Het nut van cytokeratines 7 en 20 (CK7 /20) immunohistochemie in het onderscheid van het korte segment Barrett slokdarm van de maag-darm metaplasie: Is het betrouwbaar

het nut van cytokeratines 7 en 20 (CK7 /20) immunohistochemie in het onderscheid van het kort? -segment Barrett slokdarm van de maag-darm metaplasie:? Is het betrouwbaar
Abstracte achtergrond
het doel van de huidige correlatieve immunohistochemische studie was om het nut van cytokeratine (CK7 en CK20) expressie in de diagnose van korte beoordelen -segment Barrett slokdarm, met name de werkzaamheid in het onderscheiden van Barrett slijmvlies van intestinale metaplasie van de maag cardia en corpus.
Methods
Twee groepen van endoscopische biopsie monsters werden onderzocht, waaronder 20 endoscopische biopsie specimens van de korte-segment Barrett slokdarm ( groep A) en gelijk aantal exposerende Helicobacter pylori
geassocieerd intestinale metaplasie van de maag cardia en corpus (groep B). Allen werden onderzocht door immunohistochemie met behulp van de standaard ABC-methode voor CK7 en CK20 expressie. Fisher's exact test werd gebruikt voor statistische analyse van Barrett CK7 /20 en maag- CK7 /20 patronen tussen de groepen
Resultaten
De verwachte patroon van reactiviteit in Barrett slijmvlies (CK7:. sterke diffuse positiviteit in oppervlakkige en diepe klieren; CK20: positiviteit in oppervlakte-epitheel en oppervlakkige klieren) werd gezien in 2 gevallen van groep A exemplaren. Het verwachte maag patroon (CK7: fragmentarisch immunokleuring met een variabele betrokkenheid van de diepe klieren; CK20: fragmentarisch immunokleuring van oppervlakkige en diepe klieren in incomplete intestinale metaplasie /afwezigheid van CK7 immunoreactiviteit met sterke CK20 kleuring in oppervlakkige en diepe klieren in volledige intestinale metaplasie) werd gezien in 8 gevallen van groep B specimens. De respectievelijke gevoeligheid en vals-negatieve waarden CK7 /20 kleuring voor Barrett patroon in groep A waren 10% en 90%, respectievelijk. Deze waarden voor gastrische patroon van groep B was 40% en 60%, respectievelijk. De specificiteit en vals-positiviteit waarden van beide patronen waren gelijk (100% en 0% respectievelijk). Er was geen statistisch significant verschil Barrett patroon tussen de twee groepen (P
= 0,487), terwijl de waarneming van maag patroon was in groep B aanmerkelijk hoger dan van groep A (p
= 0,02).
conclusies
We concludeerden dat deze hypothese en recent toegepaste diagnostische criteria met betrekking tot CK7 en CK20 immunoreactiviteit niet betrouwbaar zijn in het onderscheiden van korte-segment Barrett slokdarm van intestinale metaplasie zoals te zien in de maag cardia en corpus. achtergrond
Barrett slokdarm ( BE) geassocieerd met een verhoogd risico op slokdarmkanker adenocarcinoom, een maligniteit die snel toenemende incidentie onlangs [1-3] heeft. De etiologie van BE is niet bekend, maar genetische aanleg met colitis verandert van gastro-oesofageale refluxziekte (GERD) zou verantwoordelijk zijn [4].
Wees moet worden vermoed bij de endoscopie, wanneer de normale, witachtige lijkende plaveiselepitheel wordt vervangen door een rood-fluwelen verschijnen slijmvlies in de distale slokdarm. De betrouwbare diagnose van BE is moeilijk in verband met steekproeffouten te wijten aan het bepalen van de exacte locatie van de gastro-oesofageale overgang, zoals in hiatus hernia. Diagnostische problemen ontstaan ​​wanneer de endoscopist deals met de korte-segment. Junctional, fundic en gespecialiseerde (darm) soorten glandular epitheel werden beschreven voor de definitie van de BE door Paull et al.
