Профиль экспрессии муцинов (MUC2, MUC5AC и MUC6) в инфицированных Helicobacter Pylori пренеопластическим и опухолевое человеческого эпителия желудка

Профиль экспрессии муцинов (MUC2, MUC5AC и MUC6) в хеликобактерной
зараженных пренеопластическим и опухолевое человеческого эпителия желудка
Аннотация
Справочная информация
хеликобактерной
(H. Pylori
) вызывает гастрит и кишечной метаплазии (IM), которые могут развиться в рак желудка. Целью данного исследования было сравнение профиля муцинах в прогрессивных стадиях хеликобактерной
зараженную пренеопластическим и опухолевой человеческого эпителия желудка. Мы использовали панель моноклональных антител с четко определенными особенностей MUC2, MUC5AC и MUC6, чтобы охарактеризовать характер экспрессии муцинов с помощью иммуногистохимии.
Методы
БУТ и ELISA снизились на H. Pylori
подтверждение. Была выражена желудочные биопсии секции человека окрашивали с помощью иммуногистохимии с MUC2, MUC5AC и MUC6 антител.
Результаты
MUC5AC в поверхностном эпителии и верхней части желудка ямы. MUC6 экспрессии был обнаружен в нижней части желудочных желез. Была выражена MUC2 в кишечной метаплазии, в основном в бокаловидных клеток. Муцина Профиль экспрессии в прогрессивных стадиях хеликобактерной
инфицированных человек эпителий желудка позволяет идентифицировать кишечной метаплазии, которая характеризуется снижением экспрессии желудочных муцинов (MUC5AC и MUC6) и де-NOVO
выражение MUC2.
заключение
в заключение, наши результаты свидетельствуют о том, что изменяют экспрессию MUC5AC и MUC6 вместе с аберрантной экспрессией MUC2 в кишечной метаплазией, в процессе канцерогенеза желудка. Настоящее исследование показывает, что MUC2 муцин паттерн экспрессии является надежным маркером кишечной метаплазии, которая появляется в контексте H. Pylori
инфицированных лиц.
Предпосылки
хеликобактер пилори
колонизирует слизистую оболочку желудка человека и вызывает гастрит и кишечной метаплазии (IM), который может развиться к желудочному карциномы [1-3]. H. Pylori
инфекция была создана в качестве типа я канцерогеном для человека в IARC [4]; недавно было показано, что бактерии также способны вызывать гастрит, мгновенных сообщений и рака желудка в монгольских песчанок [5-8]. В организме человека антихеликобактерную
также колонизирует слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки, когда есть метаплазия желудка [9]. H. пилори
инфекции у человека, следовательно, зависит от желудка микросреды, которая определяется в значительной степени муцина и углеводный состав желудочного муцина слоя.
Муцины сильно гликозилированных гликопротеинов, которые являются основными компонентами слизистая вязкий гель, покрывающей поверхность эпителиальные ткани [10]. На сегодняшний день, девять различных эпителиальные муцин генов (MUC1, 2, 3, 4, 5 ° С, 5В, 6, 7, и 8), были идентифицированы [11-21]. В месте
гибридизация и иммуногистохимического исследования показали, что эти муцинов дифференцированно выражены в эпителии с клеточным типом специфичности [21-24]. Нормальная слизистая оболочка желудка показывает типы клеток, специфическую экспрессию MUC1, MUC5AC и MUC6, с первыми двумя муцин, найденных в поверхностном эпителии и MUC6 в глубоких железах [22, 25, 26]. MUC6 в основном экспрессируется в слизистой оболочке желудка. Нормальная слизистая оболочка желудка не выражают MUC2 [25, 27].
Изменения уровней экспрессии и гликозилирования моделей муцинах были связаны с несколькими заболеваниями, в том числе карцином [27-31]. При раке желудка, были зарегистрированы изменения в муцина полипептид: потеря экспрессии MUC5AC [23, 26, 32], увеличение муцина heterogenesity [23]. Эти наблюдения указывают на то, что муцин изменения можно рассматривать как "молекулярные" маркеров злокачественной трансформации слизистой оболочки желудка. Более того, недавно опубликованное исследование настоятельно советуем MUC5AC в качестве мнимого H. pylari
рецептора [33, 34].
В этом настоящем исследовании мы охарактеризовали паттерн экспрессии муцинов в прогрессивных этапах хеликобактерной
заражена рак желудка человека. Мы использовали комплексную панель моноклональных антител, с хорошо охарактеризованных специфичностью, направленных на MUC2, MUC5AC и MUC6 муцинах.

