PLoS ONE: visoke mobilnosti Grupa Box 1 inhibira čira na želucu iscjeljivanje kroz Toll-like receptora 4 i receptor za glikozilacije konačnih produkata

Sažetak pregled

visoke mobilnosti grupa box 1 (HMGB1) u početku je otkrivena kao nuklearni protein koji stupa u interakciju s DNA kao kromatina povezane non-histona proteina stabilizirati nukleosome i reguliraju transkripciju mnogih gena u jezgri. Jednom pukotina ili aktivno izlučuje u izvanstanični okoliš, HMGB1 aktivira upalne puteve stimuliranjem više receptora, uključujući Toll-like receptora (TLR) 2, TLR4, i receptora za krajnji proizvodi uznapredovale glikozilacije (RAGE), što dovodi do ozljede tkiva. Iako HMGB1 sposobnost da izazove upalu je dobro dokumentirano, nema istraživanja su ispitali ulogu HMGB1 u zacjeljivanju rana u probavnom području. Cilj ovog istraživanja bio je procijeniti ulogu HMGB1 i njihovih receptora u liječenje želučanih čireva. Također smo istraživali koji receptor među TLR2, TLR4 ili RAGE posreduje efekte HMGB1-a na zarastanja čira. Želučani ulkusi su inducirane seroznog aplikacije octene kiseline u miševa i želučanih tkiva su pripremljeni za daljnje procjene. Indukcija čira povećana imunohistokemijsku bojenje citoplazmatski HMGB1 i povišenim razinama serumskog HMGB1. Veličina čir, mijeloperoksidaze Aktivnost (MPO), a ekspresija faktora tumorske nekroze a (TNFa) mRNA nalazio na dan 4. intraperitonealo HMGB1 odgođeno zarastanja čira i povišene aktivnosti MPO i TNFa ekspresiju. Nasuprot tome, primjena anti-HMGB1 antitijela promovira ulkusa liječenje i smanjenu aktivnost MPO i TNFa izraz. TLR4 i nedostatak RAGE poboljšane zarastanja čira i smanjuje razinu TNFa, dok zarastanja čira u TLR2 nokaut (KO) miševa bila je slična onoj kod miševa divljeg tipa. U TLR4 KO i RAGE KO miševa, egzogeni HMGB1 nije utjecao ulkusa liječenje i TNFa izraz. Tako, pokazali smo da HMGB1 je otežavajući faktor u želučanom proces zarastanja čira, koja djeluje kroz TLR4 i RAGE da inducira prekomjerne upalnih odgovora. pregled

Izvor: Nadatani Y, Watanabe T, Tanigawa T, Ohkawa F, Takeda S, Higashimori A, et al. (2013) visoke mobilnosti Grupa Box 1 inhibira čira na želucu iscjeljivanje Toll-like receptora 4 i receptor za glikozilacije konačnih produkata. PLoS ONE 8 (11): e80130. doi: 10,1371 /journal.pone.0080130 pregled

Urednik: Mathias Chamaillard, INSERM, Francuska pregled

Primljeno: 29. svibnja 2013; Prihvaćeno: 30. rujna 2013; Objavljeno: 11. studenog 2013 pregled

Copyright: © 2013 Nadatani et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Autori nemaju podršku ili sredstva za prijaviti pregled

suprotstavljenih interesa. Kenji Watanabe - Grant /Istraživanje podrška iz Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation, Abbott Japan Co., Ltd .; Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation; Govoreći i poučavanje: Abbott Japan Co, Ltd. Yasuhiro Fujiwara - govor i učenje: Eisai Co Ltd Tetsuo Arakawa - savjetodavnih odbora ili pregled Paneli: Eisai Co Ltd, Otsuka Pharmaceutical Co Ltd i drugi autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi. To ništa ne mijenja pridržavanje autorovih svim PLoS ONE politika na razmjenu podataka i materijala. Pregled

Uvod pregled

visoke mobilnosti grupa kutija protein 1 (HMGB1), član visoko- pokretljivost skupina proteina superfamilije je nuklearna proteina [1]. HMGB1 interakciju s DNA, kao kromatina povezana nonhistone protein kako bi stabilizirali nukleosome i reguliraju transkripciju mnogih gena u jezgri [2]. Kada pukotina iz stanice u nekrotičnom stanične smrti [3], ili aktivno izlučuje u izvanstanični okoliš monocita i makrofaga [3,4], HMGB1 djeluje kao alarmin s potentnim proupalnih svojstvima [5]. pregled