[5]. Maar werd onlangs gemeld dat de detectie van het laatste is een betrouwbare maat voor de diagnose van BE [4, 6]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) zou kunnen worden geassocieerd met carditis en intestinale metaplasie van de cardia [7]. Daarom kan intestinale metaplasie met de cardia soortgelijk aan Helicobacter
gastritis histologisch onderscheiden van intestinale metaplasie van het distale slokdarm.
Er is gesuggereerd dat cytokeratine subsets 7 en 20 (CK20 en CK7) nuttig om zowel te onderscheiden kan zijn lange- en korte-segment van BE uit intestinale metaplasie van de proximale maag [8-11]. Het doel van deze studie was de cytokeratine (CK7 en CK20) expressie in de diagnose van korte segment Barrett slokdarm, met name haar nut bij differentiële diagnose van Barrett slijmvlies van intestinale metaplasie van de gastrische cardia corpus evalueren.
Methods
Endoscopie exemplaren van de genoemde van Marmara University Institute of Gastroenterology patiënten werden beoordeeld uit de bestanden van de afdeling Pathologie aan dezelfde universiteit tussen 1998 en 2002. ten minste 4 biopsies werden genomen van onregelmatige squamo-zuilvormige splitsing (SCJ) met schiereilanden of tongen van cilinderepitheel en de eilanden van geschubde of cilinderepitheel voor elk geval. Wanneer meer dan één schiereiland of tong kolomvormige epitheel in de distale slokdarm endoscopisch waargenomen, werd 4 biopten genomen uit elk schiereiland en ze werden naar histopathologisch onderzoek in afzonderlijke Eppendorph buizen. Kleine schiereilanden met lineaire vaten distaal van de SCJ en eventuele focale afwijkingen werden ook biopsie.
Slokdarm en maag biopten antegrade of retrograde met retroflexie van de endoscoop zijn genomen toen het nodig was. De retroflexed aanpak is de voorkeur voor de bemonstering van cardia. De gevallen die histopathologisch als korte segment werden gediagnosticeerd werden opgenomen aan de studie. Korte segment werd endoscopisch gedefinieerd als tongen minder dan 3 cm lengte boven de esophago-gastrische overgang (EGJ) met zijn gelijkenis met dunne darm met goed gevormde microvilli en intestinale metaplasie hetzij hematoxyline en eosine (H &E) (fig 1) of alcianblauw pH 2,5 positief slijmbekercellen (figuur 2) bij microscopisch onderzoek. Figuur 1 Section van gastro-oesofageale overgang tonen BE met slijmbekercellen, H & E, × 40
Figuur 2 Intense blauwe kleuring van slijmbekercellen met Alcian blauw pH 2,5 /PAS, × 40
De onderzoeksgroep bestond uit 20 patiënten met een short-segment (groep A) en het gelijke aantal patiënten met maag- intestinale metaplasie (cardia en corpus) onder begeleiding van H. pylori
gastritis (groep B). Biopsiestalen dat op 5 mm afstand onder het EGJ verkregen werden als cardiale mucosa.
Monsters werden gefixeerd in 10% gebufferde formaline en ingebed in paraffine. Seriële secties werden gesneden uit elk monster. Alle secties werden gekleurd met routine H &E kleuring. Perjoodzuur Schiff (PAS), Alcian blauw pH 2,5 en Alcian blauw pH 0,5 werden gebruikt om neutraal mucine, sialomucin en sulphomucin identificeren, respectievelijk. Giemsa kleuring werd gebruikt om te openbaren H. pylori
. We uitgesloten van de gevallen zonder ontdekt metaplasie van slijmbekercellen door Alcian blauwe vlek voor zowel groep A en groep BH pylori
besmetting werd bevestigd met Giemsa kleuring van de gevallen in groep B.
Endoscopische biopsies werden gegroepeerd als complete (type I) of onvolledige (type II) intestinale metaplasie volgens de eerder gedefinieerde criteria [12]. De voorgestelde Barrett CK7 /CK20 patroon (CK7: sterke diffuse positiviteit in oppervlakkige en diepe klieren; CK20: positiviteit in oppervlakte-epitheel en oppervlakkige klieren) en de maag CK7 /CK20 patroon (CK7: fragmentarisch immunokleuring met een variabele betrokkenheid van de diepe klieren; CK20: fragmentarisch immunokleuring van oppervlakkige en diepe klieren in incomplete intestinale metaplasie /afwezigheid van CK7 immunoreactiviteit met sterke CK20 kleuring in oppervlakkige en diepe klieren in volledige intestinale metaplasie) werden geëvalueerd voor alle gevallen. Six control biopsieën werden retrospectief samengesteld uit patiënten bij wie biopsieën vertoonden normale SCJ (n = 3) en normale cardia (n = 3) microscopisch.
