PLoS One: Feltételes kifejezése Wnt9b a Six2-pozitív sejteket megzavarja Gyomor és vesefunkció

absztrakt katalógusa

közben vese fejlődése, kanonikus Wnt jelátvitel aktiválja differenciálódás, míg a transzkripciós faktor Six2 fenntartja a progenitor. Ezek az ellentétes jelek segítenek szabályozni nephronok kialakulását és biztosítja a teljes kiegészíti a nephronok képződnek. Mivel ez a két tényező befolyásolja különböző sorsok vese mezenhimasejtek feltételeztük, hogy túltermelése Wnt9b katalógusa Six2
-expresszáló sejtek megzavarnák vese kialakulásának és megváltoztathatják sejtek differenciálódását határozatok más szövetekben. Létrehoztunk egy transzgenikus egér feltételesen kifejezte kanonikus Wnt ligandum a fejlődő vese, Wnt9b katalógusa. A transzgén aktiválja Cre rekombináz, és kifejezi a GFP. Először azt vizsgáltuk biológiai aktivitását a Hoxb7-cre katalógusa és megállapította, hogy a transzgenikus Wnt9b volt képes kiváltani differenciálódás gének és a megmentésére vese fejlődése Wnt9b ^{- /- www.Booked.hu homozigóta deficiens egerek. Ezzel szemben kifejezése Wnt9b katalógusa sejtekben a Six2-cre katalógusa okozott gasztrointesztinális distressz és súlyos veseelégtelenség felnőtt egerekben. Transzgenikus vese volt számos cisztás tubulusok és emelkedett kreatinin-értékeket (0,652 ± 0,044), mint a vad típusú egerek (0,119 ± 0,002). Ezek az állatok is mutatott egy deformált pylorus záróizom duodenogastrikus reflux és átalakulás a gyomor distalis a közelebbi sorsa. A génexpressziós változások figyelhetők meg a Wnt9b: EGFP
transzgén összehasonlították stabilizált β-catenin allél annak meghatározására, hogy Wnt9b aktiváló kanonikus Wnt útvonal a szövetekben elemezték. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy kifejeződése Wnt9b katalógusa Six2 katalógusa-pozitív sejtek megzavarja sejtsors döntéseket a vesében és a gyomor-bél traktusban. Katalógusa}

Citation: Kiefer SM, Robbins L, Rauchman M (2012) feltételes kifejezése Wnt9b Six2 katalógusa-pozitív sejteket megzavarja gyomor és a vesefunkciót. PLoS ONE 7 (8): e43098. doi: 10,1371 /journal.pone.0043098 katalógusa

Szerkesztő: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japán katalógusa

Beérkezett: február 29, 2012; Elfogadva: július 17, 2012; Megjelent: augusztus 17, 2012 katalógusa

Ez egy nyílt hozzáférésű cikk, mentesen minden szerzői jogot, és szabadon másolható, terjeszthető, továbbított, módosított, épül, vagy más módon bárki felhasználhatja bármilyen törvényes célra. A munka legyen elérhető a Creative Commons CC0 közkincs elkötelezettség. Katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatott National Institutes of Health támogatás R01 DK067222 (http://nih.gov/) és az American Heart Association Alapítva nyomozó 0840117N (http://www.heart.org) az MR. SK támogatott a Saint Louis Egyetem elnöki Research Fund-díj (www.slu.edu). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

A kanonikus Wnt jelátadó útvonal kulcsfontosságú szabályozója sejt sorsát, a sejtproliferációt, és a sejt adhézió a fejlődés során és az egész felnőttkorban. Számos pozitív és negatív mediátorok azonosítottak, amelyek elérése érdekében közösen dolgozik szigorú szabályozására β-catenin jelátvitel. A központi paradigma, hogy a citoplazma β-catenin szekvesztrálódik egy megsemmisítés komplex, foszforilálják GSK3p, és célzott, hogy az ubiquitin pusztítás útvonal hiányában a Wnt jel. Wnt kötési gátolja foszforilációja és megsemmisítése β-catenin, amely lehetővé teszi azt, hogy a sejtmagba, hogy befolyásolja a génexpressziót, a TCF /LEF faktorok (vizsgálta felül, MacDonald és mtsai. [1]). Számos egér modellek jöttek létre, hogy tanulmányozza ezt az útvonalat, beleértve mind nyereség és a veszteség a funkció allélja Wnts, Wnt receptorok β-catenin és a TCF /LEF transzkripciós szabályozó. Ezek a modellek már feltárt lényeges szerepe kanonikus Wnt jelátviteli csont, szőr, belek, vér, és a rák [2]. Egy feltörekvő téma ezekből a tanulmányokból, hogy számos biológiai folyamat különösen érzékeny az erős kanonikus Wnt jelátvitel. Katalógusa

