Antimikrobielle aktiviteter Eugenol og Cinnamaldehyd mod den humane gastriske patogen Helicobacter pylori

Antimikrobielle aktiviteter Eugenol og Cinnamaldehyd mod den menneskelige gastrisk patogen Helicobacter pylori
Abstrakt
Baggrund
Udryddelse af Helicobacter pylori
er et vigtigt mål at overvinde gastriske sygdomme. Mange regimer findes i øjeblikket, men ingen af ​​dem kunne opnå 100% succes i udryddelse. Eugenol og cinnamaldehyd, der almindeligvis anvendes i forskellige næringsmidler er kendt for at besidde antimikrobielle aktivitet mod et bredt spektrum af bakterier.
Formål
Den foreliggende undersøgelse blev udført for at vurdere in vitro Salg virkninger af eugenol og cinnamaldehyd mod indfødte og standard H. pylori
stammer, deres mindste hæmmende koncentration (MIC) og tidsforløbet dødelige virkninger ved forskellige pH.
Metoder
alt 31 stammer (29 indfødte og en standard stamme af H. pylori
ATCC 26.695 blev en stamme af E. coli
NCIM 2089) screenet. Agarfortyndingsmetoden blev anvendt til bestemmelse af lægemiddel følsomhed mønstre af isolater til de almindeligt anvendte antibiotika og bouillon fortyndingsmetode for testforbindelserne.
Resultater
Eugenol og cinnamaldehyd hæmmede væksten af ​​alle de 30 H. pylori
stammer testet, i en koncentration på 2 mg /ml, i det 9. og 12. timers inkubation hhv. Ved sur pH, blev forøget aktivitet observeret for begge forbindelserne. Desuden har organismen ikke udvikle nogen modstand mod disse forbindelser, selv efter 10 passager vokset med sub-hæmmende koncentrationer.
Konklusion
Disse resultater indikerer, at de to bioaktive stoffer, vi testede kan forhindre H. pylori
vækst i vitro
, uden at erhverve nogen modstand.
Introduktion
Helicobacter pylori
blev først opdaget i 1982 og blev senere fundet at være en vigtig ætiologisk agent for gastritis [1], mavesår [2] og gastrisk malignitet [3]. Det anslås, at halvdelen af ​​verdens befolkning er inficeret med H. pylori
[4]. Talrige kliniske beviser afslører, at udryddelse af H. pylori
resultater i forbedring af gastritis og drastisk nedsætter hastigheden af ​​tilbagefald af gastriske og duodenale sår [5, 6]. H. pylori
transport satser er omkring 80-90% i udviklingslandene [7], med en høj risiko for mavekræft og antibiotiske regimer mod H. pylori
ofte ineffektive i sådanne populationer [8]. Ud over dette, uønskede bivirkninger [9], manglende overholdelse blandt patienterne [10] og omkostningerne ved de antibiotiske regimer [11] er nogle andre faktorer for deres ineffektivitet. Der er derfor behov for at udvikle alternative metoder til at undertrykke /kurere infektionen.
siden oldtiden, krydderier og krydderier er blevet anset uundværlige i den kulinariske kunst, som de anvendes til at give smag fødevarer. Også disse krydderier blev anerkendt for deres fysiologiske og medicinske egenskaber. Det formodes, at den bredspektrede effektiviteten af ​​disse krydderier [12-14], kan give et passende grundlag for nye anti H. pylori
behandlingsformer. Nogle af de epidemiologiske undersøgelser antyder et omvendt forhold mellem forekomsten af ​​kræft i maven (for hvilken H. pylori
infektion er en kendt risikofaktor) og indtaget af Allium grøntsager [15, 16]. Der er rapporter om in vitro
antimikrobielle aktivitet af mange krydderiekstrakter (og ikke deres aktive principper) på H. pylori
[17, 18]. Men lægemiddelstoffer af hvidløg og hvidløg komponenter er blevet prøvet [11, 19].
Eugenol, en phenolforbindelse er den vigtigste komponent i fed (Eugenia caryophillis
) olie. Cinnamaldehyd er et aromatisk aldehyd og vigtigste komponent i bark ekstrakt af kanel (Cinnamomum verum
). Begge disse forbindelser er til stede i æteriske olier af mange planter og er bevist at være aktive mod mange patogene bakterier [20, 21], svampe [21, 22] og vira [14]. Der er for få oplysninger om virkningerne af disse bioaktive forbindelser på H. pylori
. Derfor blev denne undersøgelse foretaget for at evaluere effekten af ​​eugenol og cinnamaldehyd som anti H. pylori
agenter.