Результаты паттерна экспрессии MUC2, MUC5AC и MUC6 муцинах в нормальной слизистой оболочке желудка
MUC5AC была высоко выраженное в foveolar эпителий и слизистую шейки клеток антрального (>. 75%, фиг.1В;. рис 3b; Таблица 2). Выражение MUC6 был обнаружен в железах антральном (> 75%, рис 1в;. Фиг.3С;. Таблица 3) и MUC2 не был обнаружен в нормальной слизистой оболочки желудка (рис 1а;.. Фиг.3А; Таблица 2). Рисунок 1 Иммуногистохимическое окрашивание MUC2, MUC5AC и MUC6 муцинах в хеликобактерной инфицированных пациентов. а. MUC2 окрашивание нормальной слизистой оболочки желудка (исходное увеличение х100). б. MUC5AC окрашивание нормальной слизистой оболочки желудка (исходное увеличение × 100). гр. MUC6 окрашивание нормальной слизистой оболочки желудка (исходное увеличение х100). d. MUC2 окрашивание атрофический гастрит (Original увеличение × 100). е. MUC5AC окрашивание атрофический гастрит (Original увеличение × 100). е. MUC6 окрашивание атрофический гастрит (Original увеличение × 100). г. MUC2 окрашивание кишечная метаплазия (Original увеличение × 100). час MUC5AC окрашивание кишечная метаплазия (Original увеличение × 100). Рисунок 2
иммуногистохимическое окрашивание MUC2, MUC5AC и MUC6 муцинов в H.pylori, инфицированных пациентов. а. MUC6 окрашивание кишечная метаплазия (Original увеличение × 100). б. MUC2 окрашивание дисплазии (Original увеличение × 100). гр. MUC5AC окрашивание дисплазии (Original увеличение × 100). d. MUC6 окрашивание дисплазии (Original увеличение × 100). е. MUC2 окрашивание карциномы (Original увеличение × 100). е. MUC5AC окрашивание карциномы (Original увеличение × 100). г. MUC6 окрашивание карциномы (Original увеличение × 100). Рисунок 3
паттерн экспрессии муцинов (MUC2, MUC5AC и MUC6) в хеликобактерной заражена пренеопластическим и опухолевое человеческого эпителия желудка. а. Выражение MUC2 в хеликобактерной
инфицированных пренеопластическим и опухолевое человеческого эпителия желудка. б. Выражение MUC5AC в хеликобактерной
зараженную пренеопластическим и опухолевой человеческого эпителия желудка. гр. Выражение MUC6 в хеликобактерной
инфицированных пренеопластическим и опухолевое человеческого эпителия желудка.
Таблица 1 Характерности, происхождение и разведений моноклональных антител.
Моноклональные антитело

Специфичность
справочнике

Разбавление

PMH1
MUC2
Reis и др
[11]
Неразведенный
CLH2
MUC5AC
Reis и др
[12]
1: 2
CLH5
MUC6
Reis и др
[10]
1: 2
Таблица 2. Экспрессия муцина (MUC2, MUCSAC и MUC6) в хеликобактерной
инфицированной пренеопластическим и опухолевой желудка человека эпителий
Stages