Ez szigorúan szabályozzák a kanonikus Wnt jelátvitel elengedhetetlen vese fejlődése. A kezdeti szakaszban a vese formáció, Wnt9b kiválasztódik az uréter bajt, és jeleket a progenitor sejtek a kupakot mezenhimasejtek kiváltására nefronnal differenciálás. Kezelés lítium-klorid vagy aktiválása β-catenin indukálhat nefron differenciálódását hiányában a ureter rügy és Wnt9b, ami arra utal, hogy növelni kell a kanonikus Wnt jelátvitel elegendő erre induktív esemény [3], [4]. Néhány sapka mezenhima sejtek szaporodnak, hogy fenntartsák a progenitor sejteket, amelyek szükségesek a későbbi iterációk e folyamat [5]. Ez egyensúlyt progenitor karbantartása és a differenciálódás indukciója rendkívül fontos annak biztosítása, hogy a vese képezi a teljes kiegészíti a nephronok [5], [6], [7], [8], [9]. Katalógusa

Számos tényező kifejezve a KAP mesenchyma kimutatták, hogy antagonizálják a Wnt-stimulált differenciálódása beleértve a transzkripciós faktor Six2 katalógusa. Törlését Six2 katalógusa eredményeket méhen kívüli differenciálás, kimerülése sapka mezenhimasejtek progenitor és vese agenesia [9]. Bár a pontos mechanizmus még nem ismert, a hipotézis azt javasolták, amellyel a magas szintű kanonikus Wnt jelátviteli vezetni az elkötelezettség differenciálás míg a magas Six2 tevékenységet ugyanabban sejtek fenntartja a progenitor sors [7]. Létrehoztunk egy új egér modellt feltételesen overexpresszál Wnt9b aktiválja a kanonikus Wnt jelátviteli. Mi már használta ezt a modellt, hogy tesztelje megnövekedett Wnt9b tevékenység elegendő, hogy megzavarják az egyensúlyt őssejtek és differenciálódási a kupakot mezenhimasejtek. Katalógusa

A második hely, ahol mind Six2 aktivitás és Wnt jelátviteli fontos szerepet játszanak a pylorus záróizom . Pylorus záróizom van kialakítva a távolabbi végén a gyomor és a funkciók, mint a szelep lehetővé teszi a megfelelő emésztését való belépés előtt a nyombélbe. Zavar a záróizom eredményezhet reflux nyombél tartalmának a gyomorba a fokozott kockázatot jelentő gyomor- metaplázia és a rák [10], [11]. Ez a régió is a helyén veleszületett rendellenességek, beleértve a ritka betegség elsődleges duodenogastrikus reflux és a gyakoribb veleszületett pylorus stenosis [12]. Six2 katalógusa Hiánya agenesiája pylorus záróizom és antagonizing Wnt tevékenység Sfrp1 és Sfrp2 szükséges mintát a gyomor [13], [14]. Ez vezetett minket, hogy feltételezzük, hogy a kanonikus Wnt tevékenységet kell szigorúan szabályozni a pylorus hasonlít ahhoz, amit javasoltak a vesében. A teszt ezt már használják Six2 katalógusa -cre aktiválja a Wnt9b katalógusa transzgén Six2
kifejező domain vese és a gyomor. Katalógusa

A feltételes Wnt9b katalógusa transzgenikus allél itt közölt fejezi Wnt9b katalógusa és GFP amikor aktiválja a Cre rekombináz. Ez biológiailag aktív és képes megmentése vese képződés Wnt9b ^{- /- www.Booked.hu embriók. Overexpressziója Wnt9b
a vesében ureter rügy indukálására képes géneket társított differenciálódását sapka mesenchyma, de nem esnek át mesenchymalis-To-epiteliális átmenet (MET), hogy a morfológiailag megkülönböztethető vezikulum szerkezetek. Wnt9b katalógusa transzgén aktiválás Six2 katalógusa-pozitív sejtek okoz vese ciszták és átalakítása a gyomor distalis régiókat be proximális gyomor sorsát. Összehasonlítása Wnt9b katalógusa génmanipuláltak olyan allél, amely stabilizált β-catenin fehérje bizonyítja dózis-érzékeny gént változásokat és azt sugallja, hogy ezek a törzsek képviselnek allélsorok hogy legyen értékes modulációs kanonikus Wnt jelátviteli más szövetekben.}

Eredmények katalógusa

A transzgenikus egerek kifejezni Wnt9b amikor aktiválja a Cre-rekombináz katalógusa

