Išraiška profilis mucino (MUC2, MUC5AC ir MUC6) Helicobacter pylori užsikrėtę anksto neoplazminė ir neoplazminė žmogaus skrandžio epithelium

išraiška profilis mucino (MUC2, MUC5AC ir MUC6) Helicobacter pylori
užsikrėtę anksto neoplazminė ir neoplazminė žmogaus skrandžio epitelio
Abstract
faktai
Helicobacter pylori
(H. pylori
) sukelia gastritą ir žarnyno Metaplasia (IM), kuris gali vystytis skrandžio karcinoma. Šio tyrimo tikslas buvo palyginti mucino į laipsniškai H. pylori profilį
užkrėstą preneoplastinius ir neoplastinį žmogaus skrandžio epitelį. Mes naudojamas monokloninių antikūnų gerai apibrėžtas ypatumus MUC2, MUC5AC ir MUC6 apibūdinti išraiška modelio mucino imunohistocheminiu skydelį.
Metodai
RUT ir IFA buvo nustatytos H. pylori
patvirtinimo. Žmogaus skrandžio biopsijos skyriai buvo dažomi imunohistocheminis su MUC2, MUC5AC ir MUC6 antikūnų.
Rezultatai
MUC5AC buvo išreikšta paviršutiniškai epitelio ir viršutinėje skrandžio duobes. MUC6 išraiška buvo aptikta apatinėje skrandžio liaukų. MUC2 buvo išreikštas žarnyno metaplazijos, daugiausia taurė ląstelių. Mucino išraiška aprašymą į laipsniškai H. pylori
užsikrėtę žmogaus skrandžio epitelio leidžia žarnyno metaplazijos, kuriai būdingas sumažėjęs išraiška skrandžio mucino (MUC5AC ir MUC6) ir de novo pervežimas raiškos identifikavimas MUC2.
Išvada
Apibendrinant, mūsų rezultatai rodo, kad yra pakeistas išraišką MUC5AC ir MUC6 kartu su nukrypusiu nuo normos išraiškos MUC2 žarnyne metaplazijos, skrandžio kancerogenezėje proceso metu. Šis tyrimas rodo, kad MUC2 mucino išraiška modelis yra patikimas žymeklis žarnyno metaplazijos, kuris pasirodo H. pylori
užsikrėtusių asmenų atžvilgiu.
Faktai
Helicobacter pylori
kolonizuoja žmogaus skrandžio gleivinę ir sukelia gastritą ir žarnyno Metaplasia (IM), kuris gali vystytis link skrandžio karcinoma [1-3]. H. pylori
infekcija buvo įsteigta kaip I tipo žmogaus kancerogenas IARC [4]; jis neseniai buvo parodyta, kad bakterijos taip pat gali paskatinti gastritas, IM ir skrandžio karcinoma mongolų smiltpelėms [5-8]. Žmonėms, H. pylori
pat kolonizuoja dvylikapirštės žarnos gleivinę, kai yra skrandžio metaplazija [9]. H.pylori
infekcija žmogaus Todėl priklauso nuo skrandžio sulčių mikroaplinkos, kuris nustatomas didele dalimi priklauso muciną ir angliavandenių sudėtį skrandžio muciną sluoksniu.
Mucino yra labai glikozilinto glikoproteinai, kurie yra pagrindiniai komponentai gleivinės klampus gelis apimanti paviršiaus epitelio audinius [10]. Iki šiol, devyni skirtingi epitelio mucino genai (MUC1, 2, 3, 4, 5AC, 5B, 6, 7, ir 8) buvo nustatyti [11-21]. In situ hibridizacija
ir imunohistocheminius tyrimai parodė, kad šie mucino yra skirtingai išreikštas epitelyje su ląstelių tipo specifiką [21-24]. Normalus skrandžio gleivinė rodo ląstelių tipų konkrečią išraišką MUC1, MUC5AC ir MUC6, su pirmųjų dviejų rastų paviršutiniškai epitelio ir MUC6 giliai liaukos [22, 25, 26] mucino. MUC6 daugiausia išreikštas skrandžio gleivinę. Normalus skrandžio gleivinė neišreiškia MUC2 [25, 27].