H. пилори

MUC2 Expression

MUC5AC Expression

MUC6 Выражение

N
P
-
+
++
+++ ++++

-
+
++
+++ ++++

-
+
+ +
+++ ++++

Нормальный (п = 7)
7
-
п = 7 (100%)
-
-
-
-
-
-
-
п = 2 (28,6%)
п = 5 (71,4%)
-
-
-
1 (14,3%)
6 (85,7%)
атрофический гастрит (п = 26)
-
26
п = 22 (84,6%)
п = 4 (15,4%)
-
-
-
-
-
1 (38%)
13 (50%)
12 (46,2%)
-
-
1 (3,8%)
15 (57,7%)
10 (38,5%)
Кишечная метаплазия (п = 21)
-
21
-
-
п = 9 (42,9%)
п = 12 (57,1%) **
-
-
1 (4,8%)
16 ( 76,2%) **
4 (19%)
-
-
5 (23,8%)
14 (66,7%) **
2 (9,5%)
-
дисплазии (п = 17)
-
17
-
п = 5 (29,4%)
п = 11 (64,7%)
п = 1 (5.9 %)
-
-
3 (17.6%)
10 (58,8%)
4 (23,5%)
-
-
3 (17.6%)
11 (64,7%)
3 (17.3%)
-
карциноме (п = 36)
-
36
-
22 (61,1%)
14 (38,9%)
-
-
-
28 (77,8%)
8 (22,2%)
-
-
12 (33,3% )
17 (47,2%)
7 (19,4%)
- Новости -
N - отрицательна - (> 5%) отрицательный
P - положительная + (5-25%) несколько положительных клеток
п - Количество случаев ++ (25-50%) хорошо определенной области
+++ (50- 75%) обширная область окрашивали
++++ (75-100%) большинство клеток окрашиваются
** р &л; 0.00, * р &л; 0,05 (значимая разница в экспрессии)
иммунологического муцинов в атрофический гастрит
Существовал выражение MUC5AC во всех случаях столбчатых клеток (рис 1д;.. Рис 3б; Таблица 2). Процент окрашенных клеток варьирует от случая к случаю, в большинстве случаев, наблюдается тенденция к большему числу клеток, экспрессирующих MUC5AC (> 75%) в поверхностном части метапластических желез, чем в глубокой части. MUC6 был обнаружен в столбчатых клетках (> 50%;. Рис 1f;. Фиг.3С; Таблица 2) и MUC2 не был обнаружен в атрофический гастрит (рис 1d.)
Иммунологический муцинов в кишечной метаплазией
Там. уменьшали уровень экспрессии MUC5AC и MUC6 во всех случаях (&GТ; 50%), как в кубком и в столбчатых клетках (рис 1 ч, рис 2а,.... рис 3б, рис 3С; таблица 2). Процент окрашенных клеток варьирует от случая к случаю, наблюдалось De Novo
выражение кишечника муцина MUC2 (> 75%), и его экспрессия отображается диффузный цитоплазматический узор в бокаловидных клеток (рис. 1 г;. Рис 3а; . Таблица 2)
Иммунологический муцинов в дисплазии
Там уменьшали уровень экспрессии MUC5AC и MUC6, чем кишечной метаплазией (&GТ; 50%). MUC5AC и MUC6 отображается диффузный цитоплазматический паттерн экспрессии в столбчатых клетках (рис 2в;. Рис 2d;. Рис 3d,.. Рисунок 3, таблица 2). MUC2 выражение отображается диффузный цитоплазматический узор в клетках бокалы (> 50%, рис 2b;. Рис 3а, таблица 2)
Иммунологический муцинов в карциномы
MUC5AC и экспрессии MUC6 часто наблюдались в начале карциномы (>.; 50%), чем передовых карцином (> 25%). В странах с развитой карцином, мы наблюдали тенденцию к пониженной иммунореактивности в глубоководных районах, чем в поверхностных зонах. в развитых карцином MUC5AC и MUC6 выражения уменьшались (> 25%; Фиг.3А;. фиг.3В;.. фиг.3С;. рис 2e, 2f рис, рис 2 г;.. таблицу 2).
Обсуждение
в этом настоящем исследовании мы показали, что паттерн экспрессии муцинов в прогрессивных стадиях хеликобактерной
инфицированного человека эпителий желудка. Муцины выражены с сотовом и тканесецифического рисунком в нормальной ткани. Изменения паттерна экспрессии муцинов были описаны в карцином, а также в их предраковых состояний; В последнем, измененными муцин углеводных и пептидных фрагментов могут представлять собой молекулярные маркеры повышенного риска злокачественной трансформации [27, 35, 36, 38-40].
В соответствии с предыдущими исследованиями отчетности распределение муцинах в нормальном желудке, мы нашел MUC5AC высоко экспрессируется в клетках foveolar антрума, как сообщалось [26, 27, 32, 37-39]. Мы также обнаружили, что MUC6 выражается в слизистых клетках зоны шеи в пилорического желез антрального с аналогичной схеме, описанной ранее [22, 23, 47]. Выражение MUC2 обычно не обнаружен в нормальной слизистой оболочки желудка, как описано в предыдущих докладах [25, 27, 40].
Кишечная метаплазия является одним из поражений, выявленных в каскаде случае, предшествует развитию карциномы желудка [ ,,,0],41]. Кишечная метаплазия включает замену слизистой оболочки желудка эпителием, который напоминает гистологическое слизистую оболочку кишечника. Изменившиеся муцин паттерны экспрессии наблюдались в хеликобактерной
зараженной кишечной метаплазии, в том числе при экспрессии MUC5AC и MUC6 и де Novo
выражение MUC2 главным образом в бокаловидных клеток [30, 48]. Эти результаты подтверждают предположение о том, что кишечная метаплазия действительно представляет дифференциацию слизистую оболочку кишечника в сторону фенотипа [42, 43].
Пониженная экспрессия MUC5AC и MUC6 муцина в желудочном карцином были подтверждены в настоящем исследовании. Выражение MUC5AC в начале желудочной карциномы данной серии, независимо от гистологического типа опухоли, контрастирует со снижением экспрессии уровня MUC5AC иммунореактивности в почти половине передовых карцином, которые свидетельствуют о том, что все желудочные карциномы сохраняют, по крайней мере, некоторые клетки с желудочный фенотип в течение первых стадий опухолевого развития (26). Это предположение также подтверждается уменьшением иммунореактивности в глубоководных районах по сравнению с поверхностными областях передовых карцином. Эти результаты согласуются с ранее полученными результатами, показывающие, что прогрессирование рака желудка сопровождается изменением экспрессии некоторых генов муцина [14]. Наконец, мы наблюдали, что кишечный муцин MUC2 выражается в каждом кишечной метаплазией, что повреждение, которое возникает в процессе канцерогенеза желудка в контексте антихеликобактерной