Materialer og metoder
H. pylori
stammer
Thirty H. pylori
stammer og én E. coli
stamme (NCIM2089) blev anvendt i undersøgelsen. Tyve-ni stammer, blev udpeget som MS-1 til MS-29 blev isoleret fra gastriske biopsi prøver (15 fra sår på tolvfingertarmen, 10 fra ikke sår dyspepsi og 4 fra mavesår fag), efter informerede samtykke fra patienter, der har gennemgået øvre gastrointestinal endoskopi på Deccan College of Medical Sciences, Hyderabad, Indien. En stamme af H. pylori
(ATCC26695) blev også indbefattet
primær isolering blev udført på Brucella agar (Becton, Dickinson & Co, Sparks, USA). Suppleret med 7% (V /V) fåreblod og antibiotika (Vancomycin, 6 mg /l; Amphoteracin B, 3 mg /l; Polymyxin B, 2500 IU /L; Hi-Media, Mumbai, Indien). Slut-pH af mediet blev indstillet til 7,2. H. pylori
blev identificeret ved sin typiske kolonimorfologi, Gram-farvning, mikroaerofil vækst ved 37 ° C og ved andre biokemiske tests såsom oxidase, katalase og urease. Disse stammer blev opbevaret ved -80 ° C i brucella næringsvæske (Becton, Dickinson & Co, Sparks, USA) indeholdende 10% (V /V) føtalt kalveserum (FCS) og 20% ​​(V /V) glycerol bioaktive forbindelser
Kommercielle præparater af bioaktive forbindelser såsom eugenol og cinnamaldehyd blev brugt i vores eksperimenter. Alle stammer blev podet på Brucella agar suppleret med 7% fåreblod og dyrket i 48 timer under mikroaerobe betingelser. Bakterievækst blev høstet fra pladerne og resuspenderet i sterilt saltvand. Podestoffet var fremstillet til at indeholde ~ 10 8 CFU /ml ved indstilling af suspensionen til at matche McFarland nr-4 turbiditet standard [23].
Antibakteriel aktivitet af standard antibiotika Salg minimale inhibitoriske koncentrationer (MIC) for antibiotika såsom metronidazol, amoxycillin og clarithromycin blev bestemt ved agarfortyndingsmetoden under anvendelse af to fold stigninger (0,016 til 256 ug /ml) på Mueller Hinton agar (MHA) plader suppleret med 7% fåreblod og inkuberet i 3 dage ved 37 ° C i en mikroaerofil kabinet. MIC blev bestemt som den laveste koncentration af antibiotika hæmmer synlig vækst [24] ved hjælp af ~ 10 6 CFU af inokulum.
Antibakterielle aktivitet af eugenol og cinnamaldehyd
Primær screening
Kirby-Bauer disk diffusion følsomhed test blev anvendt til at kontrollere aktiviteten af ​​de bioaktive forbindelser på H. pylori
. Inokulum blev fremstillet som beskrevet tidligere blev inokuleret på MHA suppleret med 7% fåreblod og bioaktive sammensatte diske (fremstillet ved at indlæse de respektive forbindelser i variabel koncentration på de sterile filter paper discs) blev anbragt på til pladerne med de sterile dispenser og inkuberet i mikroaerob atmosfære ved 37 ° C i 3 dage.
Mindste hæmmende koncentration (MIC) af bioaktive forbindelser
Da der ikke var etableret metode til at bestemme den antibakterielle aktivitet af bioaktive forbindelser mod H. pylori
, serielle to fold fortyndinger af eugenol og cinnamaldehyd blev fremstillet i en 5 ml Brucella-bouillon forberedelse (pH-7) med 0,1% dimethylsulfoxid (DMSO; der forbedrer forbindelsesopløselighed) og suppleret med 2,5% føtalt kalveserum (FCS). Vat sat 25 ml koniske kolber med brucella-bouillon fremstillet som ovenfor, blev inokuleret med H. pylori
(~ 10 6 CFU /ml) [11]. Kolberne blev inkuberet i 3-5 dage i en mikroaerofil kabinet med omrystning ved ~ 150 rpm. Efter inkubation blev 100 pi prøver af mediet udpladet på Brucella agar plader suppleret med 7% fåreblod at bestemme de levedygtige tællinger.