Groep A
klinische gegevens zoals leeftijd, geslacht, gastro-oesofageale reflux symptomen, en endoscopische bevindingen en korte-segment Barrett slijmvlies werden verkregen van elk geval. De patiënten met BE in de laatste 3 cm van de distale slokdarm werden opgenomen om de groep A. Patiënten met een positieve H. pylori
werden uitgesloten van de studie.
Groep B
klinische gegevens zoals leeftijd, geslacht, gastro -esophageal reflux symptomen, endoscopische bevindingen, en H. pylori
statuut werden verkregen van elk geval. Patiënten met positieve H. pylori
opgenomen de studie. Twintig endoscopische biopten (cardia, n = 9 en corpus, n = 11) met histologische bewijs van intestinale metaplasie werden bestudeerd.
Immunohistochemische studies
Een weefsel blok werd geselecteerd voor elk geval. De blokken werden op 5 urn secties gesneden. Dia's werden van paraffine ontdaan en gerehydrateerd door middel van gesorteerde alcoholen. Antigeenterugtrekking werd uitgevoerd met citraatbuffer magnetron zowel CK7 en CK20. Glaasjes werden geïncubeerd in 3% waterstofperoxide /methanol gedurende 20 min niet-specifieke achtergrondkleuring te blokkeren door endogeen peroxidase. Gebruik van de standaard streptavidine-biotine-peroxidase complex (ABC) methode, CK7 (kloon OV-TL 12/30, Neomarkers, Fremont, CA, USA) en CK20 (kloon K20.4, Neomarkers, Fremont, CA, USA) werden uitgevoerd op alle dia's. De objectglaasjes werden gedurende 30 minuten secundaire antilichaamoplossing. Diaminobenzidine (DAB) diende als chromagen. De objectglaasjes werden tegengekleurd met hematoxyline. De monsters van borstcarcinoom en coloncarcinoom werden gebruikt als positieve controles voor CK7 en CK20, respectievelijk. Negatieve controles werden geproduceerd met dezelfde tumormonsters en kleuringmethoden door het weglaten van de primaire antilichamen.
Statistische analyse
Fisher's exact test werd gebruikt voor analyse van Barrett en maag patronen. Een resultaat werd als statistisch significant indien P
waarde kleiner dan of gelijk aan een alfa-niveau van 0,05 was.
Resultaten
In totaal 40 patiënten deel aan de studie. De mediane leeftijd van de patiënten was 46 (range, 28-77) jaar in groep A en 50 (range, 25-73) jaar in groep B. De verhouding mannen en vrouwen was 4-1 in Groep A, terwijl het was 2 3 in groep B. De klinische en immunohistochemische functies in Tabel 1.Table werden samengevat 1 klinische en immunohistochemische bevindingen bij patiënten met een korte-segment BE en maag-darm metaplasie

Short-segment (n = 20)
Gastric intestinale metaplasie (n = 20)
Leeftijd (jr) een
28-77
25-73
Man /Vrouw
4/1
2/3
Barrett CK7 /20 patternb (%)
10 | 0
Gastric CK7 /20 patternc (%)
5
40
andere patronen (%)
85
60
Range b gedefinieerd in referentiec gedefinieerd in referentie
Groep a
Reflux symptomen werden gevonden in 14 gevallen (70%) met BE. Hoge frequentie van hiatus hernia (65%) werd gevonden in deze groep. Drie gevallen bleek low-grade dysplasie uit van het totaal. Dertien gevallen bleek onvolledig intestinale metaplasie en 7 gevallen waren compleet intestinale metaplasie met behulp Alcian blauwe vlek. De verwachte Barrett CK7 /20 patroon werd slechts 2 van de 20 gevallen geïdentificeerd (Figuur 3). Eén geval toonde verwachte maag CK7 /CK20 patroon. De herinnering had variabele kleurpatronen; als geen immunokleuring (n = 6) of focale immunokleuring (n = 11) voor CK7 met focale of diffuse immunokleuring voor CK20, die niet passen bij de verwachte Barrett CK7 /20 patroon (figuur 4). De gevoeligheid, specificiteit, valse positiviteit en negativiteit van vals-CK7 /20 kleuring voor Barrett patroon was 10%, 100%, 0% en 90%, respectievelijk. Figuur 3 een. Diffuse matige CK7 immunokleuring van oppervlakkige en diepe klieren in BE, × 40, b. Band-achtige CK20 immunokleuring van oppervlakte-epitheel en oppervlakkige klieren in BE, × 40