инфицированных лиц.
Заключение Несмотря на то,
H . пилори
классифицирован как класс I канцероген IARC [4] механизм желудочного канцерогенеза остается плохо изученным. В пренеопластическим слизистой оболочки желудка, экспрессия всех трех муцин антигенов видимому, не коррелирует с тяжестью воспаления и H. Pylori
статуса. Результаты данного исследования можно предположить, что антихеликобактерную
инфекции выступает в качестве инициатора этого канцерогенеза каскада путем индукции воспаления и, в некоторых случаях, последующего метапластического изменения. Кишечная метаплазия сопровождается индукцией экспрессии MUC2 и снижение экспрессии MUC5AC и MUC6. Эти изменения могут способствовать развитию рака желудка. Настоящее исследование показывает, что MUC2 является маркером кишечной метаплазии и может быть использовано для раннего выявления этого поражения в H. Pylori
инфицированный пренеопластическим человеческого эпителия желудка.
Материалы и методы
образцов тканей
Пятьдесят девять желудочные биопсии и 3 мл крови были получены из Стэнли медицинского колледжа и больницы, Ченнаи. Все образцы биопсии ткани были собраны после информированного согласия. Это исследование было проведено после получения разрешения от этического совета больницы. Все образцы биопсии фиксировали в 10% забуференном формалине и обычно встроен в парафин. 4 мкм тонкие серийные срезы и использовали для иммуногистохимического анализа. H. Pylori
инфекция была подтверждена БУТ и ELISA [43]. Гематоксилином и эозином окрашенные срезы были использованы для классификации гастрит ранжированы в соответствии с пересмотренной классификации Сидней [44], опухоли желудка в соответствии с классификацией Lauren [45] и классификации ВОЗ [46]. Мы изучили 7 случаев нормального человеческого эпителия желудка (7 биопсий), 26 случаев атрофический гастрит (26 биопсий), 21 случаев кишечной метаплазии (21 биопсий), 17 случаев дисплазии (17 биопсии) и 36 случаев рака, в которых 21 случаи ранней карциномы и 15 случаев поздних стадий рака (16 биопсий и 20 хирургических образцов).
моноклональные антитела
коллегией из трех моноклональных антител использовали для определения экспрессии муцинов (MUC2, MUC5AC и MUC6). Спецификам, ссылки и разведений антител, перечислены в таблице 1.
иммуногистохимии
срезах нормальных, пренеопластическим и неопластических тканей желудка были иммуно окрашивали в соответствии с Reis и др
[47], с небольшими изменениями , Разделы, предназначенные для лечения нейраминидазы дважды промывали в фосфатно-буферном солевом растворе (PBS), рН 7,4, и инкубировали с нейраминидазы из Clostridium Perfringens типа VI
(Sigma, Сент-Луис, Миссури), разбавленного в 0,1 М Na-ацетатного буфера, рН 5,5 до конечная концентрация 0,1 Ед /мл. Инкубацию проводили в течение 2 ч при 37 ° С и затем три стирок в охлажденном льдом PBS. Срезы обрабатывали 0,5% Н <суб> 2O <суб> 2 в метаноле в течение 30 мин, затем 20 мин инкубации с кроличьей неиммунного сыворотки. Срезы промывали и инкубировали с первичным антителом (таблица 1), в течение ночи при 4 ° С. Срезы промывали и инкубировали с ПХ Сопряженное кроличьей анти-мыши вторичное антитело (разведение 1: 100) в течение 1 ч с последующей промывкой ЗФР и разработки с 0,05% 3,3'-диаминобензидин тетрагидрохлорид (DAB) (SRL, Мумбай, Индия ) свежеприготовленный в PBS, содержащем 0,1% H <> 2O суб <суб> 2. Срезы счетчик окрашивали гематоксилином, обезвожены, и смонтированы. Все серии в том числе положительных и отрицательных контролей были выполнены путем замещения первичных моноклональных антител с иммуноглобулинами того же класса и в той же концентрации.
Озвучивание экспрессии муцинов в хеликобактерной
инфицированных пренеопластическим и неопластических желудочных тканей человека
Полупроницаемая количественный подход был использован, чтобы забить иммунное желудочных тканей человека. Срезы исследовали под световым микроскопом, через каждые 100 клеток оценивали в пяти различных областях, и результаты выражали в виде среднего процента. (-), Отрицательный; +, несколько положительных клеток (≪ 25%); ++ Четко определенных областях с положительными клетками (25-50%); +++, обширные участки с положительными клетками (50-75%); ++++, большинство клеток окрашивали (> 75%).
Статистика
Анализ данных проводился с использованием статистического пакета программ SPSS 10.0 для Windows. Тест хи-квадрат или точный критерий Фишера использовали для анализа различий в частотах. корреляционный тест Спирмена был использован для анализа корреляции между параметрами. P &л; 0,05 считалось статистически значимым
Сокращения
DAB - 3:.
3'-диаминобензидина тетра гидрохлорида