Tidsforløb
Tidsforløb levedygtighed studier af de bioaktive forbindelser blev oprettet på samme måde som ovennævnte MIC tests, men bouillon blev udtaget hver time i løbet af de første 4 timer og derefter igen ved 6, 9, 12, 24, 48 og 72 timer for at kontrollere optællingen af ​​levedygtige. H. pylori
ATCC26695 blev anvendt som inokulum til undersøgelsen.
Til sammenligning kendt antibiotikum, såsom amoxycillin blev anvendt, og E. coli
(NCIM2089) blev anvendt som en standard bakteriel kontrol forskellig fra H. pylori
.
virkninger af bioaktive forbindelser på H. pylori
morfologi
til kontrol af effekten af ​​bioaktive stoffer på morfologi af H. pylori
blev slides fremstillet af de ovennævnte prøver af første fire timer, farvet med Giemsa og observeret i immersionsolie.
Måling af baktericid aktivitet ved sur pH
virkningerne af pH på antibakterielle aktiviteter af eugenol og cinnamaldehyd blev udført som tidligere [25, 26] rapporteret. PH af pufferen blev indstillet til 4,00 under anvendelse af 100 mM citratpuffer (pH 5,2) suppleret med 10 mM urinstof, og pH blev justeret til 7,00 ved anvendelse af 10 mM fosfatbuffer (pH 6,8). H. pylori
ATCC26695 (~ 10 7 CFU /ml) blev inokuleret i 5 ml af mediet med 0,1% DMSO til hvilke forskellige koncentrationer af forbindelserne blev tilsat. Alle kolber blev inkuberet ved 37 ° C. Tyve pi af prøverne blev taget ved 0, 15, 30 og 60 minutter efter inokulering at optælle antallet af levedygtige celler.
Test for udvikling af resistens over for bioaktive forbindelser
For at undersøge udviklingen af ​​resistens, fem stammer dvs. ATCC26695, MS-27 (følsom over for alle de tre antibiotika), MS-1 (resistent over for alle de tre antibiotika), MS-8 (resistent over for metronidazol, clarithromycin og følsom over for amoxycillin) og MS-15 (resistent kun metronidazol ), blev dyrket på agar ved sub inhibitoriske koncentrationer (0,25 og 0,5 ug /ml) af eugenol og cinnamaldehyd i 10 passager. Alle forsøgene anført ovenfor blev gentaget tre gange.
Resultater
antibakteriel aktivitet mod H. pylori
MIC'er af antibiotika for H. pylori
blev bestemt. Stamme ATCC26695 var følsom (MIC < 0,016 mg /ml) til alle de testede tre lægemidler. Tyve (66,7%) kliniske isolater (MS1-8, 10, 12, 14 - 17, 20, 23 - 26 og MS28) fra vores laboratorium var resistente over for metronidazol (MIC > 8 ug /ml), 2 (6,7%) kliniske isolater (MS1 & 8) var resistente overfor clarithromycin (MIC > 2 ug /ml) og 1 (3,3%) klinisk isolat (MS1) var resistent over for amoxycillin (MIC > 0,5 ug /ml) [27] (tabel 1) .table en følsomhed af H. pylori
stammer (n = 30) til forskellige antibiotika
antibiotisk
Sensitive (% )
Resistance (%)
Range (pg /ml)
MIC27 (ug /m)
Metronidazol
10 (33,3)
20 (66,7)
< 0,5 - > 256
> 8
Clarithromycin
28 (93,3)
2 (6.7)
< 0,5 - > 256
> 2
Amoxycillin
29 (96,7)
1 (3.3)
< 0,5 - > 256
> 0,5
i den indledende screening, både forbindelser gav ca. 15 mm hæmningszoner til alle de kliniske isolater og standard stamme (H. pylori
ATCC26695). Dette in vitro
antimikrobielle virkning af de bioaktive forbindelser viste, at begge forbindelserne var i stand til fuldstændigt at hæmme væksten af ​​alle stammer (både følsomme & resistent) i en koncentration på 2 pg /ml. For E. coli
(NCIM-2089), MIC af eugenol og cinnamaldehyd var 1 pg /ml.