Pokyčiai ekspresijos lygį ir glikozilinimo apie mucino buvo susijęs su keliomis ligomis, įskaitant karcinoma [27-31]. Skrandžio vėžio, buvo pranešta pakitimai mucino polipeptido: nuostolius išraiškos MUC5AC [23, 26, 32], padidėjo mucino heterogenesity [23]. Šios pastabos rodo, kad mucino pakeitimai gali būti laikomi "molekulinius" žymenų piktybinę transformaciją skrandžio gleivinę. Toliau daugiau, neseniai paskelbtas tyrimas stipriai pasiūlė MUC5AC kaip tariamą H. pylari
receptorių [33, 34].
Šiuo Šiame tyrime mes charakterizavo mucino raiškos modelis per laipsniškai H. pylori
užsikrėtę žmogaus skrandžio karcinoma. Mes naudojome išsamią skydelį monokloninių antikūnų, su gerai charakterizuojamas ypatumus, nukreiptas į MUC2, MUC5AC ir MUC6 mucino.
Rezultatai
išraiška modelio MUC2, MUC5AC ir MUC6 mucino normaliai skrandžio gleivinės
MUC5AC buvo labai išreikštas foveolar epitelio ir gleivinės kaklo ląstelių antralinėje dalyje (>. 75%, pav 1b; pav. 3b; 2 lentelė). Išraiška MUC6 buvo aptiktas iš antralinėje dalyje liaukų (> 75%, pav 1c; pav. 3c,. 3 lentelė) ir MUC2 nebuvo aptikta normaliai skrandžio gleivinės (pav 1a;. Pav. 3a; 2 lentelė). 1 pav Imunohistocheminis dažymo MUC2, MUC5AC ir MUC6 mucino H. pylori infekuotiems pacientams. a. MUC2 dažymo normalus skrandžio gleivinės (Originalus didinimas × 100). b. MUC5AC dažymo normalus skrandžio gleivinės (Originalus didinimas × 100). c. MUC6 dažymo normalus skrandžio gleivinės (Originalus didinimas × 100). d. MUC2 dažymo atrofijos gastritas (Originalus didinimas × 100). El. MUC5AC dažymo atrofijos gastritas (Originalus didinimas × 100). f. MUC6 dažymo atrofijos gastritas (Originalus didinimas × 100). g. MUC2 dažymo žarnyno metaplazijos (Originalus didinimas × 100). val. MUC5AC dažymo žarnyno metaplazijos (Originalus didinimas × 100).
2 paveikslas Imunohistocheminiais dažymas MUC2, MUC5AC ir MUC6 mucino H. pylori infekuotiems pacientams. a. MUC6 dažymo žarnyno metaplazijos (Originalus didinimas × 100). b. MUC2 dažymo displazija (Originalus didinimas × 100). c. MUC5AC dažymo displazija (Originalus didinimas × 100). d. MUC6 dažymo displazija (Originalus didinimas × 100). El. MUC2 dažymo karcinoma (Originalus didinimas × 100). f. MUC5AC dažymo karcinoma (Originalus didinimas × 100). g. MUC6 dažymo karcinoma (Originalus didinimas × 100).
3 paveikslas Expression modelio mucino (MUC2, MUC5AC ir MUC6) H. pylori užsikrėtę anksto neoplazminė ir neoplazminė žmogaus skrandžio epitelio. a. MUC2 išraiška H. pylori
užsikrėtę anksto neoplazminė ir neoplazminė žmogaus skrandžio epitelio. b. MUC5AC išraiška H. pylori
užkrėstą preneoplastinius ir neoplastinį žmogaus skrandžio epitelį. c. MUC6 išraiška H. pylori
užsikrėtę anksto neoplazminė ir neoplazminė žmogaus skrandžio epitelio.
