PLoS One: Nagy Mobility Group Box 1 Gátolja gyomorfekély gyógyítás Toll-like receptor 4 és receptora véglegesen glikozilezett Products

absztrakt katalógusa

Nagy-mobility group box 1 (HMGB1) eredetileg felfedezték a nukleáris protein, amely kölcsönhatásba lép a DNS-sel, mint a kromatin-asszociált nem-hiszton fehérje stabilizálása nukleoszóma és szabályozzák a transzkripciós számos gén a sejtmagban. Miután kiszivárgott vagy aktívan szekretálódik az extracelluláris környezetbe, a HMGB1 gyulladásos folyamatok stimulálásával többszörös receptorok, köztük Toll-szerű receptor (TLR) 2, TLR4, és receptora glikációs végtermékek (RAGE), ami szöveti sérülés. Bár a HMGB1 azon képességét, hogy indukálja a gyulladás már jól dokumentált, nem tanulmány vizsgálta a szerepe a HMGB1 sebgyógyulásban a gasztrointesztinális területen. A vizsgálat célja az volt, hogy értékelje a szerepe HMGB1 és receptorai a gyógyító gyomorfekély. Vizsgáltuk azt is, ami receptor között TLR2, TLR4, vagy RAGE közvetíti HMGB1 hatását a fekély gyógyulását. Gyomorfekélyek indukálta savós hártya alkalmazásával ecetsav egerekben, és a gyomor szöveteket feldolgozott további értékelésre. Az indukció fekély növelte immunhisztokémiai festésével citoplazmatikus HMGB1 és emelkedett szérum HMGB1 szintje. Fekély méret, mieloperoxidáz (MPO) aktivitás és a kifejezés a tumor nekrózis faktor α (TNFa) mRNS tetőzött, a 4. napon intraperitoneális HMGB1 késleltetett a fekély gyógyulását, és emelkedett MPO aktivitást és TNFa kifejezést. Ezzel szemben, az anti-HMGB1 antitest elősegítette a fekély gyógyulását és csökkenti a MPO aktivitást és TNF kifejezést. TLR4 és RAGE hiány fokozott a fekély gyógyulását, és csökkentette a TNFa, míg a fekély gyógyulását a TLR2 knockout (KO) egerekben hasonló volt a vad típusú egerekben. Ebben TLR4 KO és RAGE KO egerekben, exogén HMGB1 nem befolyásolja a fekély gyógyulását és TNF kifejezést. Így azt mutatta, hogy a HMGB1 bonyolítja a gyomorfekély gyógyulási folyamat, amely révén TLR4 és RAGE indukálni túlzott gyulladásos válaszokat.

bevezető hivatkozás: Nadatani Y, Watanabe T, Tanigawa T, Ohkawa F, Takeda S, Higashimori A, et al. (2013) Nagy Mobility Group Box 1 Gátolja gyomorfekély gyógyítás Toll-like receptor 4 és receptora glikációs végtermékek. PLoS ONE 8 (11): e80130. doi: 10,1371 /journal.pone.0080130 katalógusa

Szerkesztő: Mathias Chamaillard, INSERM, Franciaország katalógusa

Beérkezett: Május 29, 2013; Elfogadva: szeptember 30, 2013; Megjelent: november 11, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Nadatani et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: A szerzők nincs támogatás vagy támogatási jelenteni. katalógusa

Érdekütközés: Kenji Watanabe - Grant /Research Support a Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation, Abbott Japan Co., Ltd .; Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation; Beszéd és tanítás: Abbott Japan Co., LTD. Yasuhiro Fujiwara - Beszéd és tanítás: Eisai Co. Ltd Tetsuo Arakawa - tanácsadó bizottságok vagy véleményét panelek: Eisai Co. Ltd, Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd. A más szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Ez nem változtat a szerzők betartása minden PLoS One politikák adatok megosztása és anyagok. Katalógusa

Bevezető katalógusa

Nagy-mobility group box protein 1 (HMGB1), tagja a nagy Mobility Group fehérje szupercsalád, egy nukleáris fehérje [1]. HMGB1 kölcsönhatásba lép a DNS-sel, mint a kromatin-asszociált nonhistone fehérje stabilizálása nukleoszóma és szabályozzák a transzkripciós számos gén a sejtmagban [2]. Amikor szivárgott ki egy sejt során nekrotikus sejthalál [3] vagy aktívan szekretálódik az extracelluláris környezetbe monociták és makrofágok [3,4], a HMGB1, mint egyfajta alarmin potens gyulladáskeltő tulajdonságokat [5].

