Caveolin-1 (Cav1) ass eng scaffold FAQ a pathogen receptor an der mucosa vun der gastrointestinal TRACT. Chronescher Krankheet vun gastric epithelial Zellen vun Helicobacter pylori VerfÜgung ( H. Pylori VerfÜgung) ass e grousse Risiko Faktor fir Mënscherechter gastric Kriibs (GC) wou Cav1 ass dacks verwandelt-reegelen. Allerdéngs, d'Funktioun vun Cav1 zu H. pylori VerfÜgung Wonn an pathogenesis vun GC nach onbekannt. Mir weisen hei, datt Cav1-erhéijen Mais, fir 11 Méint Krankheet mat der CagA-Liwwerung erhéijen H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1, entwéckelt méi schwéieren gastritis an Otemschwieregkeeten Schued, dorënner Verloscht vun parietal Zellen an foveolar hyperplasia, an ugewisen ënneschten Kolonisatioun vun der gastric mucosa wéi Wildwest-Typ B6129 littermates. Cav1-automatesch Mais awer net einfach vun macrophages gestäerkt a B-Zellen an secretion vun chemokines (RANTES) mee hat Niveau vun CD25 reduzéiert Wonn mat der Bakterie Helicobacter pylori VerfÜgung ( H. pylori VerfÜgung) haaptsächlech Kanner an d'Entwécklungslänner betreffen, déi am Risiko si fir gastric Kriibs (GC) als Erwuessener no ville Jore vun bestänneg Wonn ze Fortschrëtt, virun allem mat analyséieren wat fir positiv sinn der oncogenic virulence Faktor CagA. Ausradéiere vun H. pylori VerfÜgung vun Antibiotiken ass eng Behandlung vun presentéiert mä vläicht och de waat ze evitéieren an aner entholl Zorte ofzeänneren. Sou, sinn Roman diagnostic oder prognostic lues waren déi am Mo. mucosa während der Transitioun vun chronescher inflammation zu Kriibs fréi molekulare Changementer z'entdecken. An eiser Etude, fonnt mir datt de entholl suppressor caveolin-1 (Cav1) op Wonn mat H reduzéiert gëtt. pylori VerfÜgung, an CagA genuch war awer net néideg fir dësen Ugrëff-Regulatioun. Verloscht vun Cav1 war vun H verursaacht. pylori VerfÜgung -dependent Aktivatioun vun sterol-responsiven Element-verbindlech FAQ-1 (SREBP1), an dësem Fall ofgeschaf der Interaktioun vun Cav1 mat p120 RhoGTPase-activating FAQ /geläscht an Liewer Kriibs-1 (p120RhoGAP /DLC1), eng zweet Bona fide VerfÜgung entholl suppressor zu gastric Otemschwieregkeeten. Conclusively, Cav1 an DLC1 kann Roman molekulare lues am H wor. pylori VerfÜgung -infected gastric mucosa virun neoplastic Transformatioun vun der epithelium VerfÜgung Fro:. Hitkova ech, Yuan G, Anderl F, Gerhard M, Kirchner T, Reu S, et al. (2013) Caveolin-1 geschützt B6129 Mais géint Helicobacter pylori VerfÜgung Gastritis. PLoS Pathog 9 (4): e1003251. Doi: 10.1371 /journal.ppat.1003251 VerfÜgung Redakter: Steven R. Blanke, Universitéit vun Illinois, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: Mee 23, 2012; Akzeptéiert: 4. Februar 2013; Publizéiert: April 11, 2013 VerfÜgung Copyright: © 2013 Hitkova et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Etude war déi Subventioune fir EB an MPAE vun der Deutsche Krebshilfe (108287) an DFG (Ëmfeld geschafe-2285) ënnerstëtzt. . KMU-innovativ Nee 0315116B D'; MPAE ass och déi Subventioune vun der Deutsche Krebshilfe (107885), DFG (SFB 824, TP B1), Aanescht Krounen Stëftung (Reen P14 /07 //A104 /06) an BMBF (Mobimed 01EZ0802 ënnerstëtzt funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. d'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Helicobacter pylori VerfÜgung ( H. pylori VerfÜgung) ass eng Gramm-negativ Bakterie deen ca. Mamm vun bewunnt. 