A Wnt9b transzgén épített egy lox-STOP kazetta [15], hogy hozzon létre egy feltételesen aktív Wnt9b attól függ, hogy a CRE rekombináz expresszióját (1A.). Ha egyszer aktiválódtak, a transzgén-expresszált Wnt9b megkülönböztethető endogén Wnt9b mert tartalmaz egy C-terminális influenza hemagglutinin epitóp toldalékot és a transzgenikus sejtek mutatnak GFP fluoreszcencia miatt IRES-EGFP kazettával. A teszt a hűség a transzgén, megvizsgáltuk CRE-függő expresszió tenyésztett sejtekben és in vivo az embriók (ábra. 1B). Epitópcímkézett Wnt9b volt kimutatható sejtek lizátumában együtt transzfektált a transzgén és egy CRE plazmidot, és nem a transzfekciót a transzgén egyedül. Hasonlóképpen, lizátumok embriókból hogy volt pozitív mindkét Wnt9b és β-aktin-CRE transzgéneket tartalmazott Wnt9b-FLU mivel egyetlen Wnt9b génmanipuláltak nem. GFP fluoreszcencia volt megfigyelhető Wnt9b /β-aktin-cre kettős pozitív embriók és nem Wnt9b alomtestvérek (ábra. 1C-F). Az expressziós szint transzgenikus Wnt9b korrelált intenzitását GFP fluoreszcencia mindegyik alapító vonal. (Ábra. 1D). Négy független alapító vonal volt képes előállítani az élő β-aktin-cre ^{tg /+, Wnt9b tg /+ dupla heterozigóta kölykök, amelyek igazolják, hogy mindenütt jelen emelkedett Wnt9b kifejezés embrionális halálos. Elemzés embrionális fázisok során kiderült, hogy β-aktin-cre tg /+, Wnt9b tg /+ dupla heterozigóta embriók detektáltuk a vártnál kisebb mendeli frekvenciák E11-E12. Egy kettős heterozigóta embrió volt megfigyelhető egy alapító nagyon magas expressziót (1A., N = 23, a várt gyakorisága 25%) és 16% volt megfigyelhető egy másik alapító (n = 25). Wnt9b /ß-aktin-Cre kettős transzgénikus embriók kisebb volt szívek egyesítését vér, ami arra utal, szívelégtelenség, mint a halál oka. Katalógusa}

A transzgenikus Wnt9b biológiailag aktív katalógusa

Annak megállapításához, hogy a transzgenikus Wnt9b van biológiailag aktív, teszteltük ha ez volt képes helyettesíteni a vad típusú Wnt9b katalógusa során a vese fejlődése. Wnt9b ^{- /- www.Booked.hu embriók nagyhozzáadott penetranciát szájpadhasadék és veseagenesia fenotípus (ábra. 2). Aktiválása transzgenikus Wnt9b az uréter bimbós Hoxb7 katalógusa -cre mentettek vese kialakulását, de nem szájpad zárást E14.5 minden Hoxb7 katalógusa -cre tg /+, Wnt9b katalógusa - /-, Wnt katalógusa 9b tg /+ embriók (n = 7). Ez vese-specifikus mentési megerősíti, hogy a transzgenikus Wnt9b kifejezés függ cre aktiválás, mert a szájban nem fejezi Hoxb7 katalógusa -cre. Kvantitatív PCR vad típusú, Wnt9b - /- katalógusa és Wnt9b - /- www.Booked.hu, Wnt9b tg /+ transzgenikus vesék kiderült, hogy a transzgenikus Wnt9b
expresszálódott 2,3- szeres koncentráció, mint a vad-típusú gén, míg expressziója Ret
változatlan maradt (ábra. 2 G-I). Az a képesség, a transzgenikus Wnt9b, hogy jelezze a mesenchyma helyére vad típusú Wnt9b
aktivitás megerősíti, hogy a biológiailag aktív in vivo.}

