é confiável da arte abstracta
Fundo
o objetivo do presente estudo imuno-histoquímico correlativa foi avaliar a utilidade da citoqueratina (CK7 e CK20) expressão no diagnóstico de curta -segment esôfago de Barrett, em particular a sua eficácia na diferenciação Barrett mucosa de metaplasia intestinal da cárdia gástrica e corpus.
Métodos
Dois grupos de amostras de biópsia endoscópicos foram examinados, incluindo 20 amostras de biópsia endoscópica de curto segmento de esôfago de Barrett ( grupo a) e número igual exibindo Helicobacter pylori
associados a metaplasia intestinal da cárdia e corpus (grupo B). Todos foram investigados por imuno-histoquímica utilizando o método ABC padrão para CK7 e expressão CK20. O teste exato de Fisher foi usado para análise estatística de Barrett CK7 /20 e CK7 gástrica /20 padrões entre os grupos
Resultado
O padrão esperado de reatividade em Barrett mucosa (CK7:. forte positividade difusa nas glândulas superficiais e profundas; CK20: positividade no epitélio de superfície e glândulas superficiais) foi visto em 2 casos de amostras do Grupo a. O padrão gástrica esperado (CK7: imunocoloração irregular com a participação variável de glândulas profundas; CK20: imunocoloração irregular de glândulas superficiais e profundas em incompleta intestinal metaplasia /ausência de CK7 imunorreactividade com forte coloração CK20 nas glândulas superficiais e profundas na metaplasia intestinal completa) foi visto 8 em casos de amostras do Grupo B. Os respectivos valores de sensibilidade e falsa-negatividade de CK7 /20 coloração para o padrão de Barrett no Grupo A foram 10% e 90%, respectivamente. Estes valores para o padrão gástrico do Grupo B eram 40% e 60%, respectivamente. Os valores de especificidade e falsa-positividade de ambos os padrões eram iguais (100% e 0%, respectivamente). Não houve diferença estatisticamente significativa para o padrão de Barrett entre os dois grupos (P
= 0,487), enquanto que a observação do padrão gástrica foi significativamente maior no grupo B do que no Grupo A (P
= 0,02).
conclusões
Concluímos que estes hipótese e recentemente aplicado critérios diagnósticos envolvendo CK7 e CK20 imunorreatividade não são confiáveis ​​para distinguir a curto segmento de esôfago de Barrett de metaplasia intestinal, como visto na cárdia gástrica e corpus.
Fundo
esôfago de Barrett ( BE) está associada com um risco aumentado de adenocarcinoma esofágico, um tumor maligno que tenha tido uma incidência crescente rápida recentemente [1-3]. A etiologia da BE é desconhecida, mas a predisposição genética com as mudanças ulcerativas de doença do refluxo gastro-esofágico (DRGE) pode ser responsável [4].
Ser deve ser suspeitada na endoscopia quando o epitélio escamoso-esbranquiçado de aparência normal é substituído por uma mucosa vermelho-aparecendo aveludada no esôfago distal. O diagnóstico confiável de BE é difícil relacionada a erros de amostragem devido à determinação da localização exata da junção gastro-esofágica, tais como na hérnia hiatal. Dificuldades diagnósticas surgem quando o endoscopista lida com a curto segmento BE. Juncional, foram descritas (intestinais) tipos fúndica e especializados de epitélio glandular para a definição de BE por Paull et al.
[5]. Mas recentemente, foi relatado que a detecção do último é um critério seguro para o diagnóstico de BE [4, 6]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) pode ser associado com cardite e metaplasia intestinal da cárdia [7]. Portanto, metaplasia intestinal envolvendo o cárdia relacionadas com Helicobacter
gastrite pode ser histologicamente indistinguível da metaplasia intestinal do esófago distai.
Tem sido sugerido que os subconjuntos de citoqueratina 7 e 20 (CK7 e CK20) podem ser úteis para distinguir tanto longo e curto segmento da BE de metaplasia intestinal do estômago proximal [8-11]. O objetivo deste estudo foi avaliar a citoqueratina (CK7 e CK20) expressão no diagnóstico de curto segmento de esôfago de Barrett, particularmente a sua utilidade no diagnóstico diferencial de Barrett mucosa de metaplasia intestinal da cárdia gástrica e corpus.