50% vun der Bevëlkerung an d'Welt an erhéigt de Risiko fir Entwécklung vun chronescher gastritis, peptic oppent Krankheet, gastric mucosa-verbonne lymphoid Otemschwieregkeeten (Malz) lymphoma, mucosal atrophy an gastric Kriibs (GC) [1], [2]. Baséierend op dësem etiology, H. pylori VerfÜgung ass kleng wéi enger Klass carcinogen ech vun der Weltgesondheetsorganisatioun (dÉI) vun 1994 [3]. VerfÜgung déi zwou grouss H. pylori VerfÜgung entgëften [4], CagA an VacA, sinn Message un gastric epithelial Zellen vun Sprëtz via de bakteriell Typ IV secretion System (CagA) [5] oder duerch direkt Enregistréiere an Lipid rafts (VacA) [6], [7]. Lipid rafts sinn Cholesterol an sphingolipid-räiche microdomains vun de Plasma Membran [8], [9] déi vill pathogens exploitéiert ginn, dorënner Viren, Parasiten a Bakterien, Notzong vum ganze Organismen ze vereinfachen an /oder internalisation vun entgëften an Provider Zellen [ ,,,0],10], [11], [12]. Zum Beispill, Neisseria SpecLanguage VerfÜgung. benotzt Lipid rafts an Rho-mediated sécher vun der actin cytoskeleton Zougang zu der Zytosol [13] ze gewannen. Pseudomonas aeruginosa VerfÜgung Merite Lipid Caisse Médico-verbonne Péage-wëll receptor 2 fir Wonn vun haett epithelial Zellen [14]. VerfÜgung Caveolin-1 (Cav1) ass den 21-24 kDa grouss a wesentlech strukturell FAQ vun caveolae, eng spezialiséiert Form vun Lipid Caisse microdomains. Caveolae sinn 50-100 nm flask /Rouer-gebuerene invaginations vun de Plasma Membran räich an macrophages, endothelial a glat Muskel Zellen, Typ ech pneumocytes an adipocytes, wou se zu bewosst Transport Prozesser dorënner endocytosis, Cholesterol efflux an Membran Verkéier [15] matmaachen , [16]. An dësem Kontext, Akt Cav1 kann och als inhibitor vun clathrin-onofhängeg endocytosis an Spär pathogen /toxin Notzong [17], [18]. Duerch seng Steeen Beräich verbindlech, bremst Cav1 direkt eng Onmass vu kenne an Enzymen dorënner tyrosine kinases vun der Src an Ras Famill, G-Proteinen an nitric It synthases [15]. Nieft enger Roll an Membran Verkéier, soumat Cav1 also eng Kontroll Plattform fir Regulatioun vun Zell Prolifératioun an Iwwerliewe [19]. Cav1 enormen och eng wichteg Funktioun an der Zell motility a Migratioun an, bannent epithelial, stromal an endothelial Stoffer, déi Zell-Zell Kontakter anhaalen, Zell-Matrixentgasung Haftung an immun Äntwerte [20], [21], [22], [23] . VerfÜgung Cav1 Photo'en direkt Cholesterol, an Transkriptiouns vun Cav1 vun der Transkriptiouns Faktor sterol-responsiven Element-verbindlech FAQ-1 (SREBP1) [24] ass negatif reegelen. SREBP1 ass fir d'endoplasmic reticulum (ËH) wéi eng Aarbechtslosegkeet 125 kDa Virleefer gebonnen an ass ënnert Konditiounen vun Cholesterol hunn déi proteolytic Rëss an der Golgi Staatsapparat ausgeléist. Dëst Rëss ass vun br vun der aktiver 68 kDa SREBP1 an den helle Schluss wou et zu sterol-responsiven Elementer (SREs) vun Zil- Genen, dorënner Cav1, Équipe an Synthes vu Cholesterol an fatty Saieren [25] Photo'en. H. pylori VerfÜgung gouf dës Cholesterol vum Provider Zell Membran un Alldag, an Provider Cholesterol Mäe der oncogenic Eegeschafte vun CagA [26], [27]. VerfÜgung Mir Hypothes also, datt de Cholesterol-verbindlech Proteinen SREBP1 an Cav1 sinn Ziler vun H. pylori VerfÜgung Wonn an /oder effector Funktiounen. Speziell, mir gefrot ob (i) H. pylori VerfÜgung Merite Cav1 Sprëtz ze vereinfachen an Ugrëff-bäiginn sécher vun CagA zu gastric epithelial Zellen oder (II) Cav1 Akten als Schutzpatrounin "Barrière-anhaalen" FAQ déi Krankheet Album vun H counteracts. pylori VerfÜgung. dëst ze testen, de phenotypes déi vun H Resultat. pylori VerfÜgung Wonn sech zu Cav1-erhéijen Mais a mënschlechen GC Zell Linnen studéiert. Eis Daten zougedréckt datt Cav1 geschützt B6129 Mais géint H. pylori VerfÜgung -related gastritis an Otemschwieregkeeten Schued zu VIVO VerfÜgung onofhängeg vun CagA. H. pylori VerfÜgung och SREBP1 an Ugrëff-reegelen Ausdrock vun murine a mënschlech Cav1 onofhängeg vun CagA ausgeléist. Zousätzlech, entgéintzewierken Cav1-CagA ofhängeg cytoskeletal rearrangements kënschtlech VerfÜgung vum Recrutement vun de suppressor entholl zu Liewer Kriibs-1 (DLC1) geläscht. VerfÜgung Ethik Ausso VerfÜgung Déieren Studien waren am Accord mat der ethesch Normen vun der Rosalie Universität München (däitsch Déierenschutzorganisatiounen Act, däitsche Tierschutzgesetz) gehaal an hat guttgeheescht (7.2-1-54-2531-74-08) vun der Regierung vu Bayern VerfÜgung Déieren VerfÜgung Homozygous Cav1 Knockout (Cav1-KO) (Deformatioun Cav1tm1Mls /J; Bourse Nummer 004585) (Regierung von ÖBB, München, Däitschland.). iwwereneestëmmen Kontroll Wëllschwäin -type (virstellen) (Deformatioun B6129SF2 /J; Bourse Nummer 101045) Mais (8 Wochen) goufen aus der Jackson schafft (Bar Harbor, Maine) kritt an op e gemëschtent Hannergrond vun engem pathogen-gratis Maus Gebei haten [28], [ ,,,0],29]. Experimentell gastric ulceration war mat indomethacin standing als publizéiert ier [30]. Wonn vun Mais mat der Maus-ugepasst CagA /VacA-Liwwerung erhéijen H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1 war vun mëndlech gavage standing ëmschriwwen [31]. D'Moyenne Zäit Mais aus verschiddene genetesch Hannergrënn (C57BL /6, B6129, BALB /c) huelen un chronescher gastritis an doriwwer eraus (gastric atrophy, hyperplasia, dysplasia) ze Fortschrëtt [32], läit tëschent 10 an 15 Méint op Wonn mat de standardiséierte reference Deformatioun SS1 [28], [33], [34], [35]. Mir hunn decidéiert dofir eiser Analyse an dëser Zäit Rumm ze maachen. VerfÜgung Reagents VerfÜgung Chemesch sech aus Merck (Darmstadt, Däitschland) oder Fläch (Taufkirchen, Däitschland). Polyclonal antisera sech SREBP1 (# PA1-46142, Thermofisher Wëssenschaftlech, Waltham, MA), Cav1 (N-20, sc-894), SREBP1 (C-20, sc-366), CagA (b-300, sc-25766) , FAK (A-17, sc-557), phospho-FAK (Tyr-397, sc-11765), Hsp90 alpha /Beta (H-114, sc-7947), Lamin A /S (H-110, sc- 20681, all aus Santa Cruz Biotech., CA), allgemeng a phospho ERK1 /2 (p44 /p42), p38, JNK (all aus Zell sécher, Danvers, MA) an Ki-67 (SP6, DCS GmbH, Hamburg, Däitschland ). Mouse monoclonal antibodies sech Cav1 (ɢ406) an phospho-Cav1 (pY14,ɣ338) (souwuel aus BD /Transduction déngt., San Jose, CA), verbueden-1 (C-12, sc-271915) an Beta-Actin (AC-15, sc-69879) (souwuel vu Santa Cruz Biotech.). D'macrophage-spezifesch Grenzwäerter anti-Maus F4 /80 antibody (# MF48000) war vun Invitrogen (Life Technologies, Darmstadt, Däitschland) kritt. Poulet anti- H. pylori VerfÜgung polyclonal Ab war ëmschriwwen [36] benotzt. Serum cytokines sech duerch Elisa (R & D Systemer, är ganz Famill, Punktzuel) gemooss laut den Hiersteller d'Uweisungen. Pull-verwandelt assays fir déi kleng GTPases Rho /Rac /Cdc42 aus Biocat kaaft huet (Heidelberg, Däitschland). VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung Mënscherechter embryonal Nier (HEK293), Madin-Darby canine Nier ( MDCK), Elteren Mënsch GC Zell Linnen (AGS, MKN45, N87) (all aus der American Type Kultur Collection, Rockville, MD) an stably transfected clones Verdeelung generéiert goufen ëmschriwwen haten virdrun [37]. Wonn vun Zellen mat der Zell-ugepasst CagA-Liwwerung beherrscht H. pylori VerfÜgung Deformatioun G27 war wéi virun standing [36]. VerfÜgung DNA-gesond VerfÜgung Den Ausdrock plasmid pEGFP-CagA war anzwousch ernimmt [38]. D'~800 BP Brochstéck vun der proximal Mënsch Cav1 Promoteur (AF019742, Positiounen 69 bis 859) [24] war vun Hinnen alleguer aus dem Frankräich DNA vum Mënsch normal Liewer Kick an gekloonten nees KpnI /HindIII Siten vun pGL3-luc luciferase reporter plasmid ( Promega GmbH, Mannheim, Däitschland). Isoform 4 vun de Mënscherechter DLC1 mRNA [39] (DLC1v4, NM_001164271.1) gouf vum Mënsch hepatoma HepG2 Zellen Implikatioune verstärkt an an der BamHI /NotI Siten vun den Ausdrock Vecteure pTarget (PT, Promega GmbH) gesaat. Flüchteg transfection an luciferase assays sech als ier [37] gesuergt. VerfÜgung bakteriell Kultur