Izražavanje profil mucina (MUC2, MUG5AC i MUC6) u Helicobacter pylori zaražena prije neoplastični i neoplastični ljudskog želuca epithelium

Izražavanje profil mucina (MUC2, MUG5AC i MUC6) u Helicobacter pylori
zaražena prije neoplastični i neoplastični ljudskog želuca epitel
apstraktne pregled Pozadina pregled, Helicobacter pylori pregled (H. pylori pregled) uzrokuje gastritis i intestinalne metaplazije (IM), koji se može razviti na želučanu karcinoma. Cilj ovog istraživanja bio je usporediti profil mucina u progresivnim fazama H. ​​pylori
zaraženih pre-neoplastične i neoplastične ljudske želučane epitel. Koristili smo panel monoklonskih protutijela, s dobro definiranim specifičnostima MUC2, MUC5AC i MUC6 za karakterizaciju ekspresije mucina imunohistokemijski.
Metode pregled trag i ELISA su se H. pylori pregled potvrdu. Humanog želučanog biopsije sekcije su obojene s pomoću imunohistokemije MUC2, MUC5AC i MUC6 antitijela. Rezultati pregled
MUC5AC je izražen u površinskom epitela i gornjeg dijela želučane kripte. MUC6 ekspresija je otkriven u donjem dijelu želučanim žlijezdama. MUC2 je izražen u intestinalne metaplazije, uglavnom u vrčaste stanice. Mucinskih izraz profil u progresivnim fazama H.pylori
inficirane ljudskog želučanog epitela omogućuje identifikaciju intestinalne metaplazije, koja je karakterizirana smanjenom ekspresijom želučanih mucina MUC5AC (i MUC6) i de novo
ekspresiju MUC2 pregled. Zaključak pregled u zaključku, naši rezultati sugeriraju da je promijenjena ekspresija MUC5AC i MUC6 zajedno s ekspresiji od MUC2 u intestinalne metaplazije, tijekom procesa želuca karcinogeneze. Ova studija pokazuje da je MUC2 mucin ekspresije je pouzdan pokazatelj intestinalne metaplazije, koja se pojavljuje u kontekstu H. pylori pregled inficiranih osoba. Pregled Pozadina pregled, Helicobacter pylori pregled kolonizira ljudski sluznicu želuca i uzrokuje gastritis i intestinalne metaplazije (IM), koji mogu da napreduju prema želučanog karcinoma [1-3]. H. pylori pregled infekcija je osnovana kao tip I ljudski karcinogen u IARC [4]; nedavno je pokazano da su bakterije također može izazvati gastritis, IM, i karcinom želuca u mongolskim gerbilima [5-8]. Kod ljudi, H. pylori pregled i kolonizira duodenalni sluznicu kad god postoji želučane metaplazije [9]. H. pylori pregled infekcije u čovjeka je, dakle, ovisi o želuca mikro okolinu, koji se određuje u velikoj mjeri od strane mucin i ugljikohidrata sastavu želučanoj sluzi sloja.
Mucina su jako glikolizirani glikoproteini koje su glavne komponente sluzav viskozna gel koji pokriva površinu epitelnih tkiva [10]. Do sada, devet različite epitelne mucinskih gena (MUC1, 2, 3, 4, 5AC, 5B, 6, 7 i 8) su identificirani [11-21]. In situ hibridizacija i pregled imunohistokemijske studije pokazale su da su ove mucina različito eksprimiraju u sluznice s tipom stanica specifičnošću [21-24]. Normalan želučane sluznice pokazuje tipova stanica specifičan izraz MUC1, MUC5AC i MUC6, s prva dva mucina se nalaze u površinskom epitelu i MUC6 u dubokim žlijezde [22, 25, 26]. MUC6 uglavnom izražen u želučanoj sluznici. Normalan želučane sluznice ne eksprimiraju MUC2 [25, 27]. Pregled Promjene u razinama ekspresije i glikozilacijskim uzorkom mucina su povezane s nekoliko bolesti, uključujući karcinome [27-31]. Kod karcinoma želuca, zabilježene su promjene u mucin polipeptida: gubitak ekspresije MUC5AC [23, 26, 32], povećana mucina heterogenesity [23]. Ova opažanja upućuju na to da mucin promjene mogu se smatrati kao "molekulskih" markere maligne transformacije želučane sluznice. Nadalje, nedavno je objavio istraživanje snažno sugerirao MUC5AC kao potencijalnog H. pylari pregled receptora [33, 34].