1 lentelė ypatumai, ištakos ir praskiestų monokloninių antikūnų.
monokloniniai antikūno
specifiškumas
Nuoroda
Skiedimas
PMH1
MUC2
Reis ir kt
[11]
Neskiesto
CLH2
MUC5AC
Reis ir kt
[12]
1: 2
CLH5
MUC6
Reis ir kt
[10]
1: 2
2 lentelė išraiška mucino (MUC2, MUCSAC ir MUC6) H. pylori
užkrėsto preneoplastinius ir neoplastiniu žmogaus skrandžio epitelio
Stages

H. pylori
MUC2 išraiška
MUC5AC išraiška
MUC6 išraiška
N.
P -
+
++
+++
++++ -
+
++
+++
++++ -
+
+ +
+++
++++
normalaus (N = 7)
7 -
n = 7 (100%) -
-
- CR.LT - -
- -
n = 2 (28.6%)
, n = 5 (71,4%) -
- CR.LT - CR.LT 1 (14.3%)
6 (85,7%)
Atrophic gastritas (n = 26) -
26
n = 22 (84,6%)
N = 4 (15,4%) -
- -
- -
1 (38%)
13 (50%)
12 (46,2%)
- -
1 (3,8%)
15 (57,7%)
10 (38,5%)
Žarnų metaplazija (n = 21) -
21
- -
n = 9 (42,9%)
n = 12 (57,1%) ** -
- CR.LT 1 (4,8%)
16 ( 76,2%) **
4 (19%) -
- CR.LT 5 (23,8%)
14 (66,7%) **
2 (9,5%)
- CR.LT Displazija (n = 17) -
17 -
, n = 5 (29,4%)
n = 11 (64,7%)
n = 1 (5,9 %) -
- CR.LT 3 (17,6%)
10 (58,8%)
4 (23,5%) -
- CR.LT 3 (17,6%)
11 (64,7%)
3 (17,3%) -
karcinomos (n = 36) -
36 -
22 (61,1%)
14 (38,9%) -
- -
28 (77,8%)
8 (22,2%) -
- CR.LT 12 (33,3% )
17 (47,2%)
7 (19,4%) -
- CR.LT N - neigiamas - (> 5%) neigiamas
P - teigiamas + (5-25%) keletas teigiamų ląstelių
N - skaičius atvejais ++ (25-50%) gerai apibrėžtą plotą
+++ (50- 75%) plote tamsintas
++++ (75-100%), dauguma ląstelių tamsintas
** p < 0.00, * p < 0,05 (reikšmingo skirtumo išraiška)
imunodetekcijos iš mucino į atrofinį gastritas
Nebuvo išraišką MUC5AC visose kolonų ląstelių atvejais (pav 1e;. Pav. 3b, 2 lentelė). Iš tamsintas ląstelių skyrėsi konkrečiu atveju procentais, daugeliu atvejų, ten buvo tendencija didesnio skaičiaus ląstelių išreiškiant MUC5AC (> 75%) į paviršutiniškai dalį metaplastic liaukų negu giliai dalis. MUC6 buvo aptiktas kolonų ląstelių (> 50%; pav. 1f; pav. 3c, 2 lentelė) ir MUC2 nebuvo aptikta atrofinį gastritas (1d pav.)