Najbolji proučavali HMGB1 receptori su Toll-like receptora (TLR) 2 [6,7], TLR 4 [6-9] i receptor za krajnji proizvodi uznapredovale glikozilacije (RAGE) [6,8]. TLR2 i TLR4 su članovi obitelji TLR, i oni igraju ključnu ulogu u urođenih imunoloških odgovora na patogena povezan molekularnih uzoraka i molekula oštećenja povezana s molekularnim uzorak [10]. TLR2 primarno prepoznaje komponente bakterijske stanične stijenke gram-pozitivnih i TLR4 primarno prepoznaje lipopolisaharid, koji je glavni stanični zid komponenta gram-negativnih bakterija. Pokreće TLR2 i TLR4 signalne putove dovodi do aktivacije nuklearnog faktora kB (NF-kB), kroz pomoćni protein MyD88, a naknadno reguliranje imunoloških i upalnih gena, uključujući upalne citokine, kao što su faktor nekroze tumora alfa (TNFa), s aktivacija mitogen-aktivirane protein-kinaze [11-13]. Receptor za krajnji proizvodi uznapredovale glikozilacije (RAGE) je multi-ligand receptora koji pripada superporodici imunoglobulina [14]. Ostali poznati bijes ligandi su amiloid [15] i S100 [16]. Više eksperimenti sugeriraju da je ligand-RAGE interakcija aktivira NF-kB i mitogen-aktivirane protein kinaze [17-20]. pregled

Mnogi patoloških stanja odnose se na proupalnih svojstva HMGB1. Prethodna izvješća pokazali da HMGB1 igra kritičnu ulogu u endotoksemije [21], akutni pankreatitis, [22], sindrom akutnog respiratornog distresa [23], neke autoimune bolesti [24], cerebralne ishemije ozljede [25], te ishemijsko-reperfuzijske (IR) ozljede jetre [26], srce [27] i bubrega [28]. S obzirom na gastrointestinalni trakt, HMGB1 je otežavajući faktor u eksperimentalnom kolitisu [29,30], i ne-steroidnim anti-inflamatornim lijekom inducirane tankog crijeva ozljede [31]. pregled

U ovom trenutku, uloga HMGB1 u zacjeljivanju rana je nejasno, iako je njegova sposobnost da izazove upalu je dobro dokumentirano, kao što je gore opisano. U probavnom području, nema studija ispituje ulogu HMGB1 u zacjeljivanju rana. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati ulogu HMGB1 u čira na želucu ozdravljenja. Istraživali smo ulogu HMGB1 u procesu ozdravljenja pomoću uspostavljeni eksperimentalni kroničnog želučanog čira modela stvorena u glodavaca lokalnom primjenom octene kiseline iz želuca seroznog strane. Model usko oponaša ljudski peptički vrijed želuca u histologiju i morfologije [32]. Također smo istraživali da li HMGB1 utječe ulkusa ozdravljenje kroz TLR2, TLR4, ili bijes. pregled

Materijali i metode

Životinje pregled

TLR2- i TLR4-knockout (KO) miševa, koji su izvorno nastale Dr. S. Akira (Sveučilište Osaka, Osaka, Japan ) i povratno križaju 8 puta na jedan C57BL /6 podlozi, dobivene su iz orijentalne Bioservice, Inc. (Kyoto, Japan). RAGE-KO miševi, koji su povratno križaju na jedan C57BL /6 pozadini, izvorno generirani su i dar od Dr. Y. Yamamoto (Medicinski fakultet Sveučilišta Kanazawa, Kanazawa, Japan). Divljeg tipa C57BL /6 miševa nabavljeni su od Charles River Japan, Inc. (Atsugi, Japan) kao kontrolna soja TLR2, TLR4 KO KO i RAGE KO miševa. Korišteni su slobodnog od specifičnih patogena 12 tjedana stari muški životinje. Sve životinje su smještene u polikarbonata kaveze s papira čip posteljinu. Kavezi su se nalazila u klimatiziranoj sobi s biohazard 12-satnom ciklusu svjetlost-tama a. Svi eksperimentalni postupci su odobreni od strane Care odbora životinja u Osaka City University Graduate School of Medicine (broj dozvole: 11006). Sve su operacije izvedene pod izoflurana i pripravljeni su svi napori kako bi se smanjili patnje. Pregled