egy sor adatot azt mutatják, hogy Wnt9b és β-catenin jelátviteli kritikus induktív jelek kezdeményezni differenciálódása sapka mezenhimasejtek be hámosod vese hólyagocskák [4], [8], [16]. Wnt9b termelt az ureter rügy aktiválja a kanonikus Wnt jelátadó útvonal a szomszédos mesenchyma és az eredményeket a gének expresszióját szabályozó mesenchymalis az epiteiiális átmenet (MET). Ezért megvizsgáltuk, hogy túltermelése Wnt9b katalógusa az ureter bimbó jelezné, hogy a mezenhimasejtek aktiválásához MET génexpresszió és elősegítése megnövekedett indukció nephronok. Wnt9b katalógusa ben túltermelõdik az ureter bimbó a Hoxb7 katalógusa -cre: EGFP. E12.5 embriókat genotipizált kvantitatív PCR analízis megállapítsuk, vajon hemizigóta vagy homozigóta a Wnt9b katalógusa transzgén és a veséket összegyűjtöttük génexpresszió analízis. Azt észleltük, dózisfüggő növekedése Wnt9b katalógusa hogy kísérte arányos aktiválása kifejeződése Wnt9b célgének, Wnt4 katalógusa, Pax8 katalógusa, és FGF8 katalógusa három független medencék transzgenikus vesék (ábra. 2J). Six2 katalógusa fejezik differenciálatlan (cap) mezenhimasejtek és downregulált a hólyagocskák differenciálódás következik [17]. Six2 katalógusa mRNS expressziója nem változott az Hoxb7 katalógusa -cre, Wnt9b katalógusa dupla génmanipuláltak. Hasonlóképpen, az ureter bimbó gének, Ret katalógusa és Wnt11 katalógusa, nem változtatta meg jelentősen túltermelése Wnt9b katalógusa. A konkrét upreguláció gének a mesenchyma megerősíti, hogy a transzgenikus Wnt9b képes származó jelzésre ureter BUD indukáló gének fontos a MET, azonban nem szövettanilag igazolt méhen kívüli epitelializált vese vezikulumok nyilvánvaló volt (az adatokat nem mutatjuk be). Ez azt sugallja, hogy fokozza a Wnt9b
az ureter rügy elegendő a gén aktiválás a mesenchyma, de nem a morfológiai differenciálódás vese vezikulumok.

Misexpression a Wnt9b megzavarja vesefunkció és a pylorus záróizom képződés aktiválásával kanonikus β-catenin jelátviteli katalógusa

a paradigma egyre gyakoribb a vese, hogy van egy kényes egyensúlyt progenitor önálló megújítása és aktiválása differenciálódás [6], [7], [9]. A Wnt9b /β-catenin útvonal szükséges differenciálás és Six2 elnyomja differenciálódás kezdeti lépése elkötelezettség. Ezért azt feltételeztük, hogy a képesség, hogy támogassák Six2 sors döntések szemközti azoktól aktivált magas β-catenin tevékenységet lehet egy közös téma a fejlesztés. Kipróbáltuk ezt a lehetőséget aktiválásával transzgenikus Wnt9b katalógusa a Six2 katalógusa -cre. A kettős transzgénikus kifejezni Wnt9b katalógusa ugyanabban expresszáló sejtek Six2 katalógusa és megzavarhatják folyamatok szabályozása összehangolt, a vesében és más szövetekben. Six2-cre ^{tg /+ katalógusa, Wnt9b tg /+ katalógusa egerek veszélyhelyzet elválasztás és a testsúly méréseket 39% -kal csökkent a négy hét (14,5 ± 3,4 gramm, p < 0,001), mint a CRE-negatív Wnt9b tg /+ katalógusa alomból származó (23,6 ± 0,7 gramm). Fenotípusos elemzése során kiderült, hogy ez a testtömeg csökkenése volt köszönhető, hogy fejlődési rendellenesség a gyomor-bél rendszer és a vese, két helyszín a Six2 katalógusa -cre kifejezés (3.). Katalógusa}

Számos ciszták változó méretek láthatóak voltak a kéregben és a medulla a kettős heterozigóta vese (ábra. 4, n = 11/11). A cisztákat túlnyomórészt található a kéreg és a külső medulla voltak és proximális tubulus eredetű bizonyítja LTL-festéssel. A cisztás betegséget először nyilvánvaló röviddel a születés után (P7-10) a proximális szegmensben a nefron (az adatokat nem mutatjuk). Ezek a kettős heterozigóta állatok mutattak emelkedett szérum kreatinin-szintjét (0,652 ± 0,044, p < 0,005), mint a kontroll alomtársaik (0,119 ± 0,002) már körülbelül 3 hetes korban, jelezve, súlyos veseelégtelenség. Idősebb állatokban a betegség előrehaladott is tartalmazott ciszták származó távolabbi szegmenst, beleértve a Henle-kacs (Tamm-Horsfall-pozitív). Az összes állaton előrehaladott veseelégtelenség vizsgálni azt tapasztaltuk, sok gyűjtőcsatorna eredetű ciszták kifejezett Aquaporin 2 vagy bekötött D. Biflorus katalógusa -lectin. Mivel Six2 katalógusa -cre nem fejezik gyûjtôcsatornában ez dilatáció valószínűleg másodlagos dilatáció közelebbi szegmensben. A jelenléte vese ciszták Wnt9b katalógusa transzgenikus állatok erősíti azt a következtetést, hogy zavar a Wnt jelátviteli rendszer okozza a cisztás betegség [7], [18], [19]. Katalógusa