Imunodetekcijos iš mucino žarnyne metaplazijos
Už ten. sumažėjo lygio išraiška MUC5AC ir MUC6 visais atvejais (> 50%), tiek taurės ir kolonų ląstelių (pav 1h pav 2a,... pav. 3b pav 3c, 2 lentelė). Iš tamsintas ląstelių skyrėsi konkrečiu atveju procentais, buvo pastebėtas de novo
išraiška žarnyno muciną MUC2 (> 75%), o jo išraiška rodomas difuzinio citoplazmos modelį į taurė ląstelių (pav 1g,.. Pav 3a; . 2 lentelė)
imunodetekcijos iš mucino į displaziją
Yra sumažėjo lygio išraiška MUC5AC ir MUC6, nei žarnyno metaplazijos (> 50%). MUC5AC ir MUC6 rodomas difuzinio citoplazmos išraiška modelio skiltyse ląstelių (pav 2c; 3d pav;; pav. 3; pav. 2d.. 2 lentelę). MUC2 išraiška rodomas difuzinio citoplazmos modelį į taures ląstelių (> 50%, pav 2b;. 3a pav; 2 lentelė)
imunodetekcijos iš mucino į karcinoma pervežimas MUC5AC ir MUC6 išraiška buvo dažnai pastebėta ankstyvoje vėžio (>.; 50%) negu pažangiosios karcinomų (> 25%). Išsivysčiusiose karcinoma, mes nustatėme tendenciją sumažėjo reaktyvumas giliuose srityse nei paviršutiniškai srityse. (3a pav;; 3b pav; 3c pav; 2e pav pav 2f, 2g pav; > 25%...... 2 lentelę) MUC5AC ir MUC6 išraiška sumažėjo išsivysčiusiose karcinoma.
Diskusijos
šiuo šiame tyrime mes parodėme, kad mucino raiškos modelis per laipsniškai H. pylori
užkrėstą žmogaus skrandžio epitelį. Mucino išreiškiami su somatinių ląstelių bei audinių konkrečių modelio normaliai audinio. Pakitimai ekspresijos modelio mucino buvo aprašyta karcinomų, taip pat jų prekursorių pažeidimų; Pastarojoje pakeista mucino angliavandenių ir peptidų fragmentų gali tapti molekulinius žymenis su padidėjusia rizika piktybinę transformaciją [27, 35, 36, 38-40].
sutikus ankstesni tyrimai pranešti apie mucino pasiskirstymą normalų skrandžio, mes rasti MUC5AC yra labai išreikštas foveolar ląstelių antralinėje dalyje, kaip pranešė [26, 27, 32, 37-39]. Mes taip pat nustatė, kad MUC6 yra išreikšta gleivinės ląstelių kaklo zonoje prievarčio liaukų antralinėje dalyje su panašiu būdu į aprašytą anksčiau [22, 23, 47]. Iš MUC2 išraiška paprastai nėra aptikta normalų skrandžio gleivinės kaip aprašyta ankstesnėse ataskaitose [25, 27, 40].
Žarnų metaplazija yra viena iš pažeidimų nustatytiems atveju kaskados, kad anksčiau nei skrandžio karcinoma [plėtrą ,,,0],41]. Žarnų metaplazija sudaro skrandžio gleivinės keitimas kurį epitelio, panašus histologiškai žarnyno gleivinę. Altered mucino ekspresijos modeliai buvo pastebėta H. pylori
užkrėstų žarnyno metaplazijos, įskaitant pagal išraiškos MUC5AC ir MUC6 ir de novo pervežimas išraiška MUC2 daugiausia taurė ląstelių [30, 48]. Šie rezultatai patvirtina prielaidą, kad žarnyno metaplazija daro atstovauja gleivinės diferenciaciją link žarnyno fenotipą [42, 43].
Sumažėjęs išraišką MUC5AC ir MUC6 muciną skrandžio karcinoma buvo patvirtinta šiame tyrime. Iš MUC5AC išraiška ankstyvą skrandžio karcinoma šio serija, nepriklausomai nuo histologinio tipo navikų, kontrastuoja su lygis sumažėjo išraiška MUC5AC reaktyvumas beveik pusė pažangiausių karcinoma, kuriuose teigiama, kad visi skrandžio karcinomos išlaikyti bent keletą ląsteles skrandžio fenotipas per pirmuosius žingsnius navikinių plėtros (26). Ši prielaida yra toliau remia sumažėjo reaktyvumas giliuose srityse, palyginti su paviršutiniškų sričių pažangių karcinoma. Šie rezultatai sutampa su ankstesniais rezultatai rodo, kad skrandžio vėžys progresuoja lydi keičiant kelių mucino genų [14] išraiška. Galiausiai, mes nustatėme, kad žarnyno mucino MUC2 išreiškiama kiekvienam žarnyno metaplazijos, kuris yra pažeidimas, kuris pasirodo skrandžio kancerogenezėje proceso H. pylori
infekuotų asmenų kontekste metu.