Tidsforløb
Da begge forbindelserne var aktive ved en koncentration på 2 ug /ml, undersøgte vi dræbe kurve tidsforløbet for både forbindelserne i forskellige koncentrationer, dvs. 1 ug /ml, 2 pg /ml og 4 ug /ml. Eugenol inhiberede fuldstændigt væksten af ​​H. pylori
ATCC 26.695 ved 2 ug /ml koncentration i 9 timer inkubation. Væksten var fuldstændigt inhiberet på kun 6 timer, når MIC blev fordoblet (4 ug /ml). Nogen inhibering af vækst blev observeret ved MIC for 1 ug /ml, hvor op til 6 th time blev observeret et fald på ~ 1,6 Log så bagefter var der ingen virkning af forbindelsen på bakterien (figur 1). Cinnamaldehyd inhiberede ATCC26695 helt på 2 ug /ml i 12 timer og i 9 timer ved dobbelt MIC (4 ug /ml). Men ved halvdelen af ​​MIC (1 pg /ml), blev der observeret en lille effekt op til 3 rd timer, og der var et fald på 0,6 Log uden efterfølgende hæmmende effekt (figur 1). Figur 1 Time kursus levedygtighed studier af eugenol og cinnamaldehyd med H. pylori ATCC26695. ATCC26695 blev udsat for eugenol ved koncentrationer på (◆) 4 ug /ml, (■) 2 ug /ml, (▴) 1 ug /ml, (●) kontrol, og at cinnamaldehyd (◊) 4 ug /ml, (▫ ) 2 pg /ml, (△) 1 pg /ml. detektionsgrænse, blev vist med en ret linie. Kontrollerne blev opretholdt med 0,1% DMSO.
Tidsforløbet dødelige virkning af bioaktive forbindelser på E. coli
(NCIM-2089) er blevet undersøgt ved tre forskellige koncentrationer (1 pg /ml, 2 pg /ml & 0,5 ug /ml). Ved 1 mg /ml, eugenol hæmmede E. coli
efter 1 times inkubation mens cinnamaldehyd hæmmede E. coli
efter 75 minutters inkubation (figur 2). Figur 2 Virkninger af eugenol og cinnamaldehyd på væksten af ​​E. coli NCIM-2089. E. coli
blev udsat for eugenol ved koncentrationer på (◆) 2 ug /ml, (■) 1 ug /ml, (▲) 0,5 ug /ml, (●) kontrol, og at cinnamaldehyd i koncentrationer på (◊ ) 2 pg /ml, (□) 1 ug /ml, (△) 0,5 ug /ml. detektionsgrænse, blev vist med en ret linie. Kontrollerne blev opretholdt med 0,1% DMSO. Hus Til sammenligning af effektiviteten af ​​vores bioaktive forbindelser over for H. pylori
undersøgte vi effekten af ​​en fælles antibiotikum (amoxycillin) i forskellige koncentrationer, såsom 1 ug /ml, 0,1 pg /ml og 0,01 mg /ml med en MIC på < 0,016 ug /ml. Der var ingen hæmning af H. pylori
set i en koncentration på 0,01 ug /ml. Men inhibering blev bemærket ved en koncentration på 0,1 pg /ml op til 4 th times inkubation. Imidlertid blev bakterien fuldstændigt inhiberet ved en koncentration på 1 ug /ml, af 12 th times inkubation (figur 3). Figur 3 Virkning af amoxicillin på væksten af ​​H. pylori (ATCC26695). ATCC26695 blev udsat for i koncentrationer på (◊) 1 pg /ml, (■) 0,1 ug /ml, (▴) 0,01 ug /ml, (○) kontrolsystemer. detektionsgrænse, blev vist med en ret linie.
H. pylori
morfologi
Mikroskopisk observation af objektglas viste, at ved høje koncentrationer af både de bioaktive forbindelser (4 ug /ml) og efter 4 timers inkubation ~ 70% af cellerne antages coccoid former med færre spiralformede organismer.