VerfÜgung H. pylori VerfÜgung SS1 a G27 Bakterien sech vu -80 ° C glycerol Stock an ugebaut op Wilkins-Chalgren (WM) Blutt Agar Placke ënner microaerobic Konditiounen (10% CO2, 5% O2, 85% N2; 37 ° C) emmer fir 2-3 Deeg. D'Maus-ugepasst H. pylori VerfÜgung SS1 aus Agar Placke fir zu VIVO VerfÜgung Aids virdrun als publizéiert recoltéiert war [31]. D'SS1 Deformatioun war Hinnen alleguer-positiv fir den cagA VerfÜgung Gentherapie an mRNA mee huet mer net funktionell CagA FAQ [40] als evident duerch d'Feele vun der phenotype zu infizéiert AGS Zellen "Vugel humming" (Daten net gewisen) . D'Zell-ugepasst H. pylori VerfÜgung Bakterien CagA-Liwwerung beherrscht G27 virstellen VerfÜgung an der CagA-Läschen Mann- G27 Delta cagA VerfÜgung aus Agar Placke gesammelt goufen an duerno am permanente Co-Kultur mat MDCK Zellen ugebaut ëmschriwwen [36]. VerfÜgung Ex VIVO VerfÜgung quantification vun Amphipolis administrativ Ënnerdeelunge (CFUs) VerfÜgung Lait Mamm aus Mais excised waren, a Kolonie Équipe war am Fong alles ëmschriwwen [31] . An antral Sträif vun de Mo. war gewien, gesat an 5 ml vun Brucella läschen an vortexed fir 10 min. Dilutions vun 1:10, 1:100 an 1:1000 ware bereet, an 100 μl vun all dilution war op H plated. pylori VerfÜgung -selective WM Blutt Agar Placken. D'Zuel vun bakteriell Kolonie war no 5 Deeg an normalized dem Gewiicht vum entspriechende Mo. Stécker alles. VerfÜgung Processing vun Maus gastric Otemschwieregkeeten VerfÜgung De Rescht Mo. war mat steril Waasser gewäsch. An antral Sträif war zu flëssegem Stéckstoff Géigewier, gefruer an bei -80 ° C bis RNS Extraktioun gespäichert. De Rescht vun de Mo. war an 3 ml vu 4% gesat (w /v) paraformaldehyde (PFA) zu phosphate gefiermt Salins (PBS) a fir 24 h bei 4 ° C incubated. Dunn, war de Mo. laanscht de groussen a klenge curvature an zwee gedeelt Géigewier, gefollegt vun eppes an embedding an paraffin fir histological Analyse. VerfÜgung Gentamycin Schutz assay VerfÜgung BTS sech mat der Krankheet H. pylori VerfÜgung Deformatioun G27 bei enger Zuel vun Wonn (MOI) vun 500:1 2 bis 24 h fir. Doropshin huet sech Zellen dräimol mat PBS Katakombe Reschtofall Bakterien ewechzehuelen a sech Weideren fir 2 h op 37 ° C an enger humidified Atmosphär an DMEM /F12 incubated (10% FCS, 10% Brucella läschen) ergänzt mat gentamycin (200 μg /ml ), penicillin /streptomycin (100 μg /ml) an chloramphenicol (100 μg /ml). Feele vun extracellular Bakterien gouf ënner der microscope bestätegt, an d'Zellen sech dono fir ze erkennen intracellular CagA vun Western blot (WK) lysed. VerfÜgung Coimmunoprecipitation (CoIP) a Western blot (WK) VerfÜgung Detektioun vun immunoprecipitated Proteinen vun SDS-PAGE an WK war wéi virdrun [41] gesuergt. MATRIX-assisteiert Laser Eispist /Eegeliichten Mass spectrometry (MALDI-MS) war an am Detail beschriwwe [29]. VerfÜgung Immunofluorescence VerfÜgung D'staining zu AAA-Faarf Modus Leeschtung war 4,6- visualizing diamidino-2-phenylindole (DAPI), Alexa-488 an -594 enger digitaler Kamera-verbonne mat (Axiovision, release 4,4) fluorescence microscope (Axiovert 200M, Carl König MicroImaging GmbH, Hallbergmoos, Däitschland). Confocal microscopy (Axiovert 40, König) an 3D-Rekonstruktioun vun H. pylori VerfÜgung -infected Zellen mat LSM510 (König) an Volocity (Improvision, Tübingen, Däitschland) war wéi virun gemaach [37]. VerfÜgung Histopathological Evaluatioun a immunohistochemistry (IHC) VerfÜgung Kliniken aktiv gastritis war vun der gläichzäiteg Presenz vun zwou neutrophilic polymorphnuclear (PMN) an mononuclear Zellen (lymphocytes a Plasma Zellen) bannent der gastric mucosa definéiert. Aktiv (PMN) a chronescher (mononuclear) infiltrate évaluéieren war wéi follegt: Paraffin-Ënnerbewosstsinn gastric Otemschwieregkeeten an 3 μm Rubriken geschnidde