a legjobban tanulmányozott HMGB1 receptorok Toll-szerű receptor (TLR) 2 [6,7], TLR 4 [6-9], és a receptor a glikációs végtermékek (RAGE) [6,8]. A TLR2 és TLR4 tagjai a TLR család, és játszanak döntő szerepet veleszületett immunválaszt a kórokozó-asszociált molekuláris mintázatok és károsodással összefüggő molekuláris minta molekulák [10]. TLR2 elsősorban felismeri összetevői a Gram-pozitív baktériumok sejtfal, és TLR4 elsősorban felismeri lipopoliszacharid, amely a fő sejtfal-komponens a Gram-negatív baktériumok. Triggering TLR2 és TLR4 jelátviteli utak aktiválódásához vezet a nukleáris faktor kB (NF-kB), keresztül a járulékos fehérje MyD88, és az azt követő szabályozásának immun- és gyulladásos gének, beleértve a gyulladásos citokinek, mint például a tumor nekrózis faktor α (TNFa), az aktiválása mitogén-aktivált protein kinázok [11-13]. Receptor for glikációs végtermékek (RAGE) egy multi-ligand receptor, amely tartozik az immunglobulin szupercsaládba [14]. Egyéb ismert RAGE ligandumok közé tartoznak az amiloid [15] és S100 [16]. Több kísérletet azt javasolták, hogy a ligandum-RAGE kölcsönhatása szintén aktiválja az NF-kB és mitogén-aktivált protein kinázok [17-20].

Számos patológiás állapotok kapcsolódnak a gyulladáskeltő tulajdonságokat HMGB1. Korábbi jelentések kimutatták, hogy a HMGB1 játszik kritikus szerepet endotoxémia [21], az akut hasnyálmirigy-gyulladás [22], akut légzési distressz-szindróma [23], egyes autoimmun betegségek [24], az agyi ischaemia sérülés [25], és ischaemia-reperfúziós (IR) sérülések, a máj [26], a szív [27], és a vese [28]. Ami a gyomor-bél traktus, HMGB1 bonyolító tényezőt a kísérletes kolitisz [29,30], és a nem-szteroid gyulladáscsökkentő gyógyszer által kiváltott vékonybél sérülés [31].

Jelenleg, a szerepe a HMGB1 sebgyógyulásban nem világos, habár a képességét, hogy indukálja a gyulladás már jól dokumentált, a fent leírtak szerint. A gyomor-bél, ha nincs tanulmány vizsgálta a szerepe a HMGB1 sebgyógyulásban. A cél az volt, hogy vizsgálja meg a szerepét a HMGB1 gyomorfekély gyógyulását. Megvizsgáltuk a szerepe a HMGB1 a gyógyulási folyamat segítségével egy létrehozott kísérleti krónikus gyomorfekély modellt létre rágcsáló topikális alkalmazásával ecetsav a gyomor serosa oldalon. A modell nagyon hasonlít az emberi peptikus gyomorfekély szövettani és morfológiai [32]. Azt is vizsgálták, hogy a HMGB1 befolyásolja a fekély gyógyulását keresztül TLR2, TLR4, vagy RAGE.

Anyagok és módszerek katalógusa

Állatok katalógusa

TLR2- és TLR4-knockout (KO) egerek, amelyeket eredetileg generált Dr. S. Akira (Osaka University, Osaka, Japán ) és visszakereszteztünk 8-szor-ra egy C57BL /6 háttér, nyertünk keleti Bioservice, Inc. (Kyoto, Japán). RAGE-KO egerekben, amely már visszakereszteztünk rá C57BL /6 háttérkép, eredetileg keletkezett és egy ajándék Dr. Y. Yamamoto (Kanazawa Medical University, Kanazawa, Japán). A vad típusú C57BL /6 egereket szereztünk be a Charles River Japán, Inc. (Atsugi, Japán), mint a kontroll törzs TLR2 KO, TLR4 KO, és RAGE KO egerekben. Specifikus kórokozóktól mentes 12 hetes hím állatokat használtunk. Minden állatokat a polikarbonát ketrecekben papír chip ágynemű. A ketreceket található egy légkondicionált biológiailag veszélyes szoba egy 12 órás fény-sötét ciklusban. Minden vizsgálati eljárást jóváhagyta az Animal Care Bizottsága Osaka City University Graduate School of Medicine (engedély száma: 11.006). Minden műtétek végeztük izofluránérzéstelenítésben, és minden erőfeszítést tettek arra, hogy minimálisra csökkentsék a szenvedést. Katalógusa