Virkning af de bioaktive forbindelser på væksten af ​​H. pylori
i buffere ved sur pH
levedygtighed stamme ATCC 26.695 ved sur pH var undersøgt ved anvendelse eugenol og cinnamaldehyd i forskellige koncentrationer (2 ug /ml, 4 pg /ml og 1 ug /ml). Som vist i figur 4, både forbindelserne afslørede forøget aktivitet ved sur pH (pH-4,0) og en dosisafhængig baktericid aktivitet blev også observeret. Ved en koncentration på dobbelt MIC (4 ug /ml), blev eugenol fundet fuldstændigt at inhibere bakterierne ved ca. 1 times inkubation. Cinnamaldehyd også afsløret baktericid aktivitet på lignende måde, men hæmmede ikke organismen totalt (efter en times inkubation var der en forskel på 0,2 log). For begge forbindelserne, sammenlignet ved sur og neutral pH, fandt vi en Log forskel på 1,5 efter én times inkubation ved MIC på 2 pg /ml. Figur 4 Virkning af eugenol og cinnamaldehyd på væksten af ​​H. pylori (ATCC26695) ved lav pH. ATCC26695 blev udsat for eugenol ved pH 4 (fuldt optrukne linier) og pH 7 (stiplede linjer) ved koncentrationer (◆ eller ◊) 4 ug /ml, (■ eller □) 2 ug /ml, (ß eller △) 1 ug /ml, ( ●) kontrol. detektionsgrænse, blev vist som en lige linje. Kontrollerne blev opretholdt med 0,1% DMSO.
Test for modstandsdygtighed over for eugenol og cinnamaldehyd
Vi undersøgte, om H. pylori
ville udvikler resistens over for de bioaktive stoffer. Udvalgte H. pylori
stammer (ATCC26695, MS-27, MS-1, MS-8 og MS-15) ikke udvikler resistens over for både de bioaktive stoffer ved sub inhibitoriske koncentrationer (0,25 og 0,5 ug /ml) selv efter 10 passager.
diskussion
udryddelse af H. pylori
med monoterapi er vanskelig og ofte resulterer i dårlig klinisk resultat [28]. I øjeblikket en protonpumpehæmmer (PPI) baseret tredobbelt behandling bliver brugt. Selvom det er at have en succesrate på 80 til 90% [29], problemer som manglende og kontraindikationer behandling for nogle patienter er almindelige. Endvidere er det største problem i behandling af H. pylori
infektion hurtigt voksende lægemiddelresistens ved behandling med forskellige antibiotika [30]. På grund af forekomsten af ​​antibiotikaresistente H. pylori
stammer søgen efter sikre og effektive ikke-antibiotiske midler, er af afgørende betydning.
I indiske traditionelle medicinske system, er en række planter og planteprodukter kendt for at besidde potent medicinske egenskaber, hvilket tyder på, at planter, planteprodukter og ekstrakter kan være nyttige for specifikke medicinske tilstande. Derfor har man i vores bestræbelser på at identificere nyere forbindelser, der kan hæmme H. pylori
vækst, vi testede eugenol og kanelaldehyd. Disse forbindelser er allerede vist sig at inhibere 10 forskellige multi lægemiddelresistente patogene bakterier, såsom E. coli
, Staphylococcus
, Proteus
, Klebsiella
, Enterobacter
, og Pseudomonas
isolerede fra humane individer [20, 21]. I vores undersøgelser, eugenol og cinnamaldehyd fuldstændig hæmmet alle stammer (både følsom & resistent) i en koncentration på 2 pg /ml. Denne hæmmende koncentration er meget mindre i forhold mod de tidligere rapporterede MIC {allicins: 6-12 pg /ml, hvidløg olie: 8-32 pg /ml [11] og ajoenes: 10-25 pg /ml [31]}. Vores forbindelser viste sig også at være mere potent end thiosulfinate {40 ug /ml [19]}, vinyldithiins {< 100 ug /ml [31]}, epigallocatechingallat {50-100 ug /ml [32]} og hvidløgspulver { 250 mg /ml [11]}. Salg In tidsforløb levedygtighed undersøgelser, fandt vi, at eugenol og cinnamaldehyd hæmmede H. pylori
ATCC26695 ved 2 pg /ml koncentration inden for 9 og 12 timers inkubation hhv. Højpotente virkninger af nogle essentielle olier af citrongræs på H. pylori
tidligere er blevet beskrevet [26]. Dog kan vores observationer være mere præcis med, at vi brugte aktive principper og ikke ekstrakterne eller olier, som anvendes af Ohno et al., [26]. Disse essentielle olier kan indeholde ukendte stoffer, der kan give synergistiske, inhiberende virkninger. Eugenol i vores studier viste sig at være en potent antimikrobielt end de æteriske olier af Ohno og kolleger [26] mens effekten af ​​cinnamaldehyd nogenlunde til de olier, der anvendes af dem. Endvidere vore forbindelser var mere potent end den fælles antibiotikum amoxycillin, som inhiberede H. pylori
ATCC26695 ved 12 th time (svarende til kanelaldehyd) henviser eugenol inhiberede mikrobiel vækst på 9 th time af selve inkubation på sit mindste inhiberende koncentration. Amoxycillin fandtes fuldstændigt at inhibere bakterier ved en højere koncentration (1 ug /ml), end det er minimal inhiberende koncentration (0,016 ug /ml) (figur 3). Som H. pylori
bor i maven, hvor pH-niveauer er lavere end 3,0, er det vigtigt at kontrollere aktiviteten og stabiliteten af ​​en forbindelse ved sur pH. I vores undersøgelse H. pylori
isolater overlevede ved pH 4,0, trods nogle rapporter, der viser H. pylori
overlevelse ved pH-3,0 [25], og baktericide virkninger af bioaktive forbindelser viste sig at være stærkere selv ved lave pH. Adskillige midler, der har baktericide virkninger mod H. pylori
er afhængige af pH (f.eks Ecabet natrium er aktiv i surt miljø [25] og te cathechin er aktiv ved alkalisk pH [33]).