gouf e semi-automatesche microtome (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Däitschland) benotzt. D'Sektiounen sech dann Kierchefënster benotzt Hematoxylin & Eosin (H & E) Léisungen. D'histopathological Analyse huet d'Etude charge vun dräi pathologists (CR, SR, TkLanguage) blinded duerchgefouert. Morphological hire Restaurant op der gastric mucosa sech no der aktualiséiert Sydney System séiert [32], [42]. D'Schouljoer vun gastritis war op der Dicht vun intramucosal demagogesch infiltrates aus mononuclear an PMN Zellen Faarwen baséiert wéi virun publizéiert [43]: keent (0), mëll (1+), moderéiert (2+) a schwéieren (Iwwer 3). Zousätzlech, hyperplastic oder regenerative epithelial hire Restaurant, Verloscht vun parietal Zellen an der Heefegkeet vu lymphoid follicles oder lymphoid Bodrum sech feststellen. D'Intensitéit vun H. pylori VerfÜgung Kolonisatioun an der gastric mucosa war wéi mëll (puer an eenzeg Bakterien an engem zoufälleg Verdeelung) opgeholl, moderéiert (eenzeg an der Strooss Bakterien an engem erauskomm Verdeelung) a schwéieren (dichten bakteriell Stärekéip der gastric mucosa zu kontinuéierlech Schichten Eechenholz). Abberzuel Fändelen vu verschiddene Regioune vun waren d'Mo geschoss. Immunohistochemistry (IHC) war op paraffin Rubriken standing wéi virdrun beschriwwen [44]. VerfÜgung Electrophoretic Mobilitéit Verréckelung assay (EMSA), chromatin immunoprecipitation (Chip), ëmgedréint Transkriptiouns Hinnen alleguer (RT-Hinnen alleguer) a grouss Hinnen alleguer (qPCR) VerfÜgung Chip (Kit vun Upstate, Millipore GmbH, Schwalbach, Däitschland) an all aner Methoden sech wéi virdru beschriwwen standing [45]. Oligonucleotides sinn an Table S1 opgezielt. VerfÜgung bewosst assays VerfÜgung Nuetsvolen vun Operstéiungszeen Zellen war gemoos 1- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) 3,5-diphenyl-formazan (MTT ) assay (Roche kinnt GmbH, Mannheim, Däitschland) wéi déi vun den Hiersteller ze recommandéieren. Ze bestëmmen Zell Haftung, 1 × 10 Statistics VerfÜgung Resultater sinn heescht ± S.E. vun op d'mannst 5 Déiere pro genotype oder 3 onofhängeg Experimenter aus verschiddene Zell Passagen. D'Software GraphPad Prism (Versioun 4.0, La Jolla, CA) war benotzt d'Daten ze analyséieren. P-Wäerter (* p &Si besteet; 0,05) waren berechent Student d't an Fisher genee Tester mat VerfÜgung Zougank Zuelen VerfÜgung Mënscherechter: Cav1:. NM_001753.4, Q03135; b2M: NM_004048.2, P61769; IL8: NM_000584.3, P10145; DLC1 V1: NM_182643.2, Q96QB1; DLC1 v4: NM_001164271.1, Q96QB1; ACS: NM_018677.3, Q9NR19; HMGCoAS: NM_001098272.2, Q01581; HMGCoAR: NM_000859.2, P04035; LDLR: NM_000527.4, P01130; Beta-Actin: P60709; Lamin A: P02545; Lamin C: P02545; Hsp90 alpha: P07900; Hsp90 Beta: P08238; ERK1 (p44): P27361; ERK2 (p42): P28482; FAK: Q05397; JNK1: P45983; JNK2: P45984; p38: Q16539; Src: P12931; SREBP1: P36956; Ki-67: P46013; Maus: Cav1: NM_007616.4, P49817; b2M: NM_009735.3, Q91XJ8; TNFalpha: NM_013693.2, P06804; IFNgamma: NM_008337.3, P01580; IL1beta: NM_008361.3, P10749; IL6: NM_031168.1, P08505; CD4: NM_013488.2, P06332; CD19: NM_009844.2, P25918; CD25: NM_000417.2, P01589; CD86: NM_019388.3, P42082; CCL5: NM_013653.3, P30882; CXCL1: NM_008176.3, P12850; PPARg2: NM_015869.4, P37231; TFF2: NM_009363.3, Q9QX97; Hond: b2M: NC_006612, XP_850148; H. pylori VerfÜgung: CagA: YP_002266135.1, B5Z6S0; UreB:. YP_626814.1, Q1CV82 VerfÜgung Cav1-erhéijen Mais Ecran verstäerkte gastritis op Wonn mat CagA-Liwwerung Onfäegkeet H. pylori VerfÜgung SS1 VerfÜgung der histological Ännerungen am gastric Otemschwieregkeeten op H entschlof ze bewäerten. pylori VerfÜgung Wonn, B6129 virstellen an Cav1-KO Mais sech mat der Maus-ugepasst Krankheet an CagA-Liwwerung erhéijen H. pylori VerfÜgung Deformatioun SS1. De