Métodos
espécimes endoscopia dos pacientes encaminhados a partir Marmara University Institute of Gastroenterology foram revisados ​​a partir dos arquivos do Departamento de Patologia da mesma universidade entre 1998 e 2002. pelo menos quatro biópsias foram retirados de junção escamo-colunar irregular (SCJ) com penínsulas ou línguas de epitélio colunar e ilhas de epitélio escamoso ou colunar para cada caso. Quando mais de uma península ou língua de epitélio colunar no esôfago distal foi observado por via endoscópica, 4 biópsias foi retirada de cada península e eles foram enviados para exame histopatológico em tubos eppendorph separadas. Pequenas penínsulas com vasos lineares distal à SCJ e qualquer anormalidade focal também foram biopsiados.
Do esôfago e biópsias gástricas foram tomadas anterógrada ou retrógrada com retroflexion do endoscópio quando era necessário. A abordagem retroflexão foi preferido para a amostragem da cárdia. Os casos que foram diagnosticados histopatologicamente como de curto segmento SER foram incluídos no estudo. Curto-segmento SER foi definida por via endoscópica como línguas menos de 3 cm de comprimento acima da junção esôfago-gástrica (JEG) com a sua semelhança com o intestino delgado tendo microvilosidades bem formados e metaplasia intestinal, quer com hematoxilina e eosina (H & E) (Figura 1) ou células caliciformes positivos azul Alcian de pH 2,5 (Figura 2) por exame microscópico. Figura 1 Seção de gastro-esofágico mostrando junção BE com células caliciformes, H & E, × 40
Figura 2 coloração azul intensa de células caliciformes com pH azul Alcian 2,5 /PAS, × 40
O grupo de estudo consistiu de 20 pacientes com a curto segmento BE (Grupo a) e o mesmo número de doentes com metaplasia intestinal gástrica (cárdia e corpus) acompanhado por H. pylori
gastrite (Grupo B). amostras de biópsia que foram obtidos a uma distância de 5 mm abaixo da JEG foram considerados como a mucosa cardíaca.
espécimes foram fixados em formalina a 10% tamponada e embebidos em parafina. As secções em série foram cortadas a partir de cada espécimen. Todas as secções foram coradas com rotina de H & E mancha. Schiff de ácido periódico (PAS), azul Alcian de pH 2,5 e pH 0,5 com azul Alcian foram usadas para identificar mucinas neutras, sialomucinas e sulfomucinas, respectivamente. Giemsa foi usado para revelar H. pylori
. Foram excluídos os casos sem metaplasia de células caliciformes detectado por coloração azul Alcian tanto para o Grupo A e Grupo BH pylori
foi confirmada com Giemsa para os casos no grupo B.
endoscópicos biópsias foram agrupados como completo (tipo I) ou incompletas (tipo II) metaplasia intestinal de acordo com os critérios previamente definidos [12]. O padrão proposto Barrett CK7 /CK20 (CK7: forte positividade difusa nas glândulas superficiais e profundas; CK20: positividade no epitélio de superfície e glândulas superficiais) e CK7 padrão gástrica /CK20 (CK7: imunocoloração irregular com a participação variável de glândulas profundas; CK20: irregular imunocoramento glândulas superficiais e profundas em incompleta intestinal metaplasia /ausência de CK7 imunorreactividade com forte coloração CK20 nas glândulas superficiais e profundas na metaplasia intestinal completa) foram avaliados para todos os casos. Seis biópsias de controle foram constituídos retrospectivamente a partir de pacientes cujas biópsias mostraram SCJ normal (n = 3) e cárdia normal (n = 3) microscopicamente.
Grupo A
Os dados clínicos, incluindo idade, sexo, sintomas de refluxo gastro-esofágico e endoscópicos e de curto segmento de Barrett mucosa foram obtidos a partir de cada caso. Os pacientes com BE nos últimos 3 cm de esôfago distal foram incluídas ao grupo A. Os pacientes com H. pylori positiva
foram excluídos do estudo.
Grupo B
Os dados clínicos, incluindo idade, sexo, gastro sintomas -esophageal refluxo, achados endoscópicos e H. pylori
estatuto foram obtidos de cada caso. Os pacientes com H. pylori positiva
foram incluídos no estudo. Vinte biópsias endoscópicas (cárdia, n = 9 e corpus, n = 11) com evidência histológica de metaplasia intestinal foram estudados.