Bár a vese ciszták voltak nincs jelen, amíg a születés után, túlszabályzását kanonikus Wnt jelátvitel nyilvánvalóvá E12.5, ha a Six2 katalógusa -cre kezdetben kifejezve. Lef1 fehérje expresszió fokozott volt előre cső alakú aggregátumok és vese vezikula struktúrák a kettős génmanipuláltak és tovább növekedett a számos ektópiás vezikulumok képződött stabilizált β-catenin vese (N = 3, Fig. 5). A dózis-érzékeny növekedés Lef1 kifejezés támogatja közzétett adatok Wnt9b jár, ha a kanonikus Wnt jeltovábbítási útvonal a fejlődő vese [7]. A hiányzó méhen kívüli hólyagocskák struktúrák a Wnt9b katalógusa génmanipuláltak sugallja, hogy a Wnt9b katalógusa allél mutat mérsékelt hatása β-catenin jelátvitel, ha összehasonlítjuk a stabilizált β-catenin allél. Katalógusa

A második fenotípus történő csökkentett testsúly Six2-cre ^{tg /+ katalógusa, Wnt9b tg /+ katalógusa kettős heterozigóták volt gyomorbántalmak. Sárga magzatvíz volt megfigyelhető a gyomorban a kettős génmanipuláltak, és nem egyetlen transzgén alomtársaik (n = 6, Fig. 6). Ez azt jelezte, hogy duodenogastrikus refluxot előforduló és oka lehet a rendellenes pylorus záróizom képződést. Közötti záróizom a gyomor és a duodenum megnyúlt és kiszélesedett a kettős transzgenikus (ábra. 6, süllyesztés). A TGFp-antagonista, Nephrocan, amely normálisan expresszált egy nagyon korlátozott mintát E16.5, bővült kettős génmanipuláltak, ami arra utal, hogy a záróizom régió nem megfelelően korlátozzák. Ez a hosszúkás morfológia támogatott immunhisztokémiai festése a simaizom réteg, amely képezi a sűrű izmos körülvevő fal pylorus (ábra. 6 E, F). A single transzgénikus kontroll, a legvastagabb izomzatot is található, ahol a szövet mutat a legtöbb szűkülettel záróizom (vonal). A kettős génmanipuláltak, vastag izmosságnak volt megfigyelhető, de ez a régió ellensúlyozta a területről, hogy volt a leginkább szűkített.}

Mis-mintázás hibák is megfigyeltek elemzésével specifikus markerek, amelyek megkülönböztetik a proximális (H ^{+ /K + ATPáz) és disztális (alcián kék) régióban a gyomor. A proximális gyomor (corpus) tartalmaz H + /K + ATPáz kifejező parietális sejtekben, amelyek nem tartoznak a antrumból-pylorus régióban. Ezzel szemben, az antrum-pylorus tartalmaz nyálkahártya sejtek festődnek Alcian Blue, amelyek nem találhatók a proximális régióban [20]. A kettős transzgénikus kiállított kitartó H + /K + ATPáz festést és távollétében alcián blue-pozitív mucosa az antrális gyomor-pylorus jelezve, hogy a távolabbi régió mis-mintás, hogy közelebbi sors Wnt9b
kifejezés. Alcián kék festése kehelysejtet a bélben sértetlen volt a szimpla és dupla génmanipuláltak mert Six2 katalógusa -cre nem fejezik ki a nyombélben. Ez megtévesztő mintázat azt sugallja, hogy hasonló a paradigma a vesében, kanonikus β-catenin jelátviteli meghatároz egy sors, a előgyomorba régió és Six2 aktivitásmintázatok távolabbi identitását. Ezt támasztja alá az expressziós domének ezen gének, mivel a kanonikus Wnt jelátvitel riporter mutat nagy aktivitást csak az előgyomor, és a Six2
korlátozódik a disztális gyomor és pylorus [13], [14].}