Eksperimentalna Indukcija čir

želuca inducira postupkom opisanim u detalje na drugom mjestu [33] uz manje modifikacije , Ukratko, pod anestezijom, a trbusi životinje su inciziran želudac je bio izložen. Polipropilenska cijev (4 mm u promjeru) se stavi na seroznog strani želuca. 80-ul alikvota 60% -tne octene kiseline doda se u epruvetu, koja se čuva u dodiru s seroznog površinom 30 s. Nakon neposrednog uklanjanja octene kiseline iz cijevi aspiracijom, želudac se vratio u svoj prvobitni položaj, a trbuh je bio zatvoren. Prethodna izvješća pokazala da je veličina čira na želucu dosegla maksimum na dan 3 ili 4, nakon indukcije ulkusa, a nakon toga postupno smanjio [32,34]. Faza izlječenja eksperimentalnog čira na želucu počinje na dan 4 nakon indukcije čira pregled

Eksperimentalne grupe

Da se istraži učinak egzogenog HMGB1, miševi su primili intraperitonealne injekcije ljudskog rekombinantnog HMGB1 (rHMGB1,. 100 -1000 g /kg, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO) ili nosača (slana otopina puferirana fosfatom) dva puta dnevno, počevši od 4 dana poslije indukcije čira (od dana 4 do 9. dana). pregled

Zatim učinak immunoneutralization HMGB1 na želučanu zarastanja čira je određena. Miševima intraperitonealno neutralizirajući anti-pileći HMGB1 poliklonska antitijela (5 mg /kg; Shino-Test Corporation, Tokyo, Japan) ili normalnim pile IgY (5 mg /kg, Sigma-Aldrich Co.) počevši od 4 dana nakon indukcije ulkusa ( od dana 4 do 9. dana). Osim toga, kako bi potvrdili učinak oslobađanja inhibitora HMGB1, etil piruvat ili vozilu su injektirane dva puta na dan, počevši od 4. dana nakon indukcije ulkusa. Pregled

Osim toga, kako bi se utvrdilo receptor odgovoran za HMGB1 vezane čira na želucu iscjeljivanje želučanih čireva su inducirani u TLR2, TLR4 KO KO i RAGE KO miševa, sa ili bez intraperitonealnom injekcijom od 1000 ug /kg dva puta dnevno rHMGB1 početku 4. dan nakon indukcije ulkus. pregled

želudac je uklonjen i veličina ulkus se mjeri na dan 6 i 9, nakon indukcije ulkus. Čir veličine izražena je kao indeks ulkus, proizvod iz maksimalne duljine i minimalne duljine (tj maksimalna duljina je pomnožen minimalnu duljinu). Ispitivanja su provedena upotrebom 4-8 uzoraka. Uzorci želučanog tkiva obrađeni su za daljnju procjenu. Pregled

mRNA medijatora upale u želučanoj tkiva određena u realnom vremenu Kvantitativna reverznom transkripcijom lančana reakcija polimeraze (RT-PCR) pregled