Išvada
Nors H . pylori
buvo klasifikuojamas kaip I klasės kancerogenams IARC [4] skrandžio kancerogenezėje mechanizmas menkai suprantama. Be preneoplastinius skrandžio gleivinę, neatrodė visų trijų mucino antigenų ekspresijos koreliuoja su uždegimo sunkumo ir H. pylori
statusą. Rezultatai nuo šios studijos gali manyti, kad H. pylori
infekcijos veikia kaip šio kancerogenezės kaskados iniciatorius sukeliant uždegimą ir, tam tikrais atvejais, vėliau metaplastic kaita. Žarnų metaplazija lydi ekspresijos MUC2 indukcijos ir sumažėjo išraišką iš MUC5AC ir MUC6. Šie pokyčiai gali skatinti skrandžio karcinoma plėtrą. Šis tyrimas rodo, kad MUC2 yra žarnyno metaplazijos žymeklį ir gali būti naudojamas ankstyvam šio pažeidimo H. pylori pervežimas užkrėstų anksto neoplazminė žmogaus skrandžio epitelio.
Medžiagos ir metodai
Audinių mėginiai
penkiasdešimt devynis skrandžio biopsijos mėginius ir 3 ml kraujo buvo gauti iš Stanley medicinos koledžo ir ligoninė, Čenajus. Visi biopsijos audinio mėginiai buvo imami po informuoto sutikimo. Šis tyrimas buvo atliktas gavus klirensas iš etikos taryba ligoninę. Visi biopsijos mėginiai buvo nustatytas 10% buferiniame formalino ir paprastai integruotas į parafinas. 4 mkm storio serijos dalys buvo supjaustyti ir naudoti imunohistocheminiu. H. pylori
infekcija buvo patvirtinta rujoti ir ELISA [43]. Hematoksilinu ir eozinas tamsintas skyriai buvo naudojami klasifikuoti gastritas rūšiuojami pagal peržiūrėtą Sidnėjaus klasifikaciją [44], skrandžio navikų pagal Lauren [45] klasifikaciją ir PSO klasifikaciją [46]. Mes studijavo 7 atvejais normalios žmogaus skrandžio epitelio (7 biopsijos), 26-atrofinio gastrito atvejais (26 biopsijos), 21 atvejų žarnyno metaplazijos (21 biopsijos), 17-atvejus displazija (17 biopsijos) ir 36 atvejai karcinoma, kurioje 21 atvejų anksti karcinomos ir 15 atvejai išplėstas karcinoma (16 biopsijos ir 20 chirurginiai pavyzdžiai).
monokloniniai antikūnai
tris monokloninių antikūnų skydelį buvo naudojamas siekiant nustatyti mucino (MUC2, MUC5AC ir MUC6) išraiška. Ypatumus, nuorodos ir praskiestų antikūnų yra išvardyti 1 lentelėje
imunohistocheminis
skirsniuose nuo įprastų, iš anksto navikinių ir navikinių audinių skrandžio buvo imuninės tamsintas pagal Reis ir kt
[47] su nežymių pakeitimų , Profiliai skirti neuraminidazės gydymo buvo išplauti du kartus fosfatinio buferio druskų tirpalu (PBS), pH 7,4 ir inkubuojami su neuraminidazės nuo Clostridium perfringens VI tipo
( "Sigma; St Louis, MO), praskiesto 0,1 M Na-acetato buferio, pH 5,5 su galutinės koncentracijos nuo 0,1 U /ml. Inkubacinis buvo atlikta 2 h, esant 37 ° C, po to buvo trys praplovomis ledinio PBS. Skyriai buvo gydomi 0,5% H 2O 2 metanolyje 30 min, po to po 20 min inkubavimo su triušio neturinti imuniteto serume. Dalys buvo skalaujamas ir inkubuojami su pirminiais antikūnais (1 lentelė), per naktį esant 4 ° C temperatūroje. Skyriai buvo išplautas ir inkubuojami su HRP conjucated triušio prieš pelės vidurinį antikūnas (1: 100 praskiedimas), 1 h, po to skalauti su PBS ir plėtoti 0,05% 3,3'-diaminobenzidinas tetrahidrochlorido (DAB) (SRL, Mumbajus, Indija ) ruošiamas PBS, kuriame yra 0,1% H 2O 2. Skyriai buvo Skaitliukas tamsintas hematoksilinu, dehidratuoti, ir sumontuoti. Visi serijos, įskaitant teigiamus ir neigiamus kontrolinius buvo atliktas pakeičiant pirminių mAb su imunoglobulinai tos pačios klasės ir tuo pačiu koncentracijos.