Ha a kanonikus Wnt jelátviteli felelős a gyomor-reflux Six2-cre ^{tg /+ katalógusa, Wnt9b tg /+ katalógusa kettős transzgénikus, majd a fejlődési rendellenességek megfigyelt kell összefoglalt egér modellben, amely kifejezi a stabilizált β-catenin ugyanabban a tartományban ( Ctnnb1 EX3 /+ katalógusa, [21]). Miután cre aktiválás, ez az allél megakadályozza a proteolitikus degradációját β-catenin és ezért várhatóan emelheti kanonikus Wnt jelátvitel nagyobb mértékben, mint a Wnt9b ligandum egyedül. Whole mount in situ elemzésére E12.5 gyomor kiderült, három gén, Grem1 katalógusa, Nkx 2.5 katalógusa, és Gata3 katalógusa, amely általában kifejezve egy vékony sáv demarking a régió lesz a záróizom (n = 8, Fig. 7). Méhen kívüli kifejezése Wnt9b katalógusa elnyomta a BMP-antagonista Grem1 katalógusa és a transzkripciós faktor Gata3 katalógusa ebben a régióban, és ezeket a géneket tovább downregulált amikor β-catenin jelátviteli nőtt. A dózis-függő expanzió volt megfigyelhető a transzkripciós faktor Nkx2.5
mindkét mutánsok. A gének, amelyek lokalizált kizárólag a bél ( villin katalógusa), vagy az előgyomor ( BMP4
) nem változtatták meg sem a mutáns (az adatokat nem mutatjuk be). Fokozott kanonikus Wnt jelátviteli antrális gyomor és pylorus megerősítette szigetelő ebben a régióban és a teljesítő kvantitatív PCR. A kanonikus Wnt célgénjeit hogy felszaporodnak a stabilizált β-catenin allél, Lef1 katalógusa és Axin2 katalógusa, szintén emelkedett a pylorus régió Six2 katalógusa -cre tg /+, Wnt9b tg /+ dupla génmanipuláltak [ Lef1 katalógusa, 2,0 ± 0,25 és Axin2 katalógusa, 1,4 ± 0,06 (n = 6)]. Együtt, a dózis-érzékeny génexpressziós változások figyelhetők meg a pylorus régió a Wnt9b
génmanipuláltak és a stabilizált β-catenin embriók mutatják, hogy a megnövekedett kanonikus Wnt jelátvitel megbontja disztális gyomor és a pylorus záróizom fejlődését.}

Vita katalógusa

Ezek az eredmények alapítását írja le az új egér modellt feltételesen aktiválja kanonikus Wnt jelátvitel. A Wnt9b
transzgén indukálható hatására Cre rekombináz és kifejezi GFP markerként az indukció. Azt is megtartja teljes biológiai aktivitással, mivel lehet menteni Wnt9b ^{- /- www.Booked.hu fenotípusok a vesében. Ezek az egerek is tartották a kolónia több mint egy éve, és indukálják Wnt9b katalógusa kifejezés után tenyésztésre több különböző cre törzsek. Mi már használták ezt a regényt törzs aktiválásához Wnt jelátvitel Six2 katalógusa-pozitív sejtek és talált káros hatásokat a vese és a gyomor. Katalógusa}

A vesében Wnt9b kiválasztódik az uréter bud hám hogy rábírja a szomszédos sapka mezenhimasejtek progenitor sejtek kezdeményezni differenciálás. Ennek alátámasztására a modell, az in vivo erősítés funkció-vizsgálatok azt mutatják, hogy a Wnt9b katalógusa felfokozza korai markerei vese hólyagocskák differenciálódás, mint a Wnt4 katalógusa, FGF8 katalógusa és Pax8 katalógusa. Annak ellenére azonban, vese hólyagocskák gének által indukált Wnt9b katalógusa transzgén, nem tapasztaltunk morfológiai bizonyíték a fokozott vagy ectopiás vese hólyagocskák kialakulását, amint arról a Six2 katalógusa mutánsok [9]. Amellett, hogy egy Wnt induktív jel olyan tényezők, amelyek fenntartják a vese progenitor (például Six2 katalógusa) is be kell downregulált, hogy teljes mértékben kiváltani vese hólyagocskák kialakulását. Six2 katalógusa kifejezés nem változott meg a Wnt9b katalógusa transzgenikus és így miért a növekedés Wnt9b nem okozott ectopiás vese hólyagocskák. Méhen kívüli indukciója vese vezikula markerek által indukált aktiválása β-catenin a Six2
-pozitív metanephric mesenchyma segítségével a stabilizált β-catenin allél [4], ezért a különbség a két gain-of-funkció kísérletek vonatkozhat a személy milyen mértékben aktiválja kanonikus Wnt tevékenység. Ezen felül, akkor valószínű, hogy aktiválása kanonikus jelátvitel által Wnt9b a metanephric mesenchyma indukál feedback gátlás, amint azt más Wnt érzékeny szövetekben, ezáltal megakadályozza indukciója a teljes differenciálódási program [22]. Újabb adatok alátámasztják ezt az elképzelést a visszacsatolásos gátlás óta Wnt9b /β-catenin jelátvitel elengedhetetlen nemcsak a differenciálás metanephric mezenhimasejtek, de paradox módon ugyanaz a jel is szükséges karbantartási vagy bővítése a vese progenitor [7]. Úgy gondoljuk, hogy a stabilizált β-catenin eljárva a downstream út, lehet megkerülni ezeket a szabályozó mechanizmusok. Ezeket a lehetőségeket lehetne vizsgálni a jövőbeli vizsgálatokban, hogy hasonlítsa össze a későbbi gének aktiválását vese progenitor sejtek a Wnt9b katalógusa transzgén és stabilizált β-catenin nyereség-of-function egerek. Katalógusa