Figuur 4 a. Afwezig CK7 immunokleuring in BE, × 100, b. Fragmentarisch CK20 immunokleuring van oppervlakkige en diepe klieren in BE, × 100
Groep B
Eleven gevallen toonde volledige intestinale metaplasie, terwijl 9 gevallen bleek onvolledig intestinale metaplasie met behulp Alcian blauwe vlek. Acht gevallen sprak de maag CK7 /20 patroon (cardia, n = 5 en corpus, n = 3). Zes van hen toonde volledige en 2 incomplete maag CK7 /20 patroon. Barrett CK7 /20 patroon werd niet waargenomen bij patiënten met maag- intestinale metaplasie. De kleuring kenmerken van de resterende 12 gevallen niet passen bij de verwachte maag CK7 /20 patroon; als gevolg van de fragmentarisch CK7 en /of focale CK20 immunopositivity in gevallen met volledig intestinale metaplasie en afwezigheid van CK7 immunopositivity en /of diffuse CK20 immunopositivity in gevallen met onvolledige intestinale metaplasie. De sensitiviteit, specificiteit, vals-positiviteit, en vals-negativiteit van CK7 /20 kleuring voor Barrett patroon waren 40%, 100%, 0%, en 60%, respectievelijk.
Er was geen significant verschil voor Barrett patroon tussen de twee groepen (2/20 in groep A vs.
0/20 in groep B, P
= 0,487), terwijl de waarneming van maag patroon was in groep B aanmerkelijk hoger dan van groep A (8/20 versus .
1/20, P
= 0,02).
normaal SCJ bleek fragmentarisch immunopositivity voor CK7 zonder immunoreactiviteit voor CK20, maar normale maag cardia onthuld immunonegativity voor CK7 gecombineerd met fragmentarisch immunopositivity voor CK20, die beperkt is aan de oppervlakte epitheel.
Discussie
Intestinale metaplasie kunnen ontwikkelen in de cardia bij patiënten die ofwel met een korte-segment BE of carditis vooral veroorzaakt door H. pylori
. Onderscheid tussen deze twee entiteiten is belangrijk omdat de etiologie en de kans op adenocarcinoom verschillend [7]. BE wordt verondersteld te worden veroorzaakt door GERD en geassocieerd met een verhoogd risico op slokdarmkanker adenocarcinoom [1, 2, 4]. Microscopisch BE kan worden gedefinieerd als vervanging van de esophagus plaveiselepitheel van metaplasie gespecialiseerde (intestinalized) cilindrisch epitheel. Andere epitheliale types zijn junctional type en fundal type epitheel. De diagnose van BE vereist biopsie bevestiging van intestinale metaplasie met Alcian blauwe pH 2,5 positief goblet cellen in aanvulling op de typische endoscopische bevindingen. Te weten hoeveel SCJ proximale aspect van de maag plooien en lineair gerichte mucosale vaartuigen in de distale slokdarm en EGJ worden geïdentificeerd [13]. SCJ gewoonlijk overeen met de proximale rand van de lineaire maag plooien waardoor EGJ. Kleine vaten evenwijdig aan de lengteas van de slokdarm verdwijnen de normale gelegen SCJ. Echter, detectie van abnormale uitbreiding van deze schepen onder de SCJ en boven de proximale rand van gastrische vouwen is een bewijs van de aanwezigheid van kolomvormige epitheel in de distale slokdarm [14].
