Imunizacijos su imunodominantiniai Helicobacter suis ureazės B subvieneto sukelia dalinį apsaugą nuo H. suis pelių modelis

Imunizacijos su imunodominuojantis Helicobacter suis
ureazės B subvieneto sukelia dalinį apsaugą nuo H. suis pervežimas infekciją pelės modelio pervežimas Anotacija pervežimas Helicobacter
(H.
) suis
yra kiaulių ir žmogaus skrandžio patogenas. Ankstesni tyrimai su pelėmis parodė, kad H. suis
infekcijos nesukelia apsauginio imuniteto, o imunizacija H. suis
visa ląstelių lizato (lizate) apsaugo nuo vėlesnio eksperimentinės infekcijos. Todėl buvo atliktas dvimatis gelio elektroforezės H. suis
baltymų po munoblotingu su Suminė serumu, H. suis UAB - užkrėstų pelių ar pelių paskiepytų su lizate. Silpnas reaktingumas prieš H. suis
baltymų buvo pastebėtas po infekcijos serumu. Serumai nuo lizate-paskiepyti pelėmis, tačiau parodė, reaktyvumas prieš 19 baltyminių dėmių, kurios buvo nustatytos naudojant LC-MS /MS viso. H. suis
ureazės B subvieneto (UreB) parodė Ryškiausia reaktyvumą su serumu lizate-paskiepyti pelių ir nebuvo aptikta su serumu užkrėstų pelių. Nė vienas iš bankų serumą aptiko H. suis
neutrofilų įsijungiantis BALTYMŲ (NAPA). Apsauginis veiksmingumas nosį vakcinacijos BALB /c pelių H. suis pervežimas UreB ir Napa, tiek rekombinantiniu būdu išreikšta Escherichia coli
(rUreB ir rNapA, atitinkamai), buvo lyginamas su H. suis
lizato. Visos vakcinos esančius choleratoxin kaip adjuvantu. Imunizacijos pelių su rUreB ir lizate sukeltų žymiai sumažinti H. suis
kolonizaciją palyginti su ne vakcinuoti H. suis
-infected kontrolę, o rNapA neturėjo reikšmingos apsauginį poveikį. Tikriausiai, iš vietos TH1 ir Th17 atsakymų derinys, papildytas antikūnų vaidinti svarbų vaidmenį apsauginio imuniteto prieš H. suis
infekcijų.
Įvadas
Helicobacter
(H.
) suis
yra visame pasaulyje paplitęs patogenas, daugiausia kolonizavimo kiaulių. Infekcija su šiuo gramneigiamų bakterijų buvo susijęs su opos skrandžio ne liaukų gleivinės [1, 2] ir sukelia gastritas ir sumažėjęs paros svorio padidėjimas [3] kiaulių. H. suis
taip pat yra paplitę ne Helicobacter pylori Helicobacter
rūšys žmonėms, kenčiantiems nuo skrandžio sutrikimų [2] ir kiaulės gali tarnauti kaip H. šaltinis suis
infekcijų žmogui [2, 4 ]. Valdymo H. suis
infekcijų antibiotikais pagrįstos terapija nerekomenduojama dalies dėl padidėjusios rizikos susirgti įsigijo antimikrobinio atsparumo, H. suis
padermių ir priklausančių normaliai kiaulių mikrofloros [5] bakterijų. Todėl imunizuoti nuo H. suis
gali atstovauti vertinga alternatyva. Iki šiol, tačiau keli tyrimai nagrinėjo vakcinacijos nuo šios kiaulių ir zoonozės patogeno.