U ovom istraživanju smo karakterizira obrazac izražavanja mucina u progresivnim fazama H. ​​pylori pregled zaražena humani karcinom želuca. Koristili smo sveobuhvatan ploču monoklonskih protutijela, s dobro opisanih specifičnosti usmjerenih na MUC2, MUG5AC i MUC6 mucina. | Rezultati
ekspresije MUC2, MUG5AC i MUC6 mucina u normalnoj sluznici želuca pregled MUC5AC je vrlo izražena u foveolar epitela i sluznice vrata stanicama antruma (>, 75%, slika 1b, Sl. 3b, Tablica 2). Ekspresija MUC6 otkriven u žlijezdama antruma (> 75%, slika 1c, Sl. 3c,. Tablica 3) i MUC2 nije detektiran u normalnoj sluznici želuca (Slika 1a;, Sl. 3a, Tablica 2). Slika 1 Imunohistokemisjko bojenje MUC2, MUG5AC i MUC6 mucina u H. pylori zaražene pacijente. a. MUC2 bojenje normalne sluznice želuca (Original uvećanje × 100). b. MUC5AC bojanja normalne sluznice želuca (Original povećanje x 100). c. MUC6 bojenje normalne sluznice želuca (Original uvećanje × 100). d. MUC2 bojenje atrofični gastritis (Original uvećanje × 100). e. MUC5AC bojanje atrofični gastritis (Original uvećanje × 100). f. MUC6 bojenje atrofični gastritis (Original uvećanje × 100). g. MUC2 bojenje intestinalne metaplazije (Original uvećanje × 100). h. MUC5AC bojanje intestinalne metaplazije (Original uvećanje × 100).
Slika 2 imunohistokemijsku bojenje MUC2, MUG5AC i MUC6 mucina u H. pylori zaraženih pacijenata. a. MUC6 bojenje intestinalne metaplazije (Original uvećanje × 100). b. MUC2 bojenje displazije (Original uvećanje × 100). c. MUC5AC bojanje displazije (Original povećanje x 100). d. MUC6 bojenje displazije (Original uvećanje × 100). e. MUC2 bojenje karcinoma (Original uvećanje × 100). f. MUC5AC bojanje karcinoma (Original povećanje x 100). g. MUC6 bojenje karcinoma (Original uvećanje × 100).
Slika 3 ekspresije mucina (MUC2, MUG5AC i MUC6) u H. pylori zaražena prije neoplastični i neoplastični ljudskog želuca epitel. a. MUC2 izraz u H. pylori
zaražena prije neoplastični i neoplastični ljudskog želuca epitel. b. MUG5AC izraz u H. pylori
zaraženih pre-neoplastične i neoplastične ljudske želučane epitel. c. MUC6 izraz u H. pylori
zaražena prije neoplastični i neoplastični ljudskog želuca epitel. Pregled Tablica 1. Specifičnosti, porijeklo i razrjeđenja monoklonskih antitijela. Pregled monoklonskih antitijelo
Specifičnost
Reference
Razrjeđivanje
PMH1 pregled MUC2 pregled Reis dr pregled [11] pregled Cjelovito
CLH2 pregled MUG5AC pregled Reis dr pregled [12] pregled, 1: 2 pregled CLH5 pregled MUC6 pregled Reis dr pregled [10] pregled 1: 2 pregled Tablica 2. Izražavanje mucina (MUC2, MUCSAC i MUC6) u H. pylori pregled zaraženih pre-neoplastičnim i neoplastičnim ljudskog želuca epitel Netlogu Stages

H. pylori
MUC2 Expression
MUG5AC Expression
MUC6 Expression
N pregled P
- + pregled ++
+++ pregled ++++
- + pregled ++ pregled +++ pregled ++++
- + pregled + + pregled +++ pregled ++++ pregled Normal (n = 7) pregled, 7
- n = 7 (100%)
- -
- pregled -
- -
- n = 2 (28,6%) pregled, n = 5 (71,4%) pregled -
- - pregled, 1 (14,3%) pregled 6 (85,7%) pregled atrofičnog gastritisa (n = 26)
- 26 pregled, n = 22 (84,6%), pregled, n = 4 (15.4%)
- -
- -
- 1 (38%)
13 (50%)
12 (46,2%)
-
- 1 (3.8%)
15 (57,7%)
10 (38,5%), pregled, intestinalne metaplazije (n = 21)
- 21
-
- n = 9 (42,9%), pregled, n = 12 (57,1%) ** pregled -
- 1 (4.8%)
16 ( 76,2%) ** pregled 4 (19%) pregled -
- 5 (23,8%)
14 (66,7%) ** pregled 2 (9,5%) pregled - pregled displazija (n = 17)
- 17
- n = 5 (29,4%) pregled, n = 11 (64,7%), pregled, n = 1 (5,9 %) pregled -
- 3 (17,6%)
10 (58,8%) pregled, 4 (23,5%) pregled -
- 3 (17.6%) pregled, 11 (64,7%) pregled 3 (17,3%)
- karcinoma (n = 36)
- 36
- 22 (61.1%)
14 (38,9%)