Kísérleti indukció fekély katalógusa

Gyomorfekély váltottuk ki részletesen leírt módszerrel másutt [33], kisebb módosításokkal . Röviden, éteres érzéstelenítés közben, a hasa az állatokat metszeni és a gyomor ki volt téve. Polipropilén csőbe (4 mm átmérőjű) helyezünk ellen a savós hártya oldalán a gyomorban. Egy 80 nl-es alikvot részét 60% -os ecetsavat adunk a csőbe, amelyet tartottuk érintkezésben a serosa felület 30 s-ig. Miután azonnali eltávolítását ecetsav a csőből leszívással, a gyomor visszatért az eredeti helyzetébe, és a hasat összezárjuk. Korábbi beszámolók bizonyították, hogy a méret a gyomorfekély elérte a maximális a 3. napon vagy 4 után fekély indukció, majd azt követően, hogy fokozatosan csökkent [32,34]. A gyógyulási fázisban a kísérleti gyomorfekély kezdődik követő 4. napon fekély indukció. Katalógusa

Kísérleti csoportok katalógusa

hatásának vizsgálatára az exogén HMGB1 egerek intraperitoneális injekciós humán rekombináns HMGB1 (rHMGB1 100 -1000 ug /kg; Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO) vagy a jármű (foszfáttal pufferolt sóoldat) kétszer naponta, kezdve után 4 nappal fekély indukció (nap a 4 nap 9).

Továbbá, a hatás immunoneutralization HMGB1 a gyomorfekély gyógyulását értékelték. Egereknek intraperitoneálisan neutralizáló csirke anti-HMGB1 poliklonális antitesttel (5 mg /kg; Shino-Test Corporation, Tokió, Japán) vagy normál csirke IgY (5 mg /kg, Sigma-Aldrich Co.), kezdve után 4 nappal fekély indukció ( 4. naptól a 9. nap). Sőt, a hatás igazolására felszabadulási inhibitor a HMGB1, etil-piruvát vagy a jármű injektáltuk naponta kétszer, kezdve követő 4. napon fekély indukció.

Továbbá, hogy meghatározzák a receptor felelős HMGB1-gyel kapcsolatos gyomorfekély gyógyulás, gyomorfekély hoztunk létre TLR2 KO, TLR4 KO, és RAGE KO egerek vagy anélkül intraperitoneális injekció 1000 ug /kg rHMGB1 naponta kétszer kezdete után 4 nappal fekély indukció.

A gyomrot eltávolítjuk és a fekély méretét mértük 6. napon vagy 9 után fekély indukció. A fekély méretét fejeztük fekély index, a termék a maximális hossz és a minimális hossz (azaz maximális hossza megszoroztuk minimális hossz). Tanulmányok végeztük 4-8 ​​mintákban. A mintákat a gyomor szöveti feldolgozása további értékelésre. Katalógusa

mRNS expressziója a gyulladásos mediátorok Gyomor Tissue meghatározva valós idejű kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz láncreakció (RT-PCR) hotelben