Estudos imunohistoquímicos
Um bloco de tecido foi selecionado para cada caso. Os blocos foram cortados em secções de 5 | iM. As lâminas foram desparafinadas e re-hidratadas através de álcoois graduados. A recuperação antigênica foi realizada utilizando tampão de citrato no microondas tanto para CK7 e CK20. As lâminas foram incubadas em 3% de peróxido de hidrogénio /metanol durante 20 minutos para bloquear a coloração de fundo não específica devido a peroxidase endógena. Utilizando o complexo de estreptavidina-peroxidase de biotina método padrão (ABC), CK7 (clone OV-TL 12/30, Neomarkers, Fremont, CA, EUA) e CK20 (K20.4 clone, Neomarkers, Fremont, CA, EUA) foram realizadas sobre todos os slides. As lâminas foram incubadas durante 30 minutos em solução de anticorpo secundário. Diaminobenzidina (DAB) serviu como Chromagen. As lâminas foram contrastadas com hematoxilina. As amostras de carcinoma da mama e carcinoma do cólon foram utilizados como controlos positivos para CK7 e CK20, respectivamente. Os controlos negativos foram produzidos com as amostras tumorais e métodos de coloração mesmo omitindo os anticorpos primários.
Análise Estatística
teste exato de Fisher foi utilizado para análise de Barrett e os padrões gástricas. Um resultado foi considerado estatisticamente significativo quando o valor de P
foi inferior ou igual a um, nível alfa de 0,05.

Resultados No total, 40 doentes foram incluídos no estudo. A idade média dos pacientes foi de 46 (variação, 28-77) anos no grupo A e 50 (variação, 25-73) anos no Grupo B. O rácio entre homens e mulheres foi 4-1 no Grupo A, ao passo que era 2 a 3 no Grupo B. As características clínicas e de imunohistoquímica foram resumidos na Tabela 1 1.Table achados clínicos e de imunohistoquímica em pacientes com a curto segmento BE e gástrica metaplasia intestinal

Short-segmento BE (n = 20)
gástrica metaplasia intestinal (n = 20)
Idade (anos) a
28-77
25-73
Masculino /Feminino
4/1
2/3
Barrett CK7 /20 patternb (%)
10
0
gástrica CK7 /20 patternc (%)
5
40
Outros padrões (%)
85
60
um Range b Definido em referênciac definido na referência
Grupo a
Os sintomas de refluxo foram encontrados em 14 casos (70%) com BE. Alta frequência de hérnia hiatal (65%) foi encontrada neste grupo. Três casos apresentaram displasia de baixo grau fora do total. Treze casos revelou metaplasia intestinal incompleta e 7 casos eram completos metaplasia intestinal usando mancha azul Alcian. O Barrett CK7 /20 padrão esperado foi identificado apenas 2 dos 20 casos (Figura 3). Um caso mostrou antecipado CK7 gástrica /padrão CK20. O lembrete tinha padrões de coloração variável; como nenhum imunocoloração (n = 6) ou imuno focal (n = 11) para CK7 com imunocoloração focal ou difusa para a CK20, o que não se encaixa com o esperado Barrett CK7 20 padrão /(Figura 4). A sensibilidade, especificidade, falso-positivo e falso-negatividade da CK7 /20 coloração para o padrão de Barrett foram 10%, 100%, 0% e 90%, respectivamente. A Figura 3 um. Difundir imunocoloração CK7 moderada de glândulas superficiais e profundas em BE, × 40, b. Band-como imunocoloração CK20 do epitélio de superfície e glândulas superficiais em BE, × 40
Figura 4 a. Ausente imunocoloração CK7 na BE, × 100, b. Patchy imunocoloração CK20 de glândulas superficiais e profundas em BE, × 100
Grupo B
Onze casos mostrou metaplasia intestinal completa, enquanto que 9 casos mostrou metaplasia intestinal incompleta usando mancha azul Alcian. Oito casos expressou a CK7 /20 padrão gástrico (cárdia, n = 5 e corpus, n = 3). Seis deles mostrou completa e 2 incompleta gástrica CK7 20 padrão /. Barrett CK7 /20 padrão não foi observado em nenhum paciente com metaplasia intestinal gástrica. As características de coloração dos restantes 12 casos, não se encaixam no CK7 gástrica /20 padrão previsto; devido à CK7 desigual e /ou focal imunopositividade CK20 em casos de metaplasia intestinal completa e ausência de CK7 imunopositividade e /ou difusa imunopositividade CK20 em casos de metaplasia intestinal incompleta. A sensibilidade, especificidade, falso-positivo e falso-negatividade da CK7 /20 coloração para o padrão de Barrett foram 40%, 100%, 0% e 60%, respectivamente.