Mais goufen 11 Méint méi spéit euthanized, an H. pylori VerfÜgung war vun resected Mo. Otemschwieregkeeten [31] isoléiert. Cav1-KO Mais zougedréckt a manner bakteriell Kolonisatioun vun der gastric mucosa wéi virstellen Mais (7.3 ± 2,4 virstellen versus VerfÜgung 1,6 ± 0,5 KO × 10 Cav1-hunn ënnerstëtzt Recrutement vun macrophages an d'Krankheet gastric mucosa VerfÜgung d'Identitéit vun immun Zellen ze evaluéieren wat fir H bäidroen. pylori VerfÜgung -related inflammation zu Cav1-KO Mais, RT-qPCR Analyse vun ausgewielt cytokines, Uewerfläch lues a chemokines war gesuergt (Figebam. 2A). Konsequent mat der observéiert inflammation, H. pylori VerfÜgung SS1 entschlof Ausdrock vun TNFalpha an IFNgamma an der gastric mucosa souwuel virstellen an KO Mais. Zousätzlech, dohinnergestallt mir eng fräi mRNA Ausdrock vun CD19 (B-Zellen) (1,6 ± 0.3 virstellen versus VerfÜgung 3,3 ± 0,9 KO; p = 0,0512; n = 15 pro genotype) an RANTES (CCL5) (1,3 ± 0,2 virstellen versus VerfÜgung 2.1 ± 0.6 KO; p = 0,0449; n = 15 pro genotype) zu gastric Otemschwieregkeeten vun H. pylori VerfÜgung -infected Cav1-KO Mais am Verglach mam Personal virstellen Mais. Am Géigesaz, mRNA Niveau vun CD4 (T-Mathëllef Zellen), CD25 (T-reglementaresche Zellen) an CD86 (antigen-Fotoe Zellen) waren déi H opgeléist. pylori VerfÜgung onofhängeg vun der Cav1 Status. Immunohistochemistry (IHC) fonnt engem markéiert Erhéijung vun intramucosal F4 /80-positiv macrophages zu gastric Otemschwieregkeeten vun Krankheet Cav1-KO Mais am Verglach mat virstellen littermates (Figebam. 2B). CD3-positiv lymphocytes waren wellkomm ronderëm an innerhalb intramucosal follicles (Donnéeën net gewisen). VerfÜgung Ähnlech Resultater aus Experimenter kritt sech rapid gastric Verletzungen an Méis vun Sprëtz vun indomethacin Aféiere [30] (Fig.S1). Konsequent mat der verstäerkter Otemschwieregkeeten Schued zu Cav1-KO Mamm (* p = 0,0161, virstellen versus VerfÜgung KO, n = 9 pro genotype), engersäits duerch inflammation, Erosioun an ulceration, Cav1-erhéijen Mais ausgedréckt och méi héich Zommen vun mRNAs fir d'oppent Zeechesaatz Proteinen verkënnegt trefoil Faktor-2 (TFF2) (0,8 ± 0.3 virstellen versus VerfÜgung 2,3 ± 0,4 KO; * p = 0,0048; n = 9 pro genotype) an peroxisome proliferator-ageschalt receptor- ESO (PPARg) (0.6 ± 0,2 virstellen versus VerfÜgung 2,5 ± 0,5 KO; * p = 0,0008; n = 9 pro genotype). An Zomm, uginn dës Donnéeën, datt Verloscht vun Cav1 der waat Mais bis gastric inflammation an Otemschwieregkeeten Schued verbessert. VerfÜgung Cav1 weder Mäe Haftung vun H. pylori VerfÜgung analyséieren an nach Iwwerliewe vum Mënsch GC Zellen VerfÜgung Fir d'Funktioun vun Cav1 während H bewäerten. pylori VerfÜgung Wonn kënschtlech VerfÜgung, de Mënsch AGS gastric epithelial Zell Linn benotzt gouf déi mat Cav1 Ausdrock plasmid (AGS /Cav1) oder eidel Vecteure (AGS /Print) stably transfected gouf [37]. Éischt, iwwerpréift mir ob Cav1 Afloss Zell Iwwerliewe op H. pylori VerfÜgung Wonn (Figebam. 3A). AGS clones mat an ouni Cav1 sech mat der Zell-ugepasst CagA-Liwwerung zoustännegen fir 48 h Krankheet H. pylori VerfÜgung G27 Deformatioun bei verschiddene multiplicities vun Wonn (MOI) aus 1:100 zu 1:2000 rangéiert. Colorimetric MTT assays Teamchef Cav1 keen Effekt op Punkto Iwwerliewe vun AGS Zellen op déi H. pylori VerfÜgung Wonn. Ähnlech Resultater ware mat CagA-Liwwerung Onfäegkeet H kritt. pylori VerfÜgung SS1 a vun Western blot (WK) Analyse vum Ausdrock a phosphorylation vun Iwwerliewe kinases (AKT /PKB, ERK1 /2, p38MAPK) (Donnéeën net gewisen) z'entdecken. Zanter zwee H. pylori VerfÜgung an Cav1 bannent Lipid rafts zesummekomm, mir gefrot ob Haftung vun Bakterien ze Zellen op d'Präsenz vun Cav1 hänkt. AGS /Cav1 an AGS /Print Zellen infizéierte (MOI = 10) mat G27 (Figebam. 