zavarok kanonikus Wnt jelátadó útvonal kimutatták, hogy fontosak a patogenezisében vese cisztás betegsége (vizsgálta felül, Patel et al. [23]). Transzgén expressziója stabilizált β-catenin vagy hiányossága APC vese tubulus hámban vezet vese cisztás betegség, amelyek alátámasztják, hogy a méhen kívüli kanonikus Wnt jelátvitel elegendő cystogenesis [18], [19]. Veseelégtelenség és cisztás dilatáció Six2 katalógusa -cre ^{tg /+, Wnt9b tg /+ dupla heterozigóták tovább alátámasztja azt a hipotézist, hogy túlszabályozott kanonikus Wnt jelátviteli okoz ciszták. Roncsolása nem-kanonikus Wnt jelátvitel (PCP) reakcióút is fontos a vese ciszta képződését [24]. Így lehetséges, hogy ciszta képződése a mi modell nem egyszerűen miatt aktiválását kanonikus jelátviteli, de az eredménye zavar a viszonylagos egyensúlyt kanonikus és nem-kanonikus jelátviteli. Ennek alátámasztására a gondolat, a gének mutáns az örökölt formáit cisztás betegség ( PKD1 katalógusa, PKD2 katalógusa, PKHD1 katalógusa, Inversin katalógusa ) lokalizálódik csillók és ezek a sejtalkotók nemrégiben kimutatták, hogy képes legyen szabályozni a közötti egyensúly kanonikus és nem-kanonikus Wnt jelátvitel [25], [26].}

volt egy súlyos vese- fenotípus jóllehet Wnt9b katalógusa mRNS expressziója megnő -2-szeres a transzgén, jelezve, hogy a viszonylag alacsony szintű, állandó aktiválási út vezet veseműködési zavar. Ez a szint a túlszabályzását Wnt9b az ureter bimbó a Hoxb7 katalógusa -cre nem termel ciszták, ami arra utal, hogy cystogenesis a gyűjtő csatornák a Six2 katalógusa -cre ^{tg /+, Wnt9b TG /+ dupla génmanipuláltak valószínűleg egy másodlagos hatása kitágult cső alakú szegmensek (az adatokat nem mutatjuk be). Ennek alátámasztására, hogy a szülés utáni napon 7-10 állatok, cisztás betegség nyilvánvaló csak csőszegmenseket proximális a gyűjtőcsatorna. Hasonló a policisztás vesebetegség betegeknél, a transzgenikus egerek esetében súlyos veseelégtelenség, bár a legtöbb nephronok nem alakul ciszták. Ez felveti azt a kérdést, hogy a vesetubulusok nélkül nyílt ciszták rendellenes és jelentős mértékben hozzájárul a progresszív funkcionális károsodás ezekben a betegségekben. A legújabb vizsgálatok azt mutatják, hogy a felnőtt vese tubulus hám kifejezni Wnt9b, Frizzled receptorok és LRP5 /6 co-receptorok, amelyek képesek közvetíteni kanonikus Wnt jelátvitel válaszul az akut ischaemiás sérülés [27]. Ebben a környezetben Wnt jelátvitel elősegíti tubulus javítási és regeneráció. Azonban Wnt jelátvitel aktivitás szintén szerepet játszik előmozdításában vesefibrózis sérülés után, mint például a UUO modell [28]. Összességében ezek a tanulmányok kiemelik a szabályozó Wnt jelátvitel a felnőtt vese az egyensúly kedvező válaszokat, mint például a javítás /regeneráció, és maladaptív válaszokat vezető fibrózis és krónikus szervi diszfunkció. Katalógusa}

A pylorus régióban a gyomor jelentése a kritikus határ, amely elválasztja gyomorban belekben. Záróizom lezárás, ha egy élelmiszer bolus belép a gyomorba lehetővé teszi a megfelelő emésztést megelőzően tranzit a vékonybélbe. A molekuláris alapja kialakulását a diszkrét régió nem tisztázott, bár néhány részletet jelennek meg. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a szigorú szabályozás Wnt jelátvitel létfontosságú fejlesztése a pylorus. Kanonikus Wnt tevékenységet észlel a szemfenéki és a test (corpus), de nem tartoznak a gyomor distalis és pylorus [13]. Barx1 katalógusa - /- egerekben a gyomor kicsi, az antrális corpus határ elmosódik, és van agenesiája pylorus záróizom. Elegáns szövet rekombináció vizsgálatok arra utalnak, hogy ezek a fenotípusok eredő expressziójának elvesztése a Wnt antagonisták Sfrp1 és Sfrp2. Azonban, mivel a Barx1 katalógusa hiány van a globális hatások előbél fejlesztés, nem volt egyértelmű, hogy leszabályozza kanonikus Wnt tevékenység kifejezetten szükséges kialakulását a pylorus. Vizsgálataink közvetlenebbül vizsgálni ezt a lehetőséget célzott méhen Wnt tevékenységet egy szűkebb régió csak anterior a pylorus a Six2 katalógusa -cre.