ELISA:
иммуноферментного анализ


HRP:
пероксидазой хрена


IARC:
Международное агентство по изучению рака


IM:
Кишечная метаплазия


мАт:
моноклональные антитела


PBS:
фосфатным буфером физиологический раствор


ВОЗ:
Всемирная организация здравоохранения


БУТ:.
Rapid Мочевина Test

<бр> Объявления
Благодарности
авторы благодарят Lady Tata Memorial Trust, Мумбаи, Индия для финансовой поддержки одного из авторов С. Durai Бабу. Мы благодарны доктору Нарасимхана, профессор и заведующий кафедрой патологии, Шри Рамачандра медицинского колледжа и больницы, Индия, для рассмотрения гистологические и иммуногистохимические результаты и д-р Р. Ravanan, читатель, Департамент статистики, Presidemcy колледжа, Индии за помощь в статистическом анализе. Мы хотели бы поблагодарить д-ра Celso A. Reis для обеспечения анти-MUC2, анти-MUC5AC и анти-MUC6 моноклональных антител. Оригинальные файлы, представленные для изображений, изображения Ниже приведены ссылки на авторов "
АВТОРЫ оригинал представлены файлы для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 12943_2005_142_MOESM2_ESM.doc Авторского 12943_2005_142_MOESM1_ESM.doc авторов исходного файла для Рисунок 2 12943_2005_142_MOESM3_ESM.doc Авторского исходного файла для Рисунок 3 12943_2005_142_MOESM4_ESM.doc Авторского исходного файла для исходного файла Рисунок 4 12943_2005_142_MOESM5_ESM.doc Авторского на рисунке 5

• Различия в желудочном подписей экспрессии генов рака, полученных из лазерного захвата микродиссекции versushisto…
• Дыхательные пути Клеточность, липидные нагруженные макрофаги и микробиология желудочного сока и дыхательны…