3B, C) oder SS1 (Donnéeën net gewisen) Bakterien fir 30 min, gefollegt vun wäschen a Kierzunge incubation zu frësch mëttelfristeg fir 2 h. Doropshin huet sech Zellen fir immunofluorescence microscopy Kierchefënster, an d'Zuel vun Bakterien déi op der Directioun respektéiert Cav1-ausdrécken oder eidel Vecteure-transfected Zellen sech gezielt (Figebam. 3B, C). Nee Differenzen an Haftung sech tëscht AGS /Cav1 an AGS /Print Zellen observéiert, suggeréiert datt Cav1 Afloss net Haftung vun H. pylori VerfÜgung Bakterien Zellen zu Gaascht. VerfÜgung Cav1 schützt Mënsch GC Zellen géint CagA-entschlof Emplazéiren vun der cytoskeleton VerfÜgung D'Opstellung vun den Effekt-wëll erméiglechen ( "humming Vugel") ass eng typesch morphological phenotype vun AGS Zellen an Äntwert zu Lombardia mat CagA-Liwwerung beherrscht H. pylori VerfÜgung analyséieren an br vun CagA an der Zytosol [47]. Fir d'Roll vun Cav1 an dëser Stress-entschlof Emplazéiren vun der actin cytoskeleton, AGS /Cav1 an AGS /Print ënnersicht goufen fir 16 h Krankheet mat H. pylori VerfÜgung G27 virstellen VerfÜgung oder der isogenic Mann- Delta cagA VerfÜgung (MOI = 100). Krankheet Zellen sech Kierchefënster wéi uewe beschriwwen, an d'Zuel vun verlängerten AGS Zellen huet sech (Figebam. 4A, B). Cav1-erhéijen AGS Zellen zougedréckt däitlech méi verlängerten morphologies wéi Cav1-ausdrécken Zellen (11 ± 0,8% AGS /Print versus VerfÜgung 4 ± 0,8% AGS /Cav1; * p = 1,1 × 10 An Ënnerstëtzung vun dëse Conclusiounen, Zell Haftung an Meter Zoumaache Tariffer sech méi nozekommen AGS /Cav1 Verglach mat AGS /Print Zellen (Fig.S2). Konsequent mat sengem Funktioun als Zil FAQ vun CagA an Komponent vun Brennwäit adhesions [48], WK Analysë (Figebam. 4D) och nogewise héichen Niveau (0,4 ± 0,1 AGS /Print versus VerfÜgung 1,4 ± 0,1 AGS /Cav1 * p = 0,0012; n = 3 pro Klon) vun phosphorylated Brennwäit Haftung kinase (FAK) zu Cav1-ausdrécken Zellen Krankheet mat H. pylori VerfÜgung G27. Dës Donnéeë corroborated datt AGS /Cav1 Zellen Krankheet mat CagA-Liwwerung zoustännegen H. pylori VerfÜgung haten hir Verbreedung-out epithelial Form wéi mat der Nouvelle verlängerten phenotype vun Cav1 /Print Zellen Verglach. VerfÜgung CagA-Liwwerung zoustännegen H. pylori VerfÜgung G27 kontrolléiert bindend vun p120RhoGAP /DLC1 zu Cav1 zu Mënsch GC Zellen VerfÜgung Cav1 gewise gouf duerch cytosolic tyrosine kinases (Src, ABL) op tyrosine 14 [49], an phosphorylated Cav1 phosphorylated gin an Src souwuel fir de klenge GTPases Rho /Rac /Cdc42 déi cytoskeletal Funktiounen regléieren [13], [50]. Fir d'Basisdaten molekulare Mechanismus identifizéiere wéi Cav1 schützt géint CagA-Zesummenhang Zell Stress, évaluéieren mir de sécher Weeër Ausgangspunkt vun CagA-Liwwerung beherrscht H. pylori VerfÜgung G27. Wonn vun AGS Zellen Album eng rapid phosphorylation vun Cav1 zu AGS /Cav1 Zellen a vun Src zu souwuel AGS /Cav1 an AGS /Print Zellen. Dëst Resultat uginn dass Cav1 afgerappt vun CagA-ofhängeg Src Aktivéierung mä Offloss vun der Aktivatioun vun de klenge GTPases Akten (Figebam. 5A, B). Konsequent mat dëser Conclusioun, FAQ Niveau vun phosphorylated JNK, deen ënnendrënner vun Src vermaach, sech méi héich an AGS /Print Zellen am Verglach mat AGS /Cav1 Zellen. VerfÜgung Mir waren knapp engem direkten Gespréich oder grouss colocalization vun CagA z'entdecken FAQ oder H. pylori VerfÜgung G27 Bakterien mat Cav1 zu CoIP oder immunofluorescence Experimenter (Figebam. 6A, B). Gentamycin Schutz assays verroden, datt d'Héicht vun heijen intracellular CagA war och onofhängeg vun Cav1 d'Präsenz (Figebam. 6C). Sou, Cav1 weder inhibited Haftung vun H. pylori VerfÜgung zu Bakterien de Provider Zell nach Sprëtz vun CagA un, mee éischter reduzéiert der verwandelt-bäiginn Auswierkunge vun CagA op intracellular sécher. VerfÜgung e Kandidat FAQ ze identifizéieren déi zu engem Cav1-ofhängeg Schutz géint CagA jidferengem Manéier, e Protein Interaktioun Écran baséiert op MALDI-MS war gesuergt (Figebam. 