Valós idejű kvantitatív RT-PCR-t végeztünk a korábban leírtak [35]. Röviden, a teljes RNS-t izoláltunk a bélrendszeri szövetek alkalmazásával ISOGEN kit (Nippon Gene Co., Ltd., Tokió, Japán) határoztuk meg a gyártó utasításai szerint. Kiegészítő DNS-t szerzett egy nagy kapacitású RNS-To-cDNS-készlet (Life Technologies Corporation, Carisbad, CA) alkalmazásával a gyártó protokollja. Valós idejű kvantitatív RT-PCR analízist Applied Biosystems 7500 gyors, valós idejű PCR rendszer és szoftver (Life Technologies Corporation). A reakcióelegyet úgy állítjuk elő, a gyártó protokollja segítségével a TaqMan gyors univerzális PCR mester keverék (Life Technologies Corporation). Hőciklizálást körülmények a következők voltak: 45 amplifikációs ciklus 95 ° C-on 15 s és 60 ° C-on 1 percig. Teljes RNS-t vetik alá a valós idejű kvantitatív RT-PCR-rel a mérésére célgének TaqMan gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz kontroll reagens (Life Technologies Corporation), amelyet használtunk belső standardként. Az expressziós kódoló mRNS HMGB1, TLR4, RAGE, a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF), az interleukin-1-béta (IL-1β) és aTNF fekélyes és a normál gyomor szövetek mennyiségileg a valós idejű RT-PCR és szabványosított gliceraldehid -3-foszfát-dehidrogenáz mRNS-szintre. A kifejezés az egyes mRNS-javallt egy arány, viszonyítva az átlagos érték a normális gyomor szövetben. A primerek és próbák használt RT-PCR 1. táblázat mutatja
Gene
primer és próba
TNF-αPrimer (előre) 5'-TCATGCACCACCATCAAGGA-3'Primer (reverse)5’-GAGGCAACCTGACCACTCTCC-3’Probe5’-FAM-AATGGGCTTTCCGAATTCACTGGAGC-TAMRA-3’IL-1βPrimer (Előre) 5'-ACAGGCTCCGAGATGAACAAC-3'Primer (reverse)5’-CCATTGAGGTGGAGAGCTTTC-3’Probe5’-FAM-GAAAAAGCCTCGTGCTGTCGGACCCATAT-TAMRA-3’RAGEPrimer (Előre) 5'-CCACTGGATAAAGGATGGTGCA-3'Primer (reverse)5’-CAGCTATAGGTGCCCTCATCCTC-3’Probe5’-FAM-AGCCCTGTGCTGCTCCTCCCTGAG-TAMRA-3’TLR2Primer (Előre) 5'-CTCTGGAGCATCCGAATTGC-3'Primer (fordított) 5'-GCTGAAGAGGACTGTTATGGC-3'Probe5'-CCTCAGACAAAGCGTCAAATCTCAGAGGA-TAMRA-3'TLR4Primer (előre) 5'-GGCTGGATTTATCCAGGTGTGA-3'Primer (reverse)5’-CTGTCAGTATCAAGTTTGAGAGGTG-3’Probe5’-AGCCATGCCATGCCTTGTCTTCAATTGT-TAMRA-3’HMGB1Primer (Előre) 5'-CAGCCATTGCAGTACATTGAGC-3'Primer (fordított) 5'-TCTCCTTTGCCCATGTTTAGTTG-3'Probe5'-GACAGAGTCGCCCAGTGCCCGTCC-TAMRA-3'VEGFPrimer (előre) 5'-TCCGCAGACGTGTAAATGTTC-3'Primer (fordított) 5'-TTAACTCAAGCTGCCTCGCCT- 3'Probe5'-FAM-TGCAAAAACACACAGACTCGCGTTGC-TAMRA-3'Table 1. primereket és próbákat.
CSV letöltése CSV

immunhisztokémiai és immunfluoreszcens festéssel katalógusa

a szövettani mintákat fix 0,1 M foszfát pufferben (pH = 7,4), amely 4% -os paraformaldehiddel. A mintákat paraffinba ágyaztuk, és a soros 5-um vastag metszeteket szilanizált csúszdák (Dako, Tokió, Japán). A mintákat oldatába merítjük 3% -os H _{2 O 2 abszolút metanolban 5 percig annak érdekében, hogy gátolják az endogén peroxidáz aktivitás, majd inkubáljuk 5% lefölözött tej 10 percig. Hematoxilin-eozin festést végeztünk a morfológiai megfigyelések. Egy nyúl monoklonális anti-HMGB1 antitestet (hígítva 1: 250, ABCAM, Cambridge, MA) vittünk, mint az elsődleges antitestet és egy éjszakán át inkubáljuk 4 ° C hőmérsékleten a mintákat. Egy másodlagos antitestet (Histofine Egyszerű Stain MAX Peroxidase készlet; Nichirei Biosciences Inc., Tokió, Japán) inkubáltuk a mintákat 1 órán szerint a gyártó utasításai szerint. Immunreakciót láthatóvá kezeljük szakaszok Histofine egyszerű festési és diamino-oldatot (Nichirei Biosciences Inc.). A próbatesteket ezután hematoxilinnel ellenfestettük. Ezután TLR2, TLR4 és RAGE expresszióját határoztuk meg immunflureszcencia módszerrel. A primer antitesteket használt immunfluoreszcens festéssel tartalmazott egy egér monoklonális antitest ellen TLR2 (hígítva 1: 200; ABCAM), egy egér monoklonális antitest ellen TLR4 (hígítva 1: 200; ABCAM) és egy patkány monoklonális antitest ellen RAGE (hígítva 1: 250; ABCAM). Szövetminták, amelyeket helyben készítettünk a fent leírt módon, egy éjszakán át inkubáltuk 4 ° C hőmérsékleten a primer antitestekkel, majd reagáltatjuk a megfelelő fluoreszcens festékkel konjugált szekunder antitestekkel (ABCAM) 2 órán át. A mintákat vizsgáltuk konfokális mikroszkóppal felszerelt argon és az argon-kripton lézer forrásokból.}

mérése szérum HMGB1 szintek

Blood (1000 pl) vettünk a szérum-szeparátor csövekbe szívpunkcióval. Centrifugálás után 3000 rpm-en 10 percen keresztül, a szérumot összegyűjtöttük, és -80 ° C-on. Szérumszintje HMGB1 mértük egy HMGB1 szendvics ELISA kit (Shino-Test Corporation) alkalmazásával a gyártó protokollja.