stvarnost vrijeme kvantitativni RT-PCR je izveden kako je prethodno opisano [35]. Ukratko, ukupna RNA je izolirana iz crijevnog tkiva pomoću ISOGEN kit (Nippon Gene Co, Ltd, Tokyo, Japan) u skladu s uputama proizvođača. Komplementarna DNA je stekla pomoću velikog kapaciteta RNA-za-cDNA Kit (Life Technologies Corporation, Carlsbad, CA) u skladu s uputama proizvođača. U stvarnom vremenu kvantitativni RT-PCR analize provedene su pomoću Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR sustava i softvera (Life Technologies Corporation). Reakcijska smjesa je pripravljen u skladu s protokolom proizvođača primjenom Taqman Fast Universal PCR 'glavne smjese (Life Technologies Corporation). Toplinskim uvjetima biciklističke bili su kako slijedi: 45 ciklusa pojačanja na 95 ° C tijekom 15 s, te 60 ° C tijekom 1 min. Ukupna RNA podvrgnuta je u stvarnom vremenu kvantitativnog RT-PCR za mjerenje ciljnih gena pomoću TaqMan gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze reagensa za kontrolu (Life Technologies Corporation), koji su korišteni kao interni standard. Ekspresija mRNA koja kodira HMGB1, TLR4, RAGE, faktora rasta vaskularnog endotela (VEGF), interleukin-1 beta (IL-1β), i TNFa u čirevima i normalnim želučanom tkivu kvantitativno je utvrđena pomoću RT-PCR i standardizirani na gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze razine mRNA. Izraz svakog mRNA označen je kao omjer, u odnosu na srednje vrijednosti u normalnim želučanom tkivu. Primeri i sonde koriste za RT-PCR prikazani su u tablici 1. pregled Genea
primer i sonda pregled, TNF-αPrimer (naprijed) 5'-TCATGCACCACCATCAAGGA-3 'klica (reverse)5’-GAGGCAACCTGACCACTCTCC-3’Probe5’-FAM-AATGGGCTTTCCGAATTCACTGGAGC-TAMRA-3’IL-1βPrimer (Naprijed) 5'-ACAGGCTCCGAGATGAACAAC-3 'klica (reverse)5’-CCATTGAGGTGGAGAGCTTTC-3’Probe5’-FAM-GAAAAAGCCTCGTGCTGTCGGACCCATAT-TAMRA-3’RAGEPrimer (Naprijed) 5'-CCACTGGATAAAGGATGGTGCA-3 'klica (reverse)5’-CAGCTATAGGTGCCCTCATCCTC-3’Probe5’-FAM-AGCCCTGTGCTGCTCCTCCCTGAG-TAMRA-3’TLR2Primer (Naprijed) 5'-CTCTGGAGCATCCGAATTGC-3 'klica (natrag) 5'-GCTGAAGAGGACTGTTATGGC-3'Probe5'-CCTCAGACAAAGCGTCAAATCTCAGAGGA-TAMRA 3'TLR4Primer (naprijed) 5'-GGCTGGATTTATCCAGGTGTGA-3' klica (reverse)5’-CTGTCAGTATCAAGTTTGAGAGGTG-3’Probe5’-AGCCATGCCATGCCTTGTCTTCAATTGT-TAMRA-3’HMGB1Primer (Naprijed) 5'-CAGCCATTGCAGTACATTGAGC-3 'klica (natrag) 5'-TCTCCTTTGCCCATGTTTAGTTG-3'Probe5'-GACAGAGTCGCCCAGTGCCCGTCC-TAMRA 3'VEGFPrimer (naprijed) 5'-TCCGCAGACGTGTAAATGTTC-3' klica (natrag) 5'-TTAACTCAAGCTGCCTCGCCT- 3'Probe5'-FAM-TGCAAAAACACACAGACTCGCGTTGC-TAMRA 3'Table 1. početnica i proba.
CSV Preuzmite CSV

imunohistokemijsku i imunofluorescencija bojenja pregled

uzorci tkiva su fiksirani s 0.1 M fosfatnog pufera (pH 7.4) koji je sadržavao 4% -tni formaldehid. Uzorci su uklopljena u parafin, te serijski 5 um debele sekcije su postavljene na stakalca silaniziranog (Dako, Tokyo, Japan). Uzorci su uronjene u otopinu od 3% H _{<2O pod> 2 u apsolutnom metanolu tijekom 5 minuta kako bi se inhibirala Aktivnost endogene peroksidaze, a zatim inkubirane u 5% obranog mlijeka za 10 min. Hematoksilinskom i eozinskom bojenju je provedena za morfološka opažanja. Kunić monoklonsko anti-HMGB1 antitijelo (razrijeđen 1: 250, Abcam, Cambridge, MA) se primjenjuju kao primarnim antitijelima i inkubirano preko noći na 4 ° C s uzorcima. Sekundarna protutijela (Histofine Simple Stain MAX peroksidaze kit; Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Japan) je inkubirana sa uzorcima 1 sat u skladu s uputama proizvođača. Imunoreaktivnost vizualizira se obradom odjeljke s Histofine Simple Stain i diaminobenzidin otopine (Nichirei bioznanosti Inc.). Uzorci su zatim negativno hematoksilinom. Sljedeći, TLR2, TLR4 i RAGE bila je određena pomoću metode imunofluorescencije. Primarna antitijela se koriste u imunofluorescencije bojenja uključen mišji monoklonalno antitijelo protiv TLR2 (razrijeđen 1: 200; Abcam), monoklonsko antitijelo miša protiv TLR4 (razrijeđen 1: 200; Abcam), i štakora monoklonalno antitijelo protiv RAGE (razrijeđeno 1: 250; Abcam). Uzorci tkiva, koji su pripravljeni kao što je gore opisano, su inkubirani preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelima, a zatim reagira s odgovarajućim fluorescentnih boja-konjugiranih sekundarnih antitijela (Abcam) za 2 h. Uzorci su ispitani na konfokalnom mikroskopu opremljen s argonom i argonom-kripton lasera izvora. pregled}

Mjerenje serum HMGB1 razina

Blood (1000 ul) uzorci su dobiveni u cijevima za odvajanje seruma punkcijom srca. Nakon centrifugiranja pri 3.000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta, a serum je sakupljen i pohranjena na -80 ° C. Razine u serumu od HMGB1 mjere se korištenjem HMGB1 sendvič ELISA kita (Shino-Test Corporation) u skladu s uputama proizvođača. pregled

