Immunizálás immundomináns Helicobacter suis ureáz B alegységet indukál részleges védelmet nyújt H. suis fertőzés egy egér modell

Immunizálás immundomináns Helicobacter suis
ureáz B alegységet indukál részleges védelmet nyújt H. suis
fertőzés egy egérmodelljében
Abstract
Helicobacter
(H.
) suis
van egy sertés és humán gyomor kórokozó. Korábbi tanulmányok egerekben kimutatták, hogy a H. suis
fertőzés nem eredményez protektív immunitás, míg immunizálás H. suis
teljes-sejt lizátum (lizátum) véd a későbbi kísérleti fertőzés. Ezért kétdimenziós gélelektroforézissel H. suis katalógusa fehérjék végeztük, majd immunblot pooled szérumával H. suis
- fertőzött egerek, vagy immunizált egerek lizátumból. Gyenge elleni reaktivitás H. suis katalógusa fehérjék volt megfigyelhető a fertőzés utáni szérumok. Származó szérumokat lizátum-immunizált egerekből, azonban azt mutatták, immunreaktivitást ellen összesen 19 fehérje foltokat, amelyeket alkalmazásával azonosítottuk LC-MS /MS. A H. suis
ureáz B alegység (UreB) kimutatta legkifejezettebb elleni reaktivitás származó szérumok lizátum-immunizált egerekből és nem volt kimutatható szérumával fertőzött egerekben. Egyik levett szérumok észlelt H. suis katalógusa neutrofil aktiváló protein (Napa). Védelmi hatékonyságának a intranazális vakcinálás BALB /c egerek H. suis
UreB és Napa, mindkét rekombináns módon fejezzük ki E. coli katalógusa (rUreB és rNapA-kal), hasonlították össze a H. suis katalógusa lizátum. Minden vakcinák choleratoxin adjuváns. Egerek immunizálása a rUreB és lizátumot indukált jelentős csökkenését H. suis katalógusa kolonizáció, mint a nem vakcinázott H. suis
-fertőzött kontroll, míg rNapA nem volt jelentős védőhatást. Valószínűleg, egy kombinációja a helyi Th1 és Th17 válaszokat, kiegészítve ellenanyag-válaszok játszanak szerepet az ellen protektív immunitás H. suis
fertőzések.
Bevezetés
Helicobacter
(H.
) suis
egy világszerte elterjedt kórokozó, főleg gyarmatosító disznók. Fertőzés ezen Gram-negatív baktérium összefüggésbe hozták fekélyek a gyomor nem mirigyes nyálkahártya [1, 2], és okoz gyomorhurut és a csökkent a napi súlygyarapodás [3] sertésekben. H. suis
is a leginkább elterjedt, nem Helicobacter pylori Helicobacter
fajok szenvedő emberek gyomor-rendellenességek [2] és a sertés szolgálhat forrásként H. suis katalógusa fertőzések az emberre [2, 4 ]. Vezérlése H. suis katalógusa fertőzések antibiotikum-alapú terápia nem ajánlott részben fokozott a kockázata a szerzett antimikrobiális rezisztencia H. suis
törzsnél és tartozó baktériumok a normális sertés mikrobióta [5]. Elleni immunizálás H. suis katalógusa ezért értékes alternatívájának. Eddig azonban kevés tanulmány foglalkozott védőoltás ellen sertés és zoonózis kórokozó.
Korábbi tanulmányok egy egér modell azt mutatta, hogy a H. suis katalógusa fertőzés nem eredményez protektív immunitást, mivel az oltási alapján homológ (H. suis
) vagy heterológ (H. bizzozeronii katalógusa vagy a H. cynogastricus
) teljes-sejt lizátum indukált csökkenését vagy akár teljes clearance gyomor kolonizáció a H. suis
[6]. Azonban az ilyen típusú vakcinák vannak hátrányai, beleértve a fáradságos in vitro tenyészetéből H. suis katalógusa, ami nehézségeket előállításához elegendő antigén. Továbbá, teljes-sejt lizátumok tartalmazhat mind védő antigének és antigének elnyomására védelem [7]. Egy hatékony vakcina alegység lehet hasznos alternatíva a H. suis katalógusa fertőzések. Immunoproteomics megfelelő megközelítés gyors azonosítására jelölt proteinek vakcinázási és alkalmaztak, hogy tanulmányozza és kidolgozza alegység vakcinák széles körű kórokozók [8].