- -
- 28 (77.8%) pregled, 8 (22,2%) pregled -
- 12 (33.3% )
17 (47.2%)
7 (19,4%)
-
- N - negativno - (> 5%) negativno pregled P - pozitivan + (5-25%), nekoliko pozitivnih stanica
n - Broj slučajeva ++ (25-50%), dobro definiranih područja
+++ (50- 75%) opsežna područja obojeni pregled ++++ (75-100%), većina stanica obojenih pregled ** p < 0,00, * p < 0.05 (Značajna razlika u izrazu) pregled Imunodetekcija mucina u atrofični gastritis
Bilo je ekspresiju MUC5AC u svim slučajevima columnar stanice (Sl 1e;.. Slika 3b; tablica 2). Postotak obojenih stanica varirala od slučaja do slučaja, u većini slučajeva, došlo je trend povećanja broja stanica koje eksprimiraju MUC5AC (> 75%) u površinskom dijelu metaplastičnim žlijezde nego u dubokom dijelu. MUC6 je otkriven u columnar stanice (> 50%; Sl. 1f; Sl. 3c; tablica 2) i MUC2 nije detektiran u atrofični gastritis (Slika 1D). Pregled Imunodetekcija mucina u intestinalne metaplazije pregled tamo. je smanjena ekspresija MUC5AC razini i MUC6 u svim slučajevima (> 50%), oba u vrčastim i stupčastih stanicama (Slika 1 h, slika 2a.,. sl. 3b, Sl 3c; Tablica 2). Postotak obojenih stanica varirala od slučaja do slučaja, de novo pregled izraz crijevne mucin MUC2 uočeno (> 75%), a njegova ekspresija prikazuje difuzno citoplazmatski uzorak u vrčastih stanica (Slika 1 g,.. Slika 3a; . tablica 2) pregled Imunodetekcija mucina u displazije
Tako je smanjena ekspresija MUC5AC razini i MUC6 nego intestinalne metaplazije (> 50%). MUC5AC i MUC6 prikazana difuzni citoplazmatski ekspresije u stupčastih stanicama (Slika 2c Sl. 2d, Sl. 3d,, Sl. 3, tablica 2). MUC2 izraz prikazuje difuzno citoplazmatski uzorak u pehara stanica (> 50%, slika 2b, Sl. 3a; tablica 2) pregled Imunodetekcija mucina u karcinom
MUC5AC i MUC6 izraza su često opažene u ranim karcinomom (>. 50%), nego naprednim karcinomi (> 25%). U naprednim karcinoma smo primijetili trend smanjene imunološke reaktivnosti u dubokim područjima nego u površinskim područjima. MUG5AC i MUC6 izrazi su smanjeni u naprednim karcinoma (> 25%; Sl 3a, Sl. 3b;.. Slika 3c; Sl. 2e, 2f sliku, slika 2 g;.. Tablicu 2). Pregled Rasprava pregled u sadašnjem istraživanju, pokazali smo da je uzorak ekspresije mucina u progresivnim fazama H.pylori
inficiranom čovjeku želučanog epitela. Mucina su izražene s staničnoj i tkivno specifični uzorak u normalnom tkivu. Preinake ekspresije mucina opisani su karcinomi, kao i njihovih prekursora lezija; u posljednje, izmijenjene mucinskih ugljikohidrata i peptidnih skupina može predstavljati molekularnih markera povećanog rizika od maligne transformacije [27, 35, 36, 38-40].
U dogovoru s prethodne studije izvještavanje distribuciju mucina u normalnom želudac, mi nađeno MUC5AC jako je izražen u stanicama foveolar antruma, kao što je prikazano [26, 27, 32, 37-39]. Također smo otkrili da se izražava u MUC6 mukoznih stanica zone grla u pilorusa žlijezde antruma s sličan način kao što je opisano ranije [22, 23, 47]. Izraz MUC2 obično se ne otkrije u normalnoj sluznici želuca, kao što je opisano u prethodnim izvješćima [25, 27, 40]. Pregled, intestinalne metaplazije je jedan od lezija utvrđenih u kaskadu događaja koji prethodi razvoj karcinoma želuca [ ,,,0],41]. Intestinalne metaplazije obuhvaća zamjenu želučane sluznice strane epitela koji sliči histološki u crijevnu sluznicu. Izmijenjena mucina izraz obrasci uočeni su u H. pylori pregled zaraženih intestinalne metaplazije, koja pod izrazom MUC5AC i MUC6 i de novo
izražavanja MUC2 govore u vrčastih stanica [30, 48]. Ovi rezultati podupiru pretpostavku da intestinalne metaplazije ne predstavlja razlikovanje na sluznicu prema crijevnih fenotipa [42, 43].