Mjerenje mijclopcroksidazc (MPO) aktivnost pregled

Metode za mjerenje djelovanja MPO su detaljno opisane drugdje [36]. Ukratko, uzorci se homogenizira u 50 mM kalij-fosfatnog pufera (pH 6,0) koji sadrži 0,5% heksadeciltrimetilamonijev bromid (Sigma Chemical Co.). Suspenzija je centrifugirana i MPO aktivnost u rezultirajućeg supernatanta se analizira spektrofotometrom. Jedna jedinica aktivnost MPO je definirana kao količina enzima koja razgrađuje 1 umol peroksid /min na 25 ° C. Rezultati su izraženi kao jedinice po gramu želučanog tkiva. pregled

Statistička analiza pregled

Vrijednosti su izražene kao srednja vrijednost ± standardna pogreška srednje vrijednosti (SEM). Jednosmjerna analiza varijance (ANOVA) korišten je za testiranje značajnosti razlika između grupa tretmana znači, a rezultati su analizirani s Fishera zaštićenom bar-značajna-razlika test. P-vrijednosti manje od 0,05 smatrane su statistički značajnima. pregled

Rezultati pregled

Vrijeme motrenja čira na želucu Liječenje pregled

Da bi se procijenila proces ozdravljenja želučanog ulkusa, eksperimentalni želuca izazvana je topikalna primjena octene kiseline iz želuca seroznog strani , Ulceri je evaluiran mikroskopski (Slika 1A, 1B) i makroskopski. Veličina čireva dosegnuo maksimum na dan 4 i smanjena tijekom vremena nakon toga (slika 1C). MPO aktivnost (Slika 1D) i ekspresija TNFa (slika 1E) i IL-1 (slika 1E), mRNA u čirevima želučanom tkivu i izdužen na dan 4 i njihove razine bile su više u čirevima tkivu nego u normalnom želučanom tkivu cijeloj ispitni rok. Ulceracija također povišena ekspresija VEGF mRNA (Slika 1F). pregled

HMGB1 ekspresija nakon ulceracije

Sljedeći ocjenjuje da li HMGB1 je bio uključen u želučanog ulkusa ozdravljenja. Razine HMGB1 mRNA u želučanom tkiva (slika 2a) i serumske razine HMGB1 (slika 2B) dostigla svoj maksimum na dan 4. Razine HMGB1 mRNA bila gotovo konstantna tijekom razdoblja ispitnog, dok su serumske razine HMGB1 pao na normalnu razinu 6 dana nakon indukcija čira. Imunohistokemijski, ulceracija inducirana istaknuto citoplazmatsku bojenje HMGB1 u epitelnim stanicama, naročito u područjima s ozlijeđenom (slika 2c, 2d). Nasuprot tome, u netaknutom želučane sluznice, HMGB1 lokalizacija je bila ograničena na unutar jezgre epitelnih stanica (Slika 2e).

Utjecaj egzogenog HMGB1, HMGB1 Immunoneutralization, a inhibicija HMGB1 priopćenju čira na želucu iscjeljivanje Netlogu

ekspresija mRNA i aktivnost MPO su ocijenjeni na dan 6, a indeks ulkus, procijenjena je na dan 9, navodi se u studiji, naravno vremenom. Miševima je aplicirana rHMGB1 ili anti-HMGB1 antitijelo intraperitonealno nakon indukcije ulkus. Davanje rHMGB1 u dozi od ili 100 ug /kg ili 1000 ug /kg, značajno potisnut želučanog zarastanja čira (slika 3A), koji je povezan s povećanom aktivnost MPO (slika 3B) i ekspresiju TNFa mRNA u čirevima tkivima (Slika 3C). Nasuprot tome, HMGB1 neutralizirajuća antitijela promoviraju zarastanja čira (Slika 4A) sa smanjenim aktivnost MPO (slika 4B) i ekspresiju mRNA TNFa (slika 4c). Komplicira učinak egzogenog rHMGB1 na želučani ulkus ozdravljenja je otkazan, istodobnom anti-HMGB1 antitijela (slika 4F). Ekspresija VEGF mRNA nije bio pod utjecajem tretmana s bilo rHMGB1 (Slika 3D, 3E) ili anti-HMGB1 antitijela (Slika 4D, 4E). U normalnom želučanog tkiva, primjena rHMGB1 ili anti-HMGB1 također nije imala utjecaj na ekspresiju citokina ili aktivnost MPO (podaci nisu prikazani). Nadalje, primjena etil piruvat, inhibitora HMGB1 izdanju, izrazito promovira ulkusa ozdravljenje, u usporedbi s liječenjem vozila. Liječenje je u pratnji suzbijanje izražavanja TNFa mRNA (podaci nisu prikazani). Pregled