Balai iš mucino išraiškos H. pylori
užkrėstas preneoplastinius ir neoplastinių žmogaus skrandžio audinius
pusiau kiekybinis metodas buvo naudojamas rezultatas žmogaus skrandžio audinių imunodažymu. Skaidrės buvo tiriamas šviesos mikroskopu, pelnė per 100 ląstelių penkių skirtingų sričių ir rezultatai buvo išreikštas verčių vidurkio procentine dalimi. (-), Rezultatai buvo neigiami; +, mažai teigiamos ląstelės (< 25%); ++ Gerai apibrėžtos vietovės su teigiamų ląstelių (25-50%); +++ platus vietovės su teigiamų ląstelių (50-75%); ++++, dauguma ląstelių tamsintas (> 75%).
Statistika
Duomenų analizė atlikta naudojant statistinį programinį paketą SPSS 10.0 for Windows. Chi-kvadrato testas ar tiksli Fišerio testas buvo naudojamas analizuoti skirtumus dažnius. Spearman koreliacijos testas buvo naudojamas analizuoti ryšį tarp parametrų. P < 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas
Santrumpos
TBP - 3.
3'-diaminobenzidinas tetra hidrochlorido
IFA: Rīga, imunofermentinės tyrimas
HRP: Rīga, krienų peroksidazės
IARC: Rīga, Tarptautinė tyrimų agentūra vėžio

MP: Rīga, žarnyno metaplazija
mAb: Rīga, monokloniniai antikūnai
PBS: Rīga, fosfato buferinis fiziologinis
PSO: Rīga, Pasaulio sveikatos organizacija
RUT:.
Greitas Karbamidas testas

pareiškimai
Padėka
autoriai dėkoja Lady Tata memorialinis Trust, Mumbai, Indija dėl finansinės paramos į vieną iš autorių S. Durai Babu. Mes dėkingi dr Narasimhan, profesorius ir vadovas, departamento patologijos, Šri Ramachandra medicinos koledžo ir ligoninė, Indija, peržiūrėjimo histologinius ir Imunohistocheminiais rezultatus ir dr R. Ravanan, skaitytuvas, Statistikos departamentas, Presidemcy Kolegijos, Indijoje padėti statistinės analizės. Norėtume padėkoti dr Celso A. Reis teikimo anti-MUC2, anti-MUC5AC ir anti-MUC6 monokloninius antikūnus.
Autorių originalias pateiktus failus vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autoriai " originalus pateiktų failų vaizdų. 12943_2005_142_MOESM1_ESM.doc Autorių originalus failas 1 pav 12943_2005_142_MOESM2_ESM.doc Autorių originalaus failo 2 pav 12943_2005_142_MOESM3_ESM.doc Autorių originalios 3 pav 12943_2005_142_MOESM4_ESM.doc Autorių originalaus failo 4 pav 12943_2005_142_MOESM5_ESM.doc Autorių originalaus failo 5 paveiksle

• Skirtumai skrandžio vėžio genų ekspresijos parašų, gautų iš lazerio surinkimo microdissection versushistologic macrodissection
• Kvėpavimo takų ląstelių skaičius, lipidų pakrautos makrofagai ir mikrobiologijos skrandžio sulčių ir kvėpavimo vaikams, sergantiems refliuksinio ezofagito