Endvidere har vi fandt, at organismen ikke udvikle nogen modstand mod forsøgsforbindelserne selv efter 10 på hinanden følgende passager vokset med sub-hæmmende koncentrationer (0,25 og 0,5 ug /ml) [21], mens H. pylori
stammer erhvervet resistens over for amoxycillin og clarithromycin efter 10 på hinanden passager som rapporteret tidligere [26, 34]. Desuden er disse bioaktive stoffer havde tilsvarende baktericide aktiviteter mod både modtagelige og resistente H. pylori
stammer.
Eugenol og kanelaldehyd danner en del af almindelig kost i tropiske lande siden aldre. Mange rapporter tyder disse forbindelser er ikke-toksiske ved doser, som forbruges [34], og de er kendt for deres antimikrobielle og antioxidantegenskaber [21, 36]. Desuden at helbrede mavesår, eller for at forhindre den oxidative stress, ordinering antioxidanter er en ganske normal praksis i disse dage med de praktiserende læger. Da begge disse forbindelser er naturlig antioxidant [37], kunne fordelene være flere. To dyreforsøg udført i fortiden tyder på, at et ekstrakt af kanel bark indtages oralt kan hjælpe med at forhindre mavesår [36] og en undersøgelse beskrevet eugenol at være både anti-inflammatoriske og mavesårshæmmende [38]. Det blev brugt så tidligt som 1950 til behandling af mavesår sygdom [39]. Betragtning alle de fordele, vi observeret for de to testede bioaktive stoffer, bør vores data ikke opfattes som certificering af stoffer i klinisk anvendelse, indtil deres stabilitet, specificitet og samlede effekt er etableret i forskellige laboratorier og mod forskellige bakteriestammer. Yderligere undersøgelser er derfor klart behov for i forbindelse med reproducerbarhed af disse resultater under forskellige laboratorieforhold.
Konklusion
De opnåede i denne undersøgelse viser data, at eugenol og cinnamaldehyd på 2 pg /ml producere signifikant fald i levedygtighed af organismen H. pylori
, uanset stammen. Aktivitet af disse forbindelser ved lave pH-niveauer kan hjælpe dem med at opnå deres virkningsfuldhed i et miljø, såsom human mave. Vi har tillid til disse resultater er opmuntrende i betragtning af voksende behandlingssvigt og antibiotikaresistens på området H. pylori
ledelse. Yderligere in vivo
undersøgelser og kliniske forsøg vil være nødvendige for at begrunde og yderligere at evaluere potentialet af disse forbindelser som anti H. pylori
agenter.
Erklæringer
Tak
SMA, HP, LVR og CMH takker University Grants Kommissionen, New Delhi for at yde økonomisk støtte til carryout denne undersøgelse. NA og LAS vil gerne takke ISOGEM http:... //Www isogem org for den støtte
Forfattere 'originale indsendte filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendt filer til billeder. 12941_2005_65_MOESM1_ESM.ppt Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12941_2005_65_MOESM2_ESM.ppt Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12941_2005_65_MOESM3_ESM.ppt Forfatternes oprindelige fil til figur 3 12941_2005_65_MOESM4_ESM.ppt Forfatternes oprindelige fil til figur 4

• Gastric skader: en sjælden kirurgisk begivenhed på grund af sløve abdominal trauma
• Imaging vurdere hepatiske og peritoneale metastaser af mavekræft: en systematisk review