mérése Mieloperoxidáz (MPO) aktivitás katalógusa

mérésére használt módszereket MPO részletesen máshol. [36] Röviden, a mintákat homogenizáltuk, 50 mM kálium-foszfát-pufferben (pH = 6,0), amely 0,5% hexadecil-bromidot (Sigma Chemical Co.). Szuszpenziót centrifugáljuk, és az MPO aktivitást az így kapott felülúszó spektrofotométerrel. Egy egység MPO aktivitást úgy definiáltuk, mint az az enzimmennyiség, amely lebomlott 1 umol-peroxid /perc, 25 ° C-on. Az eredményeket mint egység per gramm gyomor szövetet.

Statisztikai elemzés

Az értékeket átlag ± standard hiba az átlag (SEM). Egytényezős varianciaanalízissel (ANOVA) használtuk, hogy teszteljék a jelentősége a közötti különbségek kezelési csoport azt jelenti, és az eredményeket elemeztük Fisher-féle védett legkisebb szignifikáns differencia tesztet. P-értékek 0,05-nél kisebb tekintettük statisztikailag szignifikánsnak.

Eredmények katalógusa

tagozatos gyomorfekély gyógyítás katalógusa

Hogy értékelje a gyógyulási folyamatot gyomorfekély, kísérleti gyomorfekély váltottuk ki helyi alkalmazása ecetsav a gyomor savós oldali . A fekélyek értékeltük mikroszkopikusan (Figure 1a, 1b) és makroszkopikusan. A méret a fekélyek elérte a maximális a 4. napon, és idővel csökkent azután (1C). MPO aktivitást (1D ábra), és a kifejezés a TNFa (1 E. ábra), és az IL-1β (1 E. ábra) mRNS fekélyes gyomor szövet is tetőzött a 4. napon, és ezek magasabb volt fekélyes szövetben, mint normál gyomor szövet egész vizsgaidőszak. Fekély is megemelkedett expresszióját VEGF mRNS (ábra 1F).

HMGB1 Expression következő fekély katalógusa

A következőkben értékelni, hogy HMGB1 részt gyomorfekély gyógyulását. HMGB1 mRNS-szintje a gyomor szöveti (2A ábra) és a szérum HMGB1 (2b ábra) elérték a maximumot, a 4. napon a HMGB1-mRNS-szintek majdnem konstans a vizsgálat időszakában, míg a szérum HMGB1 csökkent a normális szintre után 6 nappal indukcióját fekély. Immunhisztokémiai, fekélyesedés indukált kiemelkedő citoplazmatikus festődés HMGB1 hámsejtekben, különösen a sérült területen (ábra 2c, 2d). Ezzel szemben, a sértetlen gyomor nyálkahártya, a HMGB1 lokalizáció korlátozódott belsejében a magok hámsejtek (ábra 2E).

hatásai Exogén HMGB1, HMGB1 Immunoneutralization, és gátolja a HMGB1 Release on gyomorfekély Healing

mRNS expresszió és az MPO aktivitás értékeltük a 6. napon, és a fekély-index értékeltük a 9. napon, szerint az idő függvényében vizsgálva. Az egereknek rHMGB1 vagy anti-HMGB1 ellenanyag intraperitoneálisan követő indukciója fekély. Beadása rHMGB1 dózisban vagy 100 ug /kg vagy 1000 ng /kg jelentősen elnyomja gyomorfekély gyógyulását (3A), amelyet összefüggésbe hozható a megnövekedett MPO aktivitást (3B, ábra), és a TNFa-mRNS-expresszióját fekélyes szövetekben (3C, ábra). Ezzel szemben, a HMGB1 neutralizáló antitestek mozdítani a fekély gyógyulását (4a ábra), csökkentett MPO aktivitást (4b ábra) és TNFa mRNS-expresszió (4C). A nehezítő hatása exogén rHMGB1 a gyomorfekély gyógyulását törölték együttadása anti-HMGB1 antitest (4F). VEGF expresszióját mRNS nem volt hatással a kezelést bármelyik rHMGB1 (ábra 3D, 3E) vagy anti-HMGB1 antitest (ábra 4D, 4E). Normál gyomor szövetben beadása rHMGB1 vagy anti-HMGB1 szintén nem volt hatása a citokin expresszióját vagy MPO aktivitást (az adatokat nem mutatjuk be). Továbbá, az adminisztráció etil-piruvát, gátolja a HMGB1 kiadás jelentősen elősegítette a fekély gyógyulását, míg a jármű kezelést. Gyógyító kísérte az elnyomás TNF mRNS expresszió (nem közölt adatok). Katalógusa