Smanjenu ekspresiju MUC5AC i MUC6 sluzi u želučanim karcinoma su potvrđena u ovom istraživanju. Ekspresija MUC5AC početkom želučanog karcinoma ovog niza, bez obzira na histološkom tipu tumora, u suprotnosti je s smanjenom ekspresijom razini od MUC5AC imunoreaktivnost u gotovo polovici naprednih karcinoma koji ukazuju na to da su svi želučani karcinom zadržati barem neke stanice s želuca fenotip tijekom prvih koraka neoplastičnim razvoja (26). Ova pretpostavka je dodatno podržano smanjenjem imunoreaktivnost u dubokim područjima u usporedbi s površinskim dijelovima naprednim karcinoma. Ovi rezultati su u skladu s prethodnim rezultatima koji pokazuju da želuca napredovanja raka je popraćena promjenom ekspresije nekoliko mucinskih gena [14]. Konačno, mi smo opazili da je crijevna mucin MUC2 izražava u svakom intestinalne metaplazije, što je lezija koja se pojavljuje tijekom postupka želučane karcinogenezu u kontekstu H. pylori pregled inficiranih osoba. Pregled Zaključak pregled Iako H . pylori pregled je klasificirana kao klasa I kancerogen od strane IARC [4] mehanizam želučane karcinogeneze slabo ostaje razumio. U pre-neoplastičnim želučane sluznice, izraz sva tri mucinskih antigena nije pojavio u korelaciji s težinom upale i H. pylori pregled statusa. Rezultati ovog istraživanja može sugerirati da je H. pylori
infekcije djeluje kao inicijator ovog karcinogeneze kaskade zbog izazivanja upale i, u nekim slučajevima, naknadne metaplastičnim promjene. Intestinalne metaplazije u pratnji indukcije ekspresije MUC2 i smanjio ekspresiju MUC5AC i MUC6. Ove promjene mogu pogodovati razvoju želučanog karcinoma. Ova studija ukazuje da MUC2 biljeg intestinalne metaplazije i mogu se koristiti za rano otkrivanje tih lezija u H. pylori
inficirane pre-neoplastično ljudskog želučanog epitela.
Materijali i metode
Tissue uzoraka
Pedeset devet želučani uzorak biopsije i 3 ml krvi dobiveni su od Stanley Medical College i bolnice, Chennai. Svi uzorci biopsije tkiva se prikupe nakon informiranog pristanka. Ovo istraživanje je provedeno nakon dobivanja izbija iz etičkog odbora u bolnici. Svi uzorci biopsije su fiksirane u 10% puferiranom formalinu i rutinski ugrađen u parafin. 4 um tanke serijski rezovi i korišteni za imunohistokemiju. H. pylori pregled infekcija potvrđena je trag i ELISA [43]. Hematoksilinom i eozinom obojeni dijelovi su korišteni za klasificiranje gastritis ocjenjuju prema izmijenjenom Sydney klasifikaciji [44], želučanih tumora prema klasifikaciji Lauren [45] i WHO klasifikaciji [46]. Proučavali smo 7 slučajeva normalnog ljudskog želučanog epitela (7 biopsija), 26 slučajeva atrofični gastritis (26 biopsija), 21 slučajeva intestinalne metaplazije (21 biopsija), 17 slučajeva displazije (17 biopsija) i 36 slučajeva karcinoma u kojoj 21 slučajeva rano karcinoma i 15 slučajeva uznapredovalih karcinoma (16 biopsije i 20 kirurške primjeraka).