Não houve diferença significativa para o padrão de Barrett entre o dois grupos (2/20 no grupo a contra
0/20 no grupo B, P = 0,487
), enquanto que a observação do padrão gástrica foi significativamente maior no grupo B do que no Grupo a (20/8 vs .
1/20, P
= 0,02).
normal SCJ mostrou imunopositividade irregular para CK7 sem qualquer imunorreatividade para CK20, mas cárdia gástrica normal, revelou immunonegativity para CK7 combinado com imunopositividade irregular para CK20, que é limitado à superfície do epitélio.
Discussão
intestinal metaplasia pode desenvolver na cárdia em pacientes tanto com a curto segmento BE ou cardite causada especialmente por H. pylori
. Distinção entre estas duas entidades é importante, pois a etiologia e risco de desenvolvimento de adenocarcinoma são diferentes [7]. SER acredita-se ser causada por DRGE e associado a um risco aumentado de adenocarcinoma esofágico [1, 2, 4]. Microscopicamente, BE pode ser definida como a substituição do epitélio escamoso do esôfago pelo especializada (intestinalized) epitélio metaplásico. Outros tipos epiteliais são do tipo juncional e tipo fundal do epitélio. O diagnóstico de BE requer confirmação biópsia de metaplasia intestinal com células caliciformes Alcian Blue pH 2,5 positivas, além de achados típicos endoscópicos. O nível exato de SCJ, aspecto proximal das pregas gástricas, e linearmente orientada vasos da mucosa do esôfago distal e JEG devem ser identificados [13]. SCJ normalmente corresponde à margem proximal das pregas gástricas lineares que significa EGJ. Os pequenos vasos orientados paralelamente ao eixo longo do esôfago desaparecem no SCJ normalmente localizados. No entanto, a detecção de extensão anormal desses vasos abaixo da SCJ e acima da margem proximal das pregas gástricas é uma evidência da presença de epitélio colunar no esôfago distal [14].
Distintivo BE de outras entidades que possam tornar histopatológico semelhante recursos é primordial. Devido à ausência de critérios histológicos absolutos para o diagnóstico de Barrett mucosa foi estabelecido ainda, estudos recentes [8-11, 15-19] dependem, principalmente, os padrões de alguns subconjuntos citoqueratina, especialmente dois padrões distintos de CK7 /20 coloração. As citoqueratinas são altamente conservadas polipéptidos e representam um grupo de proteínas estruturais citosqueléticas presentes em todos os epitélios. Há pelo menos 20 formas distintas de citoqueratinas em células epiteliais e padrões variáveis ​​de expressão, dependendo do tipo, localização e diferenciação do epitélio [20]. CK7, essencialmente, não é expressa no epitélio normal do tracto gastrointestinal, enquanto que CK20 é expressa no epitélio intestinal, foveolar epitélio gástrico, células endócrinas e nas porções superiores das glândulas pilórica. Barrett CK7 /20 padrão foi definido pela primeira vez por Ormsby et al.
[8] como coloração do epitélio superficial para CK20 e coloração de ambos epitélio metaplásico superficial e profunda para CK7. O gástrica CK7 /20 padrão designado foi agrupado em dois padrões a respeito do tipo de metaplasia intestinal (incompleto /completo) pelos mesmos autores. De acordo com a sugestão, expressão CK7 desigual com envolvimento variável de glândulas profundas foi visto em incompleta metaplasia intestinal gástrica, enquanto que a expressão forte CK20 em glândulas superficiais e profundos com a ausência de expressão foi observada em CK7 completa metaplasia intestinal gástrica. Neste estudo pioneiro, Barrett CK7 /20 padrão foi altamente sensível e específico, quando comparado aos casos com metaplasia intestinal gástrica. No entanto, H. pylori
status dos casos não foi mencionado. Estudos feitos por Glickman et al
[9] e Jovanovic et al.
[15] confirmou as descobertas de Ormsby em 91% e 94% de seus casos com longo segmento BE, respectivamente. Por outro lado, os estudos por outros investigadores não foram capazes de apoiar as descobertas de Ormsby; Barrett CK7 /20 padrão proposto foi encontrado em 54% dos pacientes com longo segmento BE por Mohammed et al.
[16] e apenas 39% dos pacientes com longo segmento BE por El-Zimaity et al.
[17].
Ormsby et al.
[11] depois avaliaram a utilidade da CK7 /20 padrões no curto segmento de estar em outro estudo e descobriu que "diagnóstico" Barrett CK7 /20 padrão estava presente em 82 % dos pacientes com a curto segmento BE. Embora Mohammed et al.