Uloga TLR2, TLR4 i bijes u čira na želucu iscjeljivanja Netlogu

Da bi istražili da li TLR2, TLR4 i RAGE doprinose na HMGB1 posredovane čir na želucu rana, eksperimentalni čireva želuca su izazvani u TLR2 KO, TLR4 KO, bijesa KO i kontrolnih miševa divljeg tipa. TLR4 i nedostatak RAGE promovira stvaranje čira na želucu i spriječio povećanje ekspresije mRNA TNFa nakon ulceracije, a nedostatak TLR2 utjecati ni indeks ulkus niti ekspresiju TNFa mRNA (Slika 5A, 5B). Primjena egzogenog HMGB1 utjecao ni indeks ulkus niti izražavanje TNFa mRNA u bilo TLR4 KO ili bijes KO miševa (Slika 5C-5f). Primjena egzogenog HMGB1, međutim, odgođeno ulkusa rana u miševa divljeg tipa i manje izraza TNFa mRNA (Slika 3). pregled

Izražavanje TLR2, TLR4 i RAGE tijekom čira na želucu iscjeljivanje Netlogu

Sljedeći istraživali ekspresiju mRNA i imunoreaktivnost TLR2, TLR4 i bijes u miševa divljeg tipa. Značajan doreguliranje TLR2 mRNA je uočena nakon indukcije čira (Slika 6A). TLR2 imunoreaktivnost je najčešće u upalnim stanicama (slika 6b). Ekspresija mRNA TLR4 nije utjecao na indukciji ulkus (Slika 6c). TLR4 imunoreaktivnost uočena je u apikalni dio epitela sluznice na rubu ulkus, au nekim upalnih stanica u ulkus krevetu (Slika 6D). Pregled

zabilježen je značajan up-regulacija bijesa mRNA na dan 9 nakon indukcija čira (Slika 6E). RAGE imunoreaktivnost je najčešće u upalnim stanicama, na rubu ulkusa kreveta i na vaskularne endotelne staničnu membranu (slika 6f). Pregled

Bojenje čirevima tkiva TLR4 KO ili RAGE KO miševa s anti-antitijelo TLR4 ili anti-RAGE antitijelo, odnosno nisu otkrivene pozitivne signale, što potvrđuje specifičnost tih protutijela (podaci nisu prikazani). pregled

Rasprava pregled

U ovom istraživanju, pokazali smo da je egzogeni HMGB1 kašnjenja čir želuca rana, dok inducira TNFa ekspresiju i aktivnost MPO. S druge strane, immunoneutralization HMGB1 ili inhibira oslobađanje HMGB1 potiče ulkusa ozdravljenje, dok smanjenje TNFa ekspresiju i aktivnost MPO. Osim toga, TLR4 i nedostatak RAGE promiče ulkusa ozdravljenje, a egzogeni HMGB1 ne odgađa ulkusa ozdravljenje u TLR4 KO i bijes KO miševa. Ovi rezultati ukazuju da HMGB1 je otežavajući faktor za želučane zarastanja čira koji djeluje kroz TLR4- i RAGE ovisnih puteva. Prema našim saznanjima, ovo je prvo izvješće pojasniti ulogu HMGB1 u zacjeljivanju rana u probavnom traktu. pregled

Nekoliko studija obratio ulogu HMGB1 u zacjeljivanje rana kod razlikuje od gastrointestinalnog trakta organa, ali rezultati ovih studija su kontroverzni [37-40]. U skladu s našim rezultatima, neke studije su pokazale da HMGB1 ima inhibicijski učinak na zacjeljivanje rana [37,38]. Zhang et al. pokazala je da HMGB1 narušava Rez zacjeljivanje rana smanjenjem reparativni odlaganje kolagena pomoću RAGE [37]. Goova et al. pokazali su da blokiranje bijesa liganada kao što su dob i HMGB1 pomoću topljivi oblik receptora za tu dob (sRAGE), ubrzava zacjeljivanje ulkusa i smanjuje razinu citokina [38]. Prethodna istraživanja pokazala su da prekomjerna upala smanjeno zacjeljivanje rana. Na primjer, naša ranija istraživanja pokazala da TNFa Prekomjerna ekspresija i prekomjerne infiltracije neutrofila kompliciraju čimbenici u formiranju i liječenje čira na želucu [41]. Nadalje, u drugom modelu popravka tkiva, Goren et al. pokazali su da prekomjerna neutrofila i makrofaga infiltracija s TNFa prekomjerna ekspresija inhibira zacjeljivanje ozljeda miša kože [42]. Prema tome, moguće je da HMGB1 odgodi želučanog čira iscjeljenje TNFa-aktivirane upalnih odgovora. pregled