Ankstesnis studijas pelės modelis parodė, kad H. suis
infekcija nesukelia apsauginio imuniteto, o vakcinacija remiantis homologinių (H. suis
) arba heterologinio (H. bizzozeronii
arba H. cynogastricus
) visa ląstelių lizatas sukėlė sumažinti ar net visiškas jo pašalinimas skrandžio kolonizacijos H. suis
[6]. Tačiau, šio vakcinų tipą leidžiama naudoti turi trūkumų, įskaitant in vitro kultūros H. suis
, dėl kurio susidaro sunkumų gaminti pakankamą antigeną sunkus. Be to, visa-ląstelių fragmentai gali būti abu apsauginius antigenus ir antigenų mažinančiomis apsaugos [7]. Veiksminga subvieneto vakcina gali būti naudinga alternatyva kontrolės H. suis
infekcijų. Immunoproteomics yra tinkamas metodas greitai identifikuoti kandidačių baltymų skiepijimo ir buvo taikomas nagrinėja ir rengia subvieneto vakcinų platų patogenų [8].
Tai buvo šio tyrimo tikslas pasirinkti H. suis
baltymai, kurie gali sukelti apsauginį imunitetą, H. suis pervežimas infekcijos. Todėl, serumais pelių paskiepytų H. suis pripažintos, H. suis
baltymai
visa ląstelių lizatas ir apsaugoti nuo infekcijos buvo nustatyti naudojant dvimatę (2D) gelyje po munoblotingu ir LC-MS /PONIA. Serumai H. suis UAB - užkrėstų pelių taip pat buvo įtraukti, nes infekcija nesukelia apsauga. Remiantis šia analize, imunoreaktyvi H. suis
ureazės B subvieneto (UreB) buvo pasirinktas dėl papildomos in vivo bandymus. Kaip kontrolės mes įtraukti į H. suis
neutrofilų-aktyvuojančio baltymo A (Napa), kuri buvo aprašyta anksčiau kaip galimo virulentiškumo [9] faktoriaus bet nebuvo pripažinta serume pelių imunizuotų su visa-ląstelių lizato. Vėliau, apsauginis veiksmingumas prieš H. suis
infekcija abiejų subvieneto vakcinų buvo įvertinta ir palyginti su H. suis
lizatas standartizuota pelės modelį.
Medžiagos ir metodai
Bakterinė padermė
visais eksperimentų H. suis
padermės 5 (HS5, GenBank: ADHO00000000) buvo naudojamas. Šis kamienas buvo išskirtas iš skrandžio gleivinės kiaulės pagal aprašytą metodą Baele ir kt., [10].
Gyvūnai
Vienas savaitei iki eksperimentams inicijavimą, penkių savaitę-amžiaus specifinis-patogenas -nemokama moterys BALB /c pelių buvo gauti iš įgaliotojo selekcininko (HARLAN, Horst, Nyderlandai). Gyvūnai buvo laikomi ant sterilizuoti medienos drožlių filtras viršų narvuose. Jie buvo šeriami su autoklavinio komercinės dietos (TEKLAD 2018S, HARLAN) ir gavo sterilizuoti vandens iki soties
. Visi laboratoriniai bandymai su gyvūnais buvo patvirtintos Gyvūnų globos ir etikos komiteto Veterinarinės medicinos fakultetas, Gento universitete.
Immunoproteomics H. suis
Dvimatis gelio elektroforezės (2D-PAGE)
HS5 buvo auginami kaip aprašyta anksčiau [11]. Bakterijos buvo surinktos centrifuguojant (5000 g
, 4 ° C temperatūroje 10 min) ir keturis kartus praplaunama Hank Subalansuotas druskų tirpalo (HBSS). Iš viso baltymai (tiek tirpios ir netirpios baltymų) buvo paimti dviem etapais naudodami ReadyPrep ™ Nuosekliųjų nusiurbimu rinkinį (Bio-Rad, Hercules, CA, JAV), pagal gamintojo instrukcijas. Tam, kad gauti gerą 2D-PAGE rezultatus, Homogenatai buvo gydomi tinkamų priedų (5 mg proteazės inhibitorius kokteilio, 1 pL DNaze I 1 pL RNAse A, 10

• Apibūdinimas genų ekspresijos profilius skirtingų tipų putliųjų ląstelių jungtinius nuo pelių skrandžio subregionų kurį RNR amplifikacijos metodą
• Klinikos charakteristikos ir prognostinė analizė Lauren klasifikavimo skrandžio adenokarcinoma in China