Onderscheidende BE van andere entiteiten die vergelijkbaar histopathologische kunnen maken features staat voorop. Door geen absolute histologische criteria voor de diagnose van Barrett slijmvlies is nog niet vastgesteld, recente studies [8-11, 15-19] voornamelijk afhangen van bepaalde patronen cytokeratine subsets, met name twee verschillende patronen van CK7 /20 kleuring. Cytokeratinen zijn sterk geconserveerd polypeptiden en vormen een groep cytoskelet structurele eiwitten in alle epithelia. Er zijn ten minste 20 verschillende vormen van cytokeratinen in epitheelcellen en variabele expressiepatronen afhankelijk van het type, de locatie en differentiatie van het epitheel [20]. CK7 in wezen niet tot expressie gebracht in normale epitheel van het spijsverteringskanaal, dat CK20 uitgedrukt in darmepitheel, maag foveolar epitheel en endocriene cellen in de bovenste delen van de pylorus klieren. Barrett CK7 /20 patroon werd voor het eerst gedefinieerd door Ormsby et al.
[8] als kleuring van de oppervlakkige epitheel voor CK20 en kleuring van zowel oppervlakkige en diepe metaplastisch epitheel voor CK7. De aangewezen maag CK7 /20 patroon werd gegroepeerd in twee patronen met betrekking tot het type van de intestinale metaplasie (onvolledige /voltooid) van dezelfde auteurs. Volgens hun suggestie werd fragmentarisch CK7 expressie met andere optreden van diepe klieren gezien in onvolledig maag intestinale metaplasie, terwijl sterke CK20 expressie in oppervlakkige en diepe klieren met het ontbreken van CK7 expressie werd waargenomen in alle maag intestinale metaplasie. In deze baanbrekende studie, Barrett CK7 /20 patroon was zeer gevoelig en specifiek in vergelijking met gevallen maag intestinale metaplasie. Echter, werd H. pylori
status van de gevallen niet genoemd. Studies van Glickman et al
[9] en Jovanovic et al.
[15] bevestigd Ormsby de bevindingen in 91% en 94% van de gevallen met een lange-segment, respectievelijk. Anderzijds hebben studies door enkele andere onderzoekers niet kunnen Ormsby bevindingen ondersteunen zijn; de voorgestelde Barrett CK7 /20 patroon werd gevonden in 54% van de patiënten met een lange-segment BE door Mohammed et al.
[16] en slechts 39% van de patiënten met een lange-segment BE door El-Zimaity et al.
[17].
Ormsby et al.
[11] later onderzocht de bruikbaarheid van CK7 /20 patronen in korte-segment in een ander onderzoek en vond dat "diagnostische" Barrett CK7 /20 patroon aanwezig was in 82 % van de patiënten met een korte-segment. Hoewel Mohammed et al.
[16] vonden bijna hetzelfde percentage (81%) voor de korte-segment gevallen Ormsby et al.
[11], vonden ze hetzelfde patroon in 30,7% van de patiënten met intestinale metaplasie in cardia en interessanter in 55% van de biopten die ofwel normaal of ontstoken maagslijmvlies hadden zonder intestinale metaplasie.
in de huidige studie, 10% van de patiënten met een korte-segment toonde de verwachte CK7 /20 patroon en de 40 % van de patiënten met maag- intestinale metaplasie toonde de verwachte maag CK7 /20 patroon met de juiste volledig of onvolledig intestinale metaplasie. De gevoeligheid van Barrett CK7 /20 patroon was zeer laag (10%) in de groep BE ondanks de hoge specificiteit (100%). De gevoeligheid van de maag CK7 /20 patroon was laag (40%) in de maag intestinale metaplasie groep, hoewel de specificiteit hoog was (100%) in deze groep. Gastric CK7 /20 patroon was in de maag intestinale metaplasie groep significant hoger dan in BE (P
= 0,02), terwijl Barrett CK7 /20 patroon verschilde niet significant tussen de twee groepen (P
= 0,487). Gebaseerd op deze resultaten, twee verschillende patronen van CK7 /20 vlekken gebruik kon niet worden aanvaard als een betrouwbare methode in het onderscheiden van korte-segment BE van maag- intestinale metaplasie aangezien beide patronen hebben een zeer lage gevoeligheid en zeer hoge vals-negatieve waarden.