S druge strane, neke in vitro studije tvrde da HMGB1 i njegovi receptori su neophodni za zacjeljivanje rana [39,40]. Staraino et al. pokazali su da HMGB1 ubrzava proces zacjeljivanja rana i regeneracija jačanjem migraciju kožnih fibroblasta i keratinocita [39]. HMGB1 također potiče zacjeljivanje rana 3T3 fibroblasta inducirajući proliferaciju i migraciju stanica kroz aktivaciju bijesa /izvanstaničnim signalom-regulirane kinaze [40]. Jer su ti in vitro studije provedeno u odsutnosti upalnih stanica, razlike u eksperimentalnih metoda može uzrokovati nejednoliku zaključaka o ulozi HMGB1 u zacjeljivanju rana, pregled

VEGF, jak angiogenetski faktor rasta igra važnu uloga u čira na želucu ozdravljenje [43,44]. Prethodna izvješća su pokazali da HMGB1 induciraju ekspresiju VEGF u nekoliko tkiva i kod životinja [45-47]. Međutim, u ovoj studiji niti rHMGB1, niti anti-HMGB1 antitijela utječe na ekspresiju VEGF u ulceroznim tkivu. Razlog razlikama između naših nalaza i onih ranijih istraživača nije jasno, ali to može biti povezano s upotrebom različitih organa i eksperimentalnim modelima. pregled

Postoje 2 mogući izvori izvanstaničnog HMGB1: pasivna izdanje iz nekrotične stanice [48] i aktivna sekrecija iz upalnih stanica [5]. U ovom istraživanju, HMGB1 imunoreaktivnost uočena je u citoplazmi kao jezgru, što sugerira da nekrotične stanice su izvor HMGB1. Želučani HMGB1 razine mRNA povećao tijekom zarastanja čira, sugerirajući da upalne stanice proizvodnju i puštanje HMGB1. Kolektivno, porast serumskog HMGB1 rezultiralo je zbog pasivnog puštanje iz ozlijeđenih stanica na želuca i aktivnog izlučivanja iz upalnih stanica. pregled

serumu razine HMGB1 povećao nakon indukcije čira na želucu, ali je odbio u kasnoj fazi ozdravljenja, iako je izraz HMGB1 i TNFa dalje je visoka. Ovi podaci podići mogućnost sustavne HMGB1 hvatanja sustava. U tom smislu, postojanje HMGB1 veznog proteina je bio prijavljen. Trombomodulin, stanična površina glikoprotein je jedan primjer HMGB1 veznog proteina. Rekombinantni humani topljivi trombomodulin inhibirali porast HMGB1 plazme inducirane lipopolisaharida u modelu štakora [49] i vezan na HMGB1 preko svog lecitinske domene [50] kako bi se spriječilo HMGB1 komunikaciju s drugim receptorima [51]. U kliničkim primjenama, trombomodulin je također koristan u bolestima HMGB1 povezanih i stanja kao što su sepsa, zbog njegovih anti-HMGB1 svojstva [52]. sRAGE, naći u opticaju, još je jedan primjer HMGB1 veznog proteina. sRAGE je topljiv oblik RAGE; djeluje kao mamac da se spriječi međudjelovanje stanica površinskog RAGE njegovim ligandima, kao HMGB1 [53]. U ovom istraživanju, takvi stupičarenje sustavi mogu također igraju zaštitnu ulogu u sprječavanju širenja upale, promičući na taj način zarastanja čira. pregled

Poznato je da su mnogi pacijenti peptički ulkus zaraženo Helicobacter pylori pregled. Iako je u ovom istraživanju nismo istražili ulogu HMGB1 u čira na želucu ozdravljenje u miševa zaraženih s H. pylori pregled, klinička i eksperimentalna istraživanja sugeriraju da je štetan učinak HMGB1 na želučani ulkus ozdravljenja će biti izraženiji u bolesnika s H. pylori
infekcije nego u onih bez nje. Mi smo ranije pokazali da je H. pylori pregled infekcija povećava neutrofila infiltraciju u čirevima tkiva u mongolskih gerbila [54]. Shimizu et al. Također je pokazao da neutrofili i makrofagi infiltrirati čirom margine na viši stupanj u bolesnika s H. pylori
infekcije nego u onih bez infekcije [55]. Velika količina HMGB1 je, dakle, vjerojatno prisutna u čirevima tkivo zaraženo s H. pylori
, jer bi se luče tih upalnih stanica. Nadalje, Radin et al. izvijestio da Vaca, glavni virulencije faktor organizam, uzrokuje programiranu nekrozu želučanog epitelnim stanicama i naknadno oslobađanje HMGB1 [56]. Dakle, očekujemo da će biti štetni za HMGB1 na zarastanja čira će biti više dolazi do izražaja u H. pylori
-infected pacijenata. pregled