[16] encontra-se quase a mesma percentagem (81%) para o curto segmento BE casos com Ormsby et al.
[11], eles encontraram o mesmo padrão em 30,7% dos pacientes com metaplasia intestinal em cárdia e mais interessante em 55% das biópsias que tiveram ou mucosa gástrica normal ou inflamado sem metaplasia intestinal.
no presente estudo, 10% dos pacientes com a curto segmento BE mostrou a /20 padrão CK7 antecipado e 40 % de pacientes com metaplasia intestinal gástrica mostraram o padrão esperado gástrica CK7 /20 com metaplasia intestinal completo ou incompleto apropriado. A sensibilidade de Barrett CK7 /20 padrão foi muito baixo (10%) no grupo devem ser, apesar da sua elevada especificidade (100%). A sensibilidade gástrica CK7 /20 padrão também foi baixa (40%) no grupo de metaplasia intestinal gástrica, embora a especificidade foi alta (100%) neste grupo assim. Gástrica CK7 /20 padrão foi significativamente maior no grupo metaplasia intestinal gástrica do que no grupo BE (P
= 0,02), enquanto Barrett CK7 /20 padrão não diferiram significativamente entre os dois grupos (P
= 0,487). Com base nestes resultados, usar dois padrões distintos de CK7 /20 coloração não poderia ser aceito como um método confiável na diferenciação de curto segmento BE de metaplasia intestinal gástrica já que ambos os padrões têm valores muito elevados falsa-negatividade muito baixa sensibilidade e.
no estudo da Couvelard [10] 31% dos pacientes e na de Ormsby estudo 15% dos pacientes com a curto segmento de ser associado com Barrett CK7 /20 padrão teve infecção por H. pylori
. Embora a percentagem de positivos H. pylori
casos em pacientes com a curto segmento de estar associada a um /20 padrão de Barrett CK7 não foi mencionado no estudo da Mohammed [16], 6% dos pacientes tiveram H. pylori
a infecção com a curto segmento BE. Uma vez que a metaplasia intestinal pode ser visto tanto em pylori
infecção por H. e BE, combinação destas entidades não deve ser interpretado do para avaliar a utilidade dos subconjuntos citoqueratina. Foram excluídos do H. pylori
casos positivos mesmo se ele foi diagnosticado como BE. resultados, portanto, as diferenças entre o nosso estudo e reportados anteriormente pode ter sido devido a esta distinção rigorosa de H. pylori
casos ser positivo no presente estudo. Diferenças nos protocolos de biópsia entre os estudos anteriores e no presente estudo (número, tamanho ou do site do espécime, anterograd ou abordagem retroflexão) poderia ter sido outra razão para as diferenças nos resultados. Para identificar a localização exacta da abordagem anterograd cárdia deve ser usado. No entanto, em relação ao epitélio cardíaca normal, a sua existência ainda permanece pouco clara, uma vez que os resultados de diferentes estudos são contraditórios [21-23]. Enquanto os dois estudos sugerem que o epitélio cardíaca normal representa uma forma de epitélio metaplásico secundária a refluxo gastro-esofágico [21, 22], outro estudo relatado por Kilgore et ai sugere que a mucosa cardíaca existe como uma estrutura nativa [23]. Novos estudos podem fornecer informações sobre a mucosa cardíaca, especialmente a sua "relação com as mudanças de refluxo e BE.
Conclusões
Com base nos nossos resultados, estão menos confiantes do uso das propostas CK7 /20 padrões para diferenciar de curto segmento BE de metaplasia intestinal gástrica. É importante reconhecer as características endoscópicas que ajuda no diagnóstico de ser para endoscopists, uma vez que a histologia de metaplasia intestinal em cárdia relacionado com outras etiologias e Barrett esófago é idêntica. Sugerimos que a definição de BE deve basear-se na clínica, endoscópica, e os achados histológicos, em vez de o padrão de CK7 /20 imunocoloração: Lista de abreviaturas
BE:.
Esôfago de Barrett

GERD:
Gastro-esofágico doença do refluxo
H. pylori
:
Helicobacter pylori

CK7:
Cytokeratin 7
CK20:
Cytokeratin 20
SCJ:
escamocolunar junção
EGJ:
esôfago-gástrica junção
H & e:
hematoxilina e Eosina

PAS:
ácido Periódico de Schiff
ABC:
padrão estreptavidina-Biotina peroxidase Complexo

DAB:
diaminobenzidina
JGE:
Gastro-esofágico junção
declarações
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