in het Couvelard studie [10] 31% van de patiënten en in de Ormsby de studie 15% van de patiënten met een korte-segment kunnen worden geassocieerd met Barrett CK7 /20 patroon had H. pylori
infectie. Hoewel het percentage van de positieve H. pylori
gevallen bij patiënten met een korte-segment worden geassocieerd met een Barrett CK7 /20 patroon werd niet in de Mohammed-studie genoemd [16], 6% van de patiënten had H. pylori
infectie met korte-segment. Aangezien intestinale metaplasie zowel H. pylori infectie
en BE worden waargenomen, dient combinatie van deze entiteiten niet uitgelegd voor het evalueren van de bruikbaarheid van de cytokeratine subsets zijn. We uitgesloten van de H. pylori
positieve gevallen, zelfs als het als BE werd gediagnosticeerd. Daarom is het verschil tussen de studie en de eerder gerapporteerde resultaten kunnen te wijten zijn aan deze strikte scheiding van H. pylori
BE positieve gevallen in deze studie. Verschillen in biopsie protocollen tussen eerdere studies en de huidige studie (aantal, grootte of site van het monster, anterograd of retroflexed benadering) kan een andere reden voor verschillen in de resultaten zijn geweest. Om te identificeren van de exacte locatie van de cardia anterograd aanpak moet worden gebruikt. Echter, over de normale cardiale epitheel, het bestaan ​​blijft onduidelijk, aangezien de resultaten van verschillende onderzoeken zijn tegenstrijdig [21-23]. Terwijl de twee studies suggereren dat de normale cardiale epitheel is een vorm van metaplastisch epithelium secundair aan gastro-oesofageale reflux [21, 22], een andere studie van Kilgore et al stelt cardiale mucosa bestaat als een natieve structuur [23]. Nader onderzoek kan informatie bevatten over de cardiale mucosa, vooral de 'relatie met reflux wisselen van werktuigen en BE.
Conclusies
Op basis van onze resultaten, wij minder vertrouwen op het gebruik van de voorgestelde CK7 /20 patronen voor differentiatie short-segment BE van maag- intestinale metaplasie. Het is belangrijk om de endoscopische kenmerken die de diagnose BE steun voor endoscopists herkennen, aangezien de histologie van intestinale metaplasie in cardia soortgelijk aan andere etiologie en Barrett slokdarm identiek. Wij stellen voor dat de definitie van BE moet gebaseerd zijn op de kliniek, endoscopische en histologische bevindingen in plaats van het patroon van CK7 /20 immunokleuring Nederlands Lijst van afkortingen
BE:.
Barrett slokdarm

GERD:
Gastro-oesofageale refluxziekte
H. pylori
:
Helicobacter pylori

CK7:
Cytokeratin 7
CK20:
Cytokeratin 20
SCJ:
squamo-Zuilvorm Junction
EGJ:
Esophago-Gastric Junction
H & E:
Hematoxylin en eosine

PAS:
Periodic Acid Schiff
ABC:
Standard Streptavidine-Biotine Peroxidase Complex

DAB:
Diaminobenzidine
GEJ:
Gastro-oesofageale Junction
verklaringen
Authors 'originele ingediende dossiers voor images
Hieronder staan ​​de links naar originele ingediende dossiers van de auteurs voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12907_2003_16_MOESM2_ESM.jpeg Authors' 12907_2003_16_MOESM1_ESM.jpeg Auteurs originele bestand voor figuur 2 12907_2003_16_MOESM3_ESM.jpeg Authors 'originele bestand voor figuur 3 12907_2003_16_MOESM4_ESM.jpeg Authors' originele bestand voor figuur 4 Concurrerende belangen
geen gemeld.

• Verminderde expressie van prenyl difosfaat synthase subunit 2 correleert met een verminderde overleving van patiënten met maagkanker
• Helicobacter pylori lipopolysaccharide modificatie, Lewis-antigeen expressie, en de maag kolonisatie zijn cholesterol-afhankelijke