szerepe TLR2, TLR4 és RAGE a gyomorfekély gyógyulását katalógusa

Annak vizsgálatára, hogy a TLR2, TLR4 és RAGE hozzájárulnak a HMGB1 által közvetített gyomorfekély gyógyulását, kísérleti gyomorfekély hoztunk létre TLR2 KO, TLR4 KO, RAGE KO, és vezérlő a vad típusú egerekben. TLR4 és RAGE hiányosság mozdítani gyomorfekély kialakulását, és megakadályozta a növekedés a TNFa mRNS-expresszió után fekélyesedés, míg a TLR2-hiány nem érinti sem a fekély-index, sem a kifejezés a TNFa mRNS (ábra 5a, 5b). Exogén HMGB1 nem érinti sem a fekély index, sem a kifejezés TNF mRNS sem TLR4 KO vagy RAGE KO egerek (5C-5F). Exogén HMGB1 azonban késleltetett fekély gyógyulását a vad típusú egereken és csökkentett TNFa mRNS-expresszió (3. ábra).

Expression TLR2, TLR4 és RAGE alatt gyomorfekély gyógyítás katalógusa

A következőkben vizsgált mRNS expressziója és az immunreakciót TLR2, TLR4 és RAGE a vad típusú egerekben. Jelentős up-regulációját TLR2 mRNS volt megfigyelhető követő indukciója fekély (6a ábra). TLR2 immunreaktivitást figyeltünk főként a gyulladásos sejtekben (6B). A kifejezés a TLR4 mRNS nem befolyásolta az indukciós a fekély (ábra a 6C). TLR4 immunreaktivitást figyeltünk meg a csúcsi része az epithelialis a fekély széle és néhány gyulladásos sejtek a fekély ágy (ábra 6D).

jelentős up-regulációját RAGE mRNS volt megfigyelhető a 9. napon, miután az indukciós fekély (ábra 6E). RAGE immunreaktivitást figyeltünk főleg gyulladásos sejtek szélén a fekély ágy és a vaszkuláris endoteliális sejt membrán (ábra 6F).

festése fekélyes szövetet TLR4 KO vagy RAGE KO egerek anti-TLR4 ellenanyag vagy anti-RAGE antitest, illetve nem mutattak pozitív jeleket, megerősítve a specifitását ezek az antitestek (az adatokat nem mutatjuk).

Vita katalógusa

Ebben a tanulmányban kimutattuk, hogy az exogén HMGB1 késések gyomorfekély gyógyulását, míg indukáló TNF expresszió és MPO. Fordítva, immunoneutralization HMGB1 vagy felszabadulásának gátlása HMGB1 elősegíti a fekély gyógyulását, miközben csökkenti a TNFa expressziós és az MPO aktivitást. Továbbá, TLR4 és RAGE hiány elősegíti a fekély gyógyulását, és exogén HMGB1 nem késlelteti a fekély gyógyulását a TLR4 KO és RAGE KO egerekben. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a HMGB1 bonyolítja a gyomorfekély gyógyulását, hogy keresztül fejti TLR4- és RAGE-függő útvonalak. Tudomásunk szerint ez az első olyan jelentés szerepének tisztázása HMGB1 sebgyógyulásban a gyomor-bél traktusban.

Néhány tanulmány foglalkozott a szerepe a HMGB1 sebgyógyulás más szervek, mint a gyomor-bélrendszer, de az említett vizsgálatok eredményei ellentmondásosak [37-40]. Összhangban Eredményeink Egyes tanulmányok kimutatták, hogy a HMGB1 fejt ki gátló hatást a sebgyógyulásra [37,38]. Zhang és mtsai. kimutatták, hogy a HMGB1 rontja bemetszés seb gyógyulását, hogy csökkentik a reparatív kollagén lerakódását keresztül RAGE [37]. Goova et al. kimutatták, hogy blokkolja a RAGE ligandumok, mint az életkor és a HMGB1 segítségével oldható formáját receptor AGE (sRAGE), gyorsítja a fekély gyógyulását, és elnyomja a szinteket a gyulladásos citokinek [38]. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a túlzott mértékű gyulladást csökkent sebgyógyulás. Például a korábbi tanulmány igazolta, hogy TNF túlzott kifejeződése és a túlzott neutrofil infiltráció vannak nehezítő tényezők kialakulását és a gyógyulás a gyomorfekély [41]. Továbbá, egy másik modell a szövet javítás, Goren et al. kimutatták, hogy a túlzott neutrofil és makrofág infiltráció TNFa túlzott expresszió gátolja a gyógyulási egér bőrsérülések [42]. Így lehetséges, hogy a HMGB1 késlelteti gyomorfekély gyógyulását keresztül TNFa-kiváltott gyulladásos válaszokat.