7A). AGS /Cav1 Zellen sech fir 16 h Krankheet mat H. pylori VerfÜgung G27 (MOI = 100) gefollegt vun lysis vun den Zellen bei Raumtemperatur zu MES-gefiermt 1% (v /v) Triton-X100. Protein Bands Preisen vun Cav1 antiserum sech duerch Sëlwer staining visualized, an peptides sech duerch MALDI-MS identifizéiert wéi virdrun publizéiert [29]. A FAQ Brochstéck vun ~95 kDa enthale peptides zu Variant 4 vun p120 Rho GTPase-activating FAQ /geläscht an Liewer Kriibs-1 (p120RhoGAP /DLC1) entspriechend [51], [52], e entholl suppressor verbonne mat Schwéierpunkt adhesions an caveolae /Lipid rafts [53]. DLC1 Variant 4 (DLC1v4) huet e virausgesot Gréisst vun ~110 kDa a war an en Echantillon vun Zellen beräichert datt mat H infizéiert gouf. pylori VerfÜgung G27 Verglach zu uninfected Zellen (Table S2). Dës Resultater goufen duerch CoIP vun Cav1 an endogenous DLC1 FAQ zu AGS /Cav1 Zellen (Figebam. 7B) confirméiert, wat beweist, dass H. pylori VerfÜgung G27 dësen engem spezifeschen Recrutement vun DLC1 zu Cav1 zu infizéiert Mënsch gastric epithelial Zellen. VerfÜgung Dëst Resultat eis Suite der cDNA vun Variant 4 vu mënschlechen DLC1 [39] vum Mënsch hepatoma HepG2 Zellen ze Meenungsfreiheet nennt (Lalumi . 7C). D'cDNA war fir 24 h an den Ausdrock Vecteure pTarget (PT-DLC1v4) gefollegt vun flüchteg transfection an Elteren AGS oder HEK293 Zellen gesaat. WK Analysë fonnt Ausdrock vun enger ~110 kDa FAQ, konsequent mat der virausgesot Gréisst vun DLC1v4 [39]. Transiently transfected AGS Zellen sech dann mat H infizéiert. pylori VerfÜgung G27 (MOI = 100) fir zousätzlech 16 h. Immunofluorescence staining Teamchef DLC1 pro se VerfÜgung hutt inhibit net Opstellung vun der CagA-entschlof "humming Vugel" phenotype (19 ± 2% AGS /DLC1 versus VerfÜgung 19 ± 2% AGS /Print; n = 3 pro Klon) am Verglach mat eidelen Vecteure-transfected Zellen (Figebam. 8A, B). Amplaz, gefördert DLC1 Zell geréckelt (20 ± 3% AGS /DLC1 versus VerfÜgung 11 ± 2% AGS /Print; * p = 0,0067; n = 3 pro Klon) konsequent mat hirer Roll an Regulatioun vun Brennwäit adhesions [ ,,,0], H. H. pylori VerfÜgung Wonn. pylori VerfÜgung.
Author Satz VerfÜgung
Aféierung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
D'Mikrobiota Modulatioun an d'Restauratioun vun der Eubiose kéinten hëllefen COVID-19 Komplikatiounen ze bekämpfen
Infliximab kann d'Effektivitéit vun e puer COVID-19 Impfungen behënneren
Wéi Mass Screening Efforten gehollef hunn méi Fäll vun Zöliakie bei Kanner z'identifizéieren
Fungi a Bakterien am Darm kënne gläichméisseg mënschlech Gesondheet a Krankheet Gravitéit beaflossen
Fuerscher benotzen Phagtherapie fir erfollegräich alkoholesch Liewerkrankheet ze behandelen
Gewiichtsverloscht Medikament Wegovy vun der FDA guttgeheescht
Vaginale Bakterien verbonne mat virzäiteger Gebuert
Eng nei Studie am Journal publizéiert Grenzen an der Mikrobiologie am Abrëll 2020 bericht datt Fraen déi fréi liwweren méi wahrscheinlech eng méi grouss Varietéit u Bakterien an hire Gebuertskanäl h
Wéi Mass Screening Efforten gehollef hunn méi Fäll vun Zöliakie bei Kanner z'identifizéieren
En neie Mass Screening Programm vu Schoulkanner an Italien huet festgestallt datt dGesamtprevalenz vun der Zöliakie an de leschten 25 Joer bal verduebelt gouf. Celiac Krankheet Infographi
Fuerscher identifizéieren eng Bakterie mat Anti-SARS-CoV-2 Aktivitéit in vitro:Dolosigranulum pigrum
De schwéiere akuten Atmungssyndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) huet iwwer 173.3 Millioune Leit weltwäit infizéiert. Vun dësen, eng bedeitend Minoritéit war schwéier oder kritesch, féiert zu iwwer 3.7 M