monoklonska protutijela
vijeće od tri monoklonskih protutijela korištena je za određivanje ekspresije mucina (MUC2, MUG5AC i MUC6). Specifičnosti, reference i razrjeđenja antitijela su navedene u tablici 1. pregled imunohemije pregled sekcijama od normalnih, prije maligne i maligne želučanog tkiva su imuno obojeni prema Reis dr
[47] uz male modifikacije , Dijelova namijenjeni neuraminidaze liječenje su dva puta isprane u fosfatnom puferu (PBS), pH 7,4 i inkubiran neuraminidazom sa Clostridium perfringens tipa VI pregled (Sigma, St Louis, MO) koji je razrijeđen u 0,1 M Na-acetat pufera, pH 5.5 do konačna koncentracija od 0.1 u /mL. Inkubacija se provodi tijekom 2 sata pri 37 ° C, te je uslijedila tri ispiranja u ledeno-hladnog PBS. Sekcije su tretirane s 0,5% 'H-sub> 2O 2 u metanolu kroz 30 min, nakon čega slijedi 20 minuta inkubacije s kunića neimunim serumu. Sekcije su isprane i inkubirane s primarnim protutijelom (Tablica 1), preko noći na 4 ° C. Sekcije su isprane i inkubirane sa HRP conjucated zečjeg protiv mišjeg sekundarnog antitijela (1: 100 razrjeđenje) kroz 1 h, nakon čega slijedi ispiranje s PBS i razvija s 0,05% 3,3'-diaminobenzidinu (DAB) Tetrahidroklorid (SRL, Mumbai, Indija ) svježe pripremljenog u PBS koji sadrži 0,1% H 2O 2. Sekcije su brojač obojeni hematoksilinom, dehidriran i montiran. Sve serije, uključujući pozitivne i negativne kontrole su izvedeni supstitucijom primarnih mAb s imunoglobulinima iste klase i pri istoj koncentraciji. Pregled bodovanja izražavanja mucina u H. pylori
inficirane prethodno neoplastične i neoplastične ljudske želučane tkiva pregled polu kvantitativni pristup korišten je za rezultat imunološko ljudskih želučanog tkiva. Rezovi su ispitani pod svjetlosnim mikroskopom, svakih 100 stanice su postignuti u pet različitih područja, a rezultati su izraženi kao srednja vrijednost postotka. (-), Negativna; +, nekoliko pozitivnih stanica (< 25%); ++ Dobro definiranim područjima s pozitivnim stanicama (25-50%); +++, opsežan područja s pozitivnim stanicama (50-75%); ++++, većina stanica obojenih (> 75%).
statistikama
analiza podataka provedena je pomoću statističkog programskog paketa SPSS 10.0 for Windows. Hi-kvadrat testa ili Fisherov egzaktni test korišten je za analizu razlike u frekvencijama. Spearmanov korelacije test korišten je za analizu korelacije između parametara. P < 0,05 smatrana je statistički značajna pregled Kratice pregled DAB - 3. Pregled, 3'-diaminobenzidin tetra-hidroklorida
ELISA: pregled imunoenzimnim test
HRP: pregled peroksidaza
IARC: pregled, Međunarodna agencija za istraživanje raka

IM: pregled intestinalne metaplazije
mab: pregled Monoklonska protutijela
PBS: pregled fosfatnim puferom slane
WHO: pregled, Svjetska zdravstvena organizacija
RUT. pregled Rapid Urea Test

Izjave pregled Zahvale
autori zahvaljuju na Lady Tata Memorial povjerenje, Mumbai, Indija za financijsku potporu jednog od autora S. Durai Babu. Mi zahvalni dr Narasimhan, profesor i voditelj Odjela za patologiju, Šri Ramachandra Medical College i bolnice u Indiji, za ocjenu histološku i imunohistokemijska rezultate i dr R. Ravanan, Reader, Odsjek za statistiku, Presidemcy College, Indiji za pomoć u statističkoj analizi. Željeli bismo zahvaliti dr Celso A. Reis za pružanje anti-MUC2, protiv MUC5AC i anti-MUC6 monoklonskih antitijela. 'Originalnih dostavljenih datoteka za slike
Ispod su linkovi na autora'
autora izvorni poslanih datoteka za slike. Izvorna datoteka za Slika 1 12943_2005_142_MOESM2_ESM.doc autorskim 12943_2005_142_MOESM1_ESM.doc autora izvorne datoteke za sliku 2 12943_2005_142_MOESM3_ESM.doc autorskim izvorne datoteke na Slici 3 12943_2005_142_MOESM4_ESM.doc autorskim izvorne datoteke za Slika 4 12943_2005_142_MOESM5_ESM.doc autorskim izvorne datoteke za lik 5

• Razlike u želučanom gena raka ekspresije potpisa koji su izvedeni iz laserskog snimanja Mikrodisek versushistologic macrodissection
• Airway celularnost, lipida laden makrofagi i mikrobiologije želučanog soka i dišnih putova u djece s povratni ezofagitis