Ezzel szemben néhány in vitro vizsgálatok arra utalnak, hogy a HMGB1 és receptorai nélkülözhetetlenek a sebgyógyulás [39,40]. Staraino et al. kimutatták, hogy a HMGB1 gyorsítja a sebgyógyulási folyamatot és a regeneráció fokozása révén a migráció a bőr fibroblasztok és keratinociták [39]. HMGB1 is elősegíti a sebgyógyulást a 3T3 fibroblasztok indukáló sejtek proliferációját és migrációját aktiválásán keresztül a RAGE /extracelluláris szignál-szabályozott kináz útvonal [40]. Mivel ezek az in vitro vizsgálatokat végeztünk annak hiányában a gyulladásos sejtek, a különbségek a kísérleti módszerek eredményezhet következetlen következtetéseket a szerepe a HMGB1 sebgyógyulásban.

VEGF, amely egy hatásos angiogén növekedési faktor játszik fontos szerepet gyomorfekély gyógyulását [43,44]. Korábbi beszámolók bizonyították, hogy a HMGB1 képes indukálni a VEGF expresszióját számos szövetben és állati modellek [45-47]. Azonban ebben a vizsgálatban sem rHMGB1 sem az anti-HMGB1 ellenanyagok érintett VEGF expresszió fekélyes szövetben. Ennek oka az a különbség között eredményeink és azokat a korábbi vizsgálók nem világos, de összefüggésben lehet a használata különböző szervek és kísérleti modellek.

Van 2 lehetséges forrásai extracelluláris HMGB1: passzív felszabadulás nekrotikus sejtek [48] és az aktív szekréció gyulladásos sejtek [5]. Ebben a vizsgálatban, a HMGB1 immunreaktivitást figyeltünk meg a citoplazmában, valamint a nucleus, ami arra utal, hogy a nekrotikus sejtek forrása HMGB1. Gyomor- HMGB1 mRNS szintek nőtt a fekély gyógyulását, ami arra utal, hogy a gyulladásos sejtek termelik és bocsátják HMGB1. Együttesen a szérumában a HMGB1 eredményezett volt köszönhető, hogy a passzív felszabadulás sérült sejtek a gyomorfekély és aktív szekréció gyulladásos sejtek.

szérum HMGB1 szintje megnövekedett követő indukciója gyomorfekély de csökkent a késői fázisú gyógyítás, bár a kifejezés a HMGB1 és TNFa magas maradt. Ezek az adatok felvetik annak lehetőségét rendszerszintű HMGB1 csapdázási rendszer. Ebből a célból, hogy létezik egy HMGB1 kötő fehérje számoltak be. A trombomodulin, egy sejtfelszíni glikoprotein, az egyik példa egy HMGB1 fehérje. A rekombináns humán oldható trombomodulin gátolta a növekedést a plazma HMGB1 által indukált lipopoliszacharid patkány modellben [49] és kötődik a HMGB1 keresztül lektin domént [50], hogy megakadályozza a HMGB1 származó kölcsönhatásban más receptorokkal [51]. A klinikai alkalmazás, trombomodulin is hasznos HMGB1-gyel kapcsolatos betegségek és állapotok, például szepszis, mert az anti-HMGB1 tulajdonságokkal [52]. sRAGE talált a forgalomban, egy másik példa egy HMGB1 fehérje. sRAGE az oldható formája RAGE; úgy viselkedik, mint a csali, hogy megakadályozza közötti kölcsönhatás sejt felszínén RAGE és ligandumai, mint a HMGB1 [53]. A jelen tanulmányban ilyen csapdázási rendszerek azt is védő szerepe terjedésének megelőzésében gyulladás, ezzel is elősegítve a fekély gyógyulását.