Ez volt a célja a jelen tanulmány kiválasztásához H. suis
fehérjék, amelyek protektív immunitást H. suis katalógusa fertőzés. Ezért H. suis
fehérjék által felismert szérumok immunizált egerek H. suis
teljes sejt lizátum és a védett fertőzés ellen azonosítottunk segítségével kétdimenziós (2D) gélelektroforézissel, majd immunblot és LC-MS /KISASSZONY. A szérumokat a H. suis katalógusa - fertőzött egereket is tartalmaz, mivel a fertőzés nem eredményez védelmet. Az elemzés alapján a immunreaktív H. suis
ureáz B alegységet (UreB) választottuk ki további in vivo vizsgálatokat. Kontrollként mi tartalmazta a H. suis
neutrofil-aktiváló protein-A (Napa), amelyet előzőleg le, mint egy lehetséges virulencia faktor [9], de nem ismerte el szérumok immunizált egerek teljes-sejt lizátumból. Ezt követően, a védőhatás ellen H. suis
fertőzés mindkét alegység vakcinák értékeltük, és összehasonlítottuk a H. suis katalógusa lizátumot egy szabványosított egérmodellben.
Anyagok és módszerek
Bakteriális törzset
Az összes kísérletben, a H. suis
törzs 5 (HS5, GenBank: ADHO00000000) használtunk. Ezt a törzset izoláltuk a gyomornyálkahártya egy disznó módszer szerint által leírt Jan Baele et al. [10].
Állatok
Egy héttel megkezdése előtt a kísérletek, öt hetes specifikus patogénmentes -mentes nőstény BALB /c egereket szereztünk be a felhatalmazott tenyésztő (Harlan, Horst, Hollandia). Az állatokat sterilizált faforgács szűrő felső ketrecekben. Etették egy autoklávban kereskedelmi étrend (Teklád 2018S Harlan) és kapott autoklávozott vízzel ad libitum katalógusa. Minden laboratóriumi állatkísérletek hagyta jóvá az Animal Care és Etikai Bizottsága a Faculty of Veterinary Medicine, Genti Egyetem. Katalógusa Immunoproteomics H. suis Matton Kétdimenziós gélelektroforézis (2D-PAGE) hotelben HS5 növesztettünk a korábban leírtak szerint [11]. A baktériumokat centrifugálással (5000 g katalógusa, 4 ° C-on 10 percig), és négyszer mossuk Hank-féle kiegyensúlyozott sóoldat (HBSS). Összesen fehérjék (oldható és oldhatatlan fehérjék) extraháltuk két lépésben a ReadyPrep ™ Szekvenciális Extraction Kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Annak érdekében, hogy jó 2D-PAGE eredménnyel, a homogenizátumokat kezeljük megfelelő adalékok (5 mg proteáz inhibitor koktél, 1 pl DNáz I, 1 ul RN-áz A 10 ul foszfatáz-inhibitorok PP2 és PP3 (Sigma-Aldrich, Steinheim, Németország) ). Végül, a fehérje-koncentráció alkalmazásával határoztuk meg az RC DC
Protein Assay (Bio-Rad), és a fehérjéket tároltuk -70 ° C-on további felhasználásig. Összesen 100 ug HS5 fehérjéket rehidratáltuk 200

• Jellemzése génexpressziós profilokat különböző típusú hízósejtek egyesítjük egér gyomor alrégiók által egy RNS amplifikációs method
• Klinikopatológiai jellemzők és prognosztikai elemzése Lauren besorolási gyomor adenocarcinoma China