Azt találtuk, hogy a méhen kívüli Wnt tevékenység kifejezetten megzavarja megalakult a pylorus sphincter hiányában a globális hibák gyomorban fejlődését. Így down-regulációja kanonikus Wnt-aktivitás szükséges a minta a pylorus régió, amely elválasztja gyomrot a bél. Méhen kívüli expressziója a Wnt9b ligandum és a stabilizált β-catenin transzgenikus egerekben hatásainak leküzdésére szekretált endogén Wnt antagonisták Sfrp1 /2, összhangban a modell által javasolt Kim és munkatársai [13]. Hasonló Eredményeink a Six2 katalógusa mutánsok csökkent mértékű kifejeződése Nkx2.5 katalógusa és gonosz szellem katalógusa, gének, amelyek fontosak a pylorus záróizom fejlődés csaj [14] , [29]. Ez arra utal, hogy Six2 katalógusa és Wnt katalógusa szabályozzák a közös genetikai kaszkád vélelmezett pylorus záróizom. Feltételezzük, hogy egy fontos funkciója Six2 katalógusa lehet értelmezni kanonikus Wnt jelek különböző fejlődési kontextusban. Katalógusa

serkentett kanonikus Wnt jelátvitel is kimutatták, hogy befolyásolja lép és a hasnyálmirigy fejlesztés [30]. Ennek alátámasztására, a lép és a hasnyálmirigy hypoplasiát is megfigyelhető volt Six2
-cre, Wnt9b
bi-transzgenikus egerekben (adatokat nem mutatjuk). Mivel Six2
-cre nem expresszálódik ezekben a szövetekben, ez azt sugallja, hogy a jeleket a hátsó gyomor mesenchyma hatással lehet a lép és a hasnyálmirigy a fejlesztés során. Ez alátámasztják azt a hipotézist, hogy a pylorus régió járhat, mint szervező képződéséhez tartozékdugaljak szervek. A fejlesztés során lép prekurzor sejtek átmenetileg társítani a pylorus régió, azt megelőzően, hogy a migráció a bal oldalon a gyomorba, ahol azok lecsapódik [31]. Bár nem érzékeli Six2 katalógusa -cre kifejezést a lépben primordium vagy mesothelium, nem zárhatjuk ki azt, hogy a tranziens kifejezése Six2 katalógusa -cre ezekben a régiókban felelős hibák a lép és a hasnyálmirigy . További vizsgálatok szükségesek, hogy közvetlenül tesztelni ezeket a lehetőségeket. Katalógusa

Összefoglalva, az általunk kifejlesztett egy új egér modellt, amely lehetővé teszi az időbeli és térbeli kifejeződése Wnt9b. A fejlődő vese, transzgenikus Wnt9b
indukálhat korai MET gén expressziójának Six2
-pozitív renális progenitorok, de nem elegendő ahhoz, hogy aktiválja a teljes differenciálódási program. Tartós expressziója Wnt9b Six2 katalógusa-pozitív sejtek vezet a vese ciszták és súlyos szervi elégtelenség. A gyomorban, ectopiás Wnt β-catenin aktivitás a pylorus régióban megváltoztatja záróizom képződés és disztális gyomor mintázat. Együttesen ezek az eredmények kiemelik a szoros ellenőrzés Wnt tevékenység, és azt sugallják, hogy a Six2 és β-catenin vesz részt szerv mintázat különböző összefüggésekben. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai nyilatkozat katalógusa

az állatkísérletek azt hagyta jóvá az állat gondozását és felhasználását bizottsága Saint Louis University (protokoll 1460) és a St. Louis VA (protokoll 0305). Minden eljárásokat állatokon megfeleltek az intézményi állatjóléti előírások, szabványok és politikák. Katalógusa

Egér katalógusa

Wnt9b katalógusa transzgenikus egereket keresztezzük mind a három különböző cre sor [32 ]. 1) β-aktin CRE-t használják, hogy kifejezzék Wnt9b ubikviter (1., [33]) 2) Hoxb7
-cre: EGFP alkalmaztunk overexpresszáló Wnt9b saját endogén helyen, a vese, a urétersztentek BUD (ábra. 2, [34]), és 3) a BAC Six2
-cre: EGFP transzgén kifejezésére használt Wnt9b exogén módon a gyomorban és a vese (ábra. 3, 4, 5, [ ,,,0],35]).

• PLoS One: rovarevő denevérek Digest kitin a gyomor savas emlős Chitinase
• PLoS One integrálása gyomortartalom és Stabil Izotóp elemzések számszerűsíteni a diéták a Pygoscelid Penguins