Ismeretes, hogy sok peptikus fekély betegek fertőzött Helicobacter pylori katalógusa. Bár a jelen tanulmányban nem vizsgálták a szerepét HMGB1 gyomorfekély gyógyulását fertőzött egerek H. pylori
, klinikai és kísérleti tanulmányok arra utalnak, hogy a káros hatás a HMGB1 a gyomorfekély gyógyulását lenne kifejezettebb betegek egy H. pylori fertőzés
mint azokban nélküle. Korábban kimutatták, hogy H. pylori
fertőzés növeli neutrofil granulocita beáramlást elfekélyesednek szövetek mongol versenyegereknél [54]. Shimizu et al. is kimutatták, hogy a neutrofilek és makrofágok beszivárog fekély árrés nagyobb mértékben betegeknél H. pylori
fertőzés, mint azokban, anélkül, hogy a fertőzés [55]. A nagy mennyiségű HMGB1, ezért valószínű jelen a fekélyes szövetet fertőzött H. pylori
, mivel ez lenne szekretált azok a gyulladásos sejtek. Továbbá Radin et al. számolt be, hogy VacA, a fő virulencia faktor ezen organizmus okozza programozott elhalása gyomor hámsejtek és az azt követő felszabadulása HMGB1 [56]. Így azt várjuk, hogy a káros HMGB1 a fekély gyógyulását lenne szembetűnőbb H. pylori
-fertőzött betegekben.

TLR2, TLR4 és RAGE közvetítő, gyulladáskeltő válaszokat, közismert HMGB1 receptorokhoz. Eredményeink egyértelműen azt mutatták, hogy a TLR4 és RAGE döntő szerepet játszanak a gyomorfekély gyógyulását. Ez az eredmény összhangban van a korábbi megállapítások a gyulladásos válaszokat HMGB1 által indukált. Az egyik leginkább létrehozott modellek bevonásával közötti kölcsönhatás HMGB1 és ezek a receptorok az I-R sérülést. A máj I-R károsodás, TLR4-deficiens egerekben kevesebb máj I-R károsodás; a kár TLR4-deficiens egerekben nem volt hatással rHMGB1 vagy anti-HMGB1 ellenanyag [26]. Sőt, blokkoló RAGE ellen védett hepatocelluláris halál és nekrózis a hepatikus I-R sérülés modell [57]. Egy olyan modellben a szív I-R sérülés, az Andrássy et al. kimutatta, hogy a RAGE-hiányos egerek csak enyhe gyulladás következtében a szív I-R károsodás; a gyulladás nem érintette az indukció rHMGB1 [27]. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy a TLR4-HMGB1 és RAGE-HMGB1 kölcsönhatások játszanak döntő szerepet I-R-kár, bár meg kell vizsgálni a különbségek az egyes szerv. A másik létrehozott modell szisztémás gyulladás, például szepszis [5,8,58]. Egy kísérleti modellben hasűri szepszis, Susa et al. kimutatták, hogy a HMGB1-RAGE interakció szorosan kapcsolódó szepszis okozta rekeszizom diszfunkció [58]. Egy in vivo szisztémás gyulladás modell által generált injekció exogén HMGB1, Zoelen et al. kimutatták, hogy a HMGB1 indukálja a citokinek aktiválása, koaguláció, és a neutrofil toborzás keresztül TLR4 és RAGE [8]. Így, TLR4 és RAGE kritikus szerepet játszanak patogenezisében által közvetített HMGB1-hez kapcsolódó útvonal, beleértve az útvonal a mi fekély gyógyulását modell.

Eredményeink azt mutatják, hogy a TLR2 nincs kapcsolatban a gyomorfekély gyógyulását: a fekély gyógyulását TLR2 KO egerek hasonlított a vad típusú egerekben. Bár in vitro vizsgálatok alkalmazásával makrofág sejtvonalakban jelezte, hogy a TLR2-HMGB1 útvonal indukál gyulladásos válaszokat [6,9], in vivo hatásait TLR2 a HMGB1 által közvetített patológiák nem számoltak be. Így korábbi eredményei [8] és az eredmények, a HMGB1-TLR2 szignálkaszkád kisebb szerepet játszanak a javítási és patogenezise szöveti sérülések és gyulladások.

Összefoglalva, kimutattuk, hogy a HMGB1 bonyolító tényezőt a gyógyulási folyamat a gyomorfekély, valamint más patológiás körülmények között. Sőt, már kimutatták, hogy a HMGB1 gátolja a fekély gyógyulását mechanizmuson keresztül, amely magában foglalja a TLR4, RAGE, és a túlzott gyulladásos válaszokat. Bár proton pompa inhibitorok általánosan előírt gyomorfekély, kezelhetetlen fekélyek is jelentenek klinikai problémát. A jelen tanulmány támogatja egy új koncepció a kezelés megoldhatatlan gyomorfekély mellett proton pompa gátlók terápiát.

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Köszönjük Emi Suzuki-Yoshioka a technikai segítségnyújtás. Azt is szeretném kifejezni őszinte hálámat a személyzet tagjai a Osaka City University, aki támogatott minket. Katalógusa