TLR2, TLR4 i RAGE, koji posreduje proupalnih odgovora, koji su obično poznati HMGB1 receptore. Naši rezultati jasno pokazuju da TLR4 i RAGE igraju ključne uloge u želučanog ulkusa ozdravljenja. Taj rezultat je u skladu s prethodnim nalazima na upalnih odgovora induciranih HMGB1. Jedan od najatraktivnijih modela koji uključuju interakciju između HMGB1 i tih receptora je I-R ozljede. U jetre ozljede I-R, TLR4-manjkav miševi pokazuju manje vrijednosti jetre I-R štete; šteta u TLR4-deficijentnih miševa nije bio pod utjecajem rHMGB1 ili anti-HMGB1 antitijela [26]. Osim toga, blokiranje RAGE zaštićeni od hepatocelularnog smrti i nekroze u jetre I-R modela ozljede [57]. U modelu srčane ozljede I-R, Andraševu et al. pokazala je da RAGE-manjkav miševi prikazuju samo neznatno upala uslijed srčane ozljede I-R; upala nije utjecao na indukciji rHMGB1 [27]. Ovi rezultati ukazuju na to da TLR4-HMGB1 i bijesa-HMGB1 interakcije imaju ključnu ulogu u I-R ozljede, iako je potrebno uzeti u obzir razlike u svakom organu. Drugi uspostavljen model sistemske upale, kao što su sepsa [5,8,58]. U eksperimentalnom modelu unutar trbušne sepse Susa et al. su pokazali da interakcija HMGB1-RAGE usko povezana sa sepsom inducirane dijafragme disfunkciju [58]. U in vivo modelu sustavne upale generira injekcijom egzogenog HMGB1, Zoelen et al. pokazali su da HMGB1 potiče otpuštanje citokina, aktivaciju koagulacije i novačenje neutrofila kroz TLR4 i RAGE [8]. Tako, TLR4 i RAGE igraju kritičnu ulogu u patogenezi posredovano HMGB1 povezana putem, uključujući put u našem modelu zarastanja čira. pregled

Naši rezultati pokazuju da TLR2 nema odnos prema čira na želucu ozdravljenja: ulkusa rana u TLR2 KO miševa sličila da je u miševa divljeg tipa. Iako su in vitro studije makrofaga stanične linije pokazuju da TLR2-HMGB1 put izaziva upalne reakcije [6,9], nisu zabilježene in vivo učinci TLR2 na HMGB1 posredovanih bolesti. Dakle, na temelju prethodnih [8] nalaza i našim rezultatima, HMGB1-TLR2 put može igrati sporednu ulogu u popravak i patogenezi ozljede tkiva i upale. pregled

Na kraju, mi smo pokazali da HMGB1 je komplicira čimbenik u procesu liječenje čira na želucu, kao i u drugim patološkim stanjima. Osim toga, mi smo pokazali da HMGB1 inhibira ulkusa iscjeljenje kroz mehanizam koji uključuje TLR4, RAGE i prekomjerne upalnih odgovora. Iako protonske inhibitori pomp najčešće propisane za želučanog ulkusa, tvrdoglav čireva i dalje predstavljati klinički problem. Naše je istraživanje podržava novi koncept za liječenje tvrdoglav želučanog ulkusa, pored inhibitora protonske pomp terapije. pregled

Izvori pregled

Hvala Emi Suzuki Yoshioka za tehničku pomoć. Također bih želio izraziti svoju iskrenu zahvalnost djelatnika Gradskog sveučilišta u Osaki koji su nas podržali. Pregled

• PLoS ONE: Mangiferin ublažava želučanog čira u Ishemija /reperfundira štakora: Uključenost PPAR-gama, NF-kB i Nrf2 /HO-1 Signaling Pathways
• PLoS ONE: Ne Udruga za kavu potrošnja s čir na želucu, čir na dvanaestercu, refluks ezofagitis i ne-erozivnog refluksna bolest: u presjeku studija 8